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目的:研究反义癌基因与抑癌基因联合抑制肝癌细胞生长的效果。方法:利用基因重组方法构建携带p16基因、p53基因的融合表达载体(pcDNA16 ̄53),利用基因合成仪体外合成N-ras、C-myc反义寡核苷酸、并将N-ras,C-myc反义寡核苷酸与pcDNA16 ̄53融合表达载体转染到人肝癌细胞系SMMC7721细胞中,观察肝癌细胞生长情况及软琼脂集落形成能力。结果:联合治疗组肝癌细胞增殖速度最慢 相似文献
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为研究硫代磷酸修饰的反义cmyc寡脱氧核苷酸(ODN)对血管平滑肌细胞(SMC)的增殖、迁移及凋亡的影响。应用脂质体分别介导硫代磷酸修饰的反义cmycODN、正义cmycODN和错配cmycODN进入体外培养的大鼠主动脉SMC内,观察其对SMC细胞cmyc表达、增殖、迁移和凋亡的影响。结果:①反义ODN降低cmyc蛋白的表达。②反义cmycODN抑制SMC增殖、迁移,并诱导SMC凋亡。而正义ODN及错配ODN则无上述作用。结果提示:应用反义技术抑制cmyc表达在防治经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)术后再狭窄中具有潜在作用。 相似文献
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目的 观察脂质体技术促进c-myc反义寡核苷酸导入人体肝癌细胞的作用。方法 采用新一代脂质体Lipofect^AMNE(LR)包裹针对肝癌表达基因c-myc反义寡核苷酸(ASODN),借助FITC荧光标记c-myc-ASODN,应用细胞培养方法及荧光分光光度计以及荧光显微镜。结果 LR促进ASON进入靶细胞并增强其对肿瘤细胞基因的特异性封闭作用。结论 脂质体作为一种安全、简便、有效的基因转移载体广 相似文献
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c-myc反义寡核苷酸对低氧内皮细胞条件培养液诱导的肺血管周细胞增殖的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
应用细胞培养、核酸斑点杂交、~3H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)掺入、免疫细胞化学、图像分析等技术观察c-myc反义寡核苷酸(ODNs)对低氧内皮细胞条件培养液(HECCM)诱导的大鼠肺血管周细胞c-myc mRNA表达、增殖细胞核抗原(PCNA)表达及~3H-TdR掺入量的影响。结果表明,HECCM显著促进周细胞 c-myc mRNA表达、PCNA表达(P<0.01)及~3H-TdR掺入量增加(P<0.01),反义ODNs显著阻抑 HECCM诱导的周细胞c-myc mRNA表达、PCNA表达(P<0.01)及~3H-TdR掺入量增加(P<0.05),而同义ODNs无上述作用(P>0.05)。结果提示,HECCM可通过上调c-myc基因表达促进肺血管周细胞增殖,反义ODNs通过下凋c-myc基因表达,抑制HECCM诱导的肺血管周细胞增殖。 相似文献
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反义c-myc、增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑肌细胞相关基因表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究有效的防治血管术后再狭窄的方法,以及应用反义cmyc、增殖细胞核抗原(PCNA)基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法设计并合成cmyc、PCNA正义、反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸,经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后,分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞(VSMCs),应用逆转录PCR半定量测定及计算机图像分析的方法,观测其对cmyc、PCNA基因表达的影响。结果设计合成的寡核苷酸在血清培养基中1~5天未被完全降解;寡核苷酸能顺利进入VSMCs内;10μmol/L浓度的反义cmyc、PCNA作用于VSMCs后1~5天,其相应的cmyc和PCNA基因表达减弱,计算机图像分析表明其表达产物与对照组相比差异有显著意义(P<0.05),而正义和错配反义寡核苷酸无此效应(P>0.05)。结论反义cmyc和PCNA寡核苷酸可通过抑制其相应基因表达来实现阻遏血管平滑肌细胞增殖 相似文献
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合成反义和正义c-myb18-mer,分别导入培养的WKY主动脉平滑细胞(SMCs),同时用内皮素诱导SMCs增殖。反义c-myb寡核苷酸(ODNs)对内皮素诱导SMCs的抗细胞增殖抑制作用随浓度(60μmol·L-1~120μmol·L-1)的增加而增加。用120μmol·L-1反义ODNS抗细胞增殖能力随时间延长而下降。免疫组化显示受抑制细胞myb水平较同期对照组或正义ODNs组低。以上为反义ODNs抑制外源性生长因子或细胞因子诱导靶基因的高表达和细胞增殖提供了新的线索,同时为探讨癌基因表达调控与动脉SMCs增殖的关系提供了一种新方法。 相似文献
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目的:比较单独及联合应用BCR-ABL反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,AS ODN)及C-MYB AS ODN对慢性粒细胞性细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)细胞及正常造血细胞的抑制作用。方法:用BCR-ABL AS ODN、C-MYB AS ODN及错配ODN,分别对10例CML骨髓和外周血单个核细胞(Mon 相似文献
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反义c—myc,增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑细胞相关基因表达 总被引:6,自引:1,他引:5
目的 研究有效的防治血管术后狭窄的方法,以及应用反义c-myc,增殖细胞核抗原(PCNA)基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法 设计并合成c-myc,PCNA正义,反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸,经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后,分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞(VSMCs),应用逆转录PCR半定量测定及计算机图像分析的方法,春对c-myc、PCNA基因表达的影响。结果 设计 相似文献
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应用细胞培养、核酸斑点杂交、H^3-胸腺嘧啶核苷(^3H-TdR)掺入、免疫细胞化学、图像分析等技术观察c-myc反义寡核苷酸(ODNs)对低氧内皮细胞条件培养液(HECCM)诱导的大鼠肺血管周细胞c-myc mRNA表达、增殖细胞核抗原(PCNA)表达及^3H-TdR掺入量的影响。结果表明,HECCM显著促进周细胞c-myc mRNA表达、PCNA表达(P〈0.01)及^3H-TdR掺入量增加( 相似文献
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c—Ha—ras和c—myc反义寡聚脱氧核苷酸对人胃癌细胞生长增殖… 总被引:2,自引:1,他引:1
作观察了人工合成的反义c-Ha-ras和c-myc寡聚脱氧核苷酸(ASO-r,ASO-m)对两株胃癌细胞中Ha-ras癌基因表达和细胞生长增殖的影响,观察至ASO-r能显抑制MGc-803细胞P21蛋白合成(作用12h抑制率达48.10%,P<0.01),同时对其DNA合成和细胞增殖也有较显的抑制作用(抑制率分别为76.79%,55.61%,P<0.05)。ASO-r对SGc-7901细... 相似文献
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林艳娟 《福建医科大学学报》1998,(3)
目的选用20ntBcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸(As-Ps-ODN,ASPO),并以其正义寡核苷酸(SPO)为对照做如下问题探讨:(1)普通剂量(5~20μmol)ASPO对HL60细胞、正常及缺铁性贫血患者骨髓细胞及急性白血病病人骨髓细胞或外周白血病细胞(幼稚细胞≥85%)的作用;(2)大剂量(160μmol)正义或反义寡核苷酸对HL60细胞作用的特点,并通过ASPO引起HL60细胞Bcl-2蛋白表达变化和SPO对HL60细胞毒性的变化,寻找可能的最佳效应剂量和最小毒性剂量;(3)ASPO联合化疗药物对HL60细胞和原代急性白血病细胞的作用。方法台盼蓝拒染试验和克隆培养测定细胞的生长能力;免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测P26Bcl-2蛋白表达,RT-PCR法检测Bcl-2mRNA(Bcl-2/β-actin)相对水平;光、电镜下观察凋亡细胞形态,吖啶橙染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率,DNA提取及电泳观察凋亡细胞DNA降解片段的形成;MTT法检测PS-ODN及化疗药物的细胞毒作用。结果(1)普通剂量的ASPO即能降低HL60细胞及白血病细胞Bcl-2mRNA的表达,并抑制HL60细胞及18/20例白血病细 相似文献
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为探讨阳离子脂质体介导的TGFβ1反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASON)对大鼠肝脏星状细胞激活及其胶原生成的作用,作者合成了特异性的针对TGFβmRNA转译超始区的硫代磷酸ASON及其对照(正义、错义寡核苷酸),并和阳离子脂质体形成复合物。通过测定细胞内^32P标记的ASON的放射量来观察ASON的细胞摄入率,用细胞免疫化学分析α-SMA的表达来观察星状细胞 相似文献
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使用硫代修饰的G蛋白(Gαq/11亚基和ras蛋白)反义寡聚脱氧核苷酸(Gαq/11亚基和ras蛋白AS-ODNs)作用于含20%胎牛血清DME培养液培养基的血管平滑肌细胞(vSMC)。通过细胞计数和免疫细胞化学方法,观察了Gαq/11亚基和ras蛋白AS-ODNs对vSMC增殖和PCNA表达的影响。结果表明,Gαq/11亚基和ras蛋白AS-ODNs联合应用能明显抑制vSMC增殖;免疫细胞化学分析亦显示vSMC中PCNA蛋白表达显著减少。而相同浓度的正义ODNs只有微小抑制作用。结果提示,Gαq/11亚基和ras蛋白AS-ODNs有可能应用于防治临床血管活性物质依赖性细胞增生性疾病的研究。 相似文献
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反义寡核苷酸体外抑制丙型肝炎病毒的研究 总被引:5,自引:0,他引:5
研究反义寡核苷酸体外抑制丙型肝炎病毒(HCV)的方法。方法以重组丙型肝炎病毒(pCD-HCV)转染的H9细胞为对象,通过半定量逆转录聚合酶链反应和dotELISA检测HCVmRNA和抗原表达的变化,观察与HCV结构区(包括AUG)互补和同源以及随机的硫代磷酸化寡核苷酸(PS-ASON、PS-ODN、rPS-ODN)对HCV的抑制作用。结果PS-ASON和PS-ODN可有效地进入靶细胞并在体外与靶基因杂交结合,终浓度为10μmol/L的PS-ODN、rPS-ODN对HCV均无抑制作用,但PS-ASON可明显降低HCVmRNA和抗原表达水平,具有药物浓度和时间依赖效应,脂质体修饰可增强PS-ASON的反义抑制作用,磷酸钙修饰却无此作用。结论与HCV互补的PS-ASON是HCV的反义寡核苷酸,在翻译水平上具有反义抑制作用。 相似文献
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ODC反义RNA对人肺鳞癌细胞c—myc及c—Ha—ras基因表达的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
关钧 《中日友好医院学报》1997,11(1):3-5
目的:探讨鸟氨酸脱羧酶(ODC)反义RNA逆转人肺鳞癌细胞LTEP78(L78)恶性表型的分子机理。方法:核酸杂交,免疫细胞化学染色等。结果:在ODC反义基因稳定整合、ODC反义RNA高效表达的转染细胞株中,cmyc及cHarasmRNA的表达比L78亲本细胞显著下降;rasP21蛋白的表达也受到明显抑制。结论:ODC反义RNA引起细胞内多胺耗竭,对cmyc及cHaras基因表达有明显的下调作用,这可能是其逆转人肺鳞癌细胞恶性表型的重要机制之一。 相似文献
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应用不同浓度的C-myc反义寡核苷酸处理体外培养的经10^-8mol/L内皮素-1(ET-1)诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和^3H-TdR掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及NDA合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞C-fos和c-myc mRNA的表达水平。结果表明,10、20、50μg/ml反义寡核苷酸对细胞计数和^3H-TdR掺入值与对照组相比抑制率分别为11.9%和12.3% 相似文献