PDGF及IGF-IB基因在骨缺损修复过程中的表达规律

目的探讨同种异体植骨修复骨缺损的骨痂中的血小板源生长因子（PDGF）及胰岛素样生长因子（IGFIB）基因与正常骨组织中2种生长因子基因的表达规律及机制。方法选取健康普通中国家兔30只,雌性,其中18只随机分成3 d,1、2、4、6、8周实验组,每组3只;另外10只为骨缺损异体骨松质提供组（骨提供组）,2只为正常对照组;实验组均按手术要求对兔桡骨制成15mm骨缺损模型,取骨提供组同种异体兔髂骨骨松质制成颗粒状骨移植以上骨缺损处,于术后3 d,1、2、4、6、8周处死家兔取骨缺损处标本进行PDGF和IGF-IB基因片段的实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）;正常对照组不作处理,喂养后取相同部位正常骨组织进行实时定量聚合酶链反应。结果通过PDGF和IGF-IB的目的基因结果进行校正后,以对照组正常骨组织拷贝数为基础,实验组各时间段拷贝数与其比值：正常骨组织为1.00,实验组PDGF 3 d、1、2、4、6、8周各时间段的比值基因数分别为1.70、2.54、1.72、3.63、2.64、0.97;IGF-IB基因比值分别是3.03、4.96、1.14、2.67、0.60、0.12。结论 PDGF和IGF-IB 2种生长因子在骨缺损修复过程中不同时间段其表达量是变化的,掌握其规律为临床上正确治疗骨缺损提供科学的理论依据。     

BMP-2与VEGF基因在同种异体骨修复骨缺损中的实验研究

目的 探讨“补肾壮骨合剂”(骨碎补、续断、自然铜、土鳖虫)在同种异体骨修复骨缺损中对骨形态形成蛋白-2(bone morphogenetic protein two,BMP-2)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的表达及影响 方法 普通家兔48只,取其中36只随机分为实验组和对照组,实验组和对照组均为18只,实验组和对照组再继续分为6组,每组各为3只;实验组和对照组均按常规1术在无菌条件把左侧桡骨中下1/3处用骨磨钻制成10mm的骨缺损模型,取另外12只备用家兔处死后取髂骨植入以上骨缺损处;实验组用“补肾壮骨合剂”复合饲料喂养,对照组用普通饲料喂养,于术后3d及1、2、4、6、8周各处死实验组和对照组普通家兔3只,取骨缺损处标本进行BMP-2和VEGF基因的实时定量聚合酶链反应(real-time PCR).结果 对BMP-2和VEGF的目的基因校正结果后,以对照组1周拷贝数为基础,其他各组与其比值:对照组和实验组在3d及1、2、4、6、8周BMP-2基因分别为0.55、1.00、2.19、3.20、2.29、1.42和1.84,8.83、3.44、2.50、6.50、6.00;VEGF基因分别为2.08、1.00、0.88、3.40、1.71、1.17和6.5、2.25、1.86、3.13、3.33、3.31,实验组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05) 结论 补肾壮骨合剂能明显缩短骨缺损的修复时间和提高骨组织的修复质量,在对BMP-2和VEGF的释放水平和诱导成骨进程及促进骨损伤区血管化方面有显著的影响,并可以看出在骨缺损的修复过程中各个时间段二者的增长不成比例关系.     

补肾壮骨合剂对家兔骨缺损修复过程中血管内皮生长因子与转化生长因子β基因表达的影响

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）与转化生长因子β（TGF—β）基因在用“补肾壮骨合剂”治疗骨缺损过程中的表达及影响。方法普通级健康家兔48只,其中36只完全随机分成实验组和对照组,各18只,均在无菌条件下取右侧桡骨中下1／3用骨磨钻制成15mm的骨缺损模型;另外12只家兔处死后,取髂骨制成颗粒状骨,植入以上骨缺损处。实验组用“补肾壮骨合剂”复合饲料喂养。对照组用普通饲料喂养。分别于术后3d和1、2、4、6、8周处死实验组与对照组家兔各3只,取骨缺损处标本,应用聚合酶链反应技术检测VEGF和TGF—β基因的表达。结果VEGF和TGF—β的目的基因,在校正结果后,以对照组术后1周时测得的基因拷贝值为基础,其他各组与其比值：对照组VEGF的值分别为2．08、1．00、0．88、3．40、1．71、1．17,实验组VEGF的值分别为6．50、2．25、1．86、3．13、3．33、3．31;对照组TGF—β的值分别为0．57、1．OO、1．40、1．44、1．59、1．27,实验组TGF—β的值分别为0．58、2．05、2．35、2．59、3．18、2．67。实验组和对照组VEGF基因校正值分别为3．3±1．4比1．7±0．9,差异有统计学意义（t=-18．95,P〈0．05）,实验组和对照组TGF—β基因校正值分别为2．2±0．9比1．2±0．4,差异有统计学意义（t=-2．594,P〈0．05）。结论补肾壮骨合剂能促进VEGF与TGF—β基因的表达。     

兔骨缺损体外冲击波治疗后成骨细胞中TGF-β1的表达

目的:观察体外冲击波(ESW)干预兔骨缺损模型后成骨细胞中活性因子TGF-β1的表达情况,探讨其促进成骨作用的分子生物学机制.方法:将18只中国健康家兔制备双桡骨骨缺损动物模型,将右上肢作为实验组,左上肢作为对照组,1周后全麻下行右上肢体外冲击波治疗,左上肢不做治疗.定期拍X片,组织学观察,免疫组化检测.结果:X光片显示冲击波治疗4周、6周后,治疗组骨不连愈合均较对照组好;组织学观察显示治疗组骨细胞、成纤维细胞、毛细血管、成骨细胞、间充质细胞等细胞增生活跃;免疫组化方法示治疗组成骨细胞中TGF-β1含量明显高于对照组,统计学检验差异均有显著性.结论:ESW干预能够提高成骨细胞中生物学活性因子TGF-β1的表达,可能是ESW促进成骨细胞成骨活动的有力证据.     

十味接骨药对家兔骨折骨细胞生长机理的实验研究

目的研究十味接骨药对家兔骨折骨细胞生长修复过程中骨痂中TGF-β1,羟脯氨酸、钙、磷 血清中碱性磷酸酶、钙、磷的变化和作用机理。方法实验用健康日本大白兔81只5～6月龄造成双侧前肢0.7cm横断性骨缺损,保留尺骨完整,并分成三组,对照组和实验组,空白组不用药,实验组给十味接骨药,对照组给骨折挫伤散。2周、5周、8周分别取材,观察十味接骨药对骨折修复的影响。结果实验组骨痂中TGF-β1、HRP先升高后递减 血中骨痂中Ca、P峰值提前出现,血中ALP随骨生长逐渐升高。与对照组相比较统计学＊P〈0.01,＊＊P〈0.001。结论十味接骨药对骨折的愈合修复有显著促进作用。     

Ⅰ期植骨治疗兔感染性桡骨骨缺损效果观察

目的观察Ⅰ期植骨治疗兔感染性桡骨骨缺损效果。方法先制作家兔感染性桡骨骨缺损模型,取缺损处脓性分泌物做细菌培养和药敏试验,清创后将敏感药物和家兔异体髂骨骨松质充分混合后置于骨缺损处,并用敏感抗生素耳缘静脉注射5d。分别于植骨后1、2、4、6、8周,处死动物前摄左侧桡骨X线片;处死动物,取左侧桡骨,行HE染色,用原位杂交检测骨形成蛋白（BMP-2）。结果 X线检查示,1～2周有少量骨痂形成;4～8周时骨缺损处模糊,骨缺损消失,并能看出骨髓腔形成。HE染色发现,1周时有大量炎性细胞浸润,并有少纤维组织增生：2～4周时有大量纤维细胞及毛细血管增生并伴有软骨细胞形成;6～8周时软骨细胞转化过程几乎停止,骨小梁开始出现,有正常骨组织结构。原位杂交显示BMP-2在1周时呈弱阳性表达,4周时呈强阳性表达,其与各周呈阳性表达。结论Ⅰ期植骨治疗兔感染性桡骨骨缺损有效可行。     

组织工程化骨修复兔桡骨缺损的实验研究

目的 探讨骨髓基质干细胞(marrow stromal stem cells,MSCs)离体培养后与生物衍生骨(bio-derivcd bone,BDB)复合修复兔桡骨的节段性骨缺损的可行性.方法 将25只健康成年新西兰大白兔双侧桡骨制备成中段15mm的骨缺损,其中20只,将MSCs与生物衍生骨于体外复合培养后,通过手术将其植入右侧桡骨缺损处作为实验组;以单纯生物衍生骨植入左侧桡骨缺损处作为对照组:另5只为空白组不植入任何材料,在2、4、、8、12周各时间点分别行大体标本X线放射学检查、组织学观察,比较3组骨缺损修复的能力.结果 术后2、4、8、12周实验组与实验对照组放射学检查评价新骨生成,有显著性差异(P＜0.05).术后组织学检查新骨生成速度、生成量均有显著性差异(P＜0.05).空白对照组各时点均无新骨形成,最后缺损由纤维组织充填.结论 生物衍生骨能够与兔骨髓间充质干细胞体外复合培养,移植入异体新西兰大白兔后未见明显免疫排斥反应,是可以选择的细胞载体.MSCs/BDB复合物植入修复兔桡骨缺损能够加速新骨形成,修复能力明显优于单纯生物衍生骨植入.     

外界刺激对内源性生长因子TGF-β_1的影响

目的观察备洞对家犬牙髓中TGF-β1表达的影响及修复性牙本质的形成情况,探讨牙本质牙髓复合体原位形成和内源性生长因子的相关性。方法 6只健康家犬,分别选取四颗磨牙,随机分为1、2、3、4四个组,每组6颗牙;1组不予任何处理,作为对照组,2、3、4组为实验组,分别给予长3 mm,宽3 mm,洞深2、2.5、3 mm的备洞刺激,予氧化锌丁香油粘固剂暂封窝洞,分别于2、4、6周麻醉下拔除,制作病理切片,显微镜下观察修复性牙本质的形成情况,图像分析和免疫组化方法观察转化生长因子-β1的表达。结果在2.5 mm洞深刺激强度下,2周时,每组都没有修复性牙本质形成;3 mm洞深刺激强度,4、6周时,前期牙本质增宽,成牙本质细胞空泡变性,有第三期牙本质形成;每组都有转化生长因子-β1表达,结果表明:随着刺激度强和时间增加,呈表达增强趋势(P<0.05)。结论备洞刺激可能激活了内源性转化生长因子-β1,且可能参与了牙本质牙髓复合体的形成,内源性转化生长因子-β1的诱导表达与时间和刺激强度成正相关关系。     

组织工程自体骨修复兔大块骨缺损

目的:研究组织工程自体骨的植入对大块骨缺损修复的影响。方法:培养兔的自体原代骨髓间充质干细胞,制备壳聚糖-明胶网络/羟基磷灰石多孔材料-重组人BMP2(CS-Gel/HA-rhBMP-2)复合材料。将骨髓间充质干细胞作为种子细胞与CS-Gel/HA-rhBMP-2进行复合。截去兔桡骨中段7mm长度的骨组织,建立骨缺损动物实验模型。实验组(每只兔的右侧)植入CS-Gel/HA-rhBMP-2-种子细胞复合材料,对照组(每只兔的左侧)植入CS-Gel/HA材料,2组均不做内外固定,逐层缝合伤口。分别在术后第4、8和12周对缺损处进行X线评分和组织学评分。结果:术后第4周实验组X线和组织学评分与对照组相比差别无统计学意义,8周和12周实验组X线和组织学评分均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:实验中所用移植修复材料具有优异的骨传导性、骨诱导性,可以缩短骨缺损的修复时间。     

引导性骨再生联合高能震波修复节段性骨缺损

目的 探讨膜引导性骨再生联合高能震波修复节段性骨缺损的成骨效能.方法 实验兔40只均分为A、B两组;制造两侧桡骨中段10 mm的骨缺损.A组将16 mm×14 mm的硅胶膜卷曲缝成管状,套于一侧桡骨缺损区,于术后第3周用高能震波冲击处理骨缺损的两骨断端(A1组);另一侧桡骨骨缺损单纯于术后第3周用同等条件的高能震波冲击骨缺损的两骨断端(A2组).B组一侧骨缺损将16 mm×14 mm的硅胶膜(Silastic)卷曲缝成管状,套于一侧桡骨缺损处(B1组);另一侧作为空白对照(B2组).于术后第1,2,4,6,8,10,12周分别行双侧桡骨X射线检查.于术后第2,4,8,12周切取标本行组织学检查及成骨面积分析.结果 A1组疗效最好,B1组、A2组次之,B2组最差.结论 膜引导性骨再生联合高能震波具有良好的成骨作用,可有效促进骨缺损的修复.     

Implants of type I collagen gel containing MG-63 osteoblast-like cells can act as stable scaffolds stimulating the bone healing process at the sites of the surgically-produced segmental diaphyseal defects in male rabbits

BACKGROUND: Three-dimensional (3-D) type I collagen gel culture systems allow long-term growth of osteoblast-like cells, in vitro. Whether the implantation of 3-D collagen systems can stimulate new bone formation was assessed in male rabbits. MATERIALS AND METHODS: A 10-mm segmental diaphyseal defect was surgically produced at the left and right limbs of 50 adult male rabbits. The 3-D systems containing MG-63 osteoblast-like cells were implanted at the right-limb defects of all 50 animals. Twenty-five left-limb defects were implanted with 3-D collagen gels containing no MG-63 cells, while the rest were left empty. The bone repair process was serially assessed by radiography for up to 8 weeks and by histological analysis for up to the week 32 post-surgery. RESULTS: Ninety-four per cent (94%) of the right-limb defects, presented radiographic evidence of complete bone-end bridging within 8 weeks. None of the 50 left-limb defects presented radiographic post-implantation evidence of bone-end bridging. The radiographic evidence of the bone-end bridging was corroborated with histological evidence of new bone formation, while the medullar canals were filled with bone marrow elements. CONCLUSION: Implants of the 3-D collagen gels containing osteoblast-like cells can be used as stable scaffolds allowing the migration/proliferation of the bone regenerating cells in male rabbits.     

骨髓间充质干细胞复合去抗原牛松质骨修复兔桡骨骨缺损

目的:研究复方接骨中药含药血清培养诱导的骨髓间充质干细胞复合去抗原牛松质骨载体修复兔桡骨骨缺损的作用机制.方法:取4月龄大耳白兔24只随机分为A、B 2组,将A、B组每只兔一侧前肢制成桡骨骨缺损模型,A组于骨缺损处植入复方接骨中药含药血清培养诱导的骨髓间充质干细胞与去抗原牛松质骨复合体；B组于骨缺损处植入单纯去抗原牛松质骨.术后3、6、12周分别取材,将术侧桡骨完整取出,进行大体观察、X线片及组织学检查,麦胚凝集沉淀法测定骨源性碱性磷酸酶活性.结果:大体观察及X线片显示:A组骨痂生长良好,骨缺损修复完成；B组骨缺损部分修复,部分为骨不连接.组织学检查:A组新生骨量较多,见大量成骨细胞,骨缺损与断端形成骨性连接.B组骨小梁间隙可见纤维组织长入,较多软骨团出现,编织骨数量多.统计学分析表明骨源性碱性磷酸酶活性A组显著高于B组(P＜0.01).结论:复方接骨中药含药血清培养诱导的骨髓间充质干细胞复合去抗原牛松质骨载体能够较好地修复兔桡骨骨缺损.     

股骨头成形术治疗股骨头无菌性坏死的力学实验研究

目的股骨头成形术对股骨头坏死的预防和治疗的动物实验研究分析。方法 60只中国白兔,随机分为4组,每组15只。右侧股骨头作为正常组,其余3组在股骨头颈交界处钻孔造成股骨头缺损,并加用95%乙醇30min灌注造成股骨头缺损模型。自然修复组股骨头作为自然修复对照。骨水泥组股骨头造成缺损乙醇填充后填充骨水泥造影剂骨水泥组。造影剂骨水泥组股骨头造成股骨头缺损乙醇填充后填充造影剂骨水泥。4组动物于术后12周处死,立即取股骨头标本观察关节软骨性状。然后分别行病理学检查及生物力学测试。结果股骨头关节软骨观察显示骨水泥组和造影剂骨水泥组股骨头外形始终保持完整无变形,4组股骨头软骨厚度自然修复组比正常组、骨水泥组、造影剂骨水泥组降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。抗压试验正常组、骨水泥组和造影剂骨水泥组刚度荷均数均高于自然修复组,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论股骨头成形术操作简单、创伤较小,可以保持股骨头外形完整,能暂缓或替代关节置换术,有望成为治疗FicatⅡ～Ⅲ期年轻患者的新型手术方法。     

甲壳质衍生物促进骨折愈合的实验研究

目的 观察甲壳质衍生物促进兔桡骨骨折愈合的作用。方法 新西兰兔，制备右桡骨中段3mm骨缺损模型，随机分组，每日灌胃给药。并于术后定期拍X-线片观察各组的骨折愈合情况。结果 X-线片显示甲壳质衍生物饲养组术后9d、17d的骨折愈合情况比对照组好，差异显著；而术后30d、42d比较，差异有极显著性。结论 甲壳质衍生物能促进骨折修复愈合。     

Serum transforming growth factor-beta1 levels increase in response to successful anti-inflammatory therapy in ulcerative colitis

OBJECTIVE: To investigate serum levels of transforming growth factor-beta1 and interferon-gamma in active ulcerative colitis and to assess changes during treatment. METHODS: We prospectively evaluated serum from 25 patients with untreated active ulcerative colitis and 19 healthy controls. Disease activity score (DAI), serum transforming growth factor-beta1 and interferon-gamma levels were measured at baseline and after 7 days of conventional treatment. Disease activity score and transforming growth factor-beta1 were also assessed at 42 days. RESULTS: Baseline transforming growth factor-beta1 levels were significantly higher in patients than in controls (P < 0.02). On the 7th day, transforming growth factor-beta1 levels increased only in patients who responded (P < 0. 01); variations in transforming growth factor-beta1 levels and disease activity score were inversely correlated (r=- 0.72, P < 0. 001). At day 42, serum transforming growth factor-beta1 decreased significantly compared with the 7th day (P < 0.05). While in controls, interferon-gamma was undetectable; untreated patients had higher, widely variable, levels. At day 7, responders had higher interferon-gamma values than unresponsive cases. Variations in interferon-gamma correlated moderately with changes in transforming growth factor-beta1 (r=0.53, P < 0.05). Cytokine response did not depend upon the type of treatment. CONCLUSIONS: Both transforming growth factor-beta1 and interferon-gamma may play a role in the injury-repair process in active ulcerative colitis. Variations in circulating transforming growth factor-beta1 levels in the first week of treatment seem to be related to the therapeutic response.     

自体骨与同种异体骨治疗兔桡骨骨缺损的试验对比研究

目的探讨采用同种异体骨治疗兔桡骨骨缺损疗效的试验研究。方法将12只健康成年新西兰大白兔作为同种异体骨供体,28只作为试验受体。按美国组织库标准制备同种异体骨。将受体试验动物双侧桡骨中段切除10mm,制成骨缺损模型。受体试验动物右侧桡骨骨缺损内植入自体髂骨骨粒（对照组）;左侧取等量同种异体骨粒同法植入（试验组）。于术后2、4、8、12周,对骨缺损修复组织内OPG蛋白的表达检测采用免疫组织化学方法。术后12周,检测2组骨小梁相对体积、骨小梁数量和骨密度。结果术后2组未见感染现象发生。术后2、4周试验组OPG蛋白表达低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。术后8、12周2组OPG蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）。术后12周2组骨小梁相对体积、骨小梁数量和骨密度比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论同种异体骨具有较好的组织相容性,其骨性愈合过程与自体骨移植相似,并且来源广泛,能够避免因自体骨移植带来的诸多并发症,可以成为治疗骨缺损的重要材料。     

载药羟基磷灰石人工骨修复骨缺损的实验研究

用载药羟基磷灰石陶瓷人工骨（Ｃ－ＰＨＡ）进行家兔骨缺损修复。实验表明,蜂蜡包裹的Ｃ－ＰＨＡ在家兔体内具有明显的药物缓释作用,２７周局部组织仍含有效药物浓度。新生骨可顺利长入Ｃ－ＰＨＡ材料,术后１８周,材料表面全部被板层骨覆盖。蜂蜡不影响植入区的新骨长入和骨缺损的修复,亦不影响ＰＨＡ发生生物降解。