N—ras和C—myc反义寡核苷酸与p53和p16基因联合抑制人肝 …

目的：研究反义癌基因与抑癌基因联合抑制肝癌细胞生长的效果。方法：利用基因重组方法构建携带ｐ１６基因、ｐ５３基因的融合表达载体（ｐｃＤＮＡ１６￣５３）,利用基因合成仪体外合成Ｎ－ｒａｓ、Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸、并将Ｎ－ｒａｓ,Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸与ｐｃＤＮＡ１６￣５３融合表达载体转染到人肝癌细胞系ＳＭＭＣ７７２１细胞中,观察肝癌细胞生长情况及软琼脂集落形成能力。结果：联合治疗组肝癌细胞增殖速度最慢     

反义寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞增殖

目的 证实反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖的效应。方法 人工合成正义、反义及错配反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸,转入体外培养的ＶＳＭＣ中,分别于作用后１～５ｄ进行细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定。结果加入反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸的ＶＳＭＣ增殖受到抑制,崦正义和错配反义寡核苷酸对ＶＳＭＣ增殖没有明显影响。结论 反义ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ寡核苷酸可有效阻遏     

反义c-myc寡脱氧核苷酸对血管平滑肌细胞增殖、迁移和凋亡的影响

为研究硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃ寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对血管平滑肌细胞（ＳＭＣ）的增殖、迁移及凋亡的影响。应用脂质体分别介导硫代磷酸修饰的反义ｃｍｙｃＯＤＮ、正义ｃｍｙｃＯＤＮ和错配ｃｍｙｃＯＤＮ进入体外培养的大鼠主动脉ＳＭＣ内，观察其对ＳＭＣ细胞ｃｍｙｃ表达、增殖、迁移和凋亡的影响。结果：①反义ＯＤＮ降低ｃｍｙｃ蛋白的表达。②反义ｃｍｙｃＯＤＮ抑制ＳＭＣ增殖、迁移，并诱导ＳＭＣ凋亡。而正义ＯＤＮ及错配ＯＤＮ则无上述作用。结果提示：应用反义技术抑制ｃｍｙｃ表达在防治经皮腔内冠状动脉成形术（ＰＴＣＡ）术后再狭窄中具有潜在作用。     

脂质体技术促进c—myc反义寡核苷酸导入人体肝癌细？…

目的 观察脂质体技术促进ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸导入人体肝癌细胞的作用。方法 采用新一代脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔ＾ＡＭＮＥ（ＬＲ）包裹针对肝癌表达基因ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸（ＡＳＯＤＮ）,借助ＦＩＴＣ荧光标记ｃ－ｍｙｃ－ＡＳＯＤＮ,应用细胞培养方法及荧光分光光度计以及荧光显微镜。结果 ＬＲ促进ＡＳＯＮ进入靶细胞并增强其对肿瘤细胞基因的特异性封闭作用。结论 脂质体作为一种安全、简便、有效的基因转移载体广     

c-myc反义寡核苷酸对低氧内皮细胞条件培养液诱导的肺血管周细胞增殖的影响

应用细胞培养、核酸斑点杂交、~３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（~３Ｈ－ＴｄＲ）掺入、免疫细胞化学、图像分析等技术观察ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对低氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）诱导的大鼠肺血管周细胞ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达及~３Ｈ－ＴｄＲ掺入量的影响。结果表明,ＨＥＣＣＭ显著促进周细胞 ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、ＰＣＮＡ表达（Ｐ＜０．０１）及~３Ｈ－ＴｄＲ掺入量增加（Ｐ＜０．０１）,反义ＯＤＮｓ显著阻抑 ＨＥＣＣＭ诱导的周细胞ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、ＰＣＮＡ表达（Ｐ＜０．０１）及~３Ｈ－ＴｄＲ掺入量增加（Ｐ＜０．０５）,而同义ＯＤＮｓ无上述作用（Ｐ＞０．０５）。结果提示,ＨＥＣＣＭ可通过上调ｃ－ｍｙｃ基因表达促进肺血管周细胞增殖,反义ＯＤＮｓ通过下凋ｃ－ｍｙｃ基因表达,抑制ＨＥＣＣＭ诱导的肺血管周细胞增殖。     

反义c-myc、增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑肌细胞相关基因表达

目的研究有效的防治血管术后再狭窄的方法，以及应用反义ｃｍｙｃ、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法设计并合成ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ正义、反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸，经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后，分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ），应用逆转录ＰＣＲ半定量测定及计算机图像分析的方法，观测其对ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ基因表达的影响。结果设计合成的寡核苷酸在血清培养基中１～５天未被完全降解；寡核苷酸能顺利进入ＶＳＭＣｓ内；１０μｍｏｌ／Ｌ浓度的反义ｃｍｙｃ、ＰＣＮＡ作用于ＶＳＭＣｓ后１～５天，其相应的ｃｍｙｃ和ＰＣＮＡ基因表达减弱，计算机图像分析表明其表达产物与对照组相比差异有显著意义（Ｐ＜０．０５），而正义和错配反义寡核苷酸无此效应（Ｐ＞０．０５）。结论反义ｃｍｙｃ和ＰＣＮＡ寡核苷酸可通过抑制其相应基因表达来实现阻遏血管平滑肌细胞增殖     

反义myb寡核苷酸对内皮素诱导动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

合成反义和正义ｃ－ｍｙｂ１８－ｍｅｒ，分别导入培养的ＷＫＹ主动脉平滑细胞（ＳＭＣｓ），同时用内皮素诱导ＳＭＣｓ增殖。反义ｃ－ｍｙｂ寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对内皮素诱导ＳＭＣｓ的抗细胞增殖抑制作用随浓度（６０μｍｏｌ·Ｌ－１～１２０μｍｏｌ·Ｌ－１）的增加而增加。用１２０μｍｏｌ·Ｌ－１反义ＯＤＮＳ抗细胞增殖能力随时间延长而下降。免疫组化显示受抑制细胞ｍｙｂ水平较同期对照组或正义ＯＤＮｓ组低。以上为反义ＯＤＮｓ抑制外源性生长因子或细胞因子诱导靶基因的高表达和细胞增殖提供了新的线索，同时为探讨癌基因表达调控与动脉ＳＭＣｓ增殖的关系提供了一种新方法。     

反义寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞c-myc, PCNA基因的表达

目的：利用反义寡核苷酸阻遏血管平滑肌细胞基因表达,为移植血管再狭窄的基因治疗提供理论依据。方法：人工合成正义,反义及错配反应ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ基因片断,并转入体外培养的ＶＳＭＣ中,运用逆转录聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）测定细胞中相应基因表达的情况。结果：反义寡核苷酸能有效抑制ＶＳＭ中ｃ－ｍｙｃ,ＰＣ－ＮＡ基因的表达,而正义和错配反应寡核苷酸没有此效应。结论：反应寡核苷酸能阻遏ＶＳＭＣ中相应基因     

联合应用反义核酸对慢性粒细胞性白血病骨髓及外周血的净化的 …

目的：比较单独及联合应用ＢＣＲ－ＡＢＬ反义寡核苷酸（Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＡＳ ＯＤＮ）及Ｃ－ＭＹＢ ＡＳ ＯＤＮ对慢性粒细胞性细胞白血病（Ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ,ＣＭＬ）细胞及正常造血细胞的抑制作用。方法：用ＢＣＲ－ＡＢＬ ＡＳ ＯＤＮ、Ｃ－ＭＹＢ ＡＳ ＯＤＮ及错配ＯＤＮ,分别对１０例ＣＭＬ骨髓和外周血单个核细胞（Ｍｏｎ     

反义寡核苷酸抑制肝癌细胞血管内皮生长因子的表达

目的 研究血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｃｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ）反义寡核苷酸（ＯＤＮ）抑制人肝癌细胞系ＶＥＧＦ的表达,探讨肝癌基因治疗的新方法。方法 人肝癌细胞系７７２１能表达ＶＥＧＦ,采用人工合成反义、正义ＯＤＮ分别作用于７７２１细胞,免疫组化图像分析方法比较各处理组ＶＥＧＦ的表达情况,即可了解ＶＥＧＦ反义ＯＤＮ抑制肝癌的血管形成情况。结果 ＶＥＧＦ反     

反义c—myc,增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑细胞相关基因表达

目的 研究有效的防治血管术后狭窄的方法,以及应用反义ｃ－ｍｙｃ,增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法 设计并合成ｃ－ｍｙｃ,ＰＣＮＡ正义,反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸,经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后,分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）,应用逆转录ＰＣＲ半定量测定及计算机图像分析的方法,春对ｃ－ｍｙｃ、ＰＣＮＡ基因表达的影响。结果 设计     

Lipofectin介导DNA聚合酶α反义寡核苷酸抑制人胃癌细胞生长

目的 研究阳离子脂质体Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（Ｌｉｐ）介导的ＤＮＡ聚合酶α（ＤＮＡ－ｐｏｌα）反义寡核酸（ＡＳＯＤＮ）体外抑制人胃癌细胞的生长。方法 合成与人ｐｏｌα催化亚基ｍＲＮＡ翻译起始区１８个碱基互补的寡核苷酸（ＯＤＮ）,与Ｌｉｐ混合制备Ｌｉｐ＋ＯＤＮ复合物,作用于ＭＧＣ－８０３、ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞２４ｈ后,细胞换液,继续培养２４ｈ,用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法测细胞存活状态,流式细胞术（     

c—myc反义寡核苷酸对低氧内皮细胞条件培养液诱导的肺血管？…

应用细胞培养、核酸斑点杂交、Ｈ＾３－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入、免疫细胞化学、图像分析等技术观察ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对低氧内皮细胞条件培养液（ＨＥＣＣＭ）诱导的大鼠肺血管周细胞ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量的影响。结果表明,ＨＥＣＣＭ显著促进周细胞ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达、ＰＣＮＡ表达（Ｐ〈０．０１）及＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入量增加（     

c—Ha—ras和c—myc反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞生长增殖…

作观察了人工合成的反义ｃ－Ｈａ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ，ＡＳＯ－ｍ）对两株胃癌细胞中Ｈａ－ｒａｓ癌基因表达和细胞生长增殖的影响，观察至ＡＳＯ－ｒ能显抑制ＭＧｃ－８０３细胞Ｐ２１蛋白合成（作用１２ｈ抑制率达４８．１０％，Ｐ＜０．０１），同时对其ＤＮＡ合成和细胞增殖也有较显的抑制作用（抑制率分别为７６．７９％，５５．６１％，Ｐ＜０．０５）。ＡＳＯ－ｒ对ＳＧｃ－７９０１细...     

急性白血病Bcl-2反义寡核苷酸基因治疗的实验研究

目的选用２０ｎｔＢｃｌ－２反义硫代磷酸寡核苷酸（Ａｓ－Ｐｓ－ＯＤＮ，ＡＳＰＯ），并以其正义寡核苷酸（ＳＰＯ）为对照做如下问题探讨：（１）普通剂量（５～２０μｍｏｌ）ＡＳＰＯ对ＨＬ６０细胞、正常及缺铁性贫血患者骨髓细胞及急性白血病病人骨髓细胞或外周白血病细胞（幼稚细胞≥８５％）的作用；（２）大剂量（１６０μｍｏｌ）正义或反义寡核苷酸对ＨＬ６０细胞作用的特点，并通过ＡＳＰＯ引起ＨＬ６０细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达变化和ＳＰＯ对ＨＬ６０细胞毒性的变化，寻找可能的最佳效应剂量和最小毒性剂量；（３）ＡＳＰＯ联合化疗药物对ＨＬ６０细胞和原代急性白血病细胞的作用。方法台盼蓝拒染试验和克隆培养测定细胞的生长能力；免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测Ｐ２６Ｂｃｌ－２蛋白表达，ＲＴ－ＰＣＲ法检测Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ（Ｂｃｌ－２／β－ａｃｔｉｎ）相对水平；光、电镜下观察凋亡细胞形态，吖啶橙染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率，ＤＮＡ提取及电泳观察凋亡细胞ＤＮＡ降解片段的形成；ＭＴＴ法检测ＰＳ－ＯＤＮ及化疗药物的细胞毒作用。结果（１）普通剂量的ＡＳＰＯ即能降低ＨＬ６０细胞及白血病细胞Ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ的表达，并抑制ＨＬ６０细胞及１８／２０例白血病细     

阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸对大鼠肝脏星 …

为探讨阳离子脂质体介导的ＴＧＦβ１反义寡核苷酸（ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，ＡＳＯＮ）对大鼠肝脏星状细胞激活及其胶原生成的作用，作者合成了特异性的针对ＴＧＦβｍＲＮＡ转译超始区的硫代磷酸ＡＳＯＮ及其对照（正义、错义寡核苷酸），并和阳离子脂质体形成复合物。通过测定细胞内＾３２Ｐ标记的ＡＳＯＮ的放射量来观察ＡＳＯＮ的细胞摄入率，用细胞免疫化学分析α－ＳＭＡ的表达来观察星状细胞     

G蛋白反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的影响

使用硫代修饰的Ｇ蛋白（Ｇαｑ／１１亚基和ｒａｓ蛋白）反义寡聚脱氧核苷酸（Ｇαｑ／１１亚基和ｒａｓ蛋白ＡＳ－ＯＤＮｓ）作用于含２０％胎牛血清ＤＭＥ培养液培养基的血管平滑肌细胞（ｖＳＭＣ）。通过细胞计数和免疫细胞化学方法，观察了Ｇαｑ／１１亚基和ｒａｓ蛋白ＡＳ－ＯＤＮｓ对ｖＳＭＣ增殖和ＰＣＮＡ表达的影响。结果表明，Ｇαｑ／１１亚基和ｒａｓ蛋白ＡＳ－ＯＤＮｓ联合应用能明显抑制ｖＳＭＣ增殖；免疫细胞化学分析亦显示ｖＳＭＣ中ＰＣＮＡ蛋白表达显著减少。而相同浓度的正义ＯＤＮｓ只有微小抑制作用。结果提示，Ｇαｑ／１１亚基和ｒａｓ蛋白ＡＳ－ＯＤＮｓ有可能应用于防治临床血管活性物质依赖性细胞增生性疾病的研究。     

反义寡核苷酸体外抑制丙型肝炎病毒的研究

研究反义寡核苷酸体外抑制丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的方法。方法以重组丙型肝炎病毒（ｐＣＤ－ＨＣＶ）转染的Ｈ９细胞为对象，通过半定量逆转录聚合酶链反应和ｄｏｔＥＬＩＳＡ检测ＨＣＶｍＲＮＡ和抗原表达的变化，观察与ＨＣＶ结构区（包括ＡＵＧ）互补和同源以及随机的硫代磷酸化寡核苷酸（ＰＳ－ＡＳＯＮ、ＰＳ－ＯＤＮ、ｒＰＳ－ＯＤＮ）对ＨＣＶ的抑制作用。结果ＰＳ－ＡＳＯＮ和ＰＳ－ＯＤＮ可有效地进入靶细胞并在体外与靶基因杂交结合，终浓度为１０μｍｏｌ／Ｌ的ＰＳ－ＯＤＮ、ｒＰＳ－ＯＤＮ对ＨＣＶ均无抑制作用，但ＰＳ－ＡＳＯＮ可明显降低ＨＣＶｍＲＮＡ和抗原表达水平，具有药物浓度和时间依赖效应，脂质体修饰可增强ＰＳ－ＡＳＯＮ的反义抑制作用，磷酸钙修饰却无此作用。结论与ＨＣＶ互补的ＰＳ－ＡＳＯＮ是ＨＣＶ的反义寡核苷酸，在翻译水平上具有反义抑制作用。     

ODC反义RNA对人肺鳞癌细胞c—myc及c—Ha—ras基因表达的影响

目的：探讨鸟氨酸脱羧酶（ＯＤＣ）反义ＲＮＡ逆转人肺鳞癌细胞ＬＴＥＰ７８（Ｌ７８）恶性表型的分子机理。方法：核酸杂交，免疫细胞化学染色等。结果：在ＯＤＣ反义基因稳定整合、ＯＤＣ反义ＲＮＡ高效表达的转染细胞株中，ｃｍｙｃ及ｃＨａｒａｓｍＲＮＡ的表达比Ｌ７８亲本细胞显著下降；ｒａｓＰ２１蛋白的表达也受到明显抑制。结论：ＯＤＣ反义ＲＮＡ引起细胞内多胺耗竭，对ｃｍｙｃ及ｃＨａｒａｓ基因表达有明显的下调作用，这可能是其逆转人肺鳞癌细胞恶性表型的重要机制之一。     

Cmyc反义核酸对内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制 …

应用不同浓度的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸处理体外培养的经１０＾－８ｍｏｌ／Ｌ内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及ＮＤＡ合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞Ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ的表达水平。结果表明,１０、２０、５０μｇ／ｍｌ反义寡核苷酸对细胞计数和＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入值与对照组相比抑制率分别为１１．９％和１２．３％