乌司他丁对小鼠不同程度肠缺血-再灌注损伤的作用

目的观察乌司他丁对小鼠轻、重度肠缺血再灌注（I／R）损伤的作用。方法建立缺血时间分别为90min和180min的小鼠轻度肠I／R损伤模型（模型1）和严重肠I／R损伤模型（模型2）。动物随机分为正常对照组、假手术组、模型1对照组和治疗组、模型2对照组和治疗组,共六组（n=10）。模型1和模型2治疗组小鼠均于缺血结束后再灌注前即刻尾静脉注射乌司他丁16IU／g,相应对照组于缺血结束再灌注前注射等体积的生理盐水,再灌注2h后于下腔静脉采血。观察小肠黏膜的大体损伤情况;采用Chiu氏评分法对小肠病理损伤程度进行评分;检测黏膜髓过氧化物酶（MPO）活性;采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-d（TNF-α）和白介素-6（IL-6）水平。结果正常对照组和假手术组小鼠肠黏膜结构正常,其余各组小鼠均有明显肠黏膜损伤,并伴有黏膜MPO活性增加及血清TNF-α和IL-6水平升高。与相应对照组比较,模型1治疗组小鼠的肠黏膜损伤显著加重,Chiu氏评分显著升高（P〈0．01）;但模型2治疗组小鼠的小肠损伤明显减轻,Chiu氏评分显著降低（P〈0．01）。模型1和模型2治疗组小鼠的血清TNF-α、IL-6水平及MPO活性均明显低于其相应对照组,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论乌司他丁治疗可减轻严重肠I／R损伤但加重轻度肠I／R损伤,这一作用可能与其抗炎作用有关。     

褪黑素对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

目的探讨褪黑素（MT）保护大鼠肝缺血再灌注损伤的机制。方法采取大鼠第一肝门阻断的缺血再灌注模型,将健康雄性SD大鼠64只随机分为两组：对照组和MT组,观察每组动物的病理切片,分别检测血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）及肝组织匀浆中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）的含量,免疫组化测定诱导型NO合酶（iNOS）的表达。结果肝脏缺血再灌注后,有明显的病理损伤改变。MT组再灌注2 h、4 h血清ALT、LDH、肝组织匀浆中MDA和SOD含量与对照组相比均明显降低（均P〈0.01）,MT组iN-OS表达明显低于对照组（P〈0.01）。结论自由基产生过多是肝脏缺血再灌注损伤初期的主要原因,给予MT预处理可通过调节iNOS和SOD来降低MDA、NO水平,从而减轻肝脏损伤。     

P38MAPK抑制剂FR167653对肝脏缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 探讨p38MAPK特异性活性抑制剂FR167653在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制.方法 利用封闭群SD大鼠制作缺血再灌注模型,将实验动物分为假手术组、对照组、治疗组.分别在各个时间点按照相应程序采集标本行血清肝功能检测、肝组织病理学检查、外周血细胞因子水平ELISA检测.结果 （1）再灌注后各时点大鼠外周血ALT、AST水平均明显升高,但治疗组明显低于对照组,两组间差异有统计学意义（P〈0.05）.（2）对照组肝细胞肿胀明显,可见散在坏死细胞;治疗组肝脏结构较对照组明显改善.（3）TNF-α及IL-1β在假手术组肝脏组织中表达水平较低,缺血再灌注后对照组的表达水平明显增高,治疗组的表达水平明显低于对照组,差异均有统计学意义（均P〈0.05）.结论 FR167653能对缺血再灌注肝脏起保护作用.     

小鼠小肠缺血再灌注损伤后FGFR3基因的变化

目的通过检测成纤维细胞生长因子受体3（fibroblast growth factor receptor 3,FGFR3）在小鼠缺血再灌注（I／R）损伤后肠上皮基因表达变化,为进一步研究FGFR3对缺血再灌注损伤的修复作用及机制奠定基础。方法采用小鼠肠系膜上动脉夹闭法制备缺血1h后再灌注动物模型。分为正常组、野生鼠I／R组和FGFR3增强小鼠I／R组。检测再灌注1、3、6h和1、3d时肠上皮损伤程度和血浆D-乳酸水平,用实时逆转录-聚合酶联反应（Realtime-PCR）检测小肠中FGFR3 mRNA表达。结果肠缺血再灌注1、3、6h,肠粘膜损害明显,肠粘膜再生1、3h,肠粘膜结构逐渐恢复至正常。FGFR3增强小鼠在各时间点肠粘膜损害程度均轻于野生小鼠。两组小鼠缺血再灌注损伤后D-乳酸水平在各时相点均明显高于正常对照组小鼠,并且均在再灌注1h后达到峰值,然后逐渐下降。但FGFR3增强小鼠在再灌注1、3、6h,均显著低于野生小鼠。两组小鼠缺血再灌注损伤后FGFR3mRNA表达明显增高,均在再灌注1h后达到第一个峰值,然后迅速下降,于3h达到低谷,再迅速升高达到第二个峰值后逐渐下降,3d仍处于较高水平。结论缺血再灌注损伤后小鼠小肠中FGFR3 mRNA表达量显著增加。     

姜黄素对大鼠肾脏缺血再灌注损伤后核因子-κB表达的影响

目的探讨姜黄素对大鼠肾缺血再灌注损伤后核因子-κB（NF-κB）表达的影响。方法 24只大鼠随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组和姜黄素组,每组8只,在肾组织缺血45 min后完全恢复组织灌流。全自动生化分析仪检测肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）,光镜下观察肾组织病理学改变,Western blotting法检测NF-κB蛋白表达。结果与假手术组比较,缺血再灌注组的肾功能指标水平明显增高,光镜下可见肾小管损伤明显加重,Western blotting显示NF-κB表达明显增高,差异有统计学意义（P〈0.05）。姜黄素组与缺血再灌注组比较,肾功能指标明显减轻,NF-κB表达显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论姜黄素能减轻肾缺血再灌注损伤,其机制可能是抑制NF-κB的表达有关。     

即刻早期基因c-fos,c-jun在缺血再灌注大鼠肝脏中的表达

目的研究即刻早期基因家族中c-fos、c-jun基因在缺血再灌注肝脏中的表达情况,探讨其与缺血再灌注损伤发生的关系。方法 SD大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注后30min组和缺血再灌注后120min组。全自动生化分析仪测定血清ALT、AST水平,光镜观察肝组织形态学改变,TUNEL法测定肝细胞凋亡指数。实时荧光定量PCR（realtimePCR）法测定组织中c-fos及c-jun的表达情况。结果肝脏缺血再灌注损伤后血清ALT、AST逐步上升（P〈0.05）。病理改变显著,细胞凋亡现象逐步显现。c-fos及c-jun的表达水平,在再灌注后30min明显升高（P〈0.05）,再灌注2h后表达水平有所回落,但仍显著高于假手术组（P〈0.05）。结论 c-fos及c-jun基因参与肝脏缺血再灌注损伤的发生,并可能与肝细胞凋亡与再生的过程相关。     

细胞因子致鼠小肠移植中小肠缺血再灌注损伤及丹参保护作用的研究

目的 探讨细胞因子致鼠小肠移植中小肠缺血再灌注损伤中的机制及丹参的保护作用.方法 将60只大鼠随机分为假手术组、模型组和丹参治疗低、中、高3个剂量组,通过夹闭SAM模拟大鼠小肠移植中小肠缺血再灌注模型.ELISA法检测再灌注2h后各组肠组织与血浆中TNF-α、IL-1β和IL-8的含量及肠黏膜损伤程度.结果 模型组血浆及肠组织中TNF-α、IL1β、IL-8含量较假手术组明显升高(P＜0.01),肠黏膜损害明显(P＜0.01);治疗组上述细胞因子水平较模型组下降(P＜0.01),且随丹参剂量增加呈逐渐下降趋势,肠黏膜损害减轻(P＜0.01).结论 丹参对小肠移植中小肠缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制炎症细胞因子的表达有关.     

姜黄素对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的干预作用

目的观察姜黄素对大鼠睾丸缺血再灌注损伤的影响。方法将60只成年雄性SD大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组和治疗组,每组20只。对照组大鼠施行左侧睾丸假手术。缺血再灌注组大鼠在左侧睾丸扭转720度2h后复位。治疗组大鼠接受与缺血再灌注组相同的外科手术,并于睾丸复位时给予姜黄素（200mg/kg）尾静脉注射。复位后4h,每组一半的大鼠行睾丸切除术,测定黄嘌呤氧化酶活性、丙二醛水平和血红素加氧酶-1蛋白表达水平。复位后3个月,剩余大鼠行睾丸切除术,分析睾丸生精功能。结果单侧睾丸扭转复位引起同侧睾丸黄嘌呤氧化酶活性、丙二醛水平和血红素加氧酶-1蛋白表达水平显著升高（P〈0.05）,睾丸生精功能明显下降（P〈0.05）。姜黄素干预后,同侧睾丸黄嘌呤氧化酶活性和丙二醛水平显著下降（P〈0.05）,血红素加氧酶-1蛋白表达水平明显提高（P〈0.05）,睾丸生精功能明显改善（P〈0.05）。结论姜黄素通过抑制黄嘌呤氧化酶活性、提高血红素加氧酶-1蛋白表达水平,减少活性氧含量,从而保护睾丸生精功能。     

姜黄素对大鼠视网膜缺血再灌注后细胞凋亡及p53表达的影响

目的 探讨姜黄素对大鼠视网膜缺血再灌注后细胞凋亡及凋亡相关基因p53表达的影响。方法制作大鼠视网膜缺血再灌注模型,并随机分为假手术组（SH组）、缺血再灌注组（IR组）、姜黄素处理组（CU组）和对照组（SC组）,分别于再灌注后2、6、24、72h和7d时观察大鼠视网膜和视网膜毛细血管细胞的凋亡情况,并检测视网膜Caspase-3酶的表达活性及p53基因的表达情况。结果各组模型均制作成功,细胞组织学检查可见CU组损伤明显轻于其他组。CU组视网膜和视网膜毛细血管的细胞凋亡数量均显著多于SH组（均P〈0.01）,但显著少于IR组（P〈0．01）;CU组p53表达水平及Caspase-3酶活性均显著强于SH组（均P〈0.01）,但显著弱于IR组（P〈0．01）。结论姜黄素对大鼠视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用,调控凋亡相关基因p53蛋白的表达可能是其作用机制之一。     

大鼠肝脏缺血再灌注损伤对COX-2和micorRNA-101的表达

目的探讨大鼠肝脏缺血再关注损伤对COX-2和micorRNA-101表达的影响。方法通过建立大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,并行肝叶切除术,术后通过Quantitative real-time PCR (q RT-PCR)及Western Blot(WB)技术分析COX-2基因在肝脏缺血再灌注过程中的表达情况;通过生物信息学预测可能与COX-2基因相互作用的重要micro RNA,并分析这些micro RNA在肝脏缺血再灌注过程中的表达模式及其对COX-2的表达调控作用。结果在肝脏缺血再灌注后,COX-2基因m RNA及蛋白表达水平显著升高;micro RNA-101在肝脏缺血再灌注过程中表达下调,其表达趋势和COX-2基因表达相反;生物信息预测发现,micro RNA-101可能结合于COX-2m RNA 3’-UTR区域;采用micro RAN-101 mimics处理大鼠永生化肝细胞系BRL-3A细胞可导致COX-2基因表达下调。结论肝脏缺血再灌注可引起micro RNA-101表达下调,进而导致COX-2基因表达上调,并最终影响肝细胞周期改变。     

高压氧对短暂前脑缺血小鼠海马半胱天冬酶-3表达的影响

旨在通过测定缺血再灌注时半胱天冬酶 3(caspase 3)的表达以及高压氧对表达的影响 ,从细胞凋亡的角度探讨高压氧治疗脑缺血的分子生物学机制。将C5 7BL/ 6N小鼠分为假手术组 (正常对照组 )、缺血再灌注组 (I/R组 )及缺血再灌注加高压氧治疗组 (HBO组 ) ,后 2组夹闭双侧颈总动脉 2 0min后再通血流 ,建立脑缺血再灌注模型 ,分别于再灌注 6h、12h、2 4h和 4 8h取海马。采用半定量反转录 PCR及蛋白免疫印迹 (WesternBlotting)方法分别检测caspase 3在转录水平(mRNA)及翻译水平的表达变化。结果 :各I/R组及HBO组海马中caspase 3mRNA及酶原表达水平与假手术组相比均有明显升高 ,且差异有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;各I/R组与相应时相点HBO组caspase 3mRNA及酶原表达水平相比差异均无统计学意义 (P >0 .0 5 )。提示 :脑缺血再灌注损伤诱发caspase 3转录水平增加 ,而且这是引起其酶原增加的主要原因 ;caspase 3介导的细胞凋亡参与了缺血再灌注损伤 ;本实验中所采用的HBO治疗方案对caspase 3转录及酶原水平无明显作用。     

IL-33预处理对小鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨白细胞介素(IL)-33预处理在小鼠肝脏缺血再灌注中的作用及可能机制。方法将45只雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,每组15只:对照组即肝脏缺血再灌注组(PBS+I/R组),静脉注射等量磷酸盐缓冲液,1 h后分离支配肝脏左、中、尾叶的肝动脉和门静脉及胆管, 应用无损伤微血管夹阻断以上血管60 min;实验组即重组白细胞介素(IL-33)预处理组(rIL-33+I/R组),静脉注射重组IL-33蛋白(每只5 μg),1 h后分离上述血管并夹闭60 min;假手术组(Sham组)小鼠除了不夹闭无损伤微血管夹外其余处理同对照组;每组小鼠再均分为3个亚组,每组5只,分别于再灌注6 h、12 h及24 h检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及IL-17A水平;另将30只同型小鼠随机分为6组,分别测定不同时段缺血肝脏组织IL-33及髓过氧化物酶(MPO)表达。结果在小鼠肝脏缺血再灌注过程中,IL-33的表达明显升高。再灌注后12 h,PBS+I/R组小鼠血清ALT、AST含量较Sham组明显升高(P < 0.01),rIL-33+I/R组血清ALT、AST含量较PBS+I/R组明显降低(P < 0.01);HE染色提示rIL-33+I/R组肝细胞损伤、中性粒细胞浸润、肝脏组织MPO含量明显低于PBS+I/R组(P < 0.01);ELISA检测血清IL-17A含量提示rIL-33+I/R组明显低于PBS+I/R组(P < 0.01)。结论IL-33在小鼠肝脏缺血再灌注过程中起到保护作用,其机制可能与其抑制IL-17A的表达,减少中性粒细胞浸润有关。     

全脑缺血再灌注后大鼠海马回中Bcl-2及Bax的表达

目的探讨大鼠全脑缺血/再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤后大脑海马回中Bcl-2及Bax的表达。方法将48只SD大鼠随机分为假手术（SO）组24只;全脑缺血/再灌注（I/R）组24只,采用四血管阻塞法建立大鼠全脑I/R损伤的模型。用免疫组织化学SABC法检测大鼠海马CA1区锥体细胞中Bcl-2及Bax的表达,测量其平均灰度值,用苏木精-伊红（HE）染色检测存活锥体细胞数。结果在I/R组,可见Bcl-2平均灰度值在3小时降低;Bax在3小时平均灰度值开始降低,12小时继续降低,24小时降低达到高峰,到48小时开始回升;存活神经元数目随再灌注时间的延长而减少（P均〈0.01）。结论大鼠全脑缺血/再灌注后,Bcl-2和Bax参与了脑神经元凋亡的调控。     

姜黄素对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中NO和S100β水平的影响

目的：观察姜黄素对脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织中一氧化氮（NO）和S100β水平的影响,探讨姜黄素对缺血性脑损伤保护作用的机制。方法：成年SD大鼠随机分为假手术组、模型组和姜黄素处理组,每组24只。采用线栓法阻断大脑中动脉（MCAO）2 h诱导建立暂时性局部脑缺血模型,姜黄素处理组大鼠术前连续3 d给予腹腔注射姜黄素溶液,于脑缺血再灌注后24和72 h采用TTC染色观察脑梗死体积,硝酸还原酶法和ELISA法分别检测各组大鼠脑组织中NO和 S100β水平。结果：与模型组比较,姜黄素处理组大鼠脑缺血再灌流24和72 h时脑梗死体积明显减小（P<0.05）。与假手术组比较,模型组大鼠脑缺血再灌注24和72 h时脑组织中NO和S100β水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,姜黄素处理组大鼠脑缺血再灌注24和72 h时脑组织中NO水平明显降低（P<0.05）,脑缺血再灌注72 h时脑组织S100β水平明显降低（P<0.05）。结论：姜黄素能明显减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的程度,降低脑组织中NO和S100β水平,提示脑组织中NO和S100β水平降低可能与姜黄素的神经保护作用有关。     

高压氧对大鼠短暂全脑缺血半胱天冬酶-3的影响

为探讨高压氧 (HBO)对脑缺血半胱天冬酶 3 (简称caspase 3 )活性的影响 ,将 2 0 0～ 2 5 0 gSD大鼠分为缺血再灌注组 (I/R组 )、高压氧 (HBO)处理组及假手术组 ,以Pulsinelli等报道的四动脉阻断法建立脑缺血再灌注动物模型 ,缺血 2 0min,分别于再灌注 6、2 4、4 8及 96h取顶叶皮质匀浆 ,用显色法测定caspase 3活性。结果显示 :再灌注 6h ,HBO组及I/R组同假手术组相比 ,caspase 3活性无显著差异 (P >0 .0 5 ) ,但HBO显著高于I/R组 (P <0 .0 5 ) ;2 4h时间点HBO组及I/R组均高于假手术组 (P <0 .0 5 ) ,但前 2组之间无显著差异 ;4 8及 96h时间点HBO及I/R组虽高于假手术组 ,但差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ,且此 2组间亦无显著差异 ,说明此时caspase 3已基本降至正常。提示全脑短暂性缺血再灌注后caspase 3被激活 ,缺血早期用HBO处理可促进其活化 ,而HBO处理多次后对凋亡的作用已不明显     

p38丝裂原活化蛋白激酶在小鼠胃缺血-再灌注损伤中的作用

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在小鼠胃缺血-再灌注损伤中的作用。方法C57BL/6小鼠随机分为3组:假手术组、模型组和CNI-1493预处理组,CNI-1493预处理组于术前1h腹腔注射p38MAPK抑制剂CNI-1493(2mg/ml)溶液10ml/kg。通过夹闭小鼠腹腔动脉30min后松开动脉夹再灌注1h制作胃缺血-再灌注损伤模型。再灌注1h后取胃标本,甲醛固定后铺平拍照,计算胃黏膜出血面积百分比。应用蛋白质印迹法检测并比较各组磷酸化及总p38、JNK、ERK,磷酸化NF-κBp65以及分裂型Caspase-3的表达水平。结果与假手术组比较,模型组胃黏膜出血面积明显增大(P<0.05),p38、JNK以及ERK明显激活(P<0.05),磷酸化NF-κBp65以及促凋亡蛋白激活型Caspase-3表达明显增多(P<0.05)。CNI-1493预处理能明显逆转上述改变(P<0.05)。结论MAPK/NF-κB通路活化在胃缺血-再灌注损伤中起到重要作用,p38MAPK抑制剂CNI-1493能抑制MAPK/NF-κB通路活化、减少凋亡蛋白表达,减轻胃缺血-再灌注引起的黏膜出血。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在小鼠肠缺血再灌注肺损伤中的作用

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在小鼠肠缺血再灌注肺损伤的作用。方法10周龄健康雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和缺血再灌注+SB239063处理组(SB239063组),SB239063组于术前1h腹腔注入p38MAPK抑制剂SB239063(3mg/kg),另两组注入等量生理盐水。采用夹闭C57BL/6小鼠肠系膜前动脉45min后再灌注6h的方法造成肠缺血再灌注损伤模型。处死小鼠取肺标本,蛋白质印迹法检测肺组织磷酸化p38MAPK蛋白水平,RT-PCR检测肺组织TNF-α和IL-1βmRNA表达,H-E染色观察肺组织病理学改变。结果肠缺血再灌注导致明显肺损伤,肺组织p38MAPK活化明显增加,TNF-α和IL-1β基因表达水平明显升高(与假手术组比较P<0.01);SB239063可抑制肺组织p38MAPK活化,减轻小肠缺血再灌注引起的肺损伤,并下调肺组织TNF-α和IL-1βmRNA表达(与缺血再灌注组比较P<0.05)。结论p38MAPK在小鼠肠缺血再灌注肺损伤中起重要作用,抑制p38MAPK活化可减轻肠缺血再灌注肺损伤。     

参附注射液对大鼠肠缺血再灌注时肠上皮细胞Caspase-3、Bcl-2基因表达的影响

目的 :研究参附注射液对大鼠肠缺血再灌注期间粘膜上皮细胞凋亡的影响 ,并探讨其可能机制。方法 :采用大鼠肠缺血再灌注模型。 2 4只大鼠随机分为对照组 (C组 )、缺血再灌注组 (I/R组 )和参附治疗组 (SF组 ) ,SF组于阻断前 30min静注SF液 2ml·(1 0 0 g) -1 。再灌注 2h检测回肠粘膜上皮细胞casapse 3、Bcl 2蛋白的表达及细胞凋亡 ;同时观察小肠粘膜病理形态学改变。结果 :①凋亡细胞检测显示 :I/R组凋亡细胞显著增多 ,SF组凋亡细胞数较I/R组显著减少而多于C组 (均P <0 .0 5 )。②casapse 3、Bcl 2蛋白的表达 :caspase 3表达I/R组显著多于SF组和C组 (P <0 .0 1 ) ,SF组与C组无明显差异 ;Bcl 2表达SF组显著高于I/R组 (P <0 .0 5 ) ,后者显著低于C组 (P <0 .0 5 )。③SF组小肠粘膜病理损伤程度明显减轻I/R组 (P <0 .0 1 )。结论 :参附注射液通过抑制caspase 3表达和促进Bcl 2基因表达减少缺血再灌注期间肠粘膜上皮细胞的凋亡 ,从而减轻肠粘膜缺血再灌注损伤     

吉非罗齐对高脂饮食喂养的兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨吉非罗齐对高脂饮食喂养的兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法选用24只新西兰兔分成缺血再灌注组（I/R组）、吉非罗齐治疗＋缺血再灌注组（GF＋I/R组）和假手术组。测定缺血前后及再灌注后各组兔血浆CK、LDH、CRP和IL-6的变化,观察各组兔心肌梗死范围,并用电镜观察心肌超微结构的变化,光镜观察心肌炎症细胞浸润。结果I/R组与GF＋I/R组在缺血后及再灌注后血浆CK、LDH、CRP、IL-6明显高于假手术组（P〈0.01）。I/R组CK、LDH、CRP、IL-6值明显高于GF＋I/R组（P〈0.01）。GF＋I/R组较I/R组心肌梗死面积减少（P〈0.05）。光镜及电镜观察可见吉非罗齐能明显减轻心肌病理损伤。结论吉非罗齐对心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与抑制炎症反应有关。