壳聚糖复合药膜的研制及实验研究

目的 :制备壳聚糖口腔复合膜 ,并通过建立口腔溃疡的动物模型 ,观察复合药膜对实验性口腔溃疡愈合的影响。方法 :选择壳聚糖作为膜载体 ,加入芦荟、表皮生长因子 (EGF)等药物制备口腔复合膜 ,用动物实验验证复合膜的疗效。结果 :(1)复合膜厚约 0 .5mm ,复合膜每平方厘米含水溶性壳聚糖 0 .0 0 7g、芦荟全叶冻干粉 0 .0 5 1g、EGF 40IU、丁卡因 0 .5 3 3mg。(2 )不同时间复合膜组溃疡面积均小于对照组 (P <0 .0 5 ) ;平均愈合速度复合膜组快于其他组 (P <0 .0 5 ) ;水肿充血程度明显好于对照组 ;炎性细胞在各个时间点复合膜组均少于对照组 (P <0 .0 5 ) ;成纤维细胞高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :壳聚糖复合药膜可明显促进实验性口腔溃疡愈合 ,具有一定的应用前景 ,但作用机制有待进一步阐明。     

表皮生长因子在牙齿萌出通道形成中的作用研究

目的:研究表皮生长因子(EGF)在牙齿萌出过程中,是否参与软、硬组织通道的形成。方法:①免疫组化法检测表皮生长因子及其受体在出生后13、15 d以及成年小鼠下颌第一磨牙萌出部位口腔黏膜的表达变化;②原代培养Wistar大鼠牙囊细胞,选择生长良好的第3代细胞,MTT法筛选EGF作用于牙囊细胞的较佳效应浓度。将第3代牙囊细胞以1×105/孔接种到培养皿中,加入最佳浓度的EGF孵育0.5、1、3、6 h后,Trizol一步法分别提取总RNA,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测同一浓度的EGF作用不同时间后,牙囊细胞MCP-1 mRNA的表达变化。结果:①牙萌出时,EGF在萌出牙齿冠方黏膜的上皮层呈弱阳性表达,表皮生长因子受体(EGFR)在口腔上皮全层呈强阳性表达。而牙萌出后,EGF的表达集中于口腔黏膜的固有层,EGFR的表达集中于上皮基底层;②在EGF浓度为5～10 ng/mL时,对牙囊细胞的增殖具有明显促进作用(P<0.05),其中10 ng/mL促进作用最强。牙囊细胞与10 ng/mL的EGF共同孵育0.5、1、3、6 h均能明显促进牙囊细胞MCP-1 mRNA的表达(P<0.05),其中3 h时促进作用最强,以后逐渐恢复,但仍比对照组高(P<0.05)。结论:EGF及其受体可能促进萌出牙齿冠方实性上皮团的形成;适当浓度的EGF能显著增加牙囊细胞的增殖活性,并上调牙囊细胞中MCP-1 mRNA的表达。     

表皮生长因子对Balb/3T3成纤维细胞生长周期及表皮生长因子受体表达的影响

目的:观察表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF) 对Balb/3T3成纤维细胞生长周期及表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)表达的影响.方法:①通过血清饥饿法使细胞同步化,加入25 ng/ml的EGF予以刺激,用流式细胞仪检测不同时间细胞生长周期参数的改变;②于不同时间点对Balb/3T3细胞进行EGFR免疫组化染色,观察EGF对EGFR表达的调节作用. 结果:①Balb/3T3细胞在加入EGF 8 h后S期细胞比例及增殖指数达到最高峰,至10 h回落至原水平;②EGF在作用早期可促进成纤维细胞EGFR表达,其对受体表达的调节作用与正常培养液相当.结论:EGF可有效促进EGFR的表达,从而促进细胞增殖.     

复方表皮生长因子膜治疗家兔口腔溃疡的实验研究

目的研制治疗口腔粘膜溃疡的膜性制剂,观察其疗效.方法以表皮生长因子(EGF)为主药制成EGF膜,通过治疗家兔口腔溃疡,观察其病理改变及愈合时间.结果EGF膜组溃疡愈合时间较对照组明显缩短(P＜0.01),EGF膜组溃疡愈合程度明显好于对照组.结论EGF膜有明显促进家兔口腔溃疡愈合的作用.     

表皮生长因子对口腔溃疡愈合的促进作用及机理探讨

目的:观察表皮生长因子对口腔溃疡的促愈合作用及其受体在溃疡愈合过程中的表达变化方法:金黄地鼠125只随机分成3组,实验组采用EGF,对照组采用生理盐水局部喷涂,以正常动物组作为基线对照.观察溃疡愈合天数、溃疡面积变化及局部组织EGFR的表达改变.结果:实验组EGF可有效促进溃疡愈合,创面愈合率显著高于对照组;并且局部新生组织EGFR表达显著高于对照组,至溃疡愈合时恢复至正常动物水平结论:EGF可通过刺激局部组织EGFR的表达从而促进口腔溃疡愈合.     

壳聚糖口腔复合药膜的研究

目的选择壳聚糖作为膜载体,加入芦荟、表皮生长因子(EGF)等药物制备口腔复合膜,探讨各成分的最佳组配方案及药膜的理化性质.方法①将壳聚糖制成膜;筛选各种药物的组配方案.②测定复合膜的理化性质.结果①复合膜厚约0.5mm,质地均匀,外观为红棕色,黏性较好,遇水2min后呈胶膏状,可牢固黏附于黏膜之上.复合膜每平方厘米含水溶性壳聚糖0.007g、芦荟全叶冻干粉0.051g、EGF40IU、丁卡因0.533mg.25℃,1%的复合膜水旋浮液的pH值为6.8±0.1.复合膜在37℃水中的溶化时间为60～90min.②复合膜具有较好的释放性能,可在2～2.5h内释放出绝大部分药物.结论本实验研究表明水溶性壳聚糖是一种良好的膜载体材料,加入芦荟、EGF等不影响其黏附性;而且其药物释放性能很好,可保证药物的有效释放.     

PCNA、EGF、EGFR在正常口腔黏膜中的表达及其意义

本文利用免疫组化的方法 ,观察增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)表皮细胞生长因子 (epidermalgrowthfactor ,EGF)、表皮细胞生长因子受体(epidermalfactorreceptor,EGFR)在正常口腔黏膜中的表达分布 ,以探讨PCNA、EGF、EGFR的表达与口腔黏膜上皮新陈代谢之间的关系。1　材料和方法1.1　标本来源及制备收集我院临床活检及手术切除的正常口腔黏膜 7例(男性 3例 ,女性 4例 )。标本活检后 ,立即置于 10 0 g/L中性甲醛溶液固定 ,常规石蜡包埋 ,制成 5 μm切片后备用。1.2　组织中PCNA、EGF、EGFR蛋白定位和…     

免疫法建立SD大鼠RAU模型

目的：利用实验性大鼠口腔黏膜组织匀浆＋弗氏佐剂注射方法,建立复发性口腔溃疡动物模型,为研究人类RAU的发病机制及治疗提供理论基础。方法：应用从实验性大鼠提取的口腔黏膜组织匀浆＋弗氏佐剂,作为抗原免疫大鼠。将上述抗原注入大鼠脊柱双侧皮内,每周注射1次,共8周,观察大鼠口腔溃疡的发病及体重和摄食量的变化情况,并做溃疡的组织病理学、流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞检测。结果：以口腔黏膜匀浆组织＋弗氏佐剂作为抗原的实验大鼠都发生了RAU,溃疡模型建立过程中大鼠体重和摄食量均有显著统计学差异（P〈0.05）。流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞CD3＋CD4＋、CD4＋/CD8＋均低于对照组（P〈0.05）。结论：利用大鼠口腔黏膜组织均浆作为抗原,可引起实验性大鼠发生RAU,其临床表现及组织学检查均与人类RAU相似。     

口疮1号方治疗大鼠口腔溃疡的实验研究

目的：通过观察实验大鼠口腔溃疡愈合情况及检测血清中EGF、及口腔黏膜EGFR水平,来评价口疮1号方对实验性大鼠口腔溃疡的治疗效果,并探讨其作用机制,从而为临床应用提供理论依据。方法：利用化学药物灼烧法复制口腔溃疡模型。利用酶联免疫吸附法（ELISA）检测正常大鼠及模型大鼠血清中EGF水平。并取正常及有损伤的口腔黏膜组织,做病理检查。及利用免疫组化方法检测EGFR水平。再将剩余模型大鼠随机分为口疮1号方实验组和生理盐水对照组,5d后,观察每组大鼠一般症状体征及口腔溃疡变化情况,检测血清中EGF水平、及口腔黏膜组织EGFR水平。结果：模型组大鼠血清中EGF、及大鼠黏膜EGFR含量水平较正常大鼠显著降低（P〈0.01）。口疮1号方实验组与生理盐水对照组相比,体重增加,口腔溃疡面积缩小。两组大鼠血清中EGF及口腔黏膜中EGFR水平均有所升高,实验组EGF,EGFR水平较对照组升高快,两组之间有显著差异（P〈0.01）。结论：口疮1号方可以显著改善口腔溃疡症状,促进溃疡愈合。口疮1号方可以调节口腔溃疡时EGF、EGFR水平,增强口腔黏膜修复能力。     

外源性表皮生长因子对口腔鳞癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活剂及其抑制剂活性的影响

目的：探讨表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGF）和口腔鳞癌侵袭转移的关系。方法：采用发色底物反应法测量不同浓度EGF作用于口腔鳞癌TSCCa细胞系及颈淋巴转移癌GNM细胞系后u—PA和PAI-1的活性,同时用Boyden Chamber观察EGF诱导口腔鳞癌TSCCa和GNM细胞转移作用。结果：不同浓度的EGF（0ng／ml,10ng／ml,20ng／ml,40ng／ml,80ng／ml）作用于两种细胞系后,随着外源性EGF浓度的增加,GNM和TSCCa细胞中u—PA和PAI-1的活性均有增加,与对照组相比差异有显著性（p〈0．05）;而以TSCCa细胞中u—PA和PAI-1的活性增加较为明显,u—PA和PAI-1活性与外源性EGF有剂量依赖关系,用不同浓度10ng／ml,20ng／ml,40ng／ml,80ng／ml的EGF培养TSCCa和GNM细胞2h,GNM和TSCCa细胞穿过滤膜数均有增加,在相同的浓度内,TSCCa细胞较GNM细胞增加较为明显,两者相比差异有显著性（p〈0．05）。结论：EGF可促进口腔鳞癌细胞侵袭转移。     

表皮生长因子对牙囊细胞增殖活性的影响

目的：研究表皮生长因子（EGF）对体外培养的大鼠牙囊细胞增殖活性的影响。方法：原代培养Wistar大鼠牙囊细胞,选择生长良好的第3代细胞,分别加入不同浓度的EGF（0.5、1、5、10、50 ng/mL）与牙囊细胞共孵育5 d,MTT法对比观察不同浓度的EGF对牙囊细胞增殖活性的影响。数据采用SPSS 13.0软件包进行方差分析。结果：在EGF浓度为5～10 ng/mL时,牙囊细胞的增殖活性显著增高（P〈0.05）,10 ng/mL时达到最高（P〈0.01）。结论：EGF可作用于牙囊细胞,合适浓度的EGF能显著增加牙囊细胞的增殖活性。     

碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和表皮生长因子（EGF）对Balb/c胎鼠下颌突外胚间充质细胞增殖的剂量效应和时间效应。方法：用体外细胞培养技术和噻唑蓝（MTT）比色法，观察不同浓度和不同时间bFGF和EGF对外胚间充质细胞增殖的影响。结果：0.1-100ng/mL bFGF,0.1-10ng/mL EGF对细胞有促增殖作用，并呈浓度依赖性,两种生长因子均在10ng/mL浓度时作用最强，并于培养第5d达到促增殖高峰。结论：bFGF和EGF能促进外胚间充质细胞的增殖。     

表皮生长因子对口腔鳞癌细胞系血管内皮生长因子和NF-κB活性的影响

目的：探讨表皮生长因子（Epidermal growth factor,EGF）和口腔鳞癌侵袭转移的关系。方法：采用ELISA和免疫组化法测量不同浓度EGF作用于口腔鳞癌TSCCa细胞系及颈淋巴转移癌GNM细胞系后血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）活性和阳性表达变化;同时采用凝胶电泳迁移实验（EMSA）检测不同浓度EGF下核转录因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）的活性变化。结果：不同浓度的EGF（0ng/mL,10ng/mL,40ng/mL,80ng/mL）作用于两种细胞系后,随着外源性EGF浓度的增加,GNM和TSCCa细胞中VEGF活性和阳性表达有增加,NF-κB的活化明显增强,VEGF和NF-κB的活性与EGF有剂量依赖关系,与对照组相比差异有显著性（P〈0.05）;而在相同的浓度内TSCCa细胞较GNM细胞VEGF和NF-κB的活性增加较明显,两者相比差异有显著性（P〈0.05）。结论：EGF可能是通过增加VEGF的活性和阳性表达,调节NF-κB的信号传导路径来促进OSCC细胞侵袭和转移的。     

表皮生长因子对大鼠牙囊细胞单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的:研究表皮生长因子(EGF)对体外培养的大鼠牙囊细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响.方法:原代培养Wistar大鼠牙囊细胞,选择生长良好的第3代细胞,分别加入不同浓度的EGF与牙囊细胞共孵育5d,MTT法对比观察不同浓度的EGF对牙囊细胞增殖活性的影响,筛选EGF作用于牙囊细胞的最佳效应浓度.将第3代牙囊细胞以1×105/孔接种到培养皿中,加入最佳浓度的EGF孵育0、0.5、1、3、6h后,Trizol一步法分别提取总RNA,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测同一浓度的EGF作用不同时间后,牙囊细胞MCP-1 mRNA的表达变化.数据采用SPSS13.0软件包进行方差分析.结果:在EGF浓度为5～10 ng/ml时,牙囊细胞的增殖活性显著增高(P＜0.05),10 ng/ml时达到最高(P＜0.01).牙囊细胞与10ng/ml的EGF共同孵育3 h,MCP-1 mRNA表达最高(P＜0.01),以后逐渐恢复,但仍比对照组高(P＜0.05).结论:EGF与其受体结合,可作用于牙囊细胞,适当浓度的EGF能显著增加牙囊细胞的增殖活性,并且EGF可通过上调牙囊细胞中MCP-1 mRNA的表达.促进单核细胞聚集.调节牙的萌出.     

表皮生长因子对口腔鳞癌细胞系MMP-2和MMP-9活性的影响

目的:探讨表皮生长因子((Epidermal growth factor,EGF)和口腔鳞癌侵袭转移的关系.方法:采用蛋白酶谱分析法测量不同浓度EGF作用于口腔鳞癌TSCCa细胞系及颈淋巴转移癌GNM细胞系后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性,同时用Boyden Chamber观察EGF诱导口腔鳞癌细胞系TSCCa和GNM细胞转移作用.结果:不同浓度的EGF(0 ng/ml,10 ng/ml,20 ng/ml,40 ng/ml,80 ng/ml)作用于两种细胞系后,随着外源性EGF浓度的增加,GNM和TSCCa细胞中MMP-2和MMP-9的活性均有增加,与对照组相比差异有显著性(p＜0.05);以TSCCa细胞中MMP-2和MMP-9的活性增加较为明显,MMP-2和MMP-9的活性与EGF有剂量依赖关系;用不同浓度10 ng/ml,20 ng/ml,40 ng/ml,80 ng/ml的EGF培养TSCCa和GNM细胞2 h,GNM和TSCCa细胞穿过滤膜数均有增加,在相同的浓度内,TSCCa细胞较GNM细胞增加较为明显,两者相比差异有显著性(p＜0.05).结论:EGF可促进口腔鳞癌细胞侵袭转移.     

复发性阿弗他溃疡患者唾液中表皮生长因子和病损区表皮生长因子受体的定量研究

目的探讨复发性阿弗他溃疡（RAU）患者溃疡期和间隙期唾液表皮生长因子（EGF）质量浓度的变化以及病损区表皮生长因子受体（EGFR）的表达有无缺陷。方法选择27例在溃疡期和间隙期均成功获取唾液样本的轻型RAU患者作为RAU1组,采集33例正常人的唾液样本作为对照1组,采用酶联免疫吸附法检测两组唾液样本中EGF质量浓度。另外选择31例轻型RAU溃疡期患者在溃疡基底部剪取小块组织样本作为RAU2组,采集35例无RAU者的正常黏膜组织作为对照2组,采用荧光定量逆转录聚合酶链反应检测两组组织样本内EGFR的RNA表达情况。结果RAU1组溃疡期患者唾液EGF质量浓度高于RAU1组间隙期和对照1组,而间隙期EGF质量浓度低于对照1组（P<0.05）。RAU1组和对照1组唾液EGF质量浓度在不同性别间差别不大,与年龄也没有相关性（P>0.05）。RAU2组EGFR的RNA表达强度高于对照2组,两组间有统计学差异（P<0.05）。结论RAU患者口腔溃疡的复发性可能与间隙期唾液EGF质量浓度减少有关;口腔溃疡的自愈性可能与溃疡期唾液EGF质量浓度增加和溃疡区EGFR表达增加有关。     

Watson细胞活素治疗复发性阿弗它溃疡的临床疗效观察

复发性阿弗它溃疡(RAU)是常见的口腔粘膜疾病,人群中发病率为20—30％,具有周期性复发规律,发作期常给病人带来痛苦与不安。目前还没有较理想的治疗方法,有待进一步深入。表皮生长因子(EGF)在溃疡愈合方面的作用在国际上日益受到重视,本试验应用广州华生基因工程有限公司生产的含EGF的Watson细胞活素治疗RAU,观察其临床疗效和不良反应,以期为该药物临床应用提供依据。我科于1993年10—12月对细胞活素进行随机对照观察,现报告如下。     

EGF/EGFR与皮肤黏膜疾病

表皮生长因子（BGF）通过和靶细胞表面特异性受体表皮生长因子受体（EGFR）结合而发挥各种生物学作用,如促进胚胎发育,细胞增殖、分化、迁移等,而EGFR又和细胞的转化有密切关系。本文回顾近年来对EGF和EGFR的研究,概述他们在皮肤黏膜疾病发病机理中的作用和临床应用。     

EGF对颌下腺导管细胞增殖作用的影响

目的 :探讨表皮生长因子 (EGF)对颌下腺导管细胞增殖作用的影响。方法 :向培养液中加入EGF进行颌下腺导管细胞培养 ,以MTT法测定细胞的增殖能力 ,研究不同浓度下生长因子对大鼠颌下腺导管细胞增殖的剂量 -效应关系及时间—效应关系。结果 :EGF在 0 .5～ 10ng/ml浓度范围内呈剂量 -效应关系 (P <0 .0 1) ,当浓度持续增大时 ,培养细胞的增殖能力则有所降低 (P >0 .0 5 ) ;与对照组比较 ,加入EGF作用第 2天开始出现促增殖效应 ,第 3天开始EGF显示出明显的促增殖效应 (P <0 .0 1) ,第 5天时培养细胞的增殖能力开始降低。结论 :EGF在一定浓度和时间范围内对颌下腺导管细胞具有促增殖作用     

口腔溃疡药膜对豚鼠实验性口腔溃疡的治疗作用

将口腔溃疡散处方的各组份,经不同方法提取,制得干浸膏.以聚乙烯醇做基质,用铺板器制成口腔溃疡药膜.用90%石碳酸烧灼法,制作豚鼠口腔溃疡模型,观察该药膜对口腔溃疡的治疗作用.结果表明,口腔溃疡药膜对豚鼠实验性口腔溃疡,有明显的促进愈合作用.