BRAF基因突变及其对分化型甲状腺癌钠碘同向转运体功能影响的研究进展

目的:总结分化型甲状腺癌中鼠类肉瘤滤过性毒菌(V-raf)致癌同源体B1(BRAF)基因突变与钠碘同向转运体(NIS)国内外研究进展,阐述BRAF和NIS基因结构表达与调控及BRAF基因突变对NIS功能的影响。方法:应用PubMed、Sciencedirect和万方检索系统,以"分化型甲状腺癌、钠碘同向转运体、BRAF、131I"为关键词,检索1998-2010年相关文献95篇。纳入标准:1)NIS结构与功能;2)NIS与分化型甲状腺癌的关系;3)BRAF结构与功能;4)BRAF突变与分化型甲状腺癌的关系;5)BRAF突变与NIS表达在分化型甲状腺癌中的关系。根据纳入标准分析文献23篇。结果:甲状腺癌131I治疗通过NIS介导。NIS的表达可以预测复发DTC131I的聚集和131I疗效评价。BRAF突变在PTC中可作为不良影响因子,影响PTC的发生、侵袭及预后。BRAF基因突变能引起NIS表达下降(20%～80%),病灶摄碘能力降低。NIS的表达水平在含有BRAF V600E突变的PTC中明显降低。结论:BRAF基因突变能引起NIS表达下降,降低病灶碘治疗疗效。因此,BRAF基因突变有望成为预测甲状腺癌放射性碘治疗疗效的指标。     

钠碘转运体转基因介导放射性碘治疗非甲状腺恶性肿瘤的研究进展

钠碘转运体(NIS)是一种能介导碘向细胞内转运的膜蛋白，可以配合放射性碘来治疗肿瘤。目前已经利用转基因技术使不表达或低表达NIS的非甲状腺恶性肿瘤细胞表达NIS蛋白。同时发现肿瘤细胞的低摄碘能力与NIS合成的量及NIS是否能正确锚着密切相关。当前努力的方向除促进NIS的表达和锚着，还要研究如何使肿瘤细胞摄入的碘能够在细胞内滞留足够长的时间以达到杀伤肿瘤的目的。目前已经在乳腺、前列腺、绒毛膜癌、非小细胞肺癌等肿瘤进行了细胞水平的转基因治疗研究。     

钠碘同向转运体在分化型甲状腺癌中异常表达的研究进展

摘 要：放射性核素碘内照射（131I治疗）是分化型甲状腺癌的重要治疗方式,钠碘同向转运体在131I的跨膜转运中起关键作用。而钠碘同向转运体在肿瘤细胞内均有不同程度的表达异常,这与驱动变异密切相关。全文就钠碘同向转运体的分子特征、调节机制及与BRAF突变、PI3K/AKT1通路变异、RAS突变和PTEN突变之间的关系和研究进展作一综述,并总结药物靶点设计与用药方案,为下一步研究提供新的思路。vels     

人钠碘转运体基因转染人大细胞肺癌介导~(131)I治疗的实验研究

背景与目的肺癌是严重危害人民生命和健康的常见病。目前世界上倾向于将两类生物学行为不同的肺癌分为小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞性肺癌     

钠/碘转运体在甲状腺癌中的表达

目的:探讨钠/碘转运体(sodium iodide symporter,NIS)在甲状腺癌组织中的表达.方法:应用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR, RFQ-PCR)和免疫组织化学法检测NIS mRNA和蛋白在18例正常甲状腺组织、27例结节性甲状腺肿组织和23例甲状腺癌组织中的表达.结果: 甲状腺癌组织中NIS mRNA的表达显著低于正常甲状腺组织和结节性甲状腺肿组织(P=0.002).免疫组织化学检测结果表明,甲状腺癌组织中NIS蛋白主要定位于细胞质,强阳性表达13例(56.6%)、阳性表达3例(13.0%),强阳性表达率显著高于正常甲状腺组织(P=0.010).与正常甲状腺组织相比,甲状腺癌组织中NIS mRNA表达下降并且NIS蛋白表达升高者17例(74%),显著高于结节性甲状腺肿组织(χ2=4.428,P=0.035).结论:甲状腺癌组织中NIS mRNA的表达下降而NIS蛋白的表达增强,推测NIS蛋白主要位于细胞质可能是NIS不能发挥正常的运输功能,导致甲状腺癌患者不能聚碘的重要原因之一.     

Transfection of the Human Sodium/Iodide Symporter （NIS） Gene with Liposomes and the Expression of the NIS Protein in Human Lung A549 Cancer Cells

OBJECTIVE To examine the possibility of human sodium iodide symporter （hNIS） protein expression in lung cancer cells. METHODS Human lung A549 cancer cells were thawed and cultured in vitro. The cells were divided into an experimental group transfected with a recombinant pcDNA3-hNIS plasmid and a control group transfected only with a pcDNA3 plasmid. The recombinant plasmid vector encoding the hNIS gene （pcDNA3-hNIS） was amplified, purified and identified. The hNIS gene was followed by DNA sequencing. A Western blot and an immunohistochemical assay were applied to detect the hNIS protein expression in the transfected human lung A549 cancer cells. RESULTS Restriction enzyme digestion and DNA sequencing results showed the size and direction of the inserted gene in the recombinant pcD- NA3-hNIS plasmid was correct. The Western blot method and immunohistochemical analysis showed a positive NIS protein expression in the experimental group. The NIS protein was detected mainly in the cell membranes showing a positive rate up to 70.6% with no expression of the NIS protein in the control group. There was a significant difference between two groups （P=0.000）. CONCLUSION The hNIS gene was transfected effectively into human lung A549 cancer cells mediated by Lipofectamine 2000, and was expressed with its protein in vitro.     

野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞生物学行为的影响

背景与目的INK4a／ARF基因是重要的细胞周期调控基因，其表达产物p16INK4a和p14ARF蛋白分别在Rb和p53通路中发挥重要调节作用。本研究将野生型INK4a／ARF基因同时转染到该基因位点缺失的人肺腺癌A549细胞中，研究其对该细胞生物学行为的影响。方法利用阳离子脂质体介导的基因转染技术，将含有人全长野生型INK4a／ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3-p16INK4a和pcDNA3-p14ARF同时导入A549细胞系中，确定所编码蛋白p16INK4a和p14ARF稳定表达；在设立空白组和空质粒转染组的情况下，进行了转染前后细胞生长曲线、克隆形成率、周期分布、凋亡指数等指标的检测和分析。结果转染INK4a／ARF基因后的细胞G0／G1期比例为59．9％，与未转染（51．2％）及空质粒转染（50．3％）细胞相比差异显著（P值分别为0．043和0．025），同时S期和G2／M期的比例下降；转染后细胞克隆形成率为63％，未转染细胞和空质粒转染细胞分别为85％和87％（P值均〈0．01），凋亡指数明显增加，转染INK4a／ARF基因后的细胞凋亡率为8．0％，另两种细胞均为2．7％，差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论阳离子脂质体可以有效地将INK4a／ARF基因导入A549细胞，并可以抑制A549细胞的生长，促进凋亡作用的增强，为将来肺癌的基因治疗提供了实验依据。     

转染癌胚抗原基因的人树突状细胞疫苗表达的研究

目的 探索使用质粒转导制备转基因DCs疫苗的方法。方法 采用细胞因子rhIL-4和rhGM—CSF诱导培养法制备人外周血树突状细胞，用Lipofectine向人DCs转染含人CEA真核表达质粒。结果 转染组DCs培养上清CEA含量明显高于末转染组培养上清CEA含量。结论 人CEA真核表达质粒转染DCs可内源性表达CEA。     

重组腺病毒携带钠碘转运体基因介导放射性碘治疗小鼠胶质瘤

目的 验证转染人钠碘转运体基因(hNIS)介导放射性碘治疗肿瘤的有效性.方法 利用重组腺病毒将hNIS基因及人甲状腺过氧化物酶(hTPO)基因转染入人胶质瘤细胞系U251中,使肿瘤细胞获得hNIS和 hTPO基因,然后进行体外摄125I实验、过氯酸盐抑制实验、体外125I反流及内流实验.应用转染hNIS和hTPO基因及未转染hNIS和hTPO基因的细胞株,分别建立荷瘤裸鼠模型,并检测131I对肿瘤的抑制作用.结果 利用腺病毒可以将hNIS和hTPO基因成功转染到U251细胞系中,转染上述基因的肿瘤细胞系可以摄取碘,而且这种摄碘的功能是由hNIS基因所介导的,转染后的hNIS-U251细胞系摄碘能力是U251细胞的121.2倍,hNIS-hTPO-U251细胞系摄碘能力是U251细胞的172.0倍.131I对裸鼠移植瘤的治疗结果表明,在131I作用下,对照组肿瘤均继续迅速生长,而hNIS转染组及hNIS和hTPO共转染组移植瘤体积均有所减小.结论 在肿瘤细胞中转染hNIS和hTPO基因后,可以提高其摄取12I的活性.131I 可以有效杀伤荷瘤裸鼠体内的中瘤细胞.

Abstract：

Objective To explore the possibility of tranfecting hNIS and hTPO genes into gliomas cells by recombinant adenovirus for radioactive iodide treatment. Methods To tranfect hNIS gene into human glioma cell line U251 by recombinant adenovirus.The biological functions of the cells stably expressing hNIS and hTPO genes were assessed by 1251 uptake assay,125I influx-course and 12I-effluxcourse.A glioma model was established with inoculation of the U251 cells in nude mice,and the inhibiting effect of 131 I on the tumor growth was tested in the mouse models. Results The hNIS and hTPO genes were successfully transfected into human gliomas cell line U251 cells by recombinant adenovirus.The radioactive iodide could be intaken by the tumor cells mediated by hNIS gene.The uptake of 125I was higher in cell lines hNIS-U251 and hNIS-hTPO-U251 cells than in cell line U251 cells.The tumor volume of the mice after 131I treatment was significantly decreased in comparison with that before treatment.Conclusion Radioactive 131I treatment after HNIS-based gene transfer can be enhanced and effectively inhibite the tumor growth in nude mice.     

脂质体介导KAI1基因转染对小细胞肺癌NCI-H446细胞株的抑制作用

 目的　探讨新抑癌基因KAI1对小细胞肺癌NCI H4 4 6细胞株抑制增殖和浸润转移的作用。方法　用脂质体介导的基因转染方法 ,借助真核质粒表达载体 (PCMV NEO XhoI) ,将抑癌基因KAI1转入小细胞肺癌NCI H4 4 6细胞中 ,经G4 18筛选 ,获得稳定表达的细胞克隆。观察NCI H4 4 6细胞的生长 ,MTT法检测细胞体外增殖能力 ,流式细胞仪进行细胞凋亡分析 ,间接免疫荧光染色结合流式细胞仪检测转染前后细胞CD82蛋白的表达。免疫组化测定Myc及MMP 1(基质金属蛋白酶 1)的表达 ,放射免疫测定LN(层黏蛋白 )表达。结果　脂质体 KAI1基因转染的小细胞肺癌细胞CD82表达增加 ,细胞增殖能力下降 ,凋亡增加 ,癌基因Myc ,MMP 1及LN表达下降。 结论　抑癌基因KAI1抑制小细胞肺癌NCI H4 4 6细胞株的增殖 ,降低Myc ,MMP 1及LN的表达。     

钠碘共同转运体在乳腺癌中的研究进展

钠碘共同转运体(sodium iodide symporter,NIS)是甲状腺激素合成过程中转运碘的糖化膜蛋白,调控甲状腺细胞摄取碘,是甲状腺及其转移癌进行放射性碘治疗的基础.研究显示放射性碘对乳腺癌也有治疗作用,乳腺癌能表达NIS蛋白,研究NIS在乳腺癌中的作用机制并进行干预,可能成为治疗乳腺癌的潜在靶点,NIS介导放射性碘可能是治疗乳腺癌尤其是三阴性乳腺癌的一个新的方向.     

hTPO和hNIS共转染肺癌细胞系H460介导放射性碘摄取的研究

背景与目的 肺癌严重危害人类生命和健康,目前国内外肺癌的发病率和死亡率仍在不断上升.尤其是非小细胞肺癌(non-small cell lung cacer, NSCLC)治疗效果多年来一直没有显著提高.本研究旨在将人甲状腺过氧化物酶(hTPO)基因及人钠碘转运体(hNIS)基因共转入肺癌细胞系后研究其摄碘能力的变化.方法 克隆,重组,包装并扩增纯化得到重组腺病毒(AdTPO),测定病毒滴度,Western blot检测重组腺病毒的表达.使用脂质体转染法将hNIS基因转染入人肺癌细胞系H460中,经G418抗生素筛选获得稳定表达hNIS的细胞系hNIS-H460,为hNIS-H460组;使用重组腺病毒将hTPO基因转导入hNIS-H460中,使肺癌细胞系获得hTPO基因,为AdTPO-hNIS-H460组;未转入hTPO和hNIS的细胞为对照组(H460).然后进行三组稳定表达细胞系的体外摄125I实验.三组间两两比较用q检验(Newman-Keuls法).结果 AdTPO-hNIS-H460细胞、hNIS-H460细胞和H460细胞所摄取125I分别为(59 637.67±1281.13)、(48622.17±2242.28.)和(1440.17±372.86)计数·min-1.三组间总体具有统计学差异(P＜0.01).AdTPO-hNIS-H460组较对照组(H460)摄125I能力增高约41倍(P＜0.01),hNIS-H460组较对照组(H460)摄碘能力增高约34倍(P＜0.01).AdTPO-hNIS-H460组较hNIS-H460组高约1.2倍(P＜0.01).结论 将hTPO和hNIS基因共转染至肺癌细胞系H460后,可有效提高H460的摄碘能力.     

转染外源CC10对肺腺癌细胞系A549的CyclinD1蛋白及mRNA的影响(英文)

目的研究转染外源性CC10基因对肺腺癌A549细胞株的细胞周期及周期蛋白CyclinD1蛋白和mRNA表达影响。方法用脂质体法分别将外源性抑癌基因CC10转染到人肺腺癌细胞株A549中,8h、16h、24h、36h、48h后,分别用Western blot法检测转染CC10基因的A549细胞CC10蛋白表达,用流式细胞仪观察细胞周期的变化,用免疫细胞化学及RT-PCR检测转染CC10基因对周期蛋白CyclinD1蛋白、mRNA的影响。结果转染外源CC10基因对A549细胞生长具有抑制作用,细胞生长阻止于G0／G1,细胞周期S期+G2／M期比例下降。转染外源 CC10基因的A549细胞CC10蛋白表达增高,而CyclinD1的蛋白及mRNA表达明显降低。结论转染外源CC10基因对肺癌细胞G0／G1周期的抑制作用可能与CyclinD1基因表达下调有关。     

转染外源CC10对肺腺癌细胞系A549的CyclinD1蛋白及mRNA的影响

Objective： To investigate the effects of exogenous CC10 gene transfection on cell cycle and the expression of cyclinD1 protein and mRNA in A549 cells. Methods： A549 cells in all test groups （group A to E） and control group （group F） were transfected with exogenous CC10 gene by liposome for 8, 16, 24, 36, 48 and 0 h respectively. CC10 protein expression was detected in A549 cells by Western blot. The growth inhibitory rate was detected by MTT method. Flow cyometry analysis （FCS） and AnnexinV-PI staining were used to determine the changes of cell cycle progression and apoptosis rate in all groups. CyclinD1 protein and mRNA expression in A549 cells was detected by the methods of immunocytochemistry and RT-PCR. Results： Exogenous CC10 gene could inhibit the growth of A549 cells, and the growth inhibitory rates in all test groups （from group A to E） were 24.7%, 33.1%, 44.3%, 61.7% and 74.2% respectively, and that in group F was 6.24%. CC10 blocked the cell cycle progression at G0/G1 and induced apoptosis gradually. In A549 cells of test groups, the expression of cyclinD1 protein and mRNA was significantly decreased. Conclusion： The inhibitory effects of the transfection of exogenous CC10 gene on G0/G1 cycle of lung cancer cells might be related with the down-regulation of cyclinD1 gene.     

Study of the Correlation of EGFR and K-RAS Gene Mutations with Its Protein Expression in Non-small Cell Lung Cancer

OBJECTIVE To investigate gene mutations of epidermal growth factor receptor (EGFR) and K-RAS (Kirsten rat sarcoma viral oncogene) in Chinese patients with non-small cell lung cancer (NSCLC), and study the correlation with its protein expression and its clinical significance on gefitinib. METHODS Detect the EGFR and K-RAS gene mutations status by gene sequencing and use the method of Immunohistochemistry to detect EGFR and K-RAS protein expression. RESULTS The frequency of EGFR mutations was 33%, mainly located in exon 19 and exon 21. The frequency of K-RAS mutations was 5.5%, mainly located in codon 12. There was no case which both had EGFR and K-RAS mutations, suggesting a mutually exclusive relationship between the two. EGFR mutations are more common in adenocarcinomas (particularly those with bronchioloalveolar features), nonsmokers and females. 16% were detected EGFR positive expression and had no correlation with EGFR mutation (P > 0.05), but had significant correlation with mutation in exon 19 (P < 0.05). The frequency of K-RAS positive expression was 52.5% and had no correlation with K-RAS mutation (P > 0.05). Twelve (8 cases were protein-negative) out of 15 gefitinib-treated NSCLC patients with disease control carry EGFR mutations. CONCLUSION EGFR protein expression has some correlation with exon 19 mutations. Combined detection of EGFR and K-RAS gene mutations can help clinicians to choose patients who may benefit from EGFR tyrosine kinase inhibitor (EGFR-TKI) and to predict the response and prognosis of gefitinib.     

非小细胞肺癌端粒酶催化亚基hTERT mRNA测定及其临床意义

[目的]阐明非小细胞肺癌(NSCLC)端粒酶催化亚基hTERT与TNM分期的关系并探究其与多药耐药相关基因蛋白MRP,LRP的关系。[方法]对50例NSCLC手术切除标本进行以下测定 :以RT_PCR和免疫酶标法(ELISA)检测肺癌手术标本中端粒酶活性 ;应用PCR和定量放射端粒扩增法 (TRAP)检测hTERT活性 ,并对其灰度扫描以定量测定hTERT;以RT-PCR检测冰冻肺癌组织的MRP和LRP的mRNA水平。[结果]50例NSCLC中端粒酶阳性率为84% (42/50) ,hTERT阳性率为78%(39/50) ,两者之间呈较好的相关性 (P<0.001)。端粒酶阳性组hTERT定量值为136.98±53.63;端粒酶阴性组定量值为15.50±43.84,有显著性差异(P<0.05)。MRP的阳性率为42% (21/50) ;LRP为68% (34/50)。hTERT定性 ,定量表达与MRP呈强相关而与LRP无关。不同的肿瘤细胞病理类型或T分期之间 ,hTERT的定性和定量表达无显著差异。不同N分期者hTERT定量值有显著差异。而hTERT阳性率定性测定差异未达到统计学意义。不同TNM分期的hTERT的定量表达有明显差异。不同分化程度之间端粒酶活性、hTERT的定性和定量表达差异均无统计学意义。[结论]NSCLC的hTERT定量和定性表达与端粒酶之间均有很好的相关性和一致性。hTERT表达水平的高低与NSCLCTNM分期及淋巴结转移有关。hTERT与MRP有相关性     

非小细胞肺癌组织中p63蛋白的表达及其意义

目的 检测p63蛋白在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达情况，并探讨其与NSCLC临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化（S-P法）检测p63蛋白在76例NSCLC及12例癌旁肺组织中的表达情况。结果 p63蛋白在NSCLC组织中的阳性表达率为55。3％（42／76），而在癌旁肺组织中无阳性表达，两者比较有非常显著性差异（P〈0．01）。p63蛋白的表达与NSCLC病理类型密切相关（P〈0.01），其在肺鳞癌中的阳性表达率（80．0％）显著高于在肺腺癌（33.3％）和肺腺鳞癌（36.4％）中的阳性表达率；在不同分化程度的肺鳞癌中p63的阳性表达率相互比较有显著性差异（P〈0.05）。p63蛋白的表达与NSCLC的TNM分期、淋巴结转移、术后复发及生存期均无明显相关（P〉0.05）。结论 p63蛋白在NSCLC中表达上调，可能是1个有价值的诊断肺鳞癌和判断肺鳞癌分化的标志物。     

pVAX-iNOS真核表达载体的构建及其抗肺癌作用研究

背景与目的 iNOS与NO介导的抗肿瘤效应有关.本研究旨在构建pVAX-iNOS载体并转染A549肺癌细胞,检测其基因的表达并初步探讨iNOS基因表达增高后对A549肺癌细胞的抗肿瘤作用.方法 应用RT-PCR方法扩增人iNOS编码序列的CDS片段,构建pVAX-iNOS载体后转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测目的基因的表达;采用MTT法、Hoechst 3235染色和划痕实验分别检测iNOS高表达在体外对肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移作用的影响.结果 真核表达质粒载体pVAX-iNOS构建成功,iNOS蛋白在转染后的A549细胞中表达升高.pVAX-iNOS转染A549肺癌细胞后能明显诱导细胞发生凋亡并抑制肿瘤细胞的生长和迁移.结论 本研究成功构建pVAX-iNOS真核表达质粒,高表达iNOS能明显抑制A549细胞的增殖、迁移并促进细胞发生凋亡.本研究有望为临床治疗肺癌提供一个新的有效策略.