TGF-β1在SARS患者急性肺损伤中的作用

目的 观察SARS急性肺损伤的组织病理学特点并探讨SARS-CoV S蛋白，TGF-β1（转化生长因子β）在SARS急性肺损伤中的作用。方法 利用4例SARS尸检肺组织为研究对象，经常规HE染色及免疫组织化学检测。结果 双肺广泛性实变，呈脱屑性肺泡炎及脱屑性支气管炎改变，肺透明膜形成及小灶性坏死；病变肺组织内肺泡上皮细胞、支气管上皮细胞及浆液腺腺上皮细胞、单核巨噬细胞SARS-CoV S蛋白及TGF-β1均呈强阳性表达。结论 肺是SARS病毒主要攻击的靶器官，严重的肺部病变是本病死亡的主要原因；TGF-β1协同病毒致病加速急性肺损伤发生。     

严重急性呼吸综合征临床病理研究

目的探讨SARS的病理形态学特点.方法常规HE染色,光镜观察.免疫组化S-P法检测3例SARS患者的肺组织CK、CD34、Ⅳ型胶原、CD 68、Mac 387的表达.结果SARS病理形态表现为肺泡上皮广泛破坏,Ⅱ型上皮细胞增生.肺泡壁毛细血管内皮细胞肿胀.大部分肺泡腔及肺泡管内透明膜形成.间质有较多的炎症细胞浸润,纤维母细胞增生.结论SARS是一种伴透明膜形成的急性非特异性间质性肺炎.     

3例SARS患者肺组织病理学观察及核转录因子-κB的表达

为观察严重急性呼吸综合征 (SARS)患者肺损伤的病理学特点及核转录因子 κB(NF κB)在肺组织中的表达 ,探讨急性肺损伤时NF κB的活化及其与肺损伤的关系 ,对 3例SARS死亡病例进行尸体解剖 ,HE染色观察肺组织的病理改变 ;采用免疫组织化学SP法检测肺组织NF κBp65活性。结果 :肺部病变主要表现为弥散性肺间质炎症及肺泡损伤 ,肺泡上皮细胞凋亡脱落及肺透明膜形成 ,肺间隔明显增宽 ,以淋巴细胞和单核细胞为主的炎细胞浸润。 3例肺组织NF κBp65检测均为阳性 ,阳性信号表达于肺泡上皮细胞、巨噬细胞及淋巴细胞的胞质及胞核内。结果提示 :SARS患者的肺组织表现为急性肺损伤 ,NF κB在SARS患者肺组织的损伤中起重要的作用     

SARS患者死因的病理机制探讨--急性肺损伤与继发感染

目的分析严重急性呼吸综合征(SARS)患者的临床病理特点,探讨SARS死亡原因的病理生理机制。方法以4例SARS患者的尸检肺组织、经皮或经支纤镜肺活检标本为观察对象,组织病理切片经常规HE染色,免疫组化,并与临床表现进行联系。结果2例发病早期患者肺组织病理切片可见Ⅱ型肺泡上皮细胞增生,肺泡壁明显增宽,血管充血水肿,纤维母细胞增生,肺泡腔见纤维素及红细胞渗出,单个核细胞浸润,透明膜形成。另2例病程较长的死亡病例可见肺组织内大量曲霉菌菌丝,血管内见真菌栓,血管壁破坏。免疫组织化学染色：B细胞的CD20 在肺组织中的表达为阴性;T细胞的CD45RO^ 表达阳性增加;吞噬细胞的CD68^ 阳性表达显著增加。结论SARS发病早期肺部主要表现为急性肺损伤,其发生机制可能与超敏反应有关,也是SARS患者早期死亡的主要原因,与免疫抑制有关的继发严重霉菌感染是晚期病人的重要死因。     

人ACE2转基因小鼠对SARS-CoV的易感性

目的建立敏感的SARS小动物模型。方法通过显微注射技术,将编码SARS-CoV细胞受体的人血管紧张素转换酶(hACE2)基因导入小鼠的基因组中制备了hACE2转基因小鼠,在小鼠ACE2(mACE2)启动子的调控下,hACE2蛋白在转基因小鼠的肺脏、心脏、肾脏和小肠表达。我们观察了野生型和转基因小鼠在SARS冠状病毒接种后病原学和病理学方面的反应。结果在接种后第3天和第7天,病毒能够更有效地在转基因小鼠的肺脏复制,而且转基因小鼠出现更严重的肺损伤。肺组织的损伤包括肺间质充血、出血,单核细胞、淋巴细胞浸润及血浆蛋白的渗出,肺泡上皮细胞增生、脱落,此外,在转基因小鼠的某些器官还发现了血管炎、变性和坏死等病理变化。在转基因小鼠的肺上皮细胞、血管内皮细胞和脑神经细胞检测到病毒抗原。结论转基因小鼠比野生型小鼠对SARS病毒更易感,而且表现出更接近SARS患者的病理变化。     

小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞-间充质细胞转型研究

目的：探讨小鼠肾间质纤维化早期是否存在肾小管上皮细胞-间充质细胞转型的形态学变化。方法：利用单侧输尿管梗阻的方法建立小鼠肾间质纤维化模型，常规组织学分析小鼠肾脏病理变化，免疫组化检测α-SMA的表达，肾基底膜六胺银染色和透射电镜观察肾小管基底膜的变化情况，明胶酶谱分析观察肾脏中MMP2和MMP9的表达情况。结果：成功地建立了小鼠肾间质纤维化模型，并被组织学分析证实。免疫组化分析显示肾脏中出现了大量表达α-SMA的细胞，肾基底膜六胺银染色和透射电镜分析显示小鼠肾间质纤维化早期肾脏出现了肾小管基底膜局部断裂和肾小管上皮细胞迁出的改变，明胶酶谱分析显示小鼠肾脏中MMP2和MMP9于肾间质纤维化早期有一过性增高变化。结论：肾小管基底膜局部断裂，肾小管上皮细胞迁出以及MMP2和MMP9的表达变化参与了小鼠肾间质纤维化早期上皮细胞-间充质细胞转型的过程。     

SARS-CoV感染后人ACE2转基因小鼠肺组织一氧化氮合酶的变化

目的利用人血管紧张素转换酶2（ACE2）转基因小鼠模型研究一氧化氮（NO）在严重急性呼吸综合症（SARS）发病中的作用。方法用PUMC01株SARS-CoV感染野生型及人ACE2转基因小鼠,免疫印迹、免疫组化及分光光度法观察两组动物在感染后3、7d肺组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血清NO的变化。结果免疫印迹显示,在接种病毒后3d和7d的转基因小鼠肺组织iNOS蛋白密度明显增高。免疫组化显示,接种病毒后3d和7d转基因小鼠肺组织巨噬细胞增多,iNOS表达呈明显的阳性反应。生化测定血清NO结果显示,接种病毒后3d,与攻毒前及相同时间的野生型小鼠相比,NO水平明显升高。结论NO在SARS发病的病理生理过程中可能发挥重要的作用。     

肝细胞生长因子在急性肺损伤中的作用机制

目的观察急性肺损伤（ALI）时肝细胞生长因子（HGF）的表达，探讨其作用机制。方法Wistar雄性大鼠45只，随机分为3组，模型组及干预组采用气管内注射内毒素诱导急性肺损伤，对照组在相同条件下给予等量生理盐水。注射内毒素后2、12、36h干预组自腹腔给予抗HGF抗体，其余各组在相同条件下给予生理盐水。各组动物在注射内毒素后4、14、38h后分别处死5只，取肺组织观察其病理变化，测湿／干重比及羟脯氨酸（MPO）浓度，用RT—PCR法和免疫组化法检测大鼠肺组织中HGF mRNA及蛋白的表达情况，用免疫组化法检测肺组织中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达情况。结果模型组显示明显的肺损伤病理变化，干预组肺损伤进一步加剧；模型组肺组织湿／干重比、MPO浓度、HGF mRNA及蛋白的表达增加，干预组的湿／干重比、MPO浓度表达较模型组进一步增加，但HGF的表达则较模型组减少；干预组肺组织中PCNA表达较模型组明显下降。结论急性肺损伤时HGF表达增加，HGF通过促进上皮细胞有丝分裂来促进肺损伤的修复。     

mfgl2凝血酶原酶/纤维介素基因转录调控元件肝细胞核因子的研究

目的 研究鉴定mfgl2凝血酶原目影纤维介素基因转录激活所必需的调控元件或转录因子。方法应用免疫印迹法检测Balb／c小鼠的巨噬细胞内是否表达肝细胞核因子4(HNF4),共聚焦显微镜免疫荧光技术检测鼠肝炎病毒(MHV)的核心(N)蛋白质是否进入被感染细胞核。应用：DNA电泳迁移差异检测、竞争实验和定点诱变技术鉴定—mfgl2基因转录激活所必需的调控元件或转录因子。结果 免疫印迹法表明巨噬细胞可持续表达HNF4。共聚焦显微镜免疫荧光技术证实MHV的N蛋白质可进入被感染细胞核内。凝胶移位分析和竞争实验显示HNF4和巨细胞病毒早期蛋白基因1．2(IEl.2)均可与特异寡核苷酸竞争结合mfgl2启动子上特定位点而不与非特异寡核苷酸发生竞争。HNF4特异性多克隆抗体竞争试验可见超迁移带。定点突变mfgl2启动子上：HNF4所结合的顺式调控元件可降低野生型mfgl2启动子的转录活动达75％,联合突变IE1-2结合位点未见协同效应。单纯突变IEl．2结合位点后,野生型nl龟12启动子的转录活动仍可保留75％-80％。结论 HNF4具有与mfgl2／fibroleukin启动子结合的特性,为MHV-3N蛋白质诱导mfgl2／fibroleukin基因表达的必备转录因子。     

绿色荧光蛋白-小鼠纤维介素蛋白融合基因表达载体的构建和表达

目的：构建绿色荧光蛋白(GFP)和小鼠纤维介素蛋白(mfgl2)的融合蛋白表达载体，在仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达，为mfgl2的RNA干扰体外研究提供简便的判断手段。方法：用PCR从mfgl2cDNA文库中扩增出mfgl2cDNA片段，插入到GFP表达载体pEGFP—N2中GFP基因序列的上游，构建成GFP—mfgl2融合基因表达载体pEGFP—mfgl2，将该载体转染到CHO细胞后24—48h，通过荧光显微镜观察并摄片。结果：扩增出长约1．3kb的基因片段，经双酶切鉴定和测序鉴定无误；重组载体转染CHO细胞后，在荧光显微镜下可观察到GFP的表达。结论：成功构建了pEGFP．mfgl2融合基因表达载体；重组载体可在CHO细胞中表达出GFP—mfgl2融合蛋白，为下一步进行mfgl2RNA干扰研究提供了简便的判断手段。     

老龄ICR小鼠对SARS-CoV的易感性

目的掌握SPF动物繁育设施内空气落下菌数的实际情况。方法采用常规方法对SPF动物繁育设施空气落下菌数进行了定期测定。结果近3年的检测结果表明,SPF动物繁育设施在动物进入以后其净化级别很难达到万级,其空气落下菌数反映的只是各动物间的卫生状况,结论建议动物饲养间空气落下菌数可控制在100个/皿以下,清洁走道和清洁物品准备间则可控制在10个/皿以下。     

SARS肺纤维化发病机制的比较医学研究

目的初步探讨SARS病毒（SARS-CoV）感染动物模型是否适用于SARS肺纤维化发生机制的研究，阐述SARS肺纤维化发生的可能机制。方法用比较医学的研究的方法，将SARS病人肺纤维化的发病特点及可能的机制同目前已经建立的SARS动物模型进行比较。结果不同病种的肺间质纤维化性改变都是从肺泡炎开始，在发展和修复过程中导致的肺纤维化倾向有共同之处。SARS中大约有7．8％的康复者中出现比较严重的肺纤维化后遗症。SARS肺纤维化发生早，病情进展快，病人可于数日内死亡，病理改变严重。SARS-CoV感染动物模型已经建成，出现了拟人SARS的临床、病理学和血清学改变。SARS肺纤维化在模型动物中表现也比较明显，纤维母细胞及胶原纤维明显增多。结论SARS—CoV感染动物模型可以用于SARS肺纤维化发病机制的实验研究。     

登革病毒特异性T细胞在DHF/DSS发病中作用的研究

目的研究登革病毒特异性T细胞在登革病毒致病中的作用.方法首先把培养的HepG2移植到严重联合免疫功能不全(SCID)小鼠体内,建立HepG2-grafted SCID(HepG2-SCID),然后将该小鼠分为3组:[1]A组:登革病毒特异性T细胞(2D42)接种后次日,腹腔内接种106pfu的Ⅱ型登革病毒(DEN2);[2]B组:正常小鼠胸腺细胞(NMT)接种后次日,腹腔内接种DEN2;[1]C组:腹腔内接种DEN2.观察感染后各组动物的死亡率、病毒血症及主要脏器的病理变化.结果接种2D42细胞 感染的小鼠,80%出现明显的临床表现,并在感染后12.8 d死亡,剩余的20%小鼠有一过性的临床表现,然后从疾病中恢复,并存活在3个月以上.而接种NMT 感染或单纯感染的小鼠,死亡率均为100%.A组和B组小鼠血清中的病毒滴度和主要脏器的病理变化发生率明显高于C组.结论 DEN-T细胞有保护机体免受病毒侵害和加重病情进展的双重作用,而NMT细胞只有加重病情的单一作用.     

浅谈急性传染性非典型肺炎病理学及发病机制

严重急性呼吸综合征(severe actue respiratory syndrome,SARS),我国暂命名为急性传染性非典型肺炎(acute inffectionus atypieal pneumonia,AIAP),简称非典型肺炎(AP)是近几个月流行全球30余个国家和地区的一种急性传染病,该病来势凶险,传染性极强,是目前国际医学界研究的焦点,本文作者根据4例系统尸体解剖和2例会诊资料对SARS的病理学特点及其发病机制作简要概述.本研究发现SARS的病理变化主要包括肺部病变,免疫器官损伤,全身小静脉炎,全身中毒性改变和继发感染4个方面.肺部病变主要包括肺水肿、肺泡上皮增生、融合、脱落、凋亡呈脱屑性肺炎变化,局灶性出血坏死,局灶性肾小球状机化性肺炎,大量肺透明膜形成,肺泡上皮内可见病毒包涵体及病毒性颗粒;免疫器官损伤,脾脏淋巴组织大片状坏死,淋巴结灶性坏死;全身小静脉炎;全身多器官内小静脉周围及血管壁水肿,灶性纤维素样坏死,单核细胞及淋巴细胞浸润,部分小静脉内有血栓形成;全身中毒性变化和继发感染;全身多器官实质细胞变性坏死和继发霉菌感染.肺和免疫器官是SARS病毒攻击的主要靶器官.SARS的发病机制不清,可能与SARS病毒进入机体后通过两种方式影响宿主有关:①SARS病毒进入靶细胞诱导细胞凋亡;②SARS诱导机体的免疫反应,引起组织和器官的病变.     

不同品系小鼠感染甲型流感病毒肺小血管内血栓形成

目的本实验旨在观察不同品系小鼠感染甲型流感病毒后肺组织内血栓形成的情况。方法使用H1N1病毒A/California/7/2009(CA7)株和H3N2病毒A/Brisbane/10/07株,对BALB/C小鼠、Scid小鼠、NOD/LTJ小鼠、BALB/C-nu小鼠、NOD-Scid小鼠和icosl-KO小鼠经乙醚麻醉后进行滴鼻攻毒。检测小鼠感染后肺组织病毒拷贝数并观察肺组织病理学改变。结果 H1N1和H3N2滴鼻攻毒的各组小鼠均染毒,病理表现为程度略有差异的间质性肺炎。13只H1N1病毒感染小鼠和6只H3N2感染小鼠在肺组织中观察到多个小血管内有血栓形成,血栓成分主要为纤维素和血小板。结论各品系小鼠感染H1N1和H3N2流感病毒后均可能出现肺组织内血栓形成。     

H5N1亚型禽流感病毒对小鼠致病性的研究

目的用一株鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染小鼠,观察其对小鼠的致病性及在小鼠间的传染性。方法将小鼠分为正常组、攻毒组、同居组,攻毒组乙醚麻醉后滴鼻感染AIV,观察各组食欲、反应、呼吸及有无皱毛、弓背、死亡等,测量体温及体重;检测相应抗体水平、小鼠排毒情况及小鼠各器官带毒情况,并观察病理组织学变化。结果攻毒组出现食欲反应下降,呼吸急促,皱毛,死亡;体重、体温下降。同居组未出现感染。攻毒组攻毒后12 h至第9天可从肺组织分离出病毒,第10天始出现相应抗体;感染小鼠的肺、心肌、肝、脾、肾和脑组织都有不同程度的病理改变。结论 AIV对小鼠具有致病性,AIV能跨越种系障碍直接感染哺乳动物, 但在小鼠间无传染性。     

Differential Gene Expression Profiles in Acute Hepatic Failure Model in Mice Infected with MHV-3 Virus Intervened by Anti-hepatic Failure Compound

Differential gene expression profiles in Balb/cJ mouse model of acute hepatic failure infected with MHV-3 virus intervened by anti-hepatic failure compound(AHFC) and the changes of cytokines regulated by genes were investigated.The Balb/cj mice were divided into AHFC-intervened group and control group randomly.Acute hepatic failure model of Balb/cJ mice infected with MHV-3 virus was established.The survival rate in the two groups was observed.It was found that the survival rate in the AHFC-intervened group and control group was 90% and 50% respectively 48 h after intraperitoneal injection of MHV-3(P<0.05).Before and after the experiment,the cytokines in peripheral blood of the survival mice were determined,and RNA was extracted from survival mouse liver tissue for the analysis of the differential gene expression by a 36 kb mouse oligonuleotide DNA array.In all the genes of microarray there were 332 genes expressed differently in the two groups,in which 234 genes were up-regulated and 78 genes down-regulated.Through clustering analysis,the differential expression of immune related genes,including TNF receptor superfamily,Kctd9,Bcl-2,Fgl2,IL-8,IL-6,IFN-γ,TNF-α etc.might be related with the curative effectiveness of AHFC.It was suggested that AHFC can balance the immune state of mouse model of acute hepatic failure infected with MHV-3 virus mainly through regulating the expression of immune related genes,decrease the immune damage and inhibit liver cell apoptosis of mouse acute hepatic failure model obviously so as to increase the survival rate of mouse models of acute hepatic failure.     

SARS患者康复期肺功能评价

目的研究严重急性呼吸综合征(severeacuterespiratorysyndrome,SARS)患者康复期肺功能状态。方法随访康复出院的SARS患者89例,了解其症状、体征和并发症,测定肺功能。并对肺功能各项指标与临床指标作相关性分析。结果复查的时间距离发病时间平均为(2.90±0.44)个月(1.8～4.2个月),距离出院时间为(1.75±0.53)个月(0.5～3.4个月)。48例(53.9%)存在肺功能异常,多数为轻度异常,其中,单纯弥散障碍38例(42.7%),弥散障碍合并限制性通气功能障碍7例(7.9%),弥散障碍合并阻塞性通气功能障碍1例,单纯限制性通气功能障碍1例,单纯1秒钟呼气容积(forcedexpiratoryvolumeinthefirstsecond,FEV1)下降1例。病程中有呼吸困难症状和康复期胸部CT异常者一氧化碳弥散量(diffusioncapacityforcarbonmonoxide,DLCO)和肺总量(totallungcapacity,TLC)下降更明显。结论SARS患者康复期存在轻度的肺功能损害,以弥散障碍为主,其次是限制性通气功能障碍。