洛沙坦对高氧致新生大鼠慢性肺疾病的保护作用

目的 研究血管紧张素II1型受体拮抗剂洛沙坦对高氧致新生大鼠慢性肺疾病(CLD)肺组织的影响,探讨肺组织局部肾素血管紧张素系统(RAS)在CLD发病中的可能机制.方法 将Wistar新生大鼠生后24h内随机分为空气组(Ⅰ)、高氧组(Ⅱ)、高氧+注射用水组(Ⅲ)和高氧+洛沙坦组(Ⅳ),Ⅱ～Ⅳ组氧浓度为85%～90%,Ⅲ、Ⅳ组在生后6d每天用注射用水和洛沙坦(5mg/kg)灌胃至实验结束,在实验的1、3、7、14和21 d处死,HE染色和放射性肺泡计数(RAC)观察肺组织病理改变,免疫组织化学检测α-SMA蛋白表达;生化检测羟脯氨酸(HYP)的含量.结果 Ⅱ和Ⅲ组肺组织肺泡间隔显著增厚,肺泡数目减少,终末气腔扩张,RAC较Ⅰ组显著下降(P＜0.01).Ⅳ组肺泡间隔变薄,但肺泡腔没有明显缩小,RAC仍明显低于Ⅰ组.高氧暴露后α-SMA在肺泡间隔和肺泡表面表达显著增强,呈条索状分布;Ⅱ和Ⅲ组7 d后较Ⅰ组α-SMA表达显著增强(P＜0.01);Ⅳ组α-SMA表达较Ⅱ组明显减弱,14d较Ⅱ组明显下降(P＜0.05),21 d时则显著下降(P＜0.01),但仍高于Ⅰ组(P＜0.01).高氧后14d和21 d新生大鼠肺组织HYP含量显著增加(P＜0.01),洛沙坦干预后能明显减轻肺纤维化的程度.结论 肺局部RAS系统参与高氧CLD的发生,洛沙坦只能抑制CLD新生大鼠肺纤维化的进展,但并不能逆转高氧诱导的新生大鼠肺发育阻滞.     

慢病毒介导TGF-β1 siRNA对高体积分数氧致新生小鼠肺损伤的影响

目的：探讨以慢病毒介导的小分子干扰RNA技术（siRNA）沉默转化生长因子β1（TGF-β1）基因对高体积分数氧致新生小鼠肺损伤的影响.方法：将100只新生昆明小鼠随机分为高氧组、干扰组、阴性干扰组、空气组4组,每组动物25只.分别构建含TGF-β1短发卡RNA（shRNA）及阴性对照序列的PRNAT-u6.2载体,慢病毒包装.于小鼠出生后3d时将两类慢病毒载体以鼻腔吸入法分别导入干扰组和阴性干扰组小鼠肺内.出生后4～14d时将高氧组、干扰组、阴性干扰组小鼠置于含600mL/LO2的氧箱内饲养.空气组仅置空气下饲养.出生后4,7,14,21,28d时分别随机杀取各组5只动物并取左上肺制作石蜡切片,进行组织形态学变化观察,测定放射状肺泡计数（RAC）和肺泡平均截距（MLI）.右肺组织以RT-PCR,Western Blot法分别检测TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平.结果：经测序和双酶切鉴定,表达TGF-β1 shRNA的慢病毒载体构建成功;干扰组肺组织TGF-β1 mRNA水平在小鼠出生后4d即明显低于其他3组（P〈0.05）;出生后7,14,21,28d时干扰组TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平均低于高氧组和阴性干扰组,但高于空气组（P均〈0.05）.出生后7,14,21,28d干扰组MLI低于高氧组和阴性干扰组而高于空气组（P均〈0.05）.RAC高于高氧组和阴性干扰组而低于空气组,差异均具有统计学意义（P〈0.05）.高氧组与阴性干扰组在各时间点上述各项指标的差异无统计学意义.结论：慢病毒载体介导的TGF-β1小分子干扰RNA对高体积分数氧吸入所致新生小鼠肺损伤具有保护作用.     

腹腔注射氢气与富氢生理盐水对新生大鼠高氧肺损伤的作用研究

目的 对比分析腹腔注射氢气(H2)和富氢生理盐水对高氧致新生大鼠肺损伤的作用.方法 将SD新生大鼠分为6组(每组10只),A组(空气组)、B组(空气十富氢生理盐水组)、C组(空气+ H2组)、D组(高氧组)、E组(高氧十富氢生理盐水组)、F组(高氧+ H2组).A、B、C组置于空气中,D、E、F组置于95％ O2中,B、E组每日腹腔注射富氢生理盐水2次(10 mL/kg),C、F组每日腹腔注射H2 2次(10mL/kg),A、D组每日腹腔注射普通生理盐水2次(10mL/kg).于实验第15天收集肺组织和血清标本,苏木精-伊红(HE)染色后光镜下观察肺组织病理改变和辐射状肺泡计数(RAC),碱水解法检测肺组织羟脯氨酸(HYP)、血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,免疫组织化学SP法检测肌成纤维细胞袁型标志α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.结果 与A组相比,D组RAC、血清SOD活力明显降低,HYP、MDA水平及α-SMA表达均明显增加,H2干预可显著缓解高氧所致上述变化,腹腔注射H2较腹腔注射富氢生理盐水效果更佳.结论 H2可一定程度减轻高氧导致的肺氧化损伤、发育受阻及纤维化指标,腹腔注射H2较腹腔注射高氢生理盐水效果更佳.     

姜黄素对高氧致新生大鼠肺纤维化的保护作用及机制探讨

目的:支气管肺发育不良(BPD)从肺发育停滞和肺间质纤维化为主要病理改变,姜黄素(Cu)具有抗氧化、抗纤维化等生物活性.观察Cu对高氧致新生大鼠肺纤维化胶原沉积、转化生长因子β1(TGF-β1)表达的影响.方法:出生12 h内的足月新生大鼠160只,随机分成4组(每组40只):空气组、空气+Cu组、高氧组和高氧+Cu组.高氧组、高氧+Cu组置于氧箱中,氧浓度维持在90%左右,空气组、空气+Cu组吸人空气.空气+Cu组、高氧+Cu组新生鼠每日腹腔注射溶于亚麻油的Cu[200mg/(kg×d)],空气组、高氧组每日腹腔注射等量亚麻油.各组分别于3、7、14、21 d随机处死5只,取肺组织进行苏木精-伊红和Masson染色、应用免疫组化技术测定TGF-β1表达水平. 结果:高氧组支气管黏膜下、血管壁及周围、肺泡壁、肺间质均有胶原大量沉积;高氧+Cu组胶原沉积明显轻于高氧组;空气组、空气+Cu组胶原沉积不明显.免疫组化发现高氧组TGF-β1表达最强,高氧+Cu组较弱,空气组、空气+Gu组微弱表达. 结论:Cu可抑制高氧致新生大鼠的肺纤维化,其作用机制可能是通过抑制TGF-β1的表达来实现.     

转化生长因子-β1、Clara细胞分泌蛋白16、Ⅱ型肺泡细胞表面抗原6与支气管肺发育不良的相关性研究

目的探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、克拉拉细胞分泌蛋白16(clara cell secretory protein,CC16)、Ⅱ型肺泡细胞表面抗原6 (krebs yon denlungen-6,KL-6)在支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)大鼠肺组织中的表达,以及这些蛋白的表达与肺细胞凋亡的关系。方法按随机数字表法随机将SD新生鼠随机分为对照组、模型组,模型组持续暴露在80%~85%氧中构建BPD模型,对照组始终暴露在空气中。每组在7 d,14 d,21 d时(简称为7 d模型组、14 d模型组、21 d模型组)随机选出8只新生鼠处死,留取5 m L血清。HE染色观察各组肺组织病理学改变,并分析辐射状肺泡计数(radial alveolar count,ROC),肺泡平均截距(mean linear intercept,MLI)。TUNEL染色检测各组肺组织中的细胞凋亡。ELISA检测各组新生鼠的血清中TGF-β1、CC16、KL-6的水平。Western blot检测各组肺组织中TGF-β1、CC16、KL-6的表达水平。同时分析肺组织中TGF-β1、CC16、KL-6的表达与肺组织细胞凋亡率的关系。结果与正常组相比,模型组肺组织随暴露氧时间的延长BPD损伤加剧,RAC、血清中CC16的水平以及肺组织中CC16的表达明显减少,MLI、细胞凋亡率、血清中TGF-β1、KL-6的水平,肺组织中TGF-β1、KL-6的表达明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,模型组新生鼠肺组织中TGF-β1、KL-6的表达与肺组织的细胞凋亡率呈正相关(r=0.977、0.970,均P=0.000),CC16的表达与细胞凋亡率呈现负相关(r=-0.982,P=0.000)。结论肺组织中TGF-β1、CC16、KL-6的表达与BPD肺组织的细胞凋亡密切相关。     

转化生长因子-β1在中浓度氧致新生鼠支气管肺发育不良模型中的作用

目的：探讨中浓度氧（60%O2）暴露对新生小鼠发育的影响及损伤,并观察转化生长因子-β1（TGF-β1）在新生鼠慢性肺部疾病支气管肺发育不良（BPD）肺损伤中的作用。方法：30只新生雌性KM小鼠,随机分为实验组和对照组,每组15只。对照组置于空气中（FiO20.21）;实验组置于封闭氧箱中（FiO20.6）,制备中浓度氧致新生雌性小鼠BPD模型,记录吸氧后2 d、7 d、14 d、21 d、28 d小鼠体重,应用HE染色观察不同时间点HE染色肺组织病理改变,免疫组化技术观察TGF-β1蛋白表达水平。结果：实验组小鼠体重吸氧7 d后明显降低,HE染色下正常肺泡结构消失、肺泡融合、肺泡间隔增厚。高氧暴露72 h后,TGF-β1的表达升高,随着吸氧时间的增长TGF-β1的表达逐渐升高。结论：持续较高浓度吸氧可致新生雌性小鼠生长障碍和肺泡化阻滞,出现类似人类支气管肺发育不良的肺部改变。TGF-β1在肺纤维化的发生和持续过程中均发挥重要作用。     

γ-干扰素对新生大鼠高氧肺纤维化的影响

目的研究γ-干扰素(IFN-γ)对新生大鼠高氧肺损伤的影响,以观察转化生长因子transforming growth factor-β(TGF-β)在新生大鼠高氧肺纤维化中的作用.方法新生大鼠随机分为:Ⅰ组-高氧对照组,Ⅱ组-高氧 IFN-γ组,Ⅲ组-空气对照组.检测暴露7d、14d、21d及28d时各组的肺组织病理学变化,肺组织TGF-β免疫组织化学染色.结果 7d时高氧对照组表现为明显的急性炎症,肺泡间隔轻度增宽,TGF-β表达强阳性;28d时出现明显的纤维化改变;高氧 IFN-γ组与空气对照组的肺组织病理改变类似,TGF-β表达弱阳性,无明显纤维增生反应.结论 IFN-γ减轻高氧诱导的纤维增生及肺泡发育与结构异常,TGF-β在高氧诱导的肺纤维化损伤过程中可能起了重要作用.     

维生素D对高氧致新生鼠支气管肺发育不良的肺保护作用

目的探讨维生素D对支气管肺发育不良的保护作用及其作用机制。方法应用高氧诱导的支气管肺发育不良新生小鼠 模型,将36只幼鼠出生后立即给予实验处理,依据不同处理随机分为4组：空气+维生素D组,空气+生理盐水组,高氧+维生素D 组,高氧+生理盐水组。将各组实验鼠称重后处死,同时抽取心室内血液,采用ELISA方法测定血清维生素D水平。分离肺组织 病理切片制作和组织细胞形态学检查取不同处理组小鼠的肺组织,光镜下观察并分析肺终末呼吸单位的组织形态;用图像分析 软件对辐射状肺泡计数、肺泡次级间隔体积密度,比较不同处理组的肺终末呼吸单位损伤参数;取不同处理组实验小鼠的肺组 织,提取总蛋白,采用Western blot法检测血管内皮生长因子（VEGF）和VEGF-R2水平。结果空气+生理盐水组和空气+维生素 D组的体质量增长速率大于高氧+生理盐水组;空气+生理盐水组和空气+维生素D组的肺组织重量大于高氧+生理盐水组（P< 0.05）。辐射状肺泡计数,高氧+生理盐水组的RAC降低（P<0.001）,而高氧+维生素D（1250 倍）组的辐射状肺泡计数升高（P< 0.001）,且当稀释倍数降低,高氧+维生素D（125倍）组的辐射状肺泡计数比高氧+维生素D（1250倍）组升高（P>0.01）。与高氧+ 生理盐水组相比,高氧+维生素D（1250倍）组的次级突起计数显著升高（P<0.001）,且当稀释倍数降低,高氧+维生素D（125倍） 组的次级突起比高氧+维生素D（1250 倍）组升高（P>0.01）。高氧+生理盐水组的VEGFR2 表达量低于空气+生理盐水组（P< 0.05）,空气+维生素D组的VEGFR2表达量低于空气+生理盐水组（P<0.01）;高氧+维生素D（1250倍）组的VEGFR2表达量高于 高氧+生理盐水组（P<0.001）和高氧+维生素D（125倍）组（P<0.001）,高氧+维生素D（125倍）组的表达量也高于高氧+生理盐水 组（P<0.05）。但是,高氧+维生素D（1250倍）组的VEGFR2表达量高于高氧+生理盐水组与HE染色、辐射状肺泡计数以及次级 突起计数的趋势相反。结论新生小鼠在支气管肺发育不良状态下增加维生素D可增加肺组织重量,为肺成熟提供物质基础, 高浓度维生素D更有助于对肺的保护作用,有助于肺血管的生长。     

CXCL4与高氧诱导新生小鼠性别差异性肺损伤的相关研究

目的：探讨肺组织CXC趋化因子配体4（chemokine C?X?C motif ligand 4,CXCL4）与高氧诱导新生小鼠性别差异性肺损伤的关系及相关机制。方法：32只C57BL/6J新生小鼠（雄性、雌性各16只）随机分为4组：高氧雄性组、高氧雌性组、空气雄性组、空气雌性组（每组8只）。高氧组小鼠置于95％氧浓度下暴露7 d,空气组于室内环境（FiO2 = 21％）中饲养。串联质谱标签（tandem mass tags,TMT）定量蛋白组学技术检测4组小鼠肺组织中蛋白质的表达变化,筛选差异表达的蛋白质;ELISA法检测肺组织匀浆CXCL4含量;HE染色法观察小鼠肺组织病理改变;冰冻切片免疫荧光染色检测肺组织“M4”型巨噬细胞（MMP7+ S100A8+）分布情况。结果：高氧暴露组肺组织肺泡化程度降低,辐射状肺泡计数（radial alveolar count,RAC）明显减小（P < 0.001）;与高氧雌性组相比,高氧雄性组RAC值下降（P < 0.01）。TMT筛选出的CXCL4在高氧雄性组差异性表达上调;肺组织匀浆验证了质谱分析结果。高氧雄性小鼠肺组织MMP7+ S100A8+细胞增多。结论：高氧诱导新生小鼠肺损伤程度存在性别差异,雄性损伤程度高于雌性,可能与CXCL4诱导肺“M4”型巨噬细胞形成存在一定的相关性。     

西地那非对高氧所致肺损伤模型新生鼠的保护作用

目的:观察西地那非对高浓度氧暴露后新生大鼠肺组织形态学改变的影响,并探讨其机制。方法:80只足月新生SD大鼠随机分为空气加生理盐水对照(A)组、空气加西地那非(B)组、高氧加生理盐水对照(C)组和高氧加西地那非治疗(D)组4组。C、D组输入高体积分数氧(FiO20.85),B、D组每天予西地那非100 mg.kg-1背部皮下注射。在实验第14天观察肺组织病理改变、放射状肺泡计数(RAC),并且用免疫组化法测定肺组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白水平。结果:D组肺组织病理改变减轻,RAC和肺微血管数目高于C组(7.340±0.620vs5.013±0.738,P<0.001;3.855±0.717vs2.375±0.705,P<0.001),且B、D两组肺组织eNOS表达明显增加(均P<0.001)。结论:西地那非对高氧所致肺损伤具有一定的保护作用,其机制可能与西地那非降低肺内血管压力及促进肺微血管生成并增加eNOS的表达有关。     

高氧致新生鼠肺结构及VEGF的变化及相关分析

目的探讨新生大鼠高氧肺损伤后肺组织结构,血管密度及VEGF蛋白的表达变化及相关性。方法新生Sprague-Dawley大鼠72只随机分为高氧实验组和空气对照组,高氧组吸入95%高氧建立高氧肺损伤模型。分别采用HE染色和免疫组化法观察新生大鼠3d、7d、14d肺组织形态改变并作肺泡辐射状记数(Radial alveolar countsRAC),检测Ⅷ因子及VEGF蛋白表达。结果对照组大鼠生后随着肺发育,肺泡化逐渐完善,RAC计数、VEGF蛋白及Ⅷ因子表达逐渐增加。高氧组随着吸氧时间延长RAC计数、肺组织VEGF蛋白及Ⅷ因子表达均出现降低,并出现肺泡化阻滞,VEGF与Ⅷ因子始终具有相关性。结论 VEGF促进新生大鼠肺发育,新生大鼠高氧可抑制VEGF及Ⅷ因子在鼠肺内的表达,致肺泡化阻滞,出现类似早产儿支气管肺发育不良的肺组织形态学特征,VEGF在新生鼠肺发育和高氧肺损伤机制中起重要作用。     

骨髓间充质干细胞外泌体在高氧诱导的新生大鼠支气管肺发育不良模型中的修复作用

目的 明确骨髓间充质干细胞外泌体(BMSCs-Exo)对高氧诱导的大鼠支气管肺发育不良(BPD)模型的修复作用。方法 将新生4 d的Sprague Dawley(SD)大鼠吸入85%高氧建立高氧肺损伤模型。分为空气对照组、高氧组、高氧+PBS组和高氧+Exo组4组。使用BMSCs-Exo腹腔注射1周后处死SD大鼠，取肺组织进行石蜡包埋，分别进行HE染色，辐射状肺泡计数(radial alveolar counts, RAC),Masson染色、免疫组化染色和TUNEL染色。ELISA和Real time-PCR(qPCR)检测血清和肺组织蛋白白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、组织金属蛋白酶-9(MMP-9)及血管内皮生长因子-A(VEGF-A)的表达。结果 动物模型中，HE染色后对各组肺泡进行统计学分析显示，高氧+Exo组的肺泡数量显著高于高氧组及高氧+PBS组(P<0.001)。Masson染色后对蓝色胶原纤维所占面积百分比进行定量分析显示，高氧+Exo组胶原纤维所占面积百分比显著低于高氧组和高氧+PBS组(P<0.001)。免疫组化染色示高...     

转化生长因子-β_1在新生大鼠高浓度氧致肺损伤中的作用研究

目的 观察应用外源性抗转化生长因子-β1(TGF-β1)抗体作用下TGF -β1在新生鼠高浓度氧(高氧,>95%O2)致肺损伤的表达.方法 将足月SD新生大鼠随机分为3组:空气对照组(Ⅰ组),高氧(>95%O2)组(Ⅱ组),高氧(>95%O2)+抗TGF-β1抗体0.4mg/kg组(Ⅲ组).每组20只,观察及检测高氧暴露3、7、14和28d时各组动物肺组织病理改变、TGF-β1免疫组织化学染色.结果 Ⅱ组3和7d时表现为明显的急性炎症改变,肺组织水肿、渗出、出血、肺泡间隔轻度增厚,14d时急性炎症减轻,而肺组织中TGF-β1表达呈强阳性;28d时出现明显的胶原沉积,形成纤维化;Ⅲ组3和7d时仍有轻度炎症反应,14和28d无明显成纤维细胞增生及胶原生成,未形成肺纤维化,Ⅲ组各时相点TGF-β1的表达明显减弱,与Ⅰ组比较差异无统计学意义.结论 新生鼠持续吸入高氧后可导致急、慢性肺损伤.高氧暴露可刺激肺部产生过量的TGF-β1,提示TGF-β1在肺纤维化过程中起重要作用;高氧暴露时给予外源性抗TGF-β1抗体对新生鼠高氧暴露有明显保护作用,可减轻高氧急性肺损伤,能有效阻断高氧肺纤维化损伤的发生、发展,从而减轻肺纤维化损伤.     

还原型谷胱甘肽对新生鼠高氧肺纤维化早期干预的研究

目的研究还原型谷胱甘肽(GSH)对新生鼠高氧肺纤维化的影响,并观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在高氧肺纤维化中的作用.方法将足月SD新生大鼠随机分为:Ⅰ组空气对照组,Ⅱ组高氧组,Ⅲ组高氧 GSH组.观察及检测高氧暴露3、7、14、28d时各组肺组织病理改变、TGF-β1免疫组织化学染色.结果Ⅱ组3、7d时表现为明显的急性炎症改变,肺组织水肿、渗出、出血、肺泡间隔轻度增厚,14d时急性炎症减轻,而肺组织中TGF-β1表达呈强阳性;28d时出现明显的胶原沉积,形成纤维化;Ⅲ组与Ⅰ组肺组织病理改变类似,Ⅲ组肺组织的TGF-β1表达呈弱阳性,无明显纤维化反应,两组无显著差异.结论 TGF-β1在高氧性肺纤维化中可能起了重要作用,GSH早期干预高氧性肺纤维有一定作用,可以明显减轻肺纤维化的发生.     

大蒜素对肺纤维化大鼠肺组织α-SMA和TGF- β1表达的影响

目的 观察大蒜素对肺纤维化大鼠肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α -SMA)及转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,并初步探讨大蒜素对大鼠肺纤维化抑制作用的机制.方法 通过气管内注射博莱霉素复制大鼠肺纤维化模型,空白对照组大鼠用生理盐水代替.造模后的Wistar大鼠随机分成4组:空白对照组(气管内注入生理盐水+生理盐水灌胃)、大蒜素组(博莱霉素造模+大蒜素灌胃)、秋水仙碱组(博莱霉素造模+秋水仙碱灌胃)和模型组(博莱霉素造模+生理盐水灌胃),分别于第7天和第28天处死大鼠后取肺组织,行HE染色和Masson染色,观察大鼠肺组织肺纤维化程度,碱水解法检测大鼠肺组织内羟脯氨酸的浓度,免疫组织化学染色检测大鼠肺组织α -SMA及TGF-β1的表达.结果 在HE染色和Masson染色中,大蒜素组及秋水仙碱组肺炎分级和肺纤维化分级较模型组降低.与模型组相比,大蒜素组大鼠肺组织内羟脯氨酸的浓度降低,肺组织内α-SMA及TGF-β1的表达均明显减少,与秋水仙碱组相似.结论 大蒜素对大鼠肺纤维化的干预作用可能与下调TGF-β1的表达,从而减少成纤维细胞α-SMA基因的表达有关.     

促红细胞生成素对新型支气管肺发育不良早产鼠模型TGF－β1表达的影响

目的：观察重组人促红细胞生成素（rhEPO）对新型支气管肺发育不良（BPD）早产鼠模型肺组织病理变化及转化生长因子－β1（TGF－β1）表达的影响。方法40只定期受孕SD大鼠于孕第15天孕囊内注射脂多糖（ LPS）或磷酸盐缓冲液（ PBS）,孕第21天剖宫娩出早产鼠,早产鼠于生后6 h内分为5组：PBS＋空气组、PBS＋高氧组、LPS＋高氧组、PBS＋高氧＋rhEPO组、LPS＋高氧＋rhEPO组。 PBS＋高氧＋rhEPO组、LPS＋高氧＋rhEPO组于高氧暴露6 h后开始第1次背部皮下注射rhEPO 1200 IU／kg,隔天1次,共7次。分别在高氧暴露第1、7、14天处死早产鼠,观察肺组织病理变化及辐射状肺泡计数（RAC）,采用ELISA 法检测肺泡灌洗液（BALF）及肺组织TGF－β1的表达量。结果与PBS＋空气组比较,经高氧干预后其病理损伤加重、RAC降低、BALF及肺组织TGF－β1表达量升高（P＜0.01）,并且以LPS＋高氧组更显著（P＜0.05,P＜0.01）,上述指标在高氧暴露后第14天与第7和（或）第1天差异有统计学意义（P＜0.05）;rhEPO干预后与相应对照组比较上述指标得到相应改善（P＜0.05, P＜0.01）;BALF中TGF－β1水平与RAC呈高度负相关,与肺组织TGF－β1水平呈高度正相关（ P＜0.05或P＜0.01）。结论 rhEPO可能通过参与调解TGF－β1相关通路,改善BPD模型大鼠肺组织损伤,从而对BPD起到一定的干预和治疗作用。     

格列卫对肺纤维化小鼠的干预机制

目的 探讨格列卫对小鼠肺纤维化的干预机制.方法 120只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组和格列卫组,每组30只.采用气管内注射博莱霉素构建肺纤维化小鼠模型,分别于7、14、21 d随机处死10只动物.免疫组化检测各组肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达,RT-PCR检测肺组织TGF-β1mRNA含量.结果 模型组各时间点TGF-β1和α-SMA的表达均较对照组显著增加,地塞米松和格列卫处理组各时间点TGF-β1和α-SMA的表达均较模型组显著降低,而地塞米松组和格列卫组的表达水平无显著差异.TGF-β1,与α-SMA表达水平呈直线正相关(r=0.251,P<0.05).结论 格列卫对博莱霉素诱导肺纤维化的抑制作用与其抑制TGF-β1和α-SMA的表达有关.     

维甲酸对新生大鼠高氧性肺损伤转化生长因子-β1 表达的影响

目的:探讨高氧性肺损伤新生大鼠肺损伤过程中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达情况,并观察维甲酸(retinoic acid,RA)的干预效果,以期为临床防治高氧性肺损伤提供一条新的有效途径.方法:80只出生12h内的清洁级Sprague-Dawley(SD)大鼠作为研究对象.随机分成4组(每组20只):A组:空气对照组;B组:空气 RA组;C组:高氧组;D组:高氧 RA组.14天时观察大鼠的一般状况、体质量、肺湿重/干重值;光镜观察各组大鼠肺组织病理形态学;RT-PCR方法检测TGF-β1mRNA水平;免疫组织化学染色方法检测TGF-β1蛋白表达.结果:14天时高氧组体质量明显减轻,肺组织肺湿重/干重比值、TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平显著高于其他各组(P<0.05);高氧 RA组14天时病理改变减轻,肺湿重/干重值、TGF-β1 mRNA及蛋白表达水平较高氧组明显降低(P<0.05),与空气对照组及空气 RA组相比差异无显著性(P>0.05).结论:高氧性肺损伤新生大鼠TGF-β1表达增加,RA早期干预可以通过下调TGF-β1的表达对高氧性肺损伤具有改善作用.     

肝细胞生长因子对转化生长因子诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化的影响

目的:研究肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子β1(TGFβ-1)诱导肺泡上皮细胞转分化的影响。方法:应用TGF-β1诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化。将人肺腺癌A549细胞株培养液分为4组:①对照组;②HGF组;③TGFβ-1组;④HGF+TGFβ-1组,应用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肺泡上皮细胞特异性标志物肺泡表面活性蛋白A(SP-A)的表达。结果:①TGF-β1组肺泡上皮细胞从原来典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态。②TGF-β1组的细胞α-SMA的表达明显增加,SP-A的表达明显减低。③HGF组的细胞形态学、α-SMA、SP-A的表达与对照组无明显差异。④HGF+TGFβ-1组,多数细胞保持原来肺泡上皮细胞的形态,α-SMA表达明显低于TGFβ-1组、SP-A表达明显高于TGFβ-1组。结论:HGF能够在一定程度上负性调控TGFβ-1诱导的肺泡上皮细胞的转分化。     

沉默Rho GDIα抑制矽肺上皮间质转化及其作用机制

目的探讨沉默Rho GDP解离抑制因子α(Rho GDP dissociation inhibitorα,Rho GDIα)对矽肺上皮间质转化的作用及机制。方法转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549,分为空载体慢病毒组(LEV)、沉默Rho GDIα慢病毒感染组(Lv-Rho GDIα-inhibition)、TGF-β1诱导LEV组(LEV+TGF-β1)、TGF-β1诱导Lv-Rho GDIα-inhibition组(Lv-Rho GDIα-inhibition+TGF-β1)。采用Western blot法、免疫细胞化学染色检测Rho GDIα、RhoA、Rho激酶(Rho kinase,ROCK)、E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和I型胶原(collagen-I)蛋白表达,采用Western blot法及CCK-8检测细胞增殖能力。结果 Western blot法及免疫细胞化学染色结果显示,与LEV对照组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition组Rho GDIα、RhoA、ROCK蛋白表达下降,E-cad蛋白表达上调,α-SMA和collagen-I蛋白表达下降; LEV+TGF-β1组Rho GDIα、RhoA、ROCK蛋白表达上升,E-cad蛋白表达下调,α-SMA和collagen-I蛋白表达上升。与LEV+TGF-β1组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition+TGF-β1组Rho GDIα、RhoA、ROCK蛋白表达下降,E-cad蛋白表达上调,α-SMA和collagen-I蛋白表达下降。CCK-8及cyclin D1蛋白检测结果显示,与LEV对照组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition组细胞增殖受到抑制,LEV+TGF-β1组细胞增殖增强,与LEV+TGF-β1组相比,Lv-Rho GDIα-inhibition+TGF-β1组细胞增殖受到抑制。结论沉默Rho GDIα可通过调控RhoA/ROCK信号通路抑制上皮间质转化发挥抗矽肺纤维化作用。