转化生长因子β2对牛角膜内皮细胞增生的影响

目的体外培养牛角膜内皮细胞（CECs）,观察不同质量浓度的外源性转化生长因子β2（TGF-β2）对牛CECs的增生抑制作用。方法0.1、1、10、100μg/L的TGF-β2作用于体外培养的牛CECs,于24、48、72h观察不同质量浓度的TGF-β2对牛CECs的影响。采用CCK-8检测法测定各孔吸光度（A值）,采用流式细胞检测仪对各组细胞周期进行检测。结果0.1、1、10μg/L的TGF-β2作用后各时间点,均能使牛CECs的吸光度发生改变。在同一时间点,0.1μg/L、1μg/L的TGF-β2抑制效果最为显著。各质量浓度的TGF-β2对牛CECs作用48h,其吸光度改变最明显。48h时,0.1μg/L、1μg/L的TGF-β2对牛CECs的增生抑制作用明显。各质量浓度组作用48h后,0.1μg/L、1μg/L组牛CECs的G0周期细胞所占比例与阴性对照组比较,差异均有统计学意义,而10μg/L、100μg/L组的牛CECs的G0期细胞百分比与阴性对照组比较,差异均无统计学意义。结论0.1μg/L、1μg/L的TGF-β2作用24、48、72h对牛CECs均具有明显的增生抑制作用。     

转化生长因子-β1对人视网膜色素上皮细胞热休克蛋白47及血管内皮生长因子表达的影响

人视网膜色素上皮(RPE)细胞增生、迁移、合成细胞外基质是促进增生性玻璃体视网膜疾病(PVD)发生和发展的主要原因之一[1-3].血管内皮生长因子(VEGF)可诱导入RPE细胞增生、迁移;转化生长因子-β1(TGF-β1)可诱导入RPE细胞迁移及合成细胞外基质;均在PVD形成过程中发挥着重要作用[2-4].但目前,有关其作用机制尚不明确.RPE细胞热休克蛋白47(HSP47)是一种胶原特异的分子伴侣,对胶原成熟有一定影响[5].我们通过观察TGF-β1对人RPE细胞HSP47及VEGF合成的影响,以进一步探讨TGF-β1在PVD发病机制中的作用.现将结果报道如下.     

TGF-β1体外对人眼眶成纤维细胞3H-Pro掺入的影响

目的:观察转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞(orbital fibroblast,OF)3H-Pro掺入的影响。方法:体外培养人OF,用0.1,1.0,5.0,10.0,100.0μg/LTGF-β1对细胞进行处理,用3H-Pro掺入法测定细胞放射性强度来判断细胞胶原合成。结果:用0.1,1.0,5.0,10.0μg/L TGF-β1作用后OF3H-Pro掺入量增加。100.0μg/L TGF-β1对OF作用相反。结论:TGF-β对人OF合成胶原有双相调节性。     

转化生长因子β2对培养的人视网膜色素上皮细胞DNA合成增殖的影响

目的：研究转化生长因子β2（TGF-β2）对培养的人视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖的作用。方法：取眼库眼球游离其视网膜色素上皮细胞，用DMEM加10％血清及MEM氨基酸和庆大霉素，进行细胞传代培养。用溶血磷脂酸（LPA）、转化生长因子β2（TGF-β2）及TGF-β2 LPA进行视网膜色素上皮细胞增殖试验，用细胞染色法进行细胞计数，提取视网膜色素上皮细胞DNA，用分光光度计进行DNA定量测定。结果：含有或缺乏1％小牛血清的两种LPA(10μM)均明显刺激视网膜色素上皮细胞增殖，但这种细胞的增殖被2nG/ml的转化生长因子-β2所阻滞。结论：转化生长因子-β2能阻滞体外培养的人视网膜色素上皮细胞DNA合成与增殖，TGF-β2在增殖性玻璃体视膜病变及RPE细胞中的确切作用，仍需进一步研究。     

TGF-β2刺激人Tenon囊成纤维细胞增殖,表达CTGF和合成Fn

目的:研究转化生长因子(TGF-β2)和结缔组织生长因子(CTGF)在滤过泡瘢痕化中的作用。方法:用不同浓度的TGF-β2刺激HTF,然后用RT-PCR和免疫细胞化学法分别检测CTGF和Fn的表达,用MTT法检测细胞的增殖。结果:TGF-β22μg/L到5μg/L范围有剂量依赖性地促进HTF的细胞增殖,CTGF的表达和Fn的合成的趋势(P<0.01),但0.5μg/L,1μg/L与正常对照组对细胞的增殖作用差别无显著性,5μg/L与10μg/L增强细胞的增殖作用也无显著性差异(P>0.05)。结论:TGF-β2能够明显地促进HTF细胞增殖,并增强其下游介质(CTGF)的表达和合成细胞外基质-纤维连接蛋白(fibronetin,Fn)。     

转化生长因子β1对牛角膜内皮细胞DNA合成的影响

目的：研究外源性转化生长因子β1(transforming growth factor，TGF-β1)对牛角膜内皮细胞(bovine corneal emdothelial cells，BCECs)增殖过程的影响。方法：在体外培养的牛角膜内皮细胞经不同浓度(0．10、1．00、10．00、100．00μg／L)TGF-β1处理后，用流式细胞术测量分析细胞周期，用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)法检测TGF-β1对角膜内皮细胞增殖功能以及DNA合成的影响。结果：一定浓度(0．10、1．00、10．00μg／L)的TGF-β1对角膜内皮细胞有明显的促增殖作用，并呈剂量依赖性。但在较高浓度(100．00μg／L)时对内皮细胞表现出一定的抑制作用。结论：一定浓度外源性的TGF-β1与其受体结合后可以促进牛角膜内皮细胞DNA的合成，可以参与角膜内皮细胞的损伤修复再生过程。     

转化生长因子-β与翼状胬肉

转化生长因子-β(transforminggrowthfactor-beta,TGF-β)具有多种生物学作用,翼状胬肉中也有其异常表达。TGF-β在翼状胬肉发病中的作用主要表现为:①能促进翼状胬肉上皮细胞,成纤维细胞的增殖和新生血管形成。②能促进多种细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)的合成。③对翼状胬肉中的炎症和免疫反应也有介导作用。     

硫酸软骨素联合甘油长期冷冻保存角膜植片的实验研究

背景 硫酸软骨素(CS)是从动物软组织中提取的一种具有高黏滞性和高弹性的酸性黏多糖类物质,因具有广泛的生物活性而用于眼科临床.中期保存液中含有CS时,对角膜内皮细胞(CECs)具有显著的保护作用.然而,CS对长期甘油冷冻保存的CECs是否起到保护作用尚待研究. 目的 研究CS在甘油冷冻保存角膜中对CECs的保护作用,并与透明质酸钠(SH)比较,探索长期保存CECs活性的新方法.方法 获取52只Wistar雌性大鼠角膜片104只,采用随机数字表法随机分为4个组,正常对照组为新鲜角膜直接进行实验,质量分数3％ CS处理组、质量分数1％ SH处理组的角膜分别在内皮面黏附3％ CS、1％SH后放入甘油中冷冻保存,单纯甘油保存组角膜直接装入甘油中-25℃冷冻保存,每组26只角膜片.96只雌性SD大鼠作为受体,角膜植片保存2个月后各组取24只植片行同种异体穿透角膜移植术(PKP),CECs锥虫蓝-茜素红染色分别评价保存的角膜片和移植术后14d的角膜植片上CECs的存活率;透射电子显微镜下观察不同方法保存的角膜植片的超微结构.角膜移植术后1d通过裂隙灯显微镜检查各组角膜排斥反应指数(RI)和植片存活时间,分别于术后7、14、30 d制备角膜标本行常规组织病理学检查,免疫组织化学法检测各时间点植片中转化生长因子β1(TGF-β1)和细胞间黏附因子1(ICAM-1)的表达水平.结果 正常对照组大鼠角膜植片CECs细胞结构正常,未见锥虫蓝-茜素红蓝染细胞,3％ CS处理组偶见细胞蓝染,1％ SH处理组和单纯甘油保存组蓝染CECs数增加.与3％ CS处理组比较,1％ SH处理组和单纯甘油保存组的细胞密度均明显下降,差异均有统计学意义(t=2.214、4.068,P＜0.05),细胞活性率表现出同细胞密度同样的趋势.CECs超微结构检查表明,3％ CS处理组仪表现为内质网的轻度肿胀,而1％SH处理组和单纯甘油保存组细胞内质网肿胀程度较重.3％ CS处理组术后14d时植片淋巴细胞浸润及新生血管明显少于1％ SH处理组和单纯甘油保存组.临床评分表明,与1％ SH处理组和单纯甘油保存组比较,3％ CS处理组的R1明显降低而CECs生存时间明显延长,差异均有统计学意义(P＜0.05).免疫组织化学检测显示,在各时间点,3％ CS处理组植片中TGF-β1的表达量(A值)明显高于1％ SH处理组和单纯甘油保存组(P＜0.01);而ICAM-1的表达量低于1％ SH处理组和单纯甘油保存组(P＜0.05),3％ CS处理组植片中TGF-β1和ICAM-1的表达量接近于正常对照组表达水平.结论 3％ CS处理后的甘油保存方法能长期维持CECs的活性,同种异体PKP结果显示3％ CS处理后的甘油保存方法效果优于1％ SH处理后的甘油保存法.     

3H-TdR掺入法测定TGFβ1对人眼眶成纤维细胞增殖的影响

目的用3H-TdR掺入法观察转化生长因子β1(TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞增殖的影响,探讨增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的可能发病机制。方法人眼眶成纤维细胞体外培养,用不同浓度TGF-β1(0.1、1.0、5.0、10.0、100.0μg/L)对细胞进行处理,3H-TdR掺入法测定细胞放射性强度。结果 0.1、1.0、5.0、10.0浓度的TGF-β1作用后活细胞数增加,细胞3H-TdR摄入量增加。100.0浓度的TGF-β1对人眼眶成纤维细胞作用相反。结论 TGF-β1对人眼眶成纤维细胞增殖有双相调节性,其不同作用的发挥依赖TGF-β1的浓度,TGF-β1的促成纤维细胞的增殖作用是PVR的诱发因素。     

阻断Rac1对转化生长因子-β诱导视网膜色素上皮细胞行为改变的作用研究

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)诱导视网膜色素上皮(RPE)细胞间质样转分化(EMT)过程中Rac1在其细胞学行为改变中的作用.方法 人RPE-19细胞分为空白组、TGF-β1组、TGF-β1+NSC23766组、NSC23766组.所有实验于加入TGF-β1前2h给予NSC23766以封闭Rac1受体.免疫荧光、蛋白免疫印迹法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;细胞划痕、侵袭及凝胶收缩实验,观察NSC23766对细胞迁徙、侵袭、凝胶收缩作用.结果 TGF-β1组细胞中α-SMA荧光表达较空白组、TGF-β1+ NSC23766增强,差异有统计学意义(F=825.314,P=0.003);细胞划痕实验结果显示,TGF-β1组细胞间距小于TGF-β1+ NSC23766组,差异有统计学意义(P24h=0.04,P48h =0.001);与空白组细胞间距比较,差异无统计学差异(P=0.278).细胞侵袭实验结果显示,TGF-β1组穿过纤维膜的细胞数与空白组、TGF-β1+ NSC23766组、NSC23766组穿过纤维膜的细胞数比较,差异无统计学意义(F=0.371,P=0.055).凝胶收缩实验结果显示,TGF-β1组能明显增加细胞的促凝胶收缩能力,组间差异有统计学意义(F=40.473,P=0.014),TGF-β1组相对TGF-β1+ NSC23766组,差异有统计学意义(P=0.022).结论 Rac1在TGF-β1诱导RPE细胞凝胶收缩改变中发挥作用;NSC23766可通过调控Rac1活化抑制RPE细胞学行为的改变.     

角膜TGF-β与屈光手术损伤愈合的关系

转化生长因子-β(TGF-β)作为一种生长因子,在角膜纤维修复反应中发挥的生物学效应和作用机制成为近年来研究的热点。TGF-β可通过Smad等信号传导通路调控修复细胞的生物学行为,充分发挥角膜基质细胞促进细胞增殖、细胞外基质形成、诱导细胞移行的正效作用。我们就TGF-β的概况、分子结构、TGF-β受体、信号传导通路、眼前节的分布、在角膜上的生物学功能以及在准分子激光屈光性角膜手术愈合中的研究作一综述。     

3H-TdR掺入法测定TGFβ1对人眼眶成纤维细胞增殖的影响

目的 用3H-TdR掺入法观察转化生长因子β1 (TGF-β1)对人眼眶成纤维细胞增殖的影响,探讨增生性玻璃体视网膜病变(PVR)的可能发病机制.方法 人眼眶成纤维细胞体外培养,用不同浓度TGF-β1(0.1、1.0、5.0、10.0、100.0 μg/L)对细胞进行处理,3H-TdR掺入法测定细胞放射性强度.结果 0.1、1.0、5.0、10.0浓度的TGF-β1作用后活细胞数增加,细胞3H-TdR摄入量增加.100.0浓度的TGF-β1对人眼眶成纤维细胞作用相反.结论 TGF-β1对人眼眶成纤维细胞增殖有双相调节性,其不同作用的发挥依赖TGF-β1的浓度,TGF-β1的促成纤维细胞的增殖作用是PVR的诱发因素.     

转化生长因子β1及其Ⅰ型受体在实验性脉络膜新生血管中的表达与意义

目的探讨激光诱导BN大鼠脉络膜新生血管(CNV)形成过程中转化生长因子β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)表达变化趋势及其作用。设计实验性研究。研究对象5组30只雄性BN大鼠。方法BN大鼠单眼视网膜氪激光光凝,诱导CNV形成。分别在光凝后3天,1、2、3、4周摘除眼球,应用免疫组织化学及原位杂交技术检测CNV形成过程中Ⅷ因子相关抗原(FⅧR:Ag)、TGF-β1、TβRⅠ和TGF-β1mRNA的表达及变化。主要指标FⅧR:Ag、TGF-β1、TGF-β1mRNA和TβRⅠ。结果FⅧR:Ag免疫组织化学结果显示,光凝后1周开始形成CNV,3～4周达到高峰。正常BN大鼠TGF-β1、TβRⅠ在视网膜神经节细胞、内核层部分细胞、视网膜色素上皮层表达;TGF-β1mRNA在视网膜神经节细胞、视网膜色素上皮层表达。视网膜光凝后3天～4周,损伤区内FⅧR:Ag阳性染色密度逐渐增加(P<0.05);TGF-β1、TGF-β1mRNA和TβRⅠ阳性染色密度逐渐下降(P<0.05);三者与FⅧR:Ag阳性染色密度负相关(r=-0.87、-0.87、-0.80,P<0.05);TGF-β1和TβRⅠ阳性染色密度正相关(r=0.84,P<0.05)。结论光凝区内TGF-β1合成、分泌不足可能是CNV形成和增殖的主要原因之一;TGF-β1在受体水平表现出调节作用,存在由TβRⅠ介导的生物学效应。TβRⅠ表达低下,信号转导减弱,可能也是CNV形成和增殖的一个重要因素。     

TGF-β1/Smad4信号传导系统在视网膜母细胞瘤株Hxo-Rb44的表达

目的探讨TGF-β1／Smad4信号传导系统在视网膜母细胞瘤株Hxo-RM4的表达及意义。方法用免疫荧光法检测TGF-β1、TGF-β受体Ⅱ及Smad4在该细胞株中的表达和定位。以已知TGF-β1、TGF-β受体Ⅱ及Smad4表达均为阳性的WI-38细胞作对照，分别用RT-PCR法和Western blot法检测TGF-β1、TGF-β受体Ⅱ及Smad4的mRNA和蛋白质在视网膜母细胞瘤细胞株Hxo-RM4中的表达，并比较两种细胞表达水平的差异。结果免疫荧光检测结果发现视网膜母细胞瘤细胞株Hxo-RM4的TGF-β1呈阳性表达，主要位于胞浆和胞膜；TGF-βRⅡ及Smad4阴性。视网膜母细胞瘤细胞株Hxo-Rbd4的TGF-β1的表达在mRNA水平和蛋白水平均高于作对照的WI-38细胞；TGF-β受体Ⅱ及Smad4在mRNA水平和蛋白水平均为阴性。结论视网膜母细胞瘤细胞株Hxo-Rbd4高表达TGF-β1；对TGF-β1增殖抑制作用反应的丧失与视网膜母细胞瘤的发病有关。     

实时荧光聚合酶链反应定量检测大鼠视网膜中 转化生长因子β1和β2的表达

转化生长因子β(TGF-β)是一种具有控制增生和分化等生物过程的自分泌或旁分泌生长因子。TGF-β及其受体、细胞内下游信号转导分子的突变在糖尿病视网膜病变的发生、发展中扮演了非常重要的角色。研究TGF-β的不同成员在视网膜中的表达，有助于深入了解它们的来源和作用机制。我们以实时荧光定量聚合酶链反应(QRT-PCR)检测TGF-β1和TGF-β2在大鼠视网膜中的表达，为研究TGF-β在视网膜病变中的作用机制提供依据。     

转化生长因子-β2对牛眼小梁细胞外基质合成的影响

目的观察人眼房水中转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2, TGF-β2)对体外培养牛眼小梁细胞外基质合成的影响.方法将体外培养的第3～5代牛眼小梁细胞分为对照组和实验组,实验各组分别经0.32×103 ng/L、1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2作用48 h后,分别应用3H-脯氨酸掺入及液体闪烁测量技术、酶联免疫吸附法和放射免疫技术检测小梁细胞胶原(collagen, CA)、纤维连接蛋白(fibronectin, FN)及透明质酸(hyaluronic acid, HA)的合成.结果与对照组相比,不同浓度的TGF-β2均可促进牛眼小梁细胞CA的合成.0.32×103 ng/L、1.00×103 ng/L TGF-β2组与对照组比较差异有显著意义(q′=3.85、4.38, P<0.05),3.20×103 ng/L TGF-β2组与对照组比较差异有非常显著意义(q′=11.40, P<0.01),3H-脯氨酸掺入量呈浓度依赖性增高;1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2组促进牛眼小梁细胞合成FN, 与对照组比较差异有显著意义(q′=3.63, P<0.05) 和非常显著意义(q′=20.10, P<0.01); 1.00×103 ng/L、3.20×103 ng/L TGF-β2组均抑制牛眼小梁细胞合成HA, 与对照组比较差异有非常显著意义(q′=15.15、16.92, P<0.01).结论 TGF-β2可能在正常人眼小梁网细胞外基质的增龄性变化及原发性开角型青光眼患者小梁网及其邻管组织内细胞外基质异常沉积的过程中发挥了重要作用.     

PDGF和TGF-β1对兔RPE细胞α-SMA表达及收缩功能的影响

目的 研究血小板源性生长因子(PDGF-AB)和转化生长因子(TGF-β1)对兔视网膜色素上皮(RPE)细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达和RPE细胞诱导的胶原收缩的影响。方法免疫荧光染色法分析PDGF-AB和TGF-β1对α-SMA表达的影响。体外胶原凝胶收缩实验用于证实两种生长因子对兔RP细胞收缩的刺激作用。结果 PDGF-AB和TGF-β1均可显著诱导兔RPE细胞α-SMA的表达，TGF-β1的作用显著强于PDGF-AB；两种生长因子对RPE细胞诱导的胶原收缩有着相同显著的刺激作用。结论 PDGF-AB和TGF-β1均可增强RPE细胞的收缩力量．但二者可能是通过不同的途径达到这一效果，还需要更多的研究来分析α-S1MA在纤维增殖疾病中的作用。     

近视眼角膜上皮细胞EGFR、TGF—pRI及IL—1RI的表达

目的检测近视患眼角膜上皮细胞表皮生长因子受体(EGF R)、转化生长因子βⅠ型受体(TGF-βRⅠ)和白细胞介素1Ⅰ型受体(IL-1RⅠ)的表达.方法将PRK术中获取的角膜上皮细胞制成细胞涂片,ABC法检测.结果EGF R、TGF-βRⅠ和IL-1RⅠ在全部标本表达,强度依次为EGF R＞IL-1RⅠ＞TGF-βRI.结论近视患眼角膜上皮细胞表达此三种受体,推测PRK术后此三种受体参与角膜创面修复.     

TGF-β对体外培养人胚视网膜色素上皮细胞的影响

目的 研究转化生长因子-β（TGF-β）对体外培养人胚视网膜色素上皮（RPE）细胞的影响，从细胞生物学水平和分子生物学水平探讨近视眼的发病机制。方法 外源性TGF-β刺激人RPE细胞后，通过绘制生长曲线、MTT法检测细胞活性及观察透射电镜研究其细胞自身的生长情况；采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定其分泌HGF、bFGF和TGF-β的量；采用RT-PCR法检测其细胞表达HGF的情况，从而分析外源性TGF-β对体外培养的RPE细胞的影响。结果不同质量浓度的TGF-β均可抑制人胚RPE细胞的生长，随时间的延长作用更加明显；TGF-β可使RPE细胞超微结构发生变化；ELISA结果显示TGF-β对其他两种因子的分泌均有抑制作用，但对自身有促进作用，为正反馈调节；同时可明显抑制RPE细胞内HGF的表达。结论 TGF-β可影响RPE细胞增生、改变超微结构及抑制HGF的表达。     

曲尼斯特对人眼Tenon囊成纤维细胞TGF-β1，2 mRNA表达的影响

目的观察曲尼斯特对人眼Tenon囊成纤维细胞(human tenon fibroblast,HTF)TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达的影响.方法体外进行HTF细胞原代及传代培养.采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),研究不同浓度和不同作用时间的曲尼斯特对HTF细胞TGF-β1、TGF-β2 mRNA表达的影响.结果曲尼斯特作用24 h后,25.0、50.0、100.0 mg/L浓度曲尼斯特组与对照组相比均能够明显下调HTF细胞TGF-β1(P＜0.05、0.05、0.01)和TGF-β2(P＜0.01、0.05、0.01)mRNA表达.50.0 mg/L曲尼斯特处理12 h、24 h、48 h组相对于相应时间对照组,能够明显下调HTF细胞TGF-β1(P＜0.05、0.01、0.01)和TGF-β1(P＜0.01、0.01、0.01)mRNA表达.结论 曲尼斯特能够下调体外培养HTF细胞TGF-β1、TGF-β2 mRNA的表达,下调效应随药物浓度和作用时间的延长而加强.(中国眼耳鼻喉科杂志,2006,681～83)