可溶性HLA-Ⅰ类抗原及其临床意义的研究进展

ＨＬＡ是一类复杂的人类遗传多肽性系统,其研究工作在医学实践中有十分重要的意义。其中,ＨＬＡ－Ⅰ类抗原在移植排斥反应中起着重要作用,是组织排斥应答的主要抗原,同时对细胞毒Ｔ细胞起约束作用,ＨＬＡ－Ⅰ类抗原除了以膜抗原形式存在于细胞膜表面外,目前也已从人类的血清和淋巴液,尿液及乳汁中检出,称为可溶性ＨＬＡ抗原（ＳｏｌｕｄｌｅＨＬＡＡｎｔｉｇｅｎｓ,ｓＨＬＡ）。本文综述了ｓＨＬＡ－Ⅰ分子的分泌、结构、检测、在免疫调节及在自身免疫病、器官移植、感染等生理、病理状况下的意义。     

HLA-Ⅰ类抗原的组织配型基因芯片的建立及应用

目的:应用基因芯片技术进行北方汉族人群HLA-Ⅰ类抗原中分辨度分型研究,建立稳定的HLA检测芯片.方法:采用寡核苷酸芯片分型方法,依据第十三届国际组织相容性工作会议报告及相关文献,同时考虑遗传的连锁不平衡,及强脊炎、幼年型糖尿病等与HLA密切相关的遗传病等因素,选择了中国人群基因频率较高的等位基因,根据HLA-Ⅰ类不同基因亚型的独特序列,完成了探针的设计与筛选,最后设计了122条探针(HLA-A56条,HLA-B66条)制成基因分型芯片.采用带荧光标记的引物,用合适的PCR方法扩增HLA-Ⅰ类抗原上的多态性区域,产物与芯片上探针杂交.杂交结果经荧光扫描并用特定软件分析判断阳性探针,以此确定样品基因型.结果:所有样本的HLA-Ⅰ类抗原基因分型均获成功.此中分辨度探针可分出598个Ⅰ类抗原等位基因,可检出Ⅰ类抗原特异性57个.结论:基因芯片用于HLA-Ⅰ类抗原分型可行.其分辨率高,特异性强,可用于HLA基因分型、骨髓移植、器官移植的HLA配型、与HLA有密切关系的遗传性疾病的人群筛查.     

HLA-Ⅱ类抗原的表达调控及其在肿瘤组织中的表达

HLA Ⅱ类抗原在免疫应答和免疫调节中具有重要作用 ,其表达调节主要发生在转录水平上。在它的启动子区内存在W盒、Y盒、X盒等顺式作用元件 ,调节HLA Ⅱ类抗原的表达。HLA Ⅱ类抗原启动子区具有的高度多态性 ,也可通过多种途径影响HLA Ⅱ基因的表达。肿瘤细胞可异常表达HLA Ⅱ类抗原 ,干扰素、启动子多态性、CⅡTA、RB蛋白等多种因素影响其表达     

081 HLA-Ⅱ类抗原的表达调控及其在肿瘤组织中的表达

HLA-Ⅱ类抗原在免疫应答和免疫调节中具有重要作用,其表达调节主要发生在转录水平上.在它的启动子区内存在W盒、Y盒、X盒等顺式作用元件,调节HLA-Ⅱ类抗原的表达.HLA-Ⅱ类抗原启动子区具有的高度多态性,也可通过多种途径影响HLA-Ⅱ基因的表达.肿瘤细胞可异常表达HLA-Ⅱ类抗原,干扰素、启动子多态性、CⅡTA、RB蛋白等多种因素影响其表达.     

不同IL-15转染对NCI-H446 HLA-Ⅰ和HLA-Ⅱ表达及NK敏感性的影响

目的探讨不同形式IL-15基因转染对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达及NK杀伤敏感性的影响。方法在本室已构建的3种细胞模型（转染IL-15成熟肽基因的NCI-H446／IL-15mp细胞、转染原型IL-15基因的NCI-H446／IL-15细胞和转染以IL-2信号肽替代IL-15信号肽的改型IL-15基因的NCI-H446／IL-2sp-IL-15mp细胞）基础上,以野生株细胞为对照,流式细胞分析仪（Fluorescence-activated cell Sorter,FACS）分析这3种细胞HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定它们对NK杀伤的敏感性。结果野生株NCI-446细胞表面阳性表达HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子;转染IL-15成熟肽基因或改型IL-15基因后,这两种分子的表达均被抑制为阴性;转染原型IL-15基因后,这两种分子的表达均被显著上调。5名不同健康志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）对野生株NCI-H446细胞的平均NK杀伤率最低,对NCI-H446／IL-15、NCI-H446／IL-15mp和NCI-H446／IL-2sp-IL-15mp细胞的平均NK杀伤率依次升高。结论转染不同形式IL-15基因对NCI-H446细胞的免疫生物学特性影响不同。转染IL-15成熟肽基因或改型IL-15基因,抑制NCI-H446细胞表面HLA的Ⅰ类和Ⅱ类分子表达;转染原型IL-15基因,上调这两种分子的表达;转染不同形式IL-15基因均可增强NCI-H446细胞对NK杀伤的敏感性,但程度不同;以改型IL-15者最高,IL-15成熟肽者次之,原型IL-15者最低。     

维吾尔族妇女子宫颈癌组织中IFITM1、Ki-67和PCnA的表达

目的：探讨维吾尔族妇女子宫颈癌组织中 IFITM1、PCNA和Ki-67蛋白的表达。方法采用免疫组化SP法检测IFITM1、PCNA和Ki-67蛋白在维吾尔族妇女子宫颈癌和慢性子宫颈炎组织中的表达。结果 IFITM1蛋白在子宫颈鳞癌组织中的表达低于慢性子宫颈炎组织,差异有统计学意义（P=0.003）;子宫颈癌组织中Ki-67和PCNA蛋白表达高于慢性子宫颈炎组织,差异有统计学意义（ P =0.019,P =0.000）。结论 IFITM1蛋白在子宫颈癌组织中的表达降低,Ki-67和PCNA蛋白在子宫颈癌组织中的表达水平增高,可能与维吾尔族妇女子宫颈癌的发生有关。     

CD68、CD3、CD15和CD22在难愈合性溃疡创面组织中的表达

目的 :观察CD6 8、CD3、CD15和CD2 2在慢性皮肤溃疡创面组织中的表达和分布。探讨其在慢性溃疡创面形成及修复过程中的作用和意义。方法 :慢性皮肤溃疡 14例 ,病程大于 1个月 ,其中 8例为糖尿病皮肤溃疡、2例下肢静脉曲张伴小腿溃疡、2例为 2者并发、2例为其他慢性溃疡。在创面边缘取材 ,中性甲醛固定。HE染色观察创面病理学改变 ,2步法免疫组织化学技术观察CD6 8、CD3、CD15和CD2 2的表达和分布。结果 :溃疡组织切片HE染色观察局部呈典型的慢性溃疡组织学改变 :创面巨噬细胞、中性粒细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞有不同程度的浸润 ,…     

维吾尔族妇女子宫颈癌ARPC2/3的表达及其相关性

目的 探讨肌动蛋白相关蛋白复合体2/3(actin-related protein complex 2/3, ARPC2/3)在宫颈鳞癌中的表达及其临床意义.方法 制备40例维吾尔族妇女子宫颈癌及15例正常宫颈组织中总RNA,采用RT-PCR法分析 ARPC2/3基因的mRNA表达水平,同时采用免疫组化SP法检测其蛋白表达.结果 (1)维吾尔族妇女子宫颈癌组织及正常宫颈组织中ARPC2/3基因及蛋白阳性率分别为63%～65%及20%～27%(P<0.005)表达差异有显著性.(2)ARPC2/3基因及其蛋白在维吾尔族子宫颈癌不同临床分期及不同分化程度组织中表达差异无显著性(P>0.05),但是在维吾尔族妇女子宫颈癌淋巴结转移阳性组中表达率明显高于淋巴阴性组,差异有显著性(P<0.05).结论 ARPC2/3在维吾尔族宫颈鳞癌中高表达,对宫颈癌的诊断及预后判断有重要的参考价值.     

原发性肝癌组织中B7-H3表达与浸润的CD8^+ T细胞数负相关北大核心CSCD

目的探讨原发性肝癌组织中B7-H3的表达与CD8+T细胞浸润之间的关系。方法采用免疫组织化学技术分析原发性肝癌组织和正常肝组织中B7-H3的表达、CD8+T细胞的浸润数量,对B7-H3的表达与CD8+T细胞浸润数量的相关性进行统计学分析。结果 63例肝癌患者中B7-H3高表达26例(41.3%),低表达37例(58.7%),总阳性率为90.5%,其中正常肝组织基本不表达B7-H3。B7-H3高表达组CD8+T细胞浸润数量明显低于B7-H3低表达组,CD8+T细胞浸润数量与肝癌组织中B7-H3的表达呈负相关。肝癌组织中B7-H3的表达和CD8+T细胞数量在肝癌患者的临床病理分期、是否有局部淋巴结转移以及远隔器官转移等方面具有显著性差异。结论原发性肝癌组织中高表达B7-H3,与肿瘤组织中CD8+T细胞浸润呈负相关。     

胃良恶性病变组织中CD24和CD44v6的表达及其意义

目的： 研究胃良恶性病变组织中癌干细胞标记物CD24、CD44v6的表达并探讨其临床病理意义。方法: 49例胃癌、20例癌旁组织、36例淋巴结转移灶及80例不同类型胃良性病例（浅表性胃炎10例，萎缩性胃炎15例，胃溃疡20例，胃息肉20例，胃腺瘤15例）标本常规制作石蜡包埋切片，CD24和CD44v6染色方法为EnVision免疫组化法。结果: 胃癌病例CD24和CD44v6表达阳性率明显高于癌旁组织和不同类型胃良性病变（P＜0.05或P＜0.01），且阳性表达的良性病例胃黏膜上皮均呈中至重度不典型增生；转移灶CD24和CD44v6表达与相应原发灶呈现高度一致性（P>0.05）；组织学分级Ⅱ级、无淋巴结转移及无远处器官转移胃癌病例CD24和CD44v6表达阳性率明显低于组织学分级Ⅲ或Ⅳ级、淋巴结转移及远处器官转移病例（P＜0.05）。此外，浸润深度T₁-T₂及淋巴结N1站转移病例CD24表达阳性率明显低于浸润深度T₃-T₄和淋巴结N₂、N₃站转移病例（P＜0.05）。结论: CD24和CD44v6表达可能是反映胃癌发生、进展、生物学行为和预后的重要癌干细胞标记物，检测胃良性病例CD24和CD44v6表达水平对预防和早期发现胃癌可能有一定的临床价值。     

NK相关抗原在HIV/AIDS患者CD8+T淋巴细胞上的表达

目的　探讨NK相关抗原CD5 6、CD16在HIV AIDS患者CD8 T淋巴细胞上的表达。方法　取外周血细胞 ,用标记荧光的抗体进行染色 ,以CD8强阳 淋巴细胞为门 ,用流式细胞仪分析CD8 T淋巴细胞上CD5 6、CD16的表达。结果　HIV AIDS患者CD8 T淋巴细胞表达CD5 6 、CD5 6 CD16 - 、CD5 6 CD16 均明显低于HIV抗体阴性健康对照组 (P <0 .0 5 ) ;经高效抗逆转录病毒疗法 (HAART)治疗后CD8 T淋巴细胞表达的CD5 6 、CD5 6 CD16 - 、CD5 6 CD16 呈逐渐升高趋势。HIV AIDS患者表达CD5 6 CD16 - 的CD8 T淋巴细胞亚群绝对数与CD4 T淋巴细胞绝对数呈正相关 ,r=0 .393,P <0 .0 5 ;表达CD5 6 - CD16 的CD8 T淋巴细胞百分数与CD4 T细胞绝对数呈负相关 ,r=- 0 .32 4 ,P <0 .0 5。结论　表达CD5 6的CD8 T淋巴细胞在HIV AIDS患者中明显缺失 ,HAART治疗可恢复缺失。CD8 T淋巴细胞上CD5 6的表达是HIV感染中值得关注的重要指标之一 ,对评价抗病毒疗效具有指导意义。     

子宫颈癌中CD105、CD31标记的微血管密度的变化及意义

目的观察子宫颈癌演变过程中CD105、CD31的表达情况,探讨CD105、CD31标记的微血管密度(microvessel den-sity,MVD)数目与子宫颈癌演变的关系。方法采用免疫组化SP法检测79例各期子宫颈癌病理中CD105、CD31标记的MVD计数,观察MVD的变化情况。结果 (1)CD105标记的MVD在原位癌、早浸润癌、有无浸润癌淋巴结转移的肿瘤组织中的数量分别是19.03±2.12、20.52±5.22、28.38±5.86、29.25±4.78,组别间差异有显著性(P<0.05)。(2)用CD31标记的MVD在原位癌、早浸润癌、有无浸润癌无淋巴结转移的肿瘤组织中的数量分别是13.40±8.10、17.93±6.95、18.85±8.12、13.50±12.06,组别间差异无显著性(P>0.05)。结论 CD105作为子宫颈癌新生血管标记物的临床价值较高。     

结直肠癌中IL-38与CD4、CD8的相关性及临床意义

目的 探讨IL-38在结直肠癌(colorectal cancer, CRC)组织中的表达与CD4、CD8表达的相关性及与预后的关系。方法 收集314例CRC临床资料,采用免疫组化SP法检测IL-38、CD4、CD8、IL-6、IL-10、IL-23和TGF-β的表达,分析其临床病理特征并复习相关文献。结果 IL-38在癌组织(H score:166.7)中的表达水平明显低于癌旁组织(H score:194.4)(P<0.000 1),且与组织分化呈正相关(P<0.000 1),IL-38与CD8表达呈正相关(r=0.115 4,P=0.039 2),IL-38与CD4表达无明显相关性(r=0.024 9,P=0.649 9)。IL-38与IL-10(r=-0.112 9,P=0.039 4)、IL-23(r=-0.112 6,P=0.036 2)、TGF-β(r=-0.161 8,P=0.003)表达呈负相关。IL-38和CD8双高表达的患者3年生存率,明显高于IL-38和CD8单高表达或双低表达的患者(P=0.036 3)。Cox多因素生存分析：IL-38与CD8双高表...     

黏液性与非黏液性结直肠腺癌中PD-L1、CD8的表达

目的探讨黏液性结直肠腺癌(mucinous colorectal adenocarcinoma, MCA)与非黏液性结直肠腺癌(non-mucinous colorectal adenocarcinoma, non-MCA)中程序性死亡蛋白-配体1(programmed death protein-ligand 1, PD-L1)和CD8的表达。方法收集结直肠腺癌标本106例,其中non-MCA 90例,MCA 16例,采用免疫组化法检测non-MCA和MCA的肿瘤细胞和肿瘤浸润免疫细胞中PD-L1和CD8表达,计算PD-L1和CD8的阳性率,比较non-MCA和MCA中PD-L1和CD8表达的差异。结果 non-MCA组织中PD-L1表达比MCA高(P0.001),两组肿瘤组织中PD-L1均大部分表达于肿瘤间质的免疫细胞。在non-MCA组中有23%的PD-L1和CD8同时高表达,有48%的PD-L1和CD8同时低表达,7%的PD-L1高表达和CD8低表达,22%的PD-L1低表达和CD8高表达。在MCA组中有40%的PD-L1和CD8同时低表达,60%的PD-L1低表达而CD8高表达。non-MCA与MCA组织中CD8~+ T细胞的表达,差异无统计学意义。结论结直肠腺癌中PD-L1主要表达于肿瘤间质的免疫细胞,且non-MCA较MCA高表达PD-L1;部分non-MCA中PD-L1和CD8同时高表达。     

血管内皮生长因子C在维吾尔族妇女宫颈病变组织及血清中表达的临床研究

目的 检测血管内皮生长因子C(VEGF-C)在新疆维吾尔族妇女宫颈病变中组织表达及血清含量,评价组织及血清中VEGF-C的相关性及临床意义.方法 ①应用免疫组织化学方法检测22例慢性宫颈炎、24例宫颈上皮内瘤变( CIN)及43例宫颈鳞癌组织中VEGF-C的表达.②用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测15例慢性宫颈炎、23例CIN及40例宫颈鳞癌患者血清中VEGF-C的含量.结果 ①慢性宫颈炎、CIN及宫颈癌组织中VEGF-C阳性表达率分别为9.10％、87.50％、100％,差异有统计学意义(P＜0.05).②慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌患者血清中VEGF -C含量呈逐渐增高趋势,差异有统计学意义(P＜0.05).③慢性宫颈炎、CIN和宫颈鳞癌患者组织及血清中VEGF-C的表达及含量,两者之间有相关性,差异有统计学意义(r=0.27,F=5.327,P＜0.05),组织表达越强,血清含量越高.结论 VEGF-C在新疆维吾尔族妇女CIN及宫颈鳞癌的转变过程中起一定的作用.     

血管内皮生长因子C在维吾尔族妇女宫颈病变组织及血清中表达的临床研究

目的检测血管内皮生长因子C（VEGF．C）在新疆维吾尔族妇女宫颈病变中组织表达及血清含量,评价组织及血清中VEGF—C的相关性及临床意义。方法①应用免疫组织化学方法检测22例慢性宫颈炎、24例宫颈上皮内瘤变（CIN）及43例宫颈鳞癌组织中VEGF—C的表达。②用酶联免疫吸附实验（ELISA）方法检测15例慢性宫颈炎、23例CIN及40例宫颈鳞癌患者血清中VEGF—C的含量。结果①慢性宫颈炎、CIN及宫颈癌组织中VEGF—C阳性表达率分别为9．10％、87．50％、100％,差异有统计学意义（P〈0．05）。②慢性宫颈炎、CIN和宫颈癌患者血清中VEGF—C含量呈逐渐增高趋势,差异有统计学意义（P〈0．05）。③慢性宫颈炎、CIN和宫颈鳞癌患者组织及血清中VEGF—C的表达及含量,两者之间有相关性,差异有统计学意义（r=0．27,F=5．327,P〈0．05）,组织表达越强,血清含量越高。结论VEGF．C在新疆维吾尔族妇女CIN及宫颈鳞癌的转变过程中起一定的作用。     

胰腺导管腺癌大切片中CD8的表达及预后分析

目的 探讨胰腺导管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)大切片中T淋巴细胞相关抗原CD8的表达与临床病理特征及预后的关系.方法 收集57对术前未行新辅助治疗并经外科手术切除的PDAC石蜡样本大、小切片,采用免疫组化EnVision法检测CD8在大、小切片组的表达,分析其表达与...     

CD68、CD11c和CD163阳性巨噬细胞在乳腺癌组织中表达及与临床病理特征和预后的关系

目的 探讨乳腺癌肿瘤间质(tumor stroma,TS)中CD68+、CD11c+和CD163+肿瘤相关巨噬细胞(tumor associ-ated macrophages,TAM)的免疫组化表达及与临床病理特征、生存期的关系.方法 采用免疫组化法检测81例乳腺癌和50例乳腺腺病组织中CD68、CD11c和CD163...     

维吾尔族妇女宫颈病变组织中HPV感染与低相对分子质量蛋白酶体2和7基因启动子甲基化的关系

目的 探讨维吾尔族妇女宫颈病变及其人乳头状瘤病毒( human papillomavirus,HPV)感染与低相对分子质量蛋白酶体(low molecular-weight protein,LMP)基因启动子区甲基化水平的关系和意义.方法 利用专业软件设计LMP2和LMP7基因启动子区含CpG岛特异性PCR引物,对SiHa宫颈癌细胞DNA进行亚硫酸氢盐修饰、目的片段扩增、质粒载体克隆和测序,确定该区域所含CpG序列甲基化情况;收集维吾尔族妇女正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈鳞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)患者新鲜组织和石蜡组织标本78例,并提取DNA,采用Sequenom MassARRAY DNA技术平台(质谱分析),定量分析LMP2和LMP7基因启动子甲基化水平,同时以HPV分型芯片鉴定HPV亚型,分析基因甲基化与HPV感染的关系;应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测LMP2、LMP7mRNA和蛋白的表达,并分析蛋白表达与基因甲基化的关系.结果 LMP2和LMP7基因相应目的片段各含有22个CpG位点,在SiHa宫颈癌细胞基因组DNA中,只有LMP7有2个位点发生甲基化.宫颈病变病理过程伴随着LMP7基因CpG片段甲基化水平改变,其在CSCC和CIN组织的甲基化率(0.1864±0.0893和0.0728±0.0548)高于正常宫颈上皮组织(0.0652±0.0488),差异有统计学意义(P＜0.05).随着宫颈病变的加重LMP7 mRNA和蛋白表达逐渐下调,各组间表达差异具有统计学意义(P＜0.05),LMP7蛋白表达随着该基因甲基化率增高而降低(F=8.69,P=0.035).而LMP2蛋白表达在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).HPV分型芯片检出12种HPV基因型,其中HPV16感染率构成比为52/78(66.7％),HPV16亚型阳性与宫颈病变进程及LMP7基因甲基化率升高趋势正相关(t=1.996,P=0.049).结论 LMP7基因启动子区CpG岛甲基化是一种宫颈癌病变特异性改变,与HPV16感染可能存在密切关系.     

EPCAM、CD44和CD24在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的: 联合检测95例胃癌组织中上皮细胞黏附分子(EPCAM)、白细胞分化抗原 44(CD44)和白细胞分化抗原 24(CD24)的表达情况,分析这3种蛋白与胃癌临床病理资料及预后之间的关系。方法: 应用免疫组织化学法检测95例经手术切除并有明确病理诊断为胃癌的标本中EPCAM、CD44和CD24的表达。分析95例胃癌临床病理资料与这3种蛋白阳性表达之间的关系。结果: (1) EPCAM阳性56例(58.95%),CD44阳性41例(43.16%),CD24阳性56例(58.95%)。其中EPCAM⁺CD44⁺30例(31.58%),EPCAM⁺CD24⁺45例(47.37%),CD44⁺CD24⁺32例(33.68%),EPCAM⁺CD44⁺CD24⁺25例(26.32%)。(2)EPCAM与年龄、肿瘤浸润深度、WHO组织学分型有关;CD44与BORRMANN分型、WHO组织学分型、CEA值有关;CD24与浸润深度、肿瘤位置、WHO组织学分型、脏器侵犯有关;三者阳性与浸润深度、肿瘤位置、WHO组织学分型有关(P<0.05)。(3)EPCAM、CD44阳性组的生存率与阴性组比较差异有统计学意义(P<0.05及P<0.01);EPCAM⁺CD44⁺CD24⁺与EPCAM^-CD44^-CD24^-的生存率比较差异有统计学意义(P<0.05); EPCAM^-CD44⁺CD24⁺与EPCAM^-CD44^-CD24^-的生存率比较有统计学意义(P<0.05)。结论: EPCAM、CD44和CD24在胃癌组织中表达阳性率高,可作为胃癌诊断的初筛实验。