海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢细胞腹腔异体移植以及对肾上腺的影响

背景:应用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊技术包裹细胞进行异体移植,被证明是一种可避免受体产生免疫排异的有效方法.目的:观察海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化卵巢细胞种植于去卵巢大鼠腹腔后对受体大鼠肾上腺的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-03/2008-09在首都医科大学生殖医学研究中心完成.材料:取Wistar大鼠卵巢分离培养卵巢细胞,进行微囊化处理,制备包裹卵巢细胞的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊.方法:将40只雌性Wistar大鼠随机分为4组:去势组于无菌条件下切除双侧卵巢;微囊移植组手术摘除双侧卵巢后腹腔移植包裹卵巢细胞的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊;雌激素替代治疗组手术摘除双侧卵巢后腹腔注射乙烯雌酚 0.2 mg/kg,每3 d注射1次.正常对照组不进行任何处理.主要观察指标:干预后30 d放射免疫法检测大鼠血清中雌激素水平,观察肾上腺切片的形态学特点,并利用免疫组织化学SP法检测各组大鼠肾上腺皮质各层增殖细胞核抗原表达变化.结果:①放射免疫法检测正常对照组,雌激素替代治疗组以及微囊移植组雌激素水平明显高于去势组,而正常对照组,微囊移植组,雌激素替代治疗组之间雌激素水平差异无显著性意义.②去势组肾上腺皮质网状带增厚,网状带与球束状带比值增大,束状带和网状带增殖细胞核抗原阳性表达都增加;而微囊移植组及雌激素替代治疗组增殖细胞核抗原阳性细胞明显低于去势组,差异具有显著性意义.结论:微囊化大鼠卵巢细胞异体移植后,可在受体大鼠体内继续合成和分泌雌二醇,所分泌的雌激素可以纠正肾上腺皮质因卵巢摘除而导致的形态改变,并与雌激素替代治疗疗效相近.     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢激素分泌细胞异体移植对垂体形态学的影响

目的:已有研究证实海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊对机体无明显毒副作用且生物相容性好,应用这一技术包裹细胞,可明显延长异体内移植物的存活时间.将海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢细胞体外培养后进行异体移植,观察其治疗卵巢功能丧失模型大鼠的可行性及垂体形态学变化.方法:实验于2006-03/2007-09在首都医科大学生殖医学研究中心完成.①实验动物:30只Wistar雌性大鼠,随机分为正常对照组,卵巢摘除组,微囊移植组,每组10只.实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求.②实验方法:卵巢摘除组:无菌条件下切除双侧卵巢:微囊移植组:海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠生物膜包裹传至P2代的大鼠卵巢细胞,制成微囊体外培养,收集24 h培养液以检测雌二醇分泌状态;将微囊化的卵巢细胞移植入已行双侧卵巢切除术的大鼠腹腔.用阴道涂片观察大鼠动情周期恢复情况.术后40 d麻醉后处死动物,放射免疫法检测血清雌二醇质量浓度,垂体组织常规石蜡包埋,连续切片,分别进行苏木精-伊红染色和雌、孕激素受体免疫组织化学染色.LEICA Q500IW自动图像分析仪对垂体细胞的面积,雌、孕激素受体吸光度值进行定量测定.结果:①放射免疫法检测培养液显示,微囊化的卵巢激素分泌细胞具有继续合成和分泌雌二醇的功能.②检测血清中雌二醇质量浓度结果显示,卵巢摘除组明显低于正常对照组和微囊移植组,差异具有显著性意义,正常对照组和微囊移植组之间差异无显著性.⑤动情周期未恢复.④苏木精-伊红染色可见卵巢摘除组大鼠垂体中有大量阉割细胞,平均面积＞180 μm2,与卵巢摘除组比较,微囊移植组大鼠垂体中细胞平均面积和阉割细胞数目均显著减少.⑤垂体雌、孕激素受体免疫组织化学吸光度值结果显示,卵巢摘除组明显低于正常对照组和微囊移植组,差异具有显著性意义.结论:微囊化大鼠卵巢细胞异体移植后,可在受体大鼠体内继续合成和分泌雌二醇,并可以减少垂体内阉割细胞的形态和数目,提高垂体细胞雌激素受体和孕激素受体的表达,提示移植后细胞对垂体有反馈调节作用.     

微囊化嗜铬细胞移植产生的镇痛效应及其机制

目的:了解微囊化牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植对大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺含量的变化,探讨海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化牛嗜铬细胞移植镇痛的机制和海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊的免疫隔离效果。方法:实验于2003-08/2004-09在郑州大学医学院解剖实验室完成。取SD大鼠96只,随机分为空囊组、微囊化细胞组和裸细胞组,每组又分为4个亚组(2,4,6,8周组)。在3组大鼠的脊髓蛛网膜下腔分别植入含空囊的Dulbecco改良的Eagle培养基、微囊化牛嗜铬细胞和单纯牛嗜铬细胞。分别测定移植术后各组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量。结果:微囊化细胞组和裸细胞组大鼠脑脊液儿茶酚胺的含量在各时间点上都高于空囊组(P<0.05);在4,6,8周时微囊化细胞组儿茶酚胺含量高于裸细胞组(P<0.05)。结论:牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植可以提高大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量,海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹有助于移植细胞长期地分泌镇痛物质。     

微囊化嗜铬细胞移植产生的镇痛效应及其机制

目的:了解微囊化牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植对大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺含量的变化,探讨海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化牛嗜铬细胞移植镇痛的机制和海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊的免疫隔离效果. 方法:实验于2003-08/2004-09在郑州大学医学院解剖实验室完成.取SD大鼠96只,随机分为空囊组、微囊化细胞组和裸细胞组,每组又分为4个亚组(2,4,6,8周组).在3组大鼠的脊髓蛛网膜下腔分别植入含空囊的Dulbecco改良的Eagle培养基、微囊化牛嗜铬细胞和单纯牛嗜铬细胞.分别测定移植术后各组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量.结果:微囊化细胞组和裸细胞组大鼠脑脊液儿茶酚胺的含量在各时间点上都高于空囊组(P＜0.05);在4,6,8周时微囊化细胞组儿茶酚胺含量高于裸细胞组(P＜0.05).结论:牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植可以提高大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量,海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹有助于移植细胞长期地分泌镇痛物质.     

卵巢细胞微囊移植对去卵巢小鼠的骨胶原代谢的影响

背景：性激素对维持骨骼的完整性是必要的,体外培养的卵巢细胞可以分泌雌激素和孕激素,海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸钠微球可以在移植物和受体间提供一个屏障,有利于异体移植物的存活。目的：探讨异体移植的微囊化卵巢细胞在去卵巢小鼠体内的生存和分泌功能,以及对骨胶原代谢的作用。方法：用6周龄雌性昆明小鼠分离培养卵巢细胞,并用海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸钠盐微囊化分离培养的卵巢细胞。将24只8周龄雌性昆明小鼠随机分为3组（n=8）,正常组：未进行卵巢切割;去卵巢组：切除卵巢;移植组：卵巢切除后立即将微囊化的卵巢细胞移植入腹腔。射免疫分析法检测微囊化卵巢细胞培养液和小鼠血清雌二醇和/或孕激素水平,VanGieson染色法显示骨基质中的Ⅰ型胶原纤维,测小鼠左侧股骨羟脯氨酸、钙和磷的含量。结果与结论：卵巢细胞和微囊化卵巢细胞培养液中分泌雌二醇和孕激素水平没有显著差异,移植90d后小鼠血清雌二醇浓度与正常组无显著差异,而去卵巢组血清雌二醇浓度明显低于正常组。VanGieson染色显示,移植组的胶原纤维分布与正常组相似,而去卵巢组的骨小梁减少、游离末端增多,脱钙骨基质变薄,胶原纤维减少。与正常组比较,去卵巢组小鼠左侧股骨羟脯氨酸、钙和磷的含量降低。提示,微囊化卵巢细胞异体移植后能继续生存并分泌雌激素,并能在某种程度上减缓由去卵巢引起的骨胶原的分解代谢。     

海藻酸钠微囊化成猪胰岛异种移植实验研究

目的 :观察实验性糖尿病大鼠腹腔内移植海藻酸钠微囊化成猪胰岛治疗效果。方法 :以海藻酸钠一多聚赖氨酸作为制备微囊的材料 ,将 18只糖尿病大鼠随机分为 3组 :对照组、未微囊化胰岛移植组、微囊化胰岛移植 ,分别进行腹腔内胰岛移植。结果 :移植前 3组血糖水平无显著差异 ,移植后 7d时 ,3组血糖分别为 2 2 6 7± 1 15mmol/L ,18 5 8± 2 6 2mmol/L和13 5 7± 1 88mmol/L ,微囊化胰岛移植组与前 2组相比均有显著差异 ,且生存期明显长于前 2组。结论 :海藻酸钠微囊化成猪胰岛可存活于糖尿病大鼠体内 ,并且具有有效生物活性。     

卵巢细胞微囊移植对去卵巢小鼠的骨胶原代谢的影响

背景:性激素对维持骨骼的完整性是必要的,体外培养的卵巢细胞可以分泌雌激素和孕激素,海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸钠微球可以在移植物和受体间提供一个屏障,有利于异体移植物的存活。目的:探讨异体移植的微囊化卵巢细胞在去卵巢小鼠体内的生存和分泌功能,以及对骨胶原代谢的作用。方法:用6周龄雌性昆明小鼠分离培养卵巢细胞,并用海藻酸-多聚赖氨酸-海藻酸钠盐微囊化分离培养的卵巢细胞。将24只8周龄雌性昆明小鼠随机分为3组(n=8),正常组:未进行卵巢切割;去卵巢组:切除卵巢;移植组:卵巢切除后立即将微囊化的卵巢细胞移植入腹腔。射免疫分析法检测微囊化卵巢细胞培养液和小鼠血清雌二醇和/或孕激素水平,VanGieson染色法显示骨基质中的Ⅰ型胶原纤维,测小鼠左侧股骨羟脯氨酸、钙和磷的含量。结果与结论:卵巢细胞和微囊化卵巢细胞培养液中分泌雌二醇和孕激素水平没有显著差异,移植90d后小鼠血清雌二醇浓度与正常组无显著差异,而去卵巢组血清雌二醇浓度明显低于正常组。VanGieson染色显示,移植组的胶原纤维分布与正常组相似,而去卵巢组的骨小梁减少、游离末端增多,脱钙骨基质变薄,胶原纤维减少。与正常组比较,去卵巢组小鼠左侧股骨羟脯氨酸、钙和磷的含量降低。提示,微囊化卵巢细胞异体移植后能继续生存并分泌雌激素,并能在某种程度上减缓由去卵巢引起的骨胶原的分解代谢。     

人嗜铬细胞微囊化处理对大鼠异种移植的免疫隔离作用

背景:课题组前期在建立海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹活细胞制备技术的基础上,已证明微囊化嗜铬细胞有良好的镇痛效果,而该微囊包被材料的免疫隔离作用尚需明确.目的:观察海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化嗜铬细胞移植到大鼠眼前房和足胝部的免疫排斥反应,评价微囊化技术的免疫隔离作用.设计:随机对照动物实验.单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学教研室.材料:选用雌性 SD大鼠48只,鼠龄3个月,由华中科技大学同济医学院实验动物部提供.实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.实验所用海藻酸钠、多聚赖氨酸为美国Sigma公司产品,微囊发生器为德国赠送.方法:实验于2002-09/2003-09在华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉学实验室完成.①取6名脑死亡健康成人的肾上腺髓质,经分离、消化、培养后,制备成人嗜铬细胞悬液.供者家属对实验知情同意,实验方案通过医院伦理委员会批准.采用海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠法制作空微囊和微囊化细胞.②48只大鼠被随机分为3组:人嗜铬细胞移植组、空微囊移植组、微囊化人嗜铬细胞移植组,每组分眼前房和足胝部两个部位进行移植,每个部位8只.人嗜铬细胞移植组分别将2×1010 L-1细胞悬液注入大鼠右眼前房和左足胝部.空微囊移植组和微囊化人嗜铬细胞组分别吸取空微囊(100个微囊)或ME-HCC(100个微囊,每个微囊包裹400～500个细胞)注入大鼠右眼前房和左足胝部.主要观察指标:于移植术后第7天采用ELISA法测定血清白细胞介素2水平.采用激光散射比浊仪测定血清IgG和IgM水平.移植术后第28天取大鼠右侧眼球及左侧足组织作常规切片,苏木精-伊红染色,40倍光镜下观察组织形态.结果:大鼠48只均进入结果分析.①血清白细胞介素2,IgG,IgM水平:空微囊移植组和微囊化人嗜铬细胞移植组均低于人嗜铬细胞移植组,差异有显著性意义(t=8.544～21.64,P < 0.01).②大鼠眼前房和足胝部组织形态:人嗜铬细胞移植组大鼠的眼前房内和足胝部可见大量淋巴细胞和中性粒细胞浸润.空微囊移植组和微囊化人嗜铬细胞移植组大鼠眼前房和足胝部仅见少量淋巴细胞和中性粒细胞.结论:海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化所产生的良好生物相容性及其机械稳定性,使之有效地发挥了免疫排斥隔离作用.     

海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PCI2细胞脑内移植改善帕金森病模型鼠的旋转行为

背景：细胞组织的微囊化移植是近年来帕金森病治疗的研究热点之一。目前发展较成熟、应用较多的是海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠微胶囊，但其易于囊周纤维化、易破碎等缺点，使其临床应用受到了限制。应用国内研制的新型微胶囊材料海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊将PC12细胞微囊化后移植入帕金森病模型鼠纹状体内，观察其作用。目的：观察海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞脑内移植治疗，改善帕金森病模型大鼠旋转行为的作用。设计：随机对照动物实验。单位：吉林大学第二医院和中国科学院大连化学物理研究所。材料：成年雄性Wistar大鼠40只，体质量（220&;#177;10）g；海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊；PC12细胞。方法：实验于2002—05／12在吉林大学第二医院动物实验室和中国科学院大连化学物理研究所完成。①应用国产新型材料壳聚糖制成的海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞。②将成功建立的23只帕金森病大鼠模型随机分为3组，微囊化PC12细胞组10只、裸PC12细胞组7只、空微胶囊组6只。分别将海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞、裸PC12细胞、空微胶囊移植入帕金森病模型鼠损伤侧纹状体内。③以阿朴吗啡检测移植前后大鼠旋转行为的差异。观察黑质及纹状体内微包囊的形态并检测微胶囊内细胞的活性。主要观察指标：①移植前后大鼠的旋转行为。②黑质和纹状体的病理形态。（3）回收的微包囊的完整性及囊内PC12细胞的活性。结果：①微囊化PC12细胞移植组在移植4周时旋转行为显著低于移植前和空微囊移植组【（6．9&;#177;2．8），（11．7&;#177;5．5），（10．5&;#177;1．6）r／min，P〈0．05】，症状改善至少持续3个月；裸PC12细胞移植组大鼠的旋转行为与移植前相比也有改善【（5．6&;#177;1．1），（9．5&;#177;1．5）r／min,P〈0．05]，但仅持续了2个月，且部分大鼠颅内有致死性肿瘤形成。空微囊移植组移植前后大鼠的旋转行为无明显差异。（爹回收微胶囊内的PC12细胞再培养生长良好，并且具有生物活性。结论：微囊化PC12细胞脑内移植能够改善阿朴吗啡诱发的帕金森病模型鼠的旋转症状。海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠新型微胶囊具有免疫隔离和抑制肿瘤形成的作用，有着广泛的临床应用前景。     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊内细胞浓度与胰岛素和C肽的释放

背景：微囊化已经普遍应用于各种实验研究,微囊包裹的干细胞治疗糖尿病问题也成为当今的热点,但是囊内包裹的细胞浓度与胰岛素释放量的关系成为目前需要解决的问题之一。目的：运用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹胰岛素产生细胞,观察细胞浓度对胰岛素和C肽释放情况的影响。方法：制备大鼠胰腺损伤提取物,将小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素产生细胞。免疫荧光和双硫腙染色鉴定诱导后细胞内胰岛素的表达。然后将胰岛素产生细胞制成浓度分别为1×107L-1,5×107L-1,1×108L-1,5×108L-1,1×109L-1,5×109L-1的细胞悬液,气体吹喷法制成微囊,用6-羧基乙二酸荧光素检测囊内细胞活力,用葡萄糖刺激微囊内细胞检查其胰岛素和C肽的分泌情况。结果与结论：胰腺损伤提取物诱导后双硫腙染色和细胞免疫荧光鉴定出胰岛素产生细胞内有胰岛素的表达;胰岛素产生细胞制成的微囊直径约为400μm,大小均一,6-羧基乙二酸荧光素检测到囊内细胞的活力很好。用葡萄糖刺激不同细胞浓度的微囊,发现细胞浓度为1×108L-1时,胰岛素和C肽的分泌达到最高。     

纯化海藻酸钠-氯化钡微囊生物相容性及1型糖尿病微囊化胰岛移植的功能评价

背景海藻酸钠-多聚赖氨酸能引起机体的异物反应导致微囊内胰岛的功能失活,而氯化钡胶囊能否解决这一问题?目的研究纯化海藻酸钠-氯化钡微囊生物相容性以及微囊化大鼠胰岛生物学活性.设计以实验动物为研究对象的随机对照研究单位一所大学医院的内分泌科.材料本实验于2002-07/2002-12在南京医科大学第一附属医院内分泌实验室和动物房完成.Sprague Dawley(SD)大鼠、Wistar大鼠分别购自南京医科大学动物实验中心和上海动物实验中心,SPF级饲养.方法用自制微囊成囊仪,一步法制备纯化和未纯化海藻酸钠-氯化钡微囊,移植于正常SD大鼠腹腔内4周,观察其生物相容性.体外葡萄糖刺激试验和体内移植于链脲佐菌素(S眩)诱导的Wistar糖尿病大鼠观察微囊化胰岛生物学活性.主要观察指标①移植空微囊回收率;②微囊化胰岛胰岛素生物学活性检测结果;③组织学检查结果.结果移植4周后,纯化组微包囊回收率较未纯化组明显增高(P<0.05),并且形态完整、光滑,组织学检查未见纤维增生.体外培养纯化海藻酸钠-氯化钡微囊化胰岛具有良好的分泌功能,与未微囊化胰岛功能差异无显著性意义(P>0.05).微囊移植给STZ诱导的Wistar糖尿病大鼠,移植物存活时间大于6周.结论纯化海藻酸钠-氯化钡微囊具有良好的生物学活性和组织相容性,从而为糖尿病胰岛移植供体的解决提供理论依据.     

微囊化牛嗜铬细胞移植对甲醛致痛大鼠镇痛作用的效应

目的:探讨微囊化牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植的镇痛作用,分析海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊的免疫隔离效果。方法:实验于2003-08/2004-09在郑州大学医学院解剖实验室完成。①选取清洁级成年SD大鼠96只,随机数字表法分为:空囊组、微囊化细胞组、裸细胞组,32只/组。②空囊组向大鼠蛛网膜下腔植入40μL含空囊的DMEM液,每只植入600～800个海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠空囊;微囊化细胞组向大鼠蛛网膜下腔植入40μL海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠-牛嗜铬细胞悬液,含细胞5×106个;裸细胞组向大鼠蛛网膜下腔植入40μL牛嗜铬细胞悬液,含细胞5×106个。③分别于细胞移植术后2,4,6,8周测定各组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺含量以及脊髓后角fos蛋白表达的变化,各时间点8只/组。结果:实验选取清洁级成年SD大鼠96只,全部进入结果分析。①海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化牛嗜铬细胞的形态:光镜下,包裹嗜铬细胞的微囊呈规则的圆球形,表面光滑,直径为150～250μm。牛嗜铬细胞散在分布于微囊内,细胞呈圆形,清晰可见。空囊半透明状,表面光滑。②移植术后不同时间各组脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量检测结果:微囊化细胞组和裸细胞组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量在移植术后2,4,6,8周均高于空囊组(P<0.05)。微囊化细胞组移植术后2周与裸细胞组基本相似(P>0.05),其余各时间点均高于裸细胞组(P<0.01)。③移植术后8周各组大鼠脊髓内fos蛋白表达的变化:大鼠注射甲醛侧脊髓灰质后角内阳性神经元个数微囊化细胞组、裸细胞组均显著低于空囊组[(39.96±4.46),(50.62±3.29),(59.70±6.93),P<0.05]。同时,微囊化细胞组脊髓组织中阳性神经元个数明显低于裸细胞组(P<0.05)。结论:微囊化牛嗜铬细胞移植可以提高脑脊液中儿茶酚胺的含量,同时抑制甲醛致痛大鼠脊髓后角fos蛋白的表达。     

海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞脑内移植改善帕金森病模型鼠的旋转行为

背景:细胞组织的微囊化移植是近年来帕金森病治疗的研究热点之一,目前发展较成熟、应用较多的是海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠微胶囊,但其易于囊周纤维化、易破碎等缺点,使其临床应用受到了限制。应用国内研制的新型微胶囊材料海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊将PC12细胞微囊化后移植入帕金森病模型鼠纹状体内,观察其作用。目的:观察海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞脑内移植治疗,改善帕金森病模型大鼠旋转行为的作用。设计:随机对照动物实验。单位:吉林大学第二医院和中国科学院大连化学物理研究所。材料:成年雄性Wistar大鼠40只,体质量(220±10)g;海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊;PC12细胞。方法:实验于2002-05/12在吉林大学第二医院动物实验室和中国科学院大连化学物理研究所完成。①应用国产新型材料壳聚糖制成的海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞。②将成功建立的23只帕金森病大鼠模型随机分为3组,微囊化PC12细胞组10只、裸PC12细胞组7只、空微胶囊组6只。分别将海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠微囊化PC12细胞、裸PC12细胞、空微胶囊移植入帕金森病模型鼠损伤侧纹状体内。③以阿朴吗啡检测移植前后大鼠旋转行为的差异。观察黑质及纹状体内微包囊的形态并检测微胶囊内细胞的活性。主要观察指标:①移植前后大鼠的旋转行为。②黑质和纹状体的病理形态。③回收的微包囊的完整性及囊内PC12细胞的活性。结果:①微囊化PC12细胞移植组在移植4周时旋转行为显著低于移植前和空微囊移植组犤(6.9±2.8),(11.7±5.5),(10.5±1.6)r/min,P<0.05犦,症状改善至少持续3个月;裸PC12细胞移植组大鼠的旋转行为与移植前相比也有改善犤(5.6±1.1),(9.5±1.5)r/min,P<0.05犦,但仅持续了2个月,且部分大鼠颅内有致死性肿瘤形成。空微囊移植组移植前后大鼠的旋转行为无明显差异。②回收微胶囊内的PC12细胞再培养生长良好,并且具有生物活性。结论:微囊化PC12细胞脑内移植能够改善阿朴吗啡诱发的帕金森病模型鼠的旋转症状,海藻酸钠-壳聚糖-海藻酸钠新型微胶囊具有免疫隔离和抑制肿瘤形成的作用,有着广泛的临床应用前景。     

微囊化牛嗜铬细胞移植对甲醛致痛大鼠镇痛作用的效应

目的：探讨微囊化牛嗜铬细胞蛛网膜下腔移植的镇痛作用，分析海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊自挽疫隔离效果。方法：实验于2003-08／2004-09在郑州大学医学院解剖实验室完成。①选取清洁级成年SD大鼠96只，随机数字表法分为：空囊组、微囊化细胞组、裸细胞组，32只／组。②空囊组向大鼠蛛网膜下腔植入40斗L含空囊的DMEM液，每只植入600~800个海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠空囊；微囊化细胞组向大鼠蛛网膜下腔植入40斗L海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠-牛嗜铬细胞悬液，含细胞5&;#215;10^6个；裸细胞组向大鼠蛛网膜下腔植入40μL牛嗜铬细胞悬液，含细胞5&;#215;10^6个。③分别于细胞移植术后2，4，6，8周测定各组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺含量以及脊髓后角fos蛋白表达的变化，各时间点8只／组。结果：实验选取清洁级成年SD大鼠96只，全部进入结果分析。①海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化牛嗜铬细胞的形态：光镜下，包裹嗜铬细胞的微囊呈规则的圆球形，表面光滑，直径为150—250μm。牛嗜铬细胞散在分布于微囊内，细胞呈圆形，清晰可见。空囊半透明状，表面光滑。②移植术后不同时间各组脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量检测结果：微囊化细胞组和裸细胞组大鼠脑脊液灌流液中儿茶酚胺的含量在移植术后2，4，6，8周均高于空囊组（P〈0．05）。微囊化细胞组移植术后2周与裸细胞组基本相似（P〉0．05），其余各时间点均高于裸细胞组（P〈0．01）。③移植术后8周各组大鼠脊髓内fos蛋白表达的变化：大鼠注射甲醛侧脊髓灰质后角内阳性神经元个数微囊化细胞组、裸细胞组均显著低于空囊组[（39．96&;#177;4．46），（50．62&;#177;3．29），（59．70&;#177;6：93），P〈0．051。同时，微囊化细胞组脊髓组织中阳性神经元个数明显低于裸细胞组（P〈0．05）。结论：微囊化牛嗜铬细胞移植可以提高脑脊液中儿茶酚胺的含量，同时抑制甲醛致痛大鼠脊髓后角fos蛋白的表达。     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊内细胞浓度与胰岛素和C肽的释放

背景:微囊化已经普遍应用于各种实验研究,微囊包裹的干细胞治疗糖尿病问题也成为当今的热点,但是囊内包裹的细胞浓度与胰岛素释放量的关系成为目前需要解决的问题之一.目的:运用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊包裹胰岛素产生细胞,观察细胞浓度对胰岛素和C肽释放情况的影响.方法:制备大鼠胰腺损伤提取物,将小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为胰岛素产生细胞.免疫荧光和双硫腙染色鉴定诱导后细胞内胰岛素的表达.然后将胰岛素产生细胞制成浓度分别为1×107 L-1,5×107 L-1,1×108 L-1,5×108 L-1,1×109 L-1,5× 109 L-1的细胞悬液,气体吹喷法制成微囊,用6-羧基乙二酸荧光素检测囊内细胞活力,用葡萄糖刺激微囊内细胞检查其胰岛素和C肽的分泌情况.结果与结论:胰腺损伤提取物诱导后双硫腙染色和细胞免疫荧光鉴定出胰岛素产生细胞内有胰岛素的表达;胰岛素产生细胞制成的微囊直径约为400 μm,大小均一,6-羧基乙二酸荧光素检测到囊内细胞的活力很好.用葡萄糖刺激不同细胞浓度的微囊,发现细胞浓度为1×108 L-1时,胰岛素和C肽的分泌达到最高.     

纯化海藻酸钠—氯化钡微囊生物相容性及1型糖尿病微囊化胰岛移植的功能评价

背景：海藻酸钠—多聚赖氨酸能引起机体的异物反应导致微囊内胰岛的功能失活，而氯化钡胶囊能否解决这一问题?目的：研究纯化海藻酸钠．氯化钡微囊生物相容性以及微囊化大鼠胰岛生物学活性。设计：以实验动物为研究对象的随机对照研究单位：一所大学医院的内分泌科。材料：本实验于2002—07／2002—12在南京医科大学第一附属医院内分泌实验室和动物房完成。Sprague Dawley(SD)大鼠、Wistar大鼠分别购自南京医科大学动物实验中心和上海动物实验中心，SPF级饲养。方法：用自制微囊成囊仪，一步法制备纯化和未纯化海藻酸钠—氯化钡微囊，移植于正常SD大鼠腹腔内4周，观察其生物相容性。体外葡萄糖刺激试验和体内移植于链脲佐菌素(STZ)诱导的Wistar糖尿病大鼠观察微囊化胰岛生物学活性。主要观察指标：①移植空微囊回收率；②微囊化胰岛胰岛素生物学活性检测结果；③组织学检查结果。结果：移植4周后，纯化组微包囊回收率较未纯化组明显增高(P&;lt;0．05)，并且形态完整、光滑，组织学检查未见纤维增生。体外培养纯化海藻酸钠—氯化钡微囊化胰岛具有良好的分泌功能，与未微囊化胰岛功能差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。微囊移植给STZ诱导的Wistar糖尿病大鼠，移植物存活时间大于6周。结论：纯化海藻酸纳—氯化钡微囊具有良好的生物学活性和组织相容性，从而为糖尿病胰岛移植供体的解决提供理论依据。     

海藻酸钠／壳聚糖微胶囊小鼠腹腔移植的生物学评价料

目的：实验证明海藻酸钠／壳聚糖微胶囊具有一定的通透性和免疫隔离特性，用于体外细胞培养取得了较好的效果，但植入体内出现了不同程度的细胞黏附和纤维化现象，因此对海藻酸钠／壳聚糖微胶囊作为细胞移植用的免疫隔离载体在体内的移植效应进行评价。方法：实验于2004-03／07中国科学院大连化学物理研究所；生物技术部生物医用材料工程实验室完成。采用自制静电液滴发生器制备海藻酸钙凝胶微球，以一定浓度海藻酸钠溶液中和成膜后的海藻酸钙微球即得到海藻酸钠／壳聚糖微囊。将对数生长的L929细胞消化后与海藻酸钠溶液混匀，转移至静电液滴发生器，制备包封细胞微囊。取小鼠84只，雌雄各半，随机分为7组，每组12只。①对比观察材料对移植的影响：取3组小鼠，每组小鼠分别腹腔注射移植单纯的海藻酸钙胶珠、壳聚糖成膜的海藻酸钠微囊和最外层用海藻酸钠中和的壳聚糖／海藻酸钠微囊，在移植后的第7天和14天观察微囊回收率。②对比观察粒径对移植的影响：另取两组小鼠，分别移植粒径为200μm左右和粒径为500μm左右的海藻酸钠／壳聚糖微囊，于移植后1，4，14d观察微囊回收率。③对比观察细胞的存在对移植的影响：取两组小鼠分别移植空的微胶囊和包封有L929细胞的微胶囊。于移植后4，14d观察微囊回收率。回收率：（回收微囊体积／移植微囊体积）&;#215;100％。结果：84只小鼠均进入结果分析。①不同材料微囊回收率：壳聚糖成膜的胶珠引发的黏附最重，外层以海藻酸钠中和后的微囊其次，而单纯的海藻酸钠胶珠在所考察的时间内基本没有引起黏附。（2）不同粒径微囊回收率：粒径为200μm左右的微囊相对于粒径为500μm的微囊引发的黏附略有增加，但差别不明显，粒径200μm左右的微囊彼此聚集的特点导致回收率低于粒径为500μm左右的微囊。③在细胞微囊与空微囊回收率：与空胶囊比较，包封细胞的微囊黏附程度明显增加。结论：黏附程度随着粒径的增加而略有增加，壳聚糖是引发黏附的主要原因，细胞的存在提高了黏附程度。     

Genistein对去卵巢后大鼠基底前脑神经元一氧化氮合酶表达及认知功能的影响

目的:观察去卵巢大鼠植物雌激素替代治疗后基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的表达和其认知功能在去卵巢后的时程变化。方法:实验于2004-07/2005-07在南通大学基础医学院人体解剖学教研室完成。3月龄雌性大鼠48只随机抽签法分为假手术组、去势组、Genistein替代组和雌激素替代组,每组12只。卵巢切除前,各组大鼠行避暗回避实验行为学检测。各组大鼠的处理:①去势组:切除双侧卵巢。②Genistein替代组:切除双侧卵巢后进行Genistein替代,剂量100μg(溶于200μLDMSO)。③雌激素替代组:切除双侧卵巢后进行雌激素替代,皮下注射苯甲酸雌二醇,剂量10μg(溶于100μL无菌芝麻油)。④假手术组:只切开双侧腰肌不触及卵巢,随即缝合伤口,相同条件下存活4周。药物注射隔日1次,时间固定,持续4周,分别于最后1次注射24h后进行灌注固定。各组大鼠在灌注前1周进行避暗回避实验。脑切片用NADPH-d组织化学方法染色,观察基底前脑内侧隔核、斜角带核垂直支脑区一氧化氮合酶阳性神经元的分布,并进行计数和统计分析。结果:实验过程中无动物死亡,全部进入结果分析。①去势前各组大鼠避暗回避实验的探索次数和滞留时间差异无显著性(P均>0.05);去势后行替代治疗1,2周后,各组大鼠避暗回避实验的探索次数和滞留时间差异无显著性(P均>0.05);替代治疗4周后,Genistein替代组和雌激素替代组大鼠的探索次数比去势组明显减少,滞留时间比去势组明显延长(P<0.05)。②大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元染色为深蓝色,胞体边界清晰,突起明显,为双极或多极细胞。内侧隔核的一氧化氮合酶阳性细胞主要分布于中线两侧,呈倒“V”字形排列,体积较小,胞体多呈梭形,各组大鼠的神经元数目在术后各时间点的差异不明显。在斜角带核垂直支则呈“人”字形排列,胞体较内侧隔核大,多呈锥形或椭圆形,多为多极神经元。各组大鼠神经元的数目呈动态变化,Genistein或雌激素替代组一氧化氮合酶阳性神经元数目上升,而去势组减少,替代治疗后1,2周内,Genistein或雌激素替代组与去势组之间差异无显著性(P>0.05);第4周时Genistein或雌激素替代组一氧化氮合酶阳性神经元的数目接近于假手术组水平,与去势组间差异有显著性(P<0.01)。结论:去卵巢后行替代治疗能增加大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的表达,改善大鼠认知功能,可能对中枢神经系统退行性病变起保护作用。     

Genistein对去卵巢后大鼠基底前脑神经元一氧化氮合酶表达及认知功能的影响

目的：观察去卵巢大鼠植物雌激素替代治疗后基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的表达和其认知功能在去卵巢后的时程变化。 方法：实验于2004—07／2005-07在南通大学基础医学院人体解剖学教研室完成：3月龄雌性大鼠48只随机抽签法分为假手术组、去势组、Genistein替代组和雌激素替代组，每组12只。卵巢切除前，各组大鼠行避暗回避实验行为学检测。各组大鼠的处理：①去势组：切除双侧卵巢。②Genistein替代组：切除双侧卵巢后进行Genistein替代，剂量100μg（溶于200μL DMSO）。③雌激素替代组：切除双侧卵巢后进行雌激素替代，皮下注射苯甲酸雌二醇，剂量10μg（溶于100μL无菌芝麻油）。④假手术组：只切开双侧腰肌不触及卵巢，随即缝合伤151，相同条件下存活4周。药物注射隔日1次，时间固定，持续4周，分别于最后1次注射24h后进行灌注固定。各组大鼠在灌注前1周进行避暗回避实验。脑切片用NADPH—d组织化学方法染色，观察基底前脑内侧隔核、斜角带核垂直支脑区一氧化氮合酶阳性神经元的分布，并进行计数和统计分析。结果：实验过程中无动物死亡，全部进入结果分析。①去势前各组大鼠避暗回避实验的探索次数和滞留时间差异无显著性（P均〉0．05）；去势后行替代治疗1，2周后，各组大鼠避暗回避实验的探索次数和滞留时间差异无显著性（P均〉0．05）；替代治疗4周后，Genistein替代组和雌激素替代组大鼠的探索次数比去势组明显减少，滞留时间比去势组明显延长（P〈0．05）。②大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元染色为深蓝色，胞体边界清晰，突起明显，为双极或多极细胞。内侧隔核的一氧化氮合酶阳性细胞主要分布于中线两侧，呈倒“V”字形排列，体积较小，胞体多呈梭形，各组大鼠的神经元数目在术后各时间点的差异不明显。在斜角带核垂直支则呈”人”字形排列，胞体较内侧隔核大，多呈锥形或椭圆形，多为多极神经元。各组大鼠神经元的数目呈动态变化，Genistein或雌激素替代组一氧化氮合酶阳性神经元数目上升，而去势组减少，替代治疗后1，2周内，Genistein或雌激素替代组与去势组之间差异无显著性（P〉0．05）；第4周时Genistein或雌激素替代组一氧化氮合酶阳性神经元的数目接近于假手术组水平，与去势组间差异有显著性（P〈0．01）。 结论：去卵巢后行替代治疗能增加大鼠基底前脑一氧化氮合酶阳性神经元的表达，改善大鼠认知功能，可能对中枢神经系统退行性病变起保护作用。     

微囊法体外重建人头皮毛乳头诱导毛囊再生功能的评价

目的：利用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠（alginate-polylysine-alginate，APA）微囊，将分离培养的毛乳头细胞包裹其中，实现毛乳头的体外重建，并观察其诱导毛囊再生的能力。方法：实验于2003-10/2004-03在汕头大学医学院第一附属医院组织工程实验室完成。一步酶消化法分离人头皮毛乳头，并在体外培养扩增毛乳头细胞；利用高压电场微囊发生器，以APA微囊包裹分离培养的毛乳头细胞；光镜及电镜观察对比新鲜分离的毛乳头及人工重建的毛乳头(即毛乳头细胞微囊)；将人工重建的毛乳头移植于裸鼠背部皮下，对其诱导功能进行评价。结果：体外重建的毛乳头与新鲜分离的人头皮毛乳头在大体形态及超微结构方面均非常相似人工重建的毛乳头移植裸鼠背部4周后，组织学观察证实：移植处皮肤可见发育完整的毛囊结构形成。结论：人工重建的毛乳头(毛乳头细胞微囊)不但具备新鲜分离的人头皮毛乳头的形态特征．而且具备其诱导毛囊再生的生理功能。