基因-病毒治疗系统AdHA对血管内皮细胞的抑制作用

目的：研究基因－病毒治疗系统AdHA对血管内皮细胞增殖的抑制作用，意在为卵巢癌抗血管生成治疗提供实验依据。方法：采用直接感染台盼蓝染色排除法、MTF实验检测血管抑素K1-5对血管内皮细胞增殖的抑制作用。结果：直接感染台盼蓝染色排除法及MTT法检测表明，携带血管抑素K1-5基因的腺病毒能显著抑制血管内皮细胞增生，并对其具有杀伤力。结论：血管抑素K1—5能明显抑制血管内皮细胞增殖，为进一步行体内实验，研究其对血管形成的抑制作用及卵巢癌抗血管生成基因治疗奠定了基础。     

格列卫对卵巢癌细胞COC1增殖及血管形成的影响

目的探讨格列卫(gleevec)对耐药卵巢癌细胞COC1增殖、顺铂敏感性和血管形成的影响,为临床应用格列卫治疗难治性卵巢癌提供实验依据。方法2006年9月至2007年5月于哈尔滨医科大学第一临床医学院采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测格列卫对细胞增殖的影响;采用ELISA法检测格列卫对COC1表达血管内皮细胞生长因子(VEGF)和内皮抑素(endostatin)的影响。结果格列卫对COC1细胞增殖的抑制作用表现出浓度依赖性,并显著提高了其对顺铂的敏感性;格列卫对COC1表达VEGF具有明显的抑制作用,格列卫对COC1表达内皮抑素具有明显促进作用,并呈浓度依赖性。结论格列卫能够抑制顺铂耐药卵巢癌细胞COC1的增殖,并显著增强其对顺铂的敏感性;格列卫对抑制肿瘤细胞产生VEGF具有明显的作用。     

内皮抑素在妇科肿瘤的研究进展

内皮抑素(endostatin)是在对小鼠血管内皮瘤(EOMA)细胞系的研究中发现的一种分子质量为20ku的蛋白,实验证明其对内皮细胞增殖有明显抑制作用,并通过抑制肿瘤相关的新生血管生成阻断肿瘤的血液供应,发挥抑制肿瘤生长作用,反复用药无任何毒副作用及耐药性.内皮抑素在妇科肿瘤中也有不同程度的表达,可作为妇科肿瘤早期诊断和治疗的新途径.     

内皮抑素对荷卵巢上皮性癌细胞系ES-2细胞裸鼠的抗血管生成作用

肿瘤的生长和转移与肿瘤区血管生长有密切关系，分期越晚，分化越差，肿瘤内血管密度（MVD）越高。抑制和破坏肿瘤区新牛血管的生长，阻断其血液供应导致肿瘤细胞坏死，并阻断其转移，成为治疗实体肿瘤的一种新途径。1997年，O’Reilly等体外实验发现，内皮抑素对牛毛细血管内皮细胞有特异的抑制增殖作用，而对非血管内皮细胞、平滑肌细胞等尢抑制作用；体内实验证明，内皮抑素可抑制鸡胚尿囊膜的毛细血管生长：近年来，已有数种作用机理不同的这类药物正在进行临床试验。目前，内皮抑素已应用于多种肿瘤的体内实验。本研究采用裸鼠移植瘤模型，观察内皮抑素对人卵巢上皮性癌（卵巢痛）移植瘤内肿瘤新生血管生成的抑制作用，现报道如下。     

内皮抑素在妇科肿瘤的研究进展

内皮抑素(endostatin)是在对小鼠血管内皮瘤(EOMA)细胞系的研究中发现的一种分子质量为20ku的蛋白，实验证明其对内皮细胞增殖有明显抑制作用，并通过抑制肿瘤相关的新生血管生成阻断肿瘤的血液供应，发挥抑制肿瘤生长作用，反复用药无任何毒副作用及耐药性。内皮抑素在妇科肿瘤中也有不同程度的表达，可作为妇科肿瘤早期诊断和治疗的新途径。     

M2型巨噬细胞调控卵巢癌腹膜内肿瘤血管生成的实验研究

目的:探讨上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)腹水中M2型巨噬细胞(M2 macrophage)调控腹膜内肿瘤血管生成的机制。方法:分离卵巢癌患者腹水中M2型巨噬细胞,体外无血清刺激后,收集上清M2作为条件培养基(M2 macrophage conditional medium,M2 CM),分别采用结晶紫染色实验、Transwell小室迁移实验和小管样结构形成实验,检测共培养刺激后其对人脐静脉血管内皮细胞系EA.hy926增殖、迁移以及小管样结构形成的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测刺激后EA.hy926细胞分泌促血管蛋白因子——白细胞介素8(IL-8)以及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。结果:①经M2 CM刺激后,EA.hy926细胞的增殖能力提高,结晶紫染色后检测OD值为0.192 6±0.002(P<0.05)。②细胞迁移能力提高,迁移细胞数为84.81±2.04(P<0.001)。③M2 CM可显著促进内皮细胞小管样结构形成,与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。④ELISA显示经M2 CM刺激后,EA.hy926分泌IL-8为(1 570.45±118.64)ng/L,VEGF分泌量也显著升高,为(502.21±133.61)ng/L,与对照组差异有统计学意义(P<0.001)。结论:EOC腹水中M2型巨噬细胞可能通过上调内皮细胞分泌VEGF及IL-8等促血管生成因子,增加血管内皮细胞增殖、迁移能力及小管样结构形成,从而促进卵巢癌腹膜内血管生成。     

内皮抑素真核表达载体对移植性卵巢癌的抑制作用

目的探讨脂质体介导的内皮抑素真核表达载体对裸鼠移植性卵巢癌的抑制作用。方法利用已构建的内皮抑素真核表达载体pVAX1sEn,在脂质体介导下转染卵巢癌细胞系3AO细胞,RTPCR技术检测3AO细胞中内皮抑素mRNA的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测3AO细胞上清液中内皮抑素的水平,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测3AO细胞上清液中的内皮抑素对脐静脉内皮细胞系ECV204细胞的抑制作用。将荷卵巢癌移植瘤裸鼠分为3组,pVAX1sEn治疗组、pVAX1对照组和生理盐水对照组,分别观察3组卵巢癌的生长情况。结果RTPCR技术检测结果显示,在610bp处有一内皮抑素mRNA的特异性条带;ELISA法检测结果显示,pVAX1sEn转染3AO细胞后其上清液中内皮抑素水平为(201±8)ng/ml;MTT法检测结果显示,pVAX1sEn转染3AO细胞后其上清液中的内皮抑素可有效抑制ECV204细胞的生长,最高抑制率为42%。pVAX1sEn治疗组肿瘤体积为(0.85±0.18)cm3,显著小于生理盐水对照组的(1.90±0.28)cm3和pVAX1对照组的(1.78±0.32)cm3(P<0.05)。肿瘤组织HE染色显示,pVAX1sEn治疗组肿瘤细胞坏死明显,而生理盐水对照组及pVAX1对照组肿瘤细胞生长旺盛。结论脂质体介导的pVAX1sEn瘤内注射可有效抑制卵巢癌移植瘤的生长。     

血管内皮生长因子、内皮抑素、血管抑素与子宫内膜癌

综述血管生成与子宫内膜癌的关系,以及血管生成调节因子中具有促进血管内皮细胞生长的血管内皮生长因子(VEGF)和抑制内皮细胞生长的内皮抑素(endostatin)、血管抑素(angiostatin)的结构与功能,三者的相互关系及其在子宫内膜癌的研究和应用前景.     

抗人血管内皮生长因子发夹状核酶基因抑制卵巢癌细胞血管内皮生长因子表达

目的 :研究抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因对人卵巢癌细胞血管内皮生长因子 (VEGF)表达的抑制作用 ,探讨卵巢癌基因治疗的新途径。方法 :人卵巢癌细胞SKOV3高表达VEGF ,将抗血管内皮生长因子发夹状核酶基因真核表达载体 (pcDNA3 RZ)转染人卵巢癌细胞SKOV3,经G4 18筛选获得阳性细胞克隆 ,RNA斑点杂交检测核酶基因是否在细胞中表达。采用免疫组化、间接免疫荧光、激光共聚焦显微镜荧光定量法及流式细胞仪结合间接免疫荧光检测转染前后细胞VEGF的表达情况。结果 :转染pcDNA3 RZ组细胞VEGF表达明显降低。结论 :抗人VEGF发夹状核酶基因真核表达载体可有效抑制卵巢癌细胞SKOV3中VEGF的表达 ,有望成为治疗卵巢癌的一种新方法。     

RNAi沉默卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达对细胞增殖能力的影响

目的:构建靶向于卵巢癌耐药细胞株中高表达的H-ras癌基因的短发夹状RNA重组质粒,研究它对卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM内源H-ras基因表达的抑制作用以及H-ras基因与卵巢癌发生和耐药的关系。方法:运用基因克隆技术构建靶向于H-ras基因的重组质粒pshRNA/H-ras并转染至卵巢癌耐药细胞株SKOV3/ADM,通过W est-ern blot、RT-PCR检测H-ras蛋白的表达及mRNA转录水平的变化;MTT法检测它对SK-OV3/ADM细胞增殖的抑制作用,AO/EB实验检测pshRNA/H-ras对SKOV3/ADM细胞凋亡的影响。结果:构建的两重组质粒pshRNA/H-ras1、2均能明显抑制H-ras基因的表达。蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pshRNA/H-ras1、2的SKOV3/ADM细胞靶蛋白的抑制率分别为86.87%和92.21%,RT-PCR检测到H-ras基因mRNA转录水平下降;pshR-NA/H-ras1、2明显抑制SKOV3/ADM细胞的增殖,MTT检测转染48h后的抑制率分别为62.4%和47.9%,AO/EB实验观测到转染24h和48h的细胞凋亡率分别为20.3%和35.6%。结论:H-ras基因在耐药的卵巢癌细胞增殖与凋亡过程中发挥作用,重组质粒pshRNA/H-ras可有效地抑制SKOV3/ADM细胞内源H-ras基因的表达和mRNA的转录,并抑制细胞的增殖和促进凋亡的发生,为化疗耐受的肿瘤细胞提供了新的基因治疗手段。