一氧化氮合酶同功异构酶在大鼠中枢神经系统的分布

本文采用免疫组织化学技术观察三种一氧化氮合酶同功异构酶在正常大鼠中枢神经系统的分布。结果显示：ＮＯＳ１ 阳性神经元分布于中枢神经系统的广泛区域,包括大脑皮质Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ层,海马分子层,齿状回多形层,尾壳核,中脑上丘,小脑皮质分子层和颗粒层,脊髓Ⅰ、Ⅱ层、侧角、中央灰质和前角。脊髓中央管室管膜上皮也为阳性。ＮＯＳ３ 阳性神经元的分布区域与前者有部分重叠,但也有差别：大脑皮质相同层次内的ＮＯＳ３ 阳性神经元的形态和染色不同于ＮＯＳ１;密集分布于海马锥体细胞层和齿状回颗粒细胞层;小脑浦肯野细胞ＮＯＳ３ 阳性;另外,ＮＯＳ３ 阳性神经元弥散分布于脊髓内,其胞体和核仁均呈阳性。ＮＯＳ２ 阴性。广泛的分布表明ＮＯ 与中枢神经系统的诸多功能有关,而ＮＯＳ１ 与ＮＯＳ３ 分布的差异又说明中枢神经系统不同神经元内ＮＯ的产生是由此两种同功异构酶分别参与而完成的。     

急性弥散性不完全性脑缺血时大鼠海马及运动皮质脑电图和GABA能神经元的变化

用电生理及免疫细胞化学方法观察急性脑缺血大鼠海马及运动皮质的脑电图和其内ＧＡＢＡ能神经元的变化。结果表明：夹闭双侧颈总动脉１５ｍｉｎ后，海马及运动皮质的脑电波波幅变低、频率变慢、高幅θ波增多，有时呈短程阵发性出现。这些变化随着缺血的发展而更加明显，有时出现癫痫样棘波或棘慢波或阵发性尖波。缺血１ｈ后，脑电波有所恢复，但没有恢复到正常水平。免疫细胞化学染色结果：缺血３０ｍｉｎ后，海马及运动皮质内ＧＡＢＡ能神经元开始减少，２ｈ后明显减少。此时海马内约为对照组的６０％左右，表现最明显的部位为齿状回和ＣＡ１及ＣＡ３区。运动皮质内比对照组减少５０％左右。结果提示：急性弥散性不完全性脑缺血时，由于脑血供减少，导致抑制性ＧＡＢＡ能神经元数量减少，出现海马及运动皮质脑电图和行为明显改变，这些变化可能与脑缺血所致的机能障碍和临床表现有关。     

微量海人藻酸刺激大鼠延髓网状背侧亚核后脊髓和三叉神经脊 …

为了观察起自延髓网状背侧亚核的下行投射对脊髓和三叉神经脊束核尾侧亚核神经元活动的影响，将微量海人藻酸注入大鼠ＳＲＤ中，致ＳＲＤ神经元兴奋，在ＳＲＤ下行通路的作用部位引起ｃ－ｆｏｓ的表达。实验结果表明，在注射后３０ｍｉｎ，脊髓灰质内出现ＦＯＳ阳性神经元，１．５－２ｈ时达高峰，４ｈ后明显减少。     

大鼠局灶性脑缺血—再灌注后尾壳核神经型一氧化氮合酶表达的变化

目的：探讨神经型一氧化氮合酶（Neuronal nitric oxide synthase,nNOS)在大鼠脑缺血后不同时程尾壳核内的变化。方法：应用大鼠大脑中动脉阻塞模型（MCAO），结合免疫细胞化学ABC法和图像定量分析技术进行研究。结果：缺血－再灌注早期（0h,1h,6h)尾壳核内nNOS免疫反应阳性神经元数量减少，细胞形态变圆，树突缩短，形态学参数开始下降，缺血－再灌注中期（24h,48h,72h)nNOS阳性神经元数量和形态学参数较前有一过性升高，但随后仍持续降低，缺血－再灌注后期（1W）nNOS阳性神经元数量继续下降，胞体浓缩，树突消失，细胞崩解，形态学参数降到最低，结论：脑缺血－再灌注后尾壳核内nNOS免疫反应阳性神经元损伤较重，持续时间长，后期更为严重，这可能会影响尾壳核功能的恢复。     

谷氨酸对大鼠不同脑区神经毒性的比较研究

目的：探讨谷氨酸神经毒性在不同脑区的差异。方法：新生ＳＤ大鼠２９只，生后第３至第９天，分为１ｇ／ｋｇ、２ｇ／ｋｇ、３ｇ／ｋｇ３组，腹腔内注射谷氨酸单钠（ｍｏｎｏｓｏｄｉｕｍ ｇｌｕｔａｍａｔｅ，ＭＳＧ），并设空白对照组和注射生理盐水组。３月龄时取脑作石蜡切片，Ｓｐｏｅｒｒｉ氏法染色。光镜下计数丘脑、下丘脑、杏仁核、海马、齿状回、梨状皮质等１６个脑区的神经元数，并进行统计学分析。结果：多数脑区注射ＭＳＧ后神经元减少，并与注射量呈正相关，但齿状回、尾－壳复合体无明显变化，背侧内梨状核、杏仁内侧核、海马ＣＡ３区和海马ＣＡ４区的神经元，在低剂量组无明显减少，而在中、高剂量组明显减少。结论：ＭＳＧ对不同脑区的损伤程度不同，有些脑区具有某种保护机制，使神经元免受伤害。     

慢性局灶脑缺血区小胶质细胞/巨噬细胞呈持续性反应

目的:观察小胶质细胞/巨噬细胞对慢性局灶脑缺血的反应。方法:运用局灶脑缺血模型和免疫组织化学染色方法对36只成年雄性SD大鼠的大脑皮质缺血区和尾壳核区的ED1和OX42阳性细胞的反应时程、分布形式和细胞形态变化进行了探查。结果:在脑缺血3d,ED1阳性细胞呈圆形,大多数分布于大脑皮质缺血区周围和缺血侧的尾壳核,仅有少量ED1阳性细胞位于缺血区中央。阳性细胞明显多于对照组。脑缺血2周,ED1阳性细胞数量最多,主要分布于大脑皮质缺血区中央和尾壳核外侧部。脑缺血6周,其数量稍有下降,细胞形态无明显变化。脑缺血3d时,OX42阳性细胞呈"星状",胞体肥大,数量增加,分布于皮质缺血区的外周和尾壳核。缺血中央区的阳性细胞数量少。脑缺血2周,OX42阳性细胞胞体明显增大,分支增粗。在大脑皮质缺血区中央出现大量圆形的没有明显突起的OX42阳性细胞。此时,尾壳核外侧部的阳性细胞的数量和胞体明显增加。脑缺血6周,阳性细胞的数量稍有下降。结论:小胶质细胞/巨噬细胞对局灶脑缺血发生持续性的反应,此可能与迟发性神经元损伤和脑缺血区的自我修复有关。     

微量海人藻酸刺激大鼠延髓网状背侧亚核后脊髓和三叉神经脊束核尾侧亚核内c-fos的表达

为了观察起自延髓网状背侧亚核（ＳＲＤ）的下行投射对脊髓和三叉神经脊束核尾侧亚核（Ｖｃ）神经元活动的影响，将微量海人藻酸注入大鼠ＳＲＤ中，致ＳＲＤ神经元兴奋，在ＳＲＤ下行通路的作用部位引起ｃ－ｆｏｓ的表达。实验结果表明，在注射后３０ｍｉｎ，脊髓灰质内出现Ｆｏｓ阳性神经元，１．５～２ｈ时达高峰，４ｈ后明显减少。在高峰期，同一脊髓节段的不同板层内Ｆｏｓ阳性神经元的密度不同：Ⅰ、Ⅱ层＞Ⅲ、Ⅳ层＞Ⅴ～ⅩⅡ、Ⅹ层，Ⅷ、Ⅸ层中偶见。Ｖｃ内Ｆｏｓ阳性神经元的出现时间和分布与脊髓后角相似。上述结果提示，ＳＲＤ发出的下行纤维主要调控脊髓和Ｖｃ（尤其是浅层）中的神经活动     

白介素-1βmRNA在缺血侧大脑半球不同区域表达的比较

目的：比较缺血侧大脑半球尾壳核、视前区和顶叶皮质白介素－１βｍＲＮＡ表达的差异,探讨脑不同区域对缺血敏感性的病理机制。方法：运用原位杂交技术对３０只ＳＤ大鼠进行了研究。结果：缺血侧大脑半球尾壳核、视前区和顶叶皮质微血管内皮细胞和单核／巨噬细胞显示白介素－１βｍＲＮＡ的强杂交信号,尾壳核杂交信号较视前区和顶叶皮质出现早而强。顶叶皮质的白介素－１βｍＲＮＡ阳性信号的高峰也明显迟于尾壳核。结论：白介素－     

脑缺血后大脑皮质及尾壳核NOS神经元的时程变化

脑缺血后大脑皮质及尾壳核ＮＯＳ神经元的时程变化马文领马常升杨天祝葛莉张兴和（解放军石家庄医学高等专科学校河北医科大学基础所）近年来逐渐认识到一氧化氮（ＮＯ）可能是中枢神经系一种新的递质或调质，参与神经损伤和神经毒性作用。为了探讨ＮＯ在脑缺血后的变化，...     

脑创伤与缺血后大鼠脑内NOS阳性细胞变化和神经元损害的形态学观察

脑创伤与缺血后大鼠脑内ＮＯＳ阳性细胞变化和神经元损害的形态学观察李红丽蔡文琴（第三军医大学组胚教研室）本实验应用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学技术结合尼氏染色观察了大鼠皮层针刺损伤及全脑缺血／再灌注术后皮层、海马及下丘脑室旁核等敏感区域神经元受损与ＮＯＳ阳性...     

脑缺血早期星形胶质细胞胶质原纤维性酸性蛋白免疫组化的时程变化研究

目的：探讨脑缺血早期（24h内）大脑皮质星形胶质细胞（Ast)的变化规律。方法：应用胶质原纤维性酸性蛋白免疫组织化学ABC技术。结果：缺血15min和30min组,缺血中心区大脑皮质胶质原纤维性酸性蛋白阳性细胞较均匀地分布于Ⅱ－Ⅵ层,细胞数量明显多于非缺血区;缺血１h和２h组胶质原纤维性酸性蛋白阳性细胞数量进一步增加,胞质染色加深,并集中出现于Ⅲ、Ⅳ层;缺血３h组胶质原纤维性酸性蛋白阳性细胞进一步增大呈气球样,突起增长变粗,突起内出现水肿泡;缺血６h组胶质原纤维性酸性蛋白细胞固缩,边界不清;12h和24h组缺血中心区胶质原纤维性酸性蛋白细胞消失。同时观察到缺血3h和6h组缺血边缘区胶质原纤维性酸性蛋白细胞数量增多,直径增大,并可见到细胞分裂现象。结论：星形胶质细胞对脑缺血早期神经元损伤具有较强的保护作用。     

胚鼠大脑皮质一氧化氮合酶阳性神经元的体外生长发育研究

本文在体外培养条件下观察了孕 14 d SD胚鼠大脑皮质中一氧化氮合酶阳性神经元的形态和发育过程。将孕 14 d SD胚鼠大脑皮质细胞悬液接种于 2 4孔培养板 ,实验按培养龄分 4组 ,分别在接种后 5d、10 d、15d和 2 0 d终止培养 ,继而进行NA DPH - d组织化学染色 ,观察各组一氧化氮合酶阳性神经元的数量和形态。结果显示 :培养后 5d即有一定数量的一氧化氮合酶阳性神经元出现 ,在 4个实验组中 ,以 15d组的一氧化氮合酶阳性神经元的数量为最多、突起最长 ,深染细胞数量也最多 ,大部分一氧化氮合酶阳性神经元的胞体与突起均局限分布在细胞团块内 ,胞体大小不一 ,只有少量的一氧化氮合酶阳性细胞散在分布在细胞团块之间 ,其突起伸向或围绕团块。本研究结果表明 ,在胚鼠大脑皮质的神经元内即已有一氧化氮合酶存在 ,提示一氧化氮可能与胚脑的生长发育有关     

缺血再灌注对大鼠神经元与星形胶质细胞的影响

应用免疫组织化学单标记法分别观察大鼠在大脑中动脉阻塞再灌注时胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和Fos蛋白在大脑皮质内表达的时间规律,并用免疫组织化学双重标记法观察GFAP和Fos蛋白表达的相互关系。结果发现在缺血1h再灌注2h时,大脑皮层的星形胶质细胞被激活,细胞体积增大,突起粗大,呈GFAP阳性。星形胶质细胞的反应直至48h依然强烈。被激活的星形胶质细胞和神经元表达Fos蛋白,并呈现时程变化规律。结果提示星形胶质细胞可能和神经元一起参与了大脑皮层缺血再灌注后的变化。     

多重脑震荡大鼠脑神经元病理变化的研究

为探讨多重脑震荡(multiple cerebral concussion,MCC)后脑损伤的累加效应机制,本实验首次应用自制单摆式机械打击装置复制MCC大鼠模型,研究伤后大鼠脑神经元的组织病理学变化。将56只大鼠随机分为7组:对照组、伤后1、2、4、8、16和24d组(n=8),分别用Nissl染色显示神经元,并对变性神经元进行计数。结果显示:MCC后1d,大鼠大脑皮层、海马、齿状回及脑干网状结构变性神经元增加,伤后2d达到高峰,4～8d减轻,8～16d又有回升,24d基本恢复至正常水平。以上结果提示,多重脑震荡后,不同脑区的脑神经元可出现早期及迟发性的神经元变性,此病理变化可能与多次脑损伤的累积性加重有关。     

脑缺血后大鼠海马一氧化氮合酶表达的变化

用四血管闭塞法造成大鼠一过性全脑缺血。按不同时程，以还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氨酶组织化学方法对再灌流期间海马不同亚区内一氧化氮合酶阳性细胞的数量变化进行了研究。结果发现：海马本部的一氧化氮合酶阳性细胞数量在再灌流2～6h即有增高，到12～24h进一步增加至对照水平的3倍左右；3d时已有所减少，7d时在CA1区恢复至对照组的水平。齿状回的一氧化氮合酶阳性细胞数量在再灌流2～6h已有明显的增高，约为对照水平的2倍．并在再灌流12h、24h和3d时保持在同一水平。此外，缺血后各亚区内染出的血管数量于再灌流2～6h即有明显增多，并在再灌流7d后仍明显高于对照组。本文结合文献对缺血性神经元坏死和一氧化氮合酶表达之间的关系进行了讨论。     

亚低温减少大鼠短暂性全脑缺血后皮质iNOS诱导的神经元凋亡

为研究亚低温对大鼠脑缺血再灌注后皮质iNOS表达、NO产生及神经元凋亡的影响及探讨亚低温的神经保护机制,用大鼠短暂全脑缺血模型,采用Nissl染色观察存活神经元、免疫组化法检测iNOS、硝酸还原酶法检测NOx-水平和TUNEL染色结合电子显微镜观察检测凋亡神经元。结果显示:常温缺血组额叶皮质iNOS表达、NOx-水平增高,出现凋亡神经元;低温缺血组iNOS表达、NOx-水平明显低于常温缺血组,未检测到凋亡神经元。上述结果提示,脑缺血后iNOS来源的NO参与了神经元的凋亡过程,亚低温可减少大鼠短暂性全脑缺血后iNOS诱导的神经元凋亡。     

脑缺血及再灌流早期大鼠海马CA_1区NMDA受体的变化

探讨脑缺血和缺血再灌流早期海马CA1 区NMDA受体的变化规律,选用雄性SD大鼠 48只,随机分为:假手术对照组、单纯脑缺血 15min、20min和 30min组及脑缺血 15min再灌流 0min、30min和 24h组,参照Pulsinelli Brierley(4VO)法制作脑缺血模型,取脑,连续冰冻冠状切片,NR1免疫组化染色并进行图像分析及计算阳性单位PU值。结果显示: (1 )单纯脑缺血 15min、20min和 30min组PU值分别为 5. 89±0. 92、5. 18±1. 63和 4. 89±2. 69,与对照组PU值 7. 56±2. 35相比,下降 22. 09% ~35. 32% (P≤0.05); (2)再灌流 30min和 24h组PU值分别为 4. 20±1. 37和 2. 99±1. 28,与对照组PU值相比,减少 44. 44% ~60. 45%,有统计学意义(P<0.05),均明显降低; (3)再灌流 0min、30min和 24h组两两比较, 24h和 0min组的NMDA受体减少有统计学意义(P<0.05)。上述结果提示,脑缺血和缺血再灌流早期海马CA1 区NMDA受体存在下行调节,这可能是脑缺血后自身的一种保护性调节。     

大鼠脑缺血再灌流时即早基因c-fos在脑组织表达的免疫组织化学研究

为了研究 c-fos在大鼠缺血性脑损伤中的作用 ,本研究利用阻塞大鼠大脑中动脉 2 h后再灌流 0 .5～ 48h制成的局灶性脑缺血模型 ,用免疫组织化学技术观察了 c-fos的表达特点。结果证明 ,正常组、假性手术组 c-fos在神经元的表达呈阴性或弱阳性 ;再灌流 0 .5～ 48h组 ,胞核呈强阳性 ( +++)的神经元主要位于非大脑中动脉供血区 ,而缺血中心区的皮质、纹状体和视前区呈阴性 ( -)。缺血周边区 ,神经元胞核呈弱阳性 ( +)。正常组未发现 c-fos阳性的胶质细胞 ,假性手术组脑实质内胶质细胞团和侧脑室壁的胶质细胞 c-fos呈强阳性 ,再灌流 3h组脑室壁及深层的室管膜下区和皮质浅层、髓质等处胶质细胞为阳性 ,再灌流2 4～ 48h组缺血周边区和脑实质内的巨噬细胞、活化小胶质细胞呈强阳性 ;再灌流 48h组 ,白质如胼胝体内大量的反应性星形胶质细胞呈强阳性。本文结果提示 ,脑缺血时 c-fos对神经元具有神经保护作用 ,并且这种保护作用可能与小胶质细胞和星形胶质细胞的活化有关     

新生大鼠大脑皮层神经细胞的体外原代培养

本文探讨了新生大鼠出生２４ｈ内大脑皮层神经细胞原代培养的方法，建立了稳定的神经细胞培养模型。通过光镜和细胞Ｎｉｓｓｌ染色、ＡＣｈＥ染色，对培养各阶段的神经细胞进行了观察，系统地描述了它们的生长发育过程和形态特征。本方法扩大了大脑皮层神经细胞培养材料的来源。另外，对培养方法的特点进行了讨论。