槲皮素对人结肠癌SW480细胞体外侵袭能力的影响

目的：研究槲皮素对结肠癌SW480细胞的体外侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：结肠癌SW480细胞经槲皮素处理后用Transwell小室的方法检测其体外黏附、侵袭和运动能力。明胶酶谱分析法检测SW480细胞分泌的基质金属蛋白酶活性。结果：结肠癌SW480细胞经槲皮素处理后,体外侵袭、运动能力呈剂量依赖性下降,SW480细胞MMP-2及MMP-9的分泌下降（P〈0.05）。结论：槲皮素在体外剂量依赖性地抑制结肠癌SW480细胞的转移能力,这可能与槲皮素抑制MMP-2及MMP-9的分泌有关。     

YAP蛋白在结肠癌中的表达及其对SW480细胞增殖和侵袭的影响

目的:研究YAP蛋白在结肠癌中的表达及临床意义, 并初步探讨其对结肠癌细胞增殖、侵袭的影响。方法:免疫组化检测YAP蛋白在25例结肠癌组织及配对正常组织中的表达,并分析其与结肠癌临床病理特征之间的关系;用Real-Time PCR和 Western blot验证YAP-shRNA慢病毒载体转染效率;生长曲线实验和MTT法检测下调YAP表达对结肠癌细胞SW480增殖的影响;Transwell实验检测下调YAP表达对结肠癌细胞SW480侵袭的影响;Western blot检测下调YAP表达对CyclinD1、E-cadherin及Vimentin蛋白的影响。结果:YAP在结肠癌组织中的表达显著高于正常结肠组织（P＜0.05）,并且与淋巴结转移密切相关(P＜0.05);转染YAP-shRNA慢病毒载体的SW480细胞YAP的表达在mRNA 和蛋白水平明显降低（均P＜0.05）;下调YAP表达后结肠癌细胞增殖及侵袭明显减弱（均P＜0.05）;下调YAP 表达可抑制结肠癌细胞CyclinD1、E-cadherin及Vimentin蛋白的表达（均P＜0.05）。结论:YAP在结肠癌组织中高表达,且与淋巴结转移相关,下调YAP表达可抑制结肠癌细胞增殖及侵袭能力,预示YAP在结肠癌恶性进展中具有重要的作用。     

Src酪氨酸激酶在人胃癌细胞转移中的作用和机制

背景与目的:Src酪氨酸激酶的活化在胃癌浸润和转移中发挥了重要的作用。本研究旨在探讨Src酪氨酸激酶对人胃癌细胞E-钙黏着蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、9表达、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)分泌、转录因子NF-κB和AP-1表达以及胃癌细胞体外侵袭能力的影响。方法:使用Src酪氨酸激酶抑制剂4-苯胺喹唑啉(3和10μmol/L)后,应用Western blot法检测人胃癌SGC7901细胞中E-cadherin、MMP-2和MMP-9蛋白表达变化;应用实时PCR(real-time PCR)检测细胞中E-cadherin、MMP-2和MMP-9的mRNA表达变化;应用ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF表达变化;应用双荧光报告基因法检测NF-κB和AP-1转录活性;应用Transwell法检测肿瘤细胞侵袭能力变化。结果:当Src酪氨酸激酶抑制剂4-苯胺喹唑啉浓度为3和10μmol/L时,SGC7901细胞中E-cadherin蛋白表达量显著增加,E-cadherin的mRNA表达是对照组的263.8%(P<0.05)和403.3%(P<0.05);MMP-2和MMP-9的蛋白表达显著降低,MMP-2的mRNA表达是对照组的28.3%(P<0.05)和16.7%(P<0.05),MMP-9的mRNA表达是对照组的23.6%(P<0.05)和13.3%(P<0.05);VEGF含量是对照组的62.6%(P<0.05)和38.7%(P<0.05);AP-1转录活性是对照组的54.4%(P<0.05)和18%(P<0.05),NF-κB转录活性是对照组的38.3%(P<0.05)和11.5%(P<0.05);胃癌细胞侵袭能力是对照组的43.3%(P<0.05)和28.2%(P<0.05),呈现明显的剂量依赖性抑制作用。结论:Src酪氨酸激酶活化与人胃癌SGC7901细胞体外转移能力密切相关,其机制可能与肿瘤转移相关基因表达有关。     

PTTG1促进结肠癌SW480细胞侵袭和迁移的作用机制

目的 研究垂体肿瘤转化基因 1（pituitary tumor transforming gene 1, PTTG1）过表达促进人结肠癌细胞SW480侵袭和迁移作用及其可能机制。方法 采用脂质体转染法将pcDNA3.1(+)-PTTG1及空载pcDNA3.1(+)转染人结肠癌SW480细胞,G418法筛选阳性克隆。Western blot和Real-time PCR法鉴定稳定过表达PTTG1细胞株建立。Transwell小室法检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot检测MMP2、MMP9、E-cadherin、Vimentin和Snail的表达。结果 （1）成功获得稳定高表达PTTG1的SW480克隆细胞株PTTG1-SW480;（2）过表达PTTG1基因后,SW480细胞侵袭和迁移能力增强,MMP2和MMP9表达升高,上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition, EMT）标记分子E-cadherin表达降低,Vimentin和Snail的表达升高,差异均有统计学意义（P<0.01）;（3）过表达PTTG1基因后,SW480细胞中PI3K/AKT信号活化增强,使用LY29400干预后,抑制细胞侵袭、迁移和EMT,E-cadherin表达上调、Vimentin和Snail的表达下调,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论 PTTG1基因过表达可能通过活化PI3K/AKT信号诱导SW480细胞EMT发生,发挥促进SW480侵袭和迁移作用;提示PTTG1蛋白可能成为结肠癌治疗的一个潜在靶点。     

胶质瘤相关癌基因同源蛋白2促进结肠癌细胞系SW620的上皮-间质转化

背景与目的:胶质瘤相关癌基因同源蛋白2(glioma-associated oncogene homologue 2,GLI2)是Hedgehog信号通路重要的转录因子,不仅参与正常的细胞分化,而且在多种肿瘤细胞中异常激活,与肿瘤转移密切相关。探讨GLI2与结肠癌细胞系SW620上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的关系及其可能机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)检测人结肠癌细胞系SW620、SW480、HCT116和HT29中E-cadherinmRNA表达,以GLI2干扰慢病毒感染SW620细胞,用RTFQ-PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞中GLI2 mRNA表达和蛋白水平,采用Transwell小室检测细胞侵袭、迁移能力,黏附实验检测同、异种细胞间黏附能力,Western blot检测细胞中p-AKT、N-cadherin、vimentin、MMP2和E-cadherin蛋白水平。结果:4种细胞系中,SW620的E-cadherin mRNA表达最低(P<0.05),SW620转染72 h后,可见明显的荧光表达;与空病毒组和对照组相比,干扰组细胞的GLI2表达降低(P<0.05);细胞侵袭和迁移能力减弱(P<0.05);同种细胞黏附能力增强(P<0.05);异种细胞黏附能力减弱(P<0.05);p-AKT、N-cadherin、vimentin和MMP-2的表达降低(P<0.05)、E-cadherin表达增加(P<0.05)。结论:GLI2可能通过上调p-AKT、N-cadherin、vimentin和MMP-2表达和抑制E-cadherin表达来促进结肠癌细胞系SW620的EMT。     

The leukocyte protein L-plastin induces proliferation, invasion and loss of E-cadherin expression in colon cancer cells

L-plastin, a gene that codes for an actin-bundling protein, is upregulated in the metastatic colon cancer cell line SW620, when compared to its premetastatic counterpart SW480. The aim of our study was to characterise the effect of L-plastin overexpression on SW480 cells in the context of the acquisition of a metastatic phenotype. SW480 cell lines overexpressing L-plastin were established (SW480-LPL). Analysis of these cell lines revealed significantly higher rates of proliferation and invasion than the control cell line (SW480-Ctrl). In addition, the expression of E-cadherin was lost from SW480-LPL cells. Treatment of SW480-LPL cells with cytochalasin B, an inhibitor of endocytosis, attenuated the loss of E-cadherin expression in these cells. The association of L-plastin overexpression with an increased rate of proliferation and invasion, and loss of E-cadherin expression in the SW480 colon cancer cell line indicates that L-plastin plays an important mechanistic role in colorectal cancer metastasis (supplementary material for this article can be found on the International Journal of Cancer website at http://www.interscience.wiley.com/jpages/0020-7136/suppmat/index.html).     

AP-2α基因转染对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响

目的 探讨AP-2α基因对人类结肠癌SW480细胞体外增生及侵袭能力的影响.方法 构建PODNA3.1(+)-AP-2α真核表达载体,利用脂质体介导pcDNA3.1(+)-AP-2α和pcDNA3.1(+)转染5W480细胞,并以正常SW480细胞作为空白对照;采用RT-PCR与Western blotting分别检测转染48 h后各组细胞中AP-2αmRNA与蛋白的表达情况;采用平板克隆、软琼脂克隆形成试验以及Transweil侵袭试验,分别检测各组细胞体外增生及侵袭能力.结果 SW480细胞内源性AP-2α蛋白表达缺失;转染AP-2α基因后,在SW480细胞中可检测到高水平的AP-2αmRNA及蛋白,细胞克隆形成率降低(P<0.05),软琼脂克隆体积小且数量少,细胞侵袭能力下降(P<0.05).结论 转染AP-2α基因可以抑制人类结肠癌SW480细胞的体外恶性增生以及侵袭能力.     

miR-126-5p靶向Notch2 对结肠癌SW480 细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响

目的:探讨miR-126-5p 对结肠癌SW480 细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其作用机制。方法：用miR-126 mimic和pcDNA Notch2（pc-Notch2）等分别或同时转染结肠癌SW480 细胞,用qPCR法检测miR-126-5p 和Notch2 的表达;荧光素酶报告实验观察miR-126-5p 和Notch2 的靶向关系;CCK-8 法、划痕愈合实验、Transwell 小室法和Annexin V/PI 染色流式细胞术分别检测转染细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡,Western blotting 检测Notch2、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）、cleaved Caspase-3、MMP-2 和MMP-9 的表达。结果：转染miR-126 mimic 能显著升高SW480 细胞miR-126-5p 的表达水平（P<0.01）和显著抑制SW480 细胞Notch2 的表达（P<0.01）,同时证实Notch2 上存在miR-126-5p 的结合位点。上调miR-126-5p 显著抑制SW480 细胞增殖并降低PCNA的表达水平（P<0.01）、升高细胞凋亡率和cleaved Caspase-9 的表达水平（均P<0.01）,pc-Notch2显著减弱miR-126 mimic 对SW480 细胞增殖和凋亡的调控作用;miR-126 mimic 显著降低SW480 细胞划痕愈合率和穿膜细胞数（均P<0.01）、抑制MMP-2 和MMP-9 的表达（P<0.01）;pc-Notch2 显著减弱miR-126 mimic 对SW480 细胞迁移、侵袭及MMP-2、MMP-9表达的抑制作用（均P<0.01）。结论：miR-126-5p 通过抑制Notch2 表达,降低结肠癌SW480 细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

CD44v3短发夹RNA对透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭的抑制作用

目的:研究CD44v3的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)对体外培养的人结肠癌SW480细胞CD44v3表达及透明质酸诱导的粘附侵袭行为的抑制作用。方法:设计和构建带有U6启动子的CD44v3基因特异性的shRNA干扰表达质粒,转染至SW480细胞,以RT-PCR和Western blot检测SW480细胞转染前后CD44v3表达,以平板粘附模型和Boyden小室模型检测SW480细胞转染前后粘附和侵袭能力。结果:和转染前相比,转染了RNA干扰表达质粒的SW480细胞CD44v3mRNA和蛋白表达、以及受透明质酸诱导而粘附于平板和穿过Boyden小室隔膜的细胞数皆显著减少(P<0.01)。结论:针对CD44v3的短发夹RNA能显著抑制透明质酸诱导人结肠癌SW480细胞体外粘附和侵袭行为。     

Src激酶抑制剂PP2在乳腺癌MCF-7细胞转移中的作用和机制

  目的  探讨Src激酶抑制剂PP2在乳腺癌MCF-7细胞转移中的作用和机制。  方法  乳腺癌MCF-7细胞经PP2作用48 h后, 检测肿瘤细胞体外粘附、侵袭能力的改变, 细胞周期的改变, Western blot及Real-time PCR试验检测肿瘤细胞转移相关基因表达的变化, 报告基因试验检测AP-1和NF-κB启动子活性的变化。  结果  PP2可抑制MCF-7细胞中Src激酶活性, 2.5μM和5μMPP2作用后, 肿瘤细胞粘附能力下降63.4%和34.7%;侵袭能力下降44.3%和20.2%;细胞周期显著阻滞在G₀/G₁期; CD44、MMP-2/9以及p-β-catenin表达显著下降, E-cadherin表达显著升高; AP-1启动子活性下降64.5%和37.9%, NF-κB启动子活性下降55.7%和31.8%。  结论  Src激酶与乳腺癌MCF-7细胞肿瘤转移能力密切相关, 阻断Src激酶活性可抑制肿瘤细胞转移能力。