HIF-1α对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在缺氧条件下对宫颈癌SiHa细胞的增殖、生长和凋亡的影响,探讨HIF-1α在宫颈癌的发展过程中所起的作用.方法 将表达全长HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-full lengthHIF-1α和空质粒pcDNA3.1转染人SiHa细胞中,分别命名为fL HIF-1α组和pcDNA3.1组,未转染细胞组命名为未转染组.应用Western Blotting和免疫细胞化学法对细胞内的HIF-1α和VEGF表达量进行检测.应用MTT方法检测不同浓度的CoCl2处理后细胞的增殖情况;采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡情况.结果 免疫细胞化学和Western Blotting结果显示重组质粒pcDNA3.1-full length HIF-1α转染成功,转染细胞内HIF-1α及VEGF表达较未转染细胞和质粒pcDNA3.1转染细胞增高(P<0.05),显示在正常或缺氧条件下.fLHIF-1α组细胞的增殖能力均高于pc DNA3.1组和未转染组(P<0.05),凋亡率小于pcDNA3.1组和未转染组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 HIF-1α在CoCl2诱导的缺氧条件下可以抑制SiHa细胞的凋亡,减少缺氧对细胞的损伤以及促进细胞的增殖,提示HIF-1α在官颈癌的发生发展中可能起着重要作用.     

dn HIF-1对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的研究抑制性缺氧诱导因子-1α(dn HIF-1α)对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响,探讨HIF-1α在SiHa细胞的血管生成、缺氧保护、凋亡、增殖过程中的作用。方法将表达dn HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染入SiHa细胞,采用免疫细胞化学法和Western Blotting检测dn HIF-1α转染SiHa细胞后其HIF-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化;CoCl2化学缺氧法处理细胞,MTT法测定细胞增殖情况,原位缺口末端标记法检测细胞凋亡情况,同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较。结果重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染SiHa细胞后,其HIF-1α蛋白表达水平与其它两组相比差异无统计学意义,而VEGF蛋白表达水平有较明显的降低(P<0.05)。转染dn HIF-1α的细胞,常氧培养和CoCl2诱导的化学缺氧条件下其增殖能力均低于其他两组(P<0.05),CoCl2处理后细胞凋亡增加,与其他两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论dn HIF-1α抑制SiHa细胞的增殖并促进CoCl2化学缺氧引起的细胞凋亡,同时能降低VEGF蛋白的表达。提示dn HIF-1α可望在宫颈癌治疗中发挥作用。     

dn HIF-1α对宫颈癌细胞生物学行为的影响

目的 研究抑制性缺氧诱导因子-1α(dn HIF-1α)对人宫颈癌SiHa细胞生物学行为的影响,探讨HIF-1α在SiHa细胞的血管生成、缺氧保护、凋亡、增殖过程中的作用.方法 将表达dn HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染入SiHa细胞,采用免疫细胞化学法和Western Blotting检测dn HIF-1α转染SiHa细胞后其HIF-1α与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化;CoCl2化学缺氧法处理细胞,MTT法测定细胞增殖情况,原位缺口末端标记法检测细胞凋亡情况.同时与pcDNA3.1组和未转染组进行比较.结果 重组质粒pcDNA3.1-dn HIF-1α转染SiHa细胞后,其HIF-1α蛋白表达水平与其它两组相比差异无统计学意义,而VEGF蛋白表达水平有较明显的降低(P<0.05).转染dn HIF-1α的细胞,常氧培养和CoCl2诱导的化学缺氧条件下其增殖能力均低于其他两组(P<0.05),CoCl2处理后细胞凋亡增加,与其他两组相比,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 dn HIF-1α抑制SiHa细胞的增殖并促进CoCl2化学缺氧引起的细胞凋亡,同时能降低VEGF蛋白的表达.提示dn HIF-1α可望在宫颈癌治疗中发挥作用.     

熊果酸对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的探讨熊果酸（UA）对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法采用MTT法观察UA对SiHa细胞增殖的影响,流式细胞术检测UA对细胞周期和凋亡率的影响,Hoechst33258荧光染色和透射电镜观察凋亡细胞的形态变化,RT-PCR技术检测SiHa细胞中转化生长因子（TGF）-β1mRNA和Smad 4 mRNA表达的变化。结果 UA可明显抑制SiHa细胞生长,并呈时间和浓度依赖趋势（P〈0.05或0.01）;流式细胞术检测发现,UA作用24 h、48 h和72 h后SiHa细胞周期阻滞在G0/G1期,并检测到凋亡峰,凋亡率分别为1.16%、16.37%、18.70%（P〈0.05或0.01）;Hoechst33258荧光染色观察可见胞核染色质不均,呈颗粒状或块状荧光,透射电镜观察出现胞质浓缩、胞核染色质凝聚、边集等典型凋亡细胞核形态变化;RT-PCR检测到TGF-β1mRNA表达减弱,并呈时间依赖趋势,Smad 4 mRNA表达随时间延长而增强。结论熊果酸在体外对SiHa细胞具有抗增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与TGF-β/Smads信号传导通路有关;UA可能通过上调Smad 4的表达恢复TGF-β/Smads信号传导通路,从而诱导细胞凋亡。     

HIF-1α表达与宫颈癌生物学行为关系的研究

目的探讨缺氧诱导因子-1α在宫颈癌中的表达及意义。方法采用免疫组化方法，回顾性研究109例宫颈癌中HIF-1α的表达，并与10例正常官颈组织、16例宫颈上皮内瘤变作同步时比。结果正常宫颈、宫颈上皮内瘤变、宫颈原位癌、宫颈浸润癌组织中HIF-1α的阳性表达率分别为0％、12.5％、43．5％、81．4％。宫颈原位癌和宫颈浸润癌组织中HIF-1α表达显著高于正常宫颈和官颈上皮内瘤变（P〈0．01）。在不同组织学分级（即高、中、低分化）的官颈浸润癌组织中，HIF-1α的阳性表达率逐渐增高，与组织学分化程度呈负相关（r=-0．769，P〈0.01）；临床分期Ⅲ期宫颈癌中HIF-1α的表达明显高于Ⅰ期，Ⅳ期明显高于Ⅱ期（P〈0．01）；但不同病理类型宫颈癌组织中HIF-1α的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论HIF-1α是宫颈癌形成的早期事件，其水平升高可能导致肿瘤向恶性表型发展，HIF-1α有可能成为新的早期筛查和判断官颈癌生物学行为的诊断指标。     

低氧对胆管癌细胞增殖的影响及与HIF-1α表达的关系

目的 建立缺氧模型,观察缺氧对QBC939胆管癌细胞生长和HIF-1 α表达的影响.方法 利用氯化钴(cobalt chloride,CoCl2)模拟缺氧诱导,MTT观察缺氧诱导对胆管癌细胞增殖的影响,用流式细胞术观察缺氧对细胞周期的影响,利用Western Blot观察缺氧诱导对胆管癌细胞HIF-1 α表达的影响.结果 CoCl2(0μmol/L,50μmol/L,100μ mol/L,200μ mol/L,400μmol/L)浓度依赖性诱导胆管癌细胞增殖;CoCl2(200μmol/L)处理48 h组QBC939胆管癌细胞G1期显著减少,处理72 h组G1期显著减少的同时S期和G2显著增加;CoCl2(50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L)处理72 h,HIF-1 α表达显著增加,并随CoCl2浓度增加显著增强.结论 缺氧可诱导胆管癌细胞增殖与增加HIF-1α表达相关.     

苍耳亭对宫颈癌 SiHa 细胞增殖、凋亡和 GSTP1的影响

目的：研究苍耳亭对宫颈癌鳞癌 SiHa 细胞增殖、凋亡及谷胱甘肽硫-转移酶 P1（GSTP1）的影响。方法 MTS法检测不同浓度苍耳亭对 SiHa 细胞生长的抑制作用,荧光显微术观察 SiHa 细胞形态的变化,流式细胞术检测苍耳亭对 SiHa 细胞凋亡的影响,酶标仪法检测 GSTP1酶活性,免疫组化检测 GSTP1蛋白表达,Western blot 法检测 p-JNK 蛋白表达。结果苍耳亭（0~40μmol/ L）对 SiHa 细胞的抑制作用呈时间-浓度依赖性,实验组 SiHa 细胞逐渐皱缩、变圆,甚至出现明显的凋亡小体。用不同浓度苍耳亭（0、5、10、20、40μmol/ L）处理 SiHa 细胞24 h 后,凋亡率分别为5.02%、9.62%、18.5%、26.4%和37.5%;与对照组相比,凋亡率明显升高。苍耳亭浓度性降低 SiHa 细胞 GSTP1酶活性及蛋白表达。Western blot 法结果显示苍耳亭可上调 SiHa 细胞 p-JNK 蛋白的表达。结论苍耳亭对宫颈癌 SiHa 细胞有明显的抑制增殖及促进凋亡作用,抑制 GSTP1、激活 c-Jun 氨基末端激酶（JNK）通路可能是其发挥诱导 SiHa 细胞凋亡的作用机制之一。     

中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞凋亡的影响

目的探讨中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制及凋亡的作用。方法设立空白血清组及中药清毒栓组、保妇康栓组、西药安达芬组,以4%含药血清培养液作用于SiHa细胞,分为3个时间点,通过MTT法检测各组对细胞增殖抑制的影响;同时运用流式细胞分析技术进行TUNEL法检测晚期细胞凋亡的变化。结果经含药血清培养液作用后各组SiHa细胞数量减少,其中以作用72h时对细胞抑制作用最强,与空白血清组比较,差异有统计学意义(P<0.01),且抑制作用安达芬组>清毒栓组>保妇康组,清毒栓组与安达芬组间差异有统计学意义(P<0.05)。各含药血清组对细胞凋亡均有显著的影响,且明显优于空白血清组(P<0.05),各含药血清组凋亡率依次为清毒栓组>保妇康组>安达芬组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论清毒栓含药血清通过促进细胞凋亡而达到抑制肿瘤的目的。     

HIF-1α和VEGF在宫颈癌癌变过程中的表达及意义

目的研究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在宫颈癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达,探讨二者在宫颈癌癌变过程中的临床意义。方法应用免疫组化SP法检测189例宫颈标本,分析HIF-1α和VEGF表达与宫颈癌及癌前病变临床病理特征间的关系。结果HIF-1α蛋白在宫颈病变中的阳性表达率分别为CINⅠ～Ⅱ21.1%、CINⅢ54.5%、宫颈癌78.5%,各组间差异显著(P<0.05);VEGF蛋白在宫颈病变中的阳性表达率分别为CINⅠ～Ⅱ38.6%、CINⅢ60.6%、宫颈癌81.0%,各组间差异显著(P<0.05);HIF-1α和VEGF蛋白在CIN和宫颈癌中的阳性表达密切正相关(r=0.632,P<0.05)。结论HIF-1α可能通过上调VEGF表达,诱导组织中血管的形成,促进宫颈癌前病变的进展和宫颈癌的生长、浸润。     

中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响

目的:探讨中药清毒栓对宫颈癌Si Ha细胞增殖的影响及其诱导凋亡作用的可能机制。方法:设立空白对照组,清毒栓高、中、低剂量组(0.16、0.04、0.01 g/ml)及保妇康栓组(0.017 5 g/ml),分别以不同药液作用于宫颈癌Si Ha细胞24 h、48 h、72 h,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测细胞增殖情况,采用线粒体膜电位法检测细胞凋亡情况。结果:不同剂量的清毒栓作用24 h、48 h、72 h时对宫颈癌Si Ha细胞的增殖均具有一定的抑制作用,其中以清毒栓高剂量组在48 h时作用最为明显。不同剂量的清毒栓均可引起宫颈癌Si Ha细胞线粒体膜电位的改变,进而引起不同程度的细胞凋亡;经统计学分析显示,清毒栓各剂量组、保妇康栓组的凋亡率与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05),清毒栓低、中剂量组与清毒栓高剂量组比较,差异亦有统计学意义(P0.05)。结论:高剂量的中药清毒栓在48 h时对宫颈癌Si Ha细胞增殖的抑制作用最为明显,其作用机制可能是通过使线粒体膜电位降低来促进肿瘤细胞的凋亡。     

Apoptin对宫颈癌Hela细胞的抑制效应

目的：探讨Apoptin基因对人宫颈癌Hela细胞的抑制作用和作用方式。方法：应用脂质体转染法将重组质粒pVAX1-Apoptin和载体质粒pVAX1分别体外转染Hela细胞,作为重组质粒pVAX1-Apoptin组和载体质粒pVAX1组,同时设空白细胞对照组。应用Western blotting检测Apoptin基因在Hela细胞中的表达;运用噻唑兰(MTT)分析法检测重组质粒对Hela肿瘤细胞的抑制作用;罗丹明123 和DCFA 染色测定线粒体跨膜电位(ΔΨm) 和活性氧水平变化;底物染色反应检测caspase-3活性。结果：pVAX1-Apoptin组转染48 h后,Hela细胞的抑制率为69.28%,明显高于对照组（0.74%）和pVAX1组（10.11%）（P<0.01）。与对照组比较,pVAX1-Apoptin组线粒体ΔΨm下降(P<0.01),细胞内活性氧水平升高(P<0.05), caspase-3活性增强(P<0.01)。结论：Apoptin可通过诱导Hela细胞凋亡,进而特异性杀伤Hela肿瘤细胞。     

宫颈癌综合治疗102例临床分析

目的探讨宫颈癌综合治疗的疗效。方法观察102例Ⅰb￣Ⅱb期宫颈癌患者,其中32例术前行新辅助化疗,所有患者接受广泛性子宫切除加盆腔淋巴结清扫术,术后对有高危因素的患者加用放疗或化疗,全部患者术后均给予免疫治疗。结果化疗结束后所有患者达到手术要求;全部患者均能顺利切除病灶并达到足够广的范围;术后辅助放疗、化疗及免疫治疗,患者极少有复发,随访至今全部健在。结论宫颈癌综合治疗近期疗效比较明显,且无严重的不良反应。     

HPV与CIN、宫颈癌的关系探讨

目的探讨人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染与宫颈上皮内瘤样病变(cervicalintraepithelial neoplasia,CIN)、宫颈癌发生之间的关系。方法回顾性分析1 500例已确诊CIN或宫颈癌的患者,采用聚合酶链反应(PCR)进行HPV分型,通过第2代杂交捕获试验法(HCⅡ)对比低危型HPV6/11和高危型HPV-16、18感染者的年龄和宫颈病变程度。结果年龄渐次升高,感染HPV几率愈高,感染高危型HPV-16、18阳性率与宫颈癌高发呈正相关。结论对妇女作HPV筛查对预防宫颈癌有重要意义。     

HPV感染与宫颈癌前病变的相关性研究

目的：探讨HPV感染与宫颈癌前病变两者之间的相关性。方法：选取2007年2月～2009年1月来我院就诊的180例宫颈病变患者为研究对象,采用杂交捕获2代（HCⅡ）方法定量对宫颈HPV DNA的含量进行检测,用RLU/CO表示病毒负荷,根据HPV DNA含量大小将患者分成5组。结果：在正常组、CIN组和宫颈鳞癌组3组中,高危型HPVDNA的检出率分别为29.35%、62.54%和93.02%,且3个组之间比较,差异有高度统计学意义（P〈0.001）。结论：宫颈病变的严重程度和HPV DNA检出率呈正相关,HPV DNA检出率越高,宫颈病变的程度可能越严重。     

乳酸杆菌对宫颈肿瘤细胞的黏附抑制作用

目的探讨乳酸杆菌对宫颈肿瘤细胞的黏附与黏附抑制作用。方法采取30例妇女宫颈脱落上皮细胞,与乳酸杆菌震荡培养1-3h、经革兰染色观察宫颈脱落上皮细胞上乳酸杆菌的黏附指数。取对数生长宫颈癌Hela细胞与乳酸杆菌共同培养1-72h,观察不同时间段宫颈癌细胞乳酸杆菌的黏附指数以及细胞活力变化。结果1）乳酸杆菌对宫颈脱落上皮细胞有很好的黏附作用：在培养2h黏附指数达高峰（活菌组39.44±2.5;灭活组85.1±2.9）;灭活组黏附指数在共培养2、3h均明显高于活菌组（P〉0.01）。2）乳酸杆菌对宫颈癌细胞的黏附作用开始随着培养时间增加逐渐增加,两组黏附指数在共培养12h达高峰（活菌黏附指数为25.69±3.1;灭活菌黏附指数为90.49±2.6）,之后逐渐降低。3）在共培养开始短时间内乳酸杆菌并不影响细胞活力;活菌组共培养12h、灭活组共培养24h宫颈癌细胞活力开始下降。结论乳酸杆菌能很好的黏附并抑制宫颈癌细胞的生长;灭活乳酸杆菌对宫颈细胞以及宫颈癌细胞有着更好的黏附抑制作用。     

二氯化钴诱导大鼠肝癌细胞缺氧与凋亡和增殖的研究

目的:了解大鼠肝癌细胞系CBRH7919在缺氧状态下凋亡和增殖的关系,探讨低氧诱导因子(hypoxia in-duced factor,HIF-1α)在此诱导过程中的作用。方法:二氯化钴(CoCl2)作为缺氧诱导剂。利用RT-PCR和免疫细胞化学法检测CBRH7919细胞HIF-1α在转录水平和翻译水平的表达,利用流式细胞仪检测CBRH7919细胞在不同缺氧程度下细胞凋亡率、细胞周期和线粒体膜电位的变化。结果:(1)随缺氧程度的加重,HIF-1α在转录和翻译水平的表达逐渐增加;(2)流式细胞仪结果显示经300μM CoCl2分别处理0、4、24小时后细胞凋亡率分别为(2.31±1.1)%、(5.62±2.4)%、(21.2±7.5)%。对照组和4小时处理组细胞周期改变不显著,24小时处理组出现显著G0/G1期阻滞。处理组细胞线粒体膜电位较对照组有不同程度的降低。结论:大鼠肝癌细胞随着缺氧程度的加重,细胞凋亡明显增加,伴随细胞周期进入G0/G1阻滞及线粒体膜电位降低;HIF-1α的表达增加在此过程中发挥重要作用。     

缺氧诱导因子和血管内皮生长因子在非遗传性肾透明细胞癌中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、HIF-2α、血管内皮生长因子（VEGF）和微血管密度（MVD）在肾透明细胞癌中的表达情况,分析四者的关系及意义.方法应用免疫组化方法分析107例肾透明细胞癌中HIF-1α、HIF-2α、VEGF和MVD的表达情况.结果本组HIF-2α的阳性染色率（80.5%）明显高于HIF-1α（69.2%）（P〈0.01）.HIF-1α和HIF-2α阳性组中VEGF的阳性率（90.5%和89.8%）明显高于它们阴性组的VEGF阳性率（51.5%和26.3%）,P〈0.01.HIF-2α和VEGF的表达与MVD存在正相关关系,（Spearman相关系数分别为0.500和0.513）,P〈0.01.但肿瘤的病理分级和分期与HIF-1α、2α的表达无相关性,P〉0.05.结论 HIF-2α在肾透明细胞癌中的表达比HIF-1α更广泛,两者与VEGF的表达正相关.HIF-2α对VEGF的正向调控和促血管生成作用都明显强于HIF-1α.未发现两者的表达与肿瘤病理分级和分期的相关性.     

胡桃醌对宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响

目的: 探讨胡桃醌对人宫颈癌SiHa细胞增殖及细胞周期的影响,阐明胡桃醌在宫颈癌治疗中的作用。方法: 选取处于对数生长期的SiHa细胞,随机分为对照组和10、20、40、60、80和100 μmol·L^-1胡桃醌处理组。倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性和细胞生长抑制率,流式细胞术检测SiHa细胞的细胞周期。结果: 与对照组比较,胡桃醌处理组SiHa细胞体积缩小,连接消失,与周围细胞脱离。与对照组比较,胡桃醌处理组细胞增殖活性降低(P<0.05),细胞生长抑制率升高(P<0.05),且呈剂量依赖性,半数抑制浓度(IC₅₀)为20.7 μmol·L^-1;流式细胞术检测,与对照组比较,10和100 μmol·L^-1胡桃醌处理组SiHa细胞的亚二倍体峰(SubG₁)比率增加,G₀/G₁和S期细胞比率降低,G₂/M期细胞比率先升高后降低。结论: 胡桃醌对SiHa细胞增殖具有抑制作用,并可使细胞周期SubG₁比率增加。