SHV-12型超广谱β-内酰胺酶特性的研究

目的研究SHV-12型超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的特性。方法将b laSHV-12基因连接至pET28 a载体上,并用重组质粒转化大肠埃希菌BL21进行克隆表达,挑选b laSHV-12阳性表达的菌落,提取其酶蛋白进行等电点测定和酶动力学分析。结果SHV-12型ESBL等电点为8.2。同时,在所测的几种抗生素中,该酶对头孢他啶和头孢噻肟的Km相同且最小;对头孢噻吩,有着最大的Vm ax/Km;而对阿莫西林,表现出最大的Km和最低的Vm ax。结论SHV-12型ESBL对头孢他啶和头孢噻肟具有高的亲和力,而对头孢噻吩有最大的催化效能。     

SHV-28型β内酰胺酶的原核表达及其性质鉴定

目的：获得SHV-28型β内酰胺酶蛋白，并研究其特性。方法：将SHV-28型β内酰胺酶基因连接到pET-28b载体上，重组质粒pET-28b／SHV-28转化大肠埃希菌BL21(DE3)。用酶抑制剂增强的纸片扩散法检测重组菌的表型，等电聚焦电泳测定其表达蛋白的等电点。结果：SHV-28型β内酰胺酶的等电点为7．6，为非超广谱β内酰胺酶。结论：SHV-28型β内酰胺酶蛋白表达正确，为进一步研究新基因型β内酰胺酶奠定了基础。     

大肠埃菌和肺炎克雷伯菌超广谱β内酰胺酶的基因分型

目的：分析我院大肠埃希菌，肺炎克雷伯菌临床分离株中超广谱β内酰胺酶（ESBLs)的主要基因型。方法：用表型确证试验确定临床标本中产ESBLs的大肠埃希菌和克雷伯菌，用Etest检测其最低抑菌浓度（MIC），分别用TEM，SHV和CTX-M通用引物进行聚合酶链反应（PCR）扩增并对PCR产物进行序列分析。结果：大部分产ESBLs菌株体外对头孢噻肟耐药而对头孢他啶敏感，PCR扩增结果显示TEM，SHV和CTX-M的阳性率分别为68%，39%和83%，序列分析证实TEM扩增产物均属于TEM-1基因，CTX-M扩增产物均属于CTX-M-3基因，而SHV扩增产物则分别属于SHV-12，SHV-11或SHV-1基因，结论：CTX-M-3和SHV-12是我院产ESBLs菌株的主要基因型；尚未发现TEM起源ESBLs。     

超广谱β—内酰胺酶及其实验室筛检

超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)是指由质粒介导的能赋予细菌对头孢菌素类( 如头孢噻肟、头孢三嗪和头孢他啶等)和单酰胺类抗生素氨曲南以及青霉素类耐药的一类酶 [1,2].自1983年在联邦德国首次从臭鼻克雷伯菌分离出产SHV-2 ESBL以来,全世界许多地区不断有新的ESBLs检出报道,由产ESBLs菌株引起的感染发病率在逐渐提高,在某些医院甚至出现爆发流行[1～4].     

SHV-71型β-内酰胺酶的酶动力学研究

目的对临床分离的鲍曼不动杆菌所产SHV-71型β-内酰胺酶的编码基因进行序列分析,研究其对多种β-内酰胺类抗生素的酶动力学参数,并观察pH、温度、底物浓度及酶抑制剂对酶活性的影响。方法PCR扩增SHV型酶的编码基因。将SHV的PCR产物与pMD18-T载体连接,测定它们的核苷酸序列,并将SHV-71型酶基因克隆至表达载体pET-41b(+),转化至宿主菌大肠埃希菌BL21(DE3)中。以IPTG诱导其表达并纯化,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测表达情况。用分光光度计测定SHV-71型酶对多种β-内酰胺类抗生素的动力学参数,以及pH、温度、底物浓度及酶抑制剂对酶活性的影响。结果SHV-71型酶对第一、二、三代头孢菌素类抗生素的相对最大水解速度及相对水解效率均较高,而对青霉素类和碳青霉烯类抗生素的相对最大水解速度及相对水解效率均较低。该酶在pH7.4、37℃的活性最高;底物浓度低于120μmol/L时,反应初速度随底物浓度增加而呈线性增加,底物浓度大于120μmol/L时,酶活性反而受抑;克拉维酸和三唑巴坦对SHV-71型酶有抑制作用。结论根据SHV-71型酶的酶学特点,我们推测SHV-71型酶为超广谱β-内酰胺酶。     

19家医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中TEM型β-内酰胺酶的研究

目的 检测全国19家医院大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的TEM型ESBLs.方法 收集2004～2005年全国19家医院对头孢他啶耐药的大肠埃希菌98株和肺炎克雷伯菌109株,琼脂稀释法测定菌株MICs,PCR扩增blaTEM基因.扩增阳性菌株进行接合实验,测定接合子MICs并PCR扩增blaTEM基因.扩增阳性的菌株和接合子以等电聚焦电泳(IEF)检测其β-内酰胺酶等电点.对具有典型TEM型ESBLs表型的菌株进行测序和变性高效液相色谱(DHPLC)分析.进一步收集检出突变菌株的宿主患者及其所在病房分离的对头孢他啶不敏感的菌株,进行测序、DHPLC分析,以及ERIC-PCR和RAPD分型.结果 实验菌株中大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBL阳性率分别为84.7%和68.8%,blaTEM基因阳性率分别为67.3%和69.7%.仅1株大肠埃希菌P34表达TEM-12型ESBL,其他均为TEM-1(广谱β-内酰胺酶).P34宿主患者分离的21株大肠埃希菌中有18株表达TEM-12,且所有菌株均为同一克隆.该患者住院期间所在病房分离的11株对头孢他啶不敏感大肠埃希菌均表达TEM-1,与P34均不是同一克隆,但不同患者间存在菌株的水平传播.结论 TEM型ESBLs已在中国出现,但仍罕见,不是导致菌株对头孢他啶耐药的主要原因.本研究在国内首次报道了TEM-12型ESBL,该菌株虽未引起流行,但仍应引起重视.必须加强感染控制,防止TEM型ESBLs在中国的传播.     

大庆地区革兰阴性杆菌SHV型ESBLs基因型调查

目的了解大庆地区革兰阴性杆菌中SHV型ESBLs基因型的分布状况。方法采用双纸片协同法(DDS)、PCR法,检测ESBL阳性革兰阴性杆菌中的SHV基因。结果254株临床分离的多重耐药革兰阴性杆菌中共检出26株携带SHV基因,分别为SHV-28、SHV-12、SHV-5、SHV-1以及SHV-11五种基因型。携带blaSHV基因的细菌主要为肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和阴沟肠杆菌。结论在大庆地区首次检出SHV-28,SHV-12,SHV-5型ESBLs基因,首次检出SHV-1,SHV-11型β-内酰胺酶基因;大庆地区革兰阴性杆菌携带多种类型SHV型ESBLs基因。     

2004～2007年南昌地区淋球菌耐药趋势的分析研究

目的了解南昌地区2004～2007年淋病奈瑟菌株对抗生素敏感性的变迁，产β-内酰胺酶淋球菌（PPNG）的流行状况。方法采用琼脂扩散法，选用六种常用的抗生素对临床分离到的淋病奈瑟菌株进行耐药性测定分析：应用头孢噻吩显色法检测PPNG菌株。结果2004～2007年青霉素的耐药率由33.33％上升到51.02％；环丙沙星的耐药率由88.62％上升到97.96％；而头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、壮观霉素一直处于高敏感率状态。在检出的青霉素耐药菌株中．PPNG占80％以上。而就诊患者淋球菌检出率呈下降趋势。结论头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、壮观霉素可作为南昌地区治疗淋病的首选药；青霉素、环丙沙星耐药率呈上升趋势，已不宜作为治疗淋病的可选药物。     

2004～2007年南昌地区淋球菌耐药趋势的分析研究

目的了解南昌地区2004～2007年淋病奈瑟菌株对抗生素敏感性的变迁，产β-内酰胺酶淋球菌（PPNG）的流行状况。方法采用琼脂扩散法，选用六种常用的抗生素对临床分离到的淋病奈瑟菌株进行耐药性测定分析：应用头孢噻吩显色法检测PPNG菌株。结果2004～2007年青霉素的耐药率由33.33％上升到51.02％；环丙沙星的耐药率由88.62％上升到97.96％；而头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、壮观霉素一直处于高敏感率状态。在检出的青霉素耐药菌株中．PPNG占80％以上。而就诊患者淋球菌检出率呈下降趋势。结论头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、壮观霉素可作为南昌地区治疗淋病的首选药；青霉素、环丙沙星耐药率呈上升趋势，已不宜作为治疗淋病的可选药物。     

抗菌药物对产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌接种效应的研究

目的研究美罗培南、头孢米诺、哌拉西林-他唑巴坦、头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟和头孢曲松7种常见抗生素对产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的接种效应。方法用微量肉汤稀释法测定7种抗生素对22株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌在标准细菌接种量(5×10~5CFU/mL)和高接种菌量(5×10~7CFU/mL)时的MIC。结果随着接种菌量增加,美罗培南和头孢米诺对所有受试菌株的MIC无接种效应;哌拉西林-他唑巴坦对SHV-12型和1株CTX-M-14菌的MIC表现出接种效应;头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟和头孢曲松存在接种效应的菌种分别占所有受试菌株的86.4%(19/22)、40.9%(9/22)、10%(22/22)和100%(22/22)。结论对22株产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,美罗培南和头孢米诺不存在接种效应,哌拉西林-他唑巴坦对部分基因型ESBLs菌株(SHV-12型和1株CTX-M-14菌株)存在接种效应,头孢吡肟、头孢他啶、头孢噻肟和头孢曲松存在接种效应。     

检测大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶的探讨

近年来，由于第三代头孢菌素的广泛应用，结果对头孢他啶，头孢噻肟等三代头孢菌素耐药的菌株不断增多，这些菌株多数产生超广谱β－内酰胺酶（ESBL），如肺炎克雷伯菌，大肠埃希菌1、2，及时检测出ESBL，可指导医生合理使用抗生素，防止医院感染及ESBL的区域性暴发流行。 1 材料与方法： 1．1 标本来源：122株大肠埃希菌为1997年8月～1998年12月临床分离有选择的大肠埃希菌，应用Vitek－32自动微生物分析仪进行鉴定。 1．2 抗生素纸片：头孢他啶、头孢噻肟、氨曲南、阿莫西林／棒酸，购自BBL公司。 1．3 试剂：培养基采用bioMer…     

VITEK—AMS仪检测超广谱—β内酰胺酶的结果评价

目的：评价VITEK全自动微生物分析仪(VITEK—AMS)检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的可靠性及选择最佳筛选底物。方法：同时使用纸片筛选和确证实验与VITEK32型—AMS仪对临床分离的195株大肠埃希菌和52株肺炎克雷伯菌进行ESBL检测。结果：确证实验中，大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBL阳性率分别为23，6％，19．8％，VITEK—AMS仪和纸片确证实验同时检测为阳性的为51株，同时检测为阴性的为192株，有四株确证实验阳性而VITEK—AMS仪漏检，VITEK—AMS仪检测ESBL的特异性为100％，灵敏度为92．7％。初筛实验中，头孢噻肟筛选的灵敏度为100％，是我院的最佳筛选底物，其次为头孢曲松、头孢泊肟、氨曲南，单用头孢他啶漏检率最高。结论：VITEK—AMS是检测ESBL的较好方法。头孢噻肟是我院的最佳筛选底物。     

310株革兰阴性杆菌β—内酰胺酶检测及药敏结果分析

目的 分析６种常见革兰阴性杆菌的β－内酰胺酶类型，分布及耐药状况。方法 酸法检测青霉素酶和头孢菌素酶；头孢他啶、头孢他啶／克拉维酸和头孢噻肟、头孢噻肟／克拉维酸双纸片检测超广谱β－内酰胺酶；Ｋ－Ｂ法做药敏试验。结果 总产酶率４０．７％，阴沟肠杆菌产酶率最高，同时产青霉素酶和头孢菌素酶的菌株占产酶株的３４．９％，６种革兰阴性杆菌不产酶株对三代头孢均较敏感。鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌对用舒     

用Vitek-ESBL试验检测超广谱β-内酰胺酶的建议

目的 观察Vitek药敏试卡检测ESBL（超广谱β－丙酰胺酶）的准确性，探讨能弥补其不足的检测方法。方法 用Vitek-GNS-NT卡（试卡法）和纸片扩散法（扩散法），对从临床标本中分离的268株大肠埃菌和208株克雷伯菌属细菌进行ESBL检测，对结果存在差异的菌株再用琼脂稀释法（稀释法）检测，并增加2种其他参考方法。结果 476被检测菌中，有18株菌试卡法与扩散法和稀释法有差异。其中有15株菌试卡法检测ESBL阴性，扩散法和稀释法检测ESBL阳性，特点为，加棒酸（CA）的复合药物比单药的MIC虽降低3个以上对倍稀释度，但未降至0．μg/ml。有2株菌试卡法和稀释法ESBL阴性，扩散法可疑阳性；有1株菌试卡法ESBL阳性，扩散法和稀释法阴性。参考方法显示，除了试卡法单独阳性的那株菌外，其他17株菌都为既产ESBL又产AmpC酶的菌株。结论 用试卡法检测ESBL，可检出大多数产ESBL的细菌，但对同时产AmpC等其他高活性酶的菌株，会造成ESBL检测的假阴性。补救措施为：试卡法结果一代头孢耐药，而ESBL阴性的那部分菌，将Labreport（实验报告）窗调至Rawdatereport（原始资料报告）窗，观察CTX（头孢噻肟）、CTX／CA和CAZ（头孢他啶）、CAZ／CA孔的A值，只要其中有一对A值同时下降40％左右，宜采用纸片法重复ESBL的检测。     

肠杆菌科产CTX-M酶细菌耐药性与β内酰胺酶基因型的关系

目的 了解我院肠杆菌科产CTX-M酶细菌耐药性与β内酰胺酶基因型的关系。方法采用琼脂2倍稀释法测定8种B内酰胺类抗生素的最低抑菌浓度；用针对SHV、TEM、CTX-M基因的特异性引物进行PCR扩增确定p内酰胺酶基因型；对扩增的CTX-M基因进行DNA序列分析。结果16株产CTX—M酶菌中有15株产2种或2种以上β内酰胺酶。产CTX—M酶菌对头孢噻肟、头孢吡肟、头孢他啶和头孢哌酮一舒巴坦的耐药率分别为81．3％、75．0％、31．3％和31．3％。结论 产CTX-M酶菌株绝大多数产多种β内酰胺酶，其对头孢噻肟、头孢吡肟的耐药水平高于不产CTX—M型ESBI—S株，耐药表型呈多样性，临床中不推荐使用头孢他啶治疗产CTX-M酶菌株感染。     

全自动细菌分析系统在监测细菌耐药性中的应用

目的 :对本所分离的 12 0株革兰阴性杆菌进行耐药性监测 ,了解超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)的发生率及其与细菌耐药性的关系。方法 :用VITEK32型全自动细菌分析系统药敏检测卡GNS -5 0 6进行细菌耐药性的监测和ESBLs的检测。结果 :15种抗菌药物中总耐药率最低的是亚胺培南 ( 6 2 5 %～ 2 5 0 %)和头孢他啶 ( 12 5 %～33 3%)。大肠埃希菌中产ESBLs菌占 6 0 0 %,肺炎克雷伯菌为 40 6 %,肠杆菌属为 2 7 8%,铜绿假单胞菌为 0 %,总检出率为 30 %。产ESBLs菌株对氨苄西林、头孢噻吩、头孢噻肟和头孢他啶的耐药率明显高于非产ESBLs株 ,对其他抗菌药物的耐药率与非产酶株组无明显差异。结论 :亚胺培南和头孢他啶对革兰阴性菌的耐药率最低。VITEK32型全自动细菌分析系统进行细菌耐药性监测快速、准确、方便。     

肠杆菌科细菌超广谱β-内酰胺酶的检测

为了解临床分离菌株超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的产生情况及不同方法、不同指示剂的敏感性,我们对收集的肠杆菌科细菌195株进行研究.用双纸片协同试验检测耐氨苄西林的肠杆菌科细菌195株,产ESBL 55株,阳性率为28.2%.大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和肠杆菌属细菌是主要的产酶菌.选其中40株用三相试验检测,仅检出33株,三相试验对ESBL的检出率低于双纸片协同试验.在头孢曲松、氨曲南、头孢他啶和头孢噻肟四种抗生素中,头孢曲松筛选ESBL的检出率最高,头孢他啶的检出率最低.常规药物敏感试验的耐药标准和NCCLS关于ESBL的筛选标准(1999)在判断ESBL上存在很大差别,提示临床微生物工作者,为避免可疑ESBL的漏检,应使用NCCLS的新标准对ESBL进行初筛.在常用抗生素20种中,亚胺培南对产ESBL细菌的抗菌效果最好(敏感率为100%),其次为头孢西丁.β-内酰胺抗生素+酶抑制剂(复方氨苄西林、复方阿莫西林和复方替卡西林)的作用效果不好.     

重症监护病房革兰阴性杆菌连续六年耐药性监测研究

目的观察和监测重症监护病房常见革兰阴性杆菌对抗菌药物的耐药变化及超广谱β-内酰胺酶(ESBL)菌株的发生率。方法连续监测1998～2003年本院重症监护常见革兰阴性杆菌的耐药状况。用E试验法测定547株革兰阴性杆菌对11种抗菌药物的MIC，并用头孢他啶／头孢他啶 克拉维酸和头孢噻肟／头孢噻肟 克拉维酸E试条检测细菌产ESBL的情况。结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌和嗜麦芽窄食单胞菌是监护病房常见革兰阴性杆菌。亚胺培南对所有受试菌保持最高抗菌活性，细菌总耐药率仅为8.04％，肺炎克雷伯菌完全敏感；阿米卡星、头孢哌酮／舒巴坦、头孢他啶、哌拉西林／他唑巴坦和头孢吡肟有较高抗菌活性，耐药率分别为18．5％、20．7％、20．8％、21．4％和25．6％，其他抗菌药物耐药率在42．2％-51．6％之间。筛选大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBL产生菌41株，检出率分别为48．5％和29．0％，耐药谱分析，酶型可能以CTX-M为主。所有大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBL菌株都对亚胺培南敏感。6年监测结果相比，所测细菌对头孢哌酮／舒巴坦耐药率由1998～2000年的11．2％～16．7％增加至2001—2002年的29．5％～30．5％，以大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌较明显。大肠埃希菌对环丙沙星耐药率由1998～1999年的45．2％上升至2000～2002年的72．9％，对其他抗菌药物耐药率变化不大。结论亚胺培南对肠杆菌科细菌(含ESBL产生菌)保持最高敏感性和较强的抗菌活性，而对加酶抑制剂β-内酰胺类抗生素的耐药率逐年升高。     

杭州地区1998-2008年产ESBL的志贺菌基因型及分子流行病学研究

1999年Ahamed和Kundu~([1])在印度首次发现了志贺菌中存在SHV-11型ESBL.ESBL通常由质粒介导,对三代头孢和单环类抗生素有很高的活性,此后,世界各地均有志贺菌中ESBL的报道.     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌表型及基因型研究

目的了解我院临床分离的大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型和基因型分布情况。方法对88株大肠埃希菌进行耐药分析,并用筛选试验和确证试验确认产ESBLs菌株,对耐药基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增分析,选部分产物测序。结果88株大肠埃希菌中共检出31株产ESBLs(35.2%)菌株。产ESBLs菌株对头孢他啶的敏感率为58.1%,对头孢噻肟和头孢曲松的敏感率均为3.2%。PCR结果显示,产ESBLs大肠埃希菌基因主要是CTX-M型(90.3%),其中以CTX-M-14、CTX-M-3型为主;TEM基因均为TEM-1型,SHV基因均为SHV-1型。结论我院产ESBLs大肠埃希菌检出率为35.2%,其耐药性明显高于非产ESBLs菌株;其基因均为CTX-M型,其中以CTX-M-14和CTX-M-3型为主;TEM-1型广谱酶广泛存在于产ESBLs的大肠埃希菌中,则SHV-1型少见。