Caspase-3在骨髓间充质干细胞回输脑缺血再灌注模型大鼠脑组织中的表达

目的 观察骨髓间充质干细胞回输脑缺血再灌注模型大鼠后脑组织中caspase-3的表达.方法 无菌分离骨髓间充质干细胞,用培养液DMEM/F12(含2% B27,EGF 40 ng/ml,bFGF 20 ng/ml)诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化,免疫组化检测NSE表达.线栓法建立大鼠缺血再灌注模型.RT-PCR 检测 MSCs 回输脑缺血再灌注模型大鼠脑组织中caspase-3 mRNA的表达.结果 骨髓间充质干细胞诱导神经样细胞后,免疫组化检测NSE呈阳性表达.RT-PCR检测caspase-3 mRNA 表达,治疗组 caspase-3表达明显低于模型组(P<0.05).治疗组Caspase-3低于对照组,但无统计学意义(P>0.05).结论 骨髓间充质干细胞回输脑缺血再灌注模型大鼠后脑组织caspase-3基因下调,抑制神经细胞凋亡.     

体外诱导成人骨髓间充质干细胞转化为神经元细胞的实验研究

目的探讨成人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在体外特定的诱导条件下,转化为神经元细胞的规律、效率及长期存活的条件.方法采用β-巯基乙醇为诱导剂,在体外诱导6 h后,改用诱导维持液使诱导后的细胞在诱导维持液中存活6 d.用细胞化学及免疫组织化学、Western blot方法检测神经元细胞、星形胶质细胞标记蛋白的表达.结果诱导6 h,诱导后的细胞尼氏染色胞浆中可见深蓝色的尼氏体形成;细胞表达NSE、NF-M,而不表达GFAP;NSE、NF-M阳性细胞数超过80%以上.Western blot结果显示:诱导6 h,诱导后的细胞表达Nestin,而无MAP-2的表达,随着时间的延长,Nestin的表达逐渐减少,而出现了MAP-2的表达.结论β-巯基乙醇在体外可定向诱导hMSCs经神经干细胞转化为神经元细胞,而且诱导后的神经元细胞逐渐趋于成熟.     

动、静脉移植骨髓间充质干细胞治疗急性期缺血再灌注大鼠模型的比较

目的探讨缺血再灌注6 h后经动、静脉途径移植骨髓间充质干细胞疗效的差异。方法将27只大脑中动脉缺血2 h后再灌注SD雌性大鼠模型随机分为颈动脉BMSCs组8只、尾静脉BMSCs组7只、颈动脉PBS组6只和尾静脉PBS组6只。全骨髓贴壁法分离、培养BMSCs,流式细胞仪检测鉴定;取缺血再灌注后6 h为移植时间点;移植后第7天观察改良神经功能损伤评分(m NSS)以评价神经功能恢复和体能恢复,免疫组织化学检测梗死周围组织GFAP、Bax和Bcl-2,TUNEL法检测梗死周围组织细胞凋亡,ELISA检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α。结果 BMSCs表面抗原CD90表达率为95.7%、CD29表达率为97.3%、CD106表达率为52.7%、CD11b表达率为6.01%、CD34表达率为2.95%、CD45表达率为2.26%。BMSCs组和PBS组相比较:GFAP阳性细胞数、Bcl-2平均光密度值显著增多;m NSS、血清TNF-α浓度、TUNEL阳性细胞数显著减少;Bax平均光密度值无明显差异。颈动脉BMSCs组和尾静脉BMSCs相比较各项数据无统计学差异。结论在缺血再灌注早期动、静脉途径移植BMSCs疗效无差异,但尾静脉途径因创伤微小、可移植细胞量多,为早期最佳移植途径。     

骨髓间充质干细胞治疗脑梗死的研究进展

<正>脑梗死是常见的脑血管病类型,因脑血管供血障碍而引发缺血性级联反应,造成神经功能缺损。随着人口老龄化,其发病率逐年上升,成为人类死亡和残疾的主要病因之一。目前,针对脑梗死的溶栓治疗因严格的时间窗而限制了获益患者。传统药物治疗虽然使疾病死亡率有所下降,但多数患者仍残存神经功能缺损,严重影响患者生活质量。自干细胞移植理论的兴起,骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗脑梗死的研究中发现移植BMSCs可促进脑梗死后功能改善〔1〕和组织修复〔2〕,并     

大鼠骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌样细胞的实验研究

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞的体外培养及向心肌样细胞转化的条件。方法获取成年大鼠胫骨干骨髓,采用贴壁法进行间充质干细胞的培养、传代,观察经5-氮胞苷诱导后骨髓间充质干细胞的生长和分化。结果大鼠骨髓基质细胞贴壁呈集落生长,5-氮胞苷诱导骨髓基质细胞转化为心肌样细胞。结论骨髓基质细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞,为自体心肌细胞移植提供了一种良好的来源。     

大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的初步研究

目的探讨体外培养、扩增骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法,诱导MSCs向神经元样细胞定向分化。方法取大鼠骨髓,采用贴壁培养筛选法分离MSCs,进行培养扩增,观察其生物学特性;用IBMX诱导MSCs向神经元样细胞分化,并通过细胞免疫化学法鉴定分化细胞。结果大鼠MSCs可通过贴壁法成功分离,并可在体外大量扩增,经IBMX诱导,MSCs可向神经元样细胞分化,出现胞体和突起,细胞免疫化学染色神经元特异性烯醇化酶和巢蛋白呈阳性。结论MSCs易分离和培养,体外培养条件下生长良好,可连续传代,诱导剂作用下可分化出神经元样细胞。     

骨髓间充质干细胞对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护机制

目的 :研究骨髓间充质干细胞 (MSC)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护机制。方法 :192只SD大鼠随机分为假手术组、手术组、对照组和MSC治疗组。MSC移植前应用BrdU标记 ,再灌注 1d后经同侧颈内动脉注射MSC(1× 10 6) ,对照组则注射PBS。采用线栓法建立脑缺血再灌注模型。术后每天应用爬杆法评定大鼠神经功能缺损。缺血 2h再灌注 2、4、6和 8d取脑组织 ,用免疫组织化学方法检测脑组织中bFGF的表达 ,RT PCR技术观察bFGFmRNA的表达。结果 :MSC治疗组大鼠的神经功能缺损评分明显低于手术组和对照组 (P <0 0 5 )。MSC治疗组缺血侧缺血周边区脑组织中观察到BrdU与bFGF免疫组化双染阳性细胞 ,脑组织中bFGFmRNA的表达也高于其他 3组 (P <0 0 1)。结论 :经颈外动脉给予的MSC可促进脑缺血再灌注大鼠的运动功能恢复 ;bFGF表达升高 ,可能是MSC脑保护作用机制之一。     

成人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经元样细胞的研究

目的 研究成人骨髓间充质干细胞(hMSC)体外定向诱导可否分化为神经元样细胞。方法 Percoll分离液离心分离hMSC，体外扩增，采用两种方法：①含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24小时，甲氧酚(BHA)和二甲亚枫(DMSO)联合诱导6小时；②2-巯基乙醇(2-ME)预诱导24小时，BHA和DMSO诱导6小时。免疫组化检测神经元样细胞表达神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结果 hMSC在体外扩增传至5代后，流式细胞仪显示hMSC表面抗原CD29、CD44、CD90表达阳性率分别为99．5％，97．8％，98．8％。采用两种方法诱导hMSC后，胞体收缩，突起伸出，较密的部分神经元拉成网状；免疫组化显示诱导的神经元样细胞能特异性表达NSE、NF，不表达GFAP。结论 成人骨髓hMSC在体外可以分化为神经元样细胞。     

骨髓间充质干细胞移植在心肌病大鼠体内存活、分化的实验研究

目的:研究骨髓间充质干细胞（MSCs）移植在心肌病大鼠体内存活、分化的情况。方法:将雌性W istar大鼠30只经腹腔注射阿霉素6次（总剂量15mg/kg）,建立心肌病的动物模型,在此模型的左室前壁采用微静脉注射法植入MSCs。8周后处死大鼠,取出心脏标本,做冰冻切片进行HE染色,观察植入的MSCs在病损心肌组织中的变化及免疫荧光检查观察植入MSCs心肌肌球蛋白重链（MHC）及心肌特有的连接蛋白（CX43）表达情况。结果:HE染色检查显示,植入的MSCs存活并有新生血管形成;免疫荧光检查显示植入的MSCs,表达MHC及CX43,但较宿主表达弱。结论:MSCs移植在心肌病大鼠体内心肌微环境中能存活,并向心肌细胞分化。     

人骨髓间充质干细胞体外分化为肝细胞样细胞

目的 探讨人骨髓间充质干细胞(MSCs)的体外培养及特异性诱导为肝细胞样细胞的能力。方法 骨髓标本来源于健康志愿者的胸骨,年龄2～35岁,采用淋巴细胞分离液(密度1.077)分离人MSCs,并分别采用HGF、FGF4、HGF FGF4以及无生长因子四种处理因素体外诱导第三代人MSC向肝细胞样细胞分化。通过流式细胞术分析鉴定.MSCs的纯度,于诱导培养的0、7、14、21、28天时留取细胞检测CK18、AFP和白蛋白的表达情况,同时进行糖原染色验证细胞功能。结果 用淋巴细胞分离液分离出的人MSCs纯度可达90％,采用HGF、FGF4及HGF FGF4三种处理因素均可在体外诱导人MSCs特异分化为具有肝细胞样细胞表型和功能的细胞。结论 人MSCs能在体外扩增并定向诱导为肝细胞样细胞。     

NT-3基因转染对骨髓间充质干细胞增殖及向神经元分化的影响

目的研究神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)增殖和向神经元分化的影响,探讨转染NT-3基因的MSCs体内移植治疗脊髓损伤的可行性。方法体外培养稳定表达NT-3蛋白的MSCs,通过MTT法检测NT-3对MSCs增殖的影响;应用免疫细胞化学和免疫印迹方法检测转染NT-3的MSCs表达神经元标志物NeuN蛋白的情况。结果转染NT-3基因的MSCs生长曲线上移,细胞增殖率显著升高,与对照组相比,两者有显著差异(P<0.05),表明转染NT-3后细胞生长加快。免疫荧光染色结果显示转染NT-3的MSCs的NeuN阳性细胞数明显增多,与对照组比较有显著差异(P<0.05);Western印迹检测结果显示转染NT-3的MSCs内NeuN蛋白表达明显增多,与对照组比较有显著差异(P<0.05),表明NT-3促进MSCs向神经元方向分化。结论 NT-3基因转染可促进MSCs的增殖,并诱导其向神经元方向分化。     

Mesenchymal stem cells for the treatment of refractory pure red cell aplasia after major ABO-incompatible hematopoietic stem cell transplantation

Pure red cell aplasia (PRCA) is a well-known, although infrequent, hematological complication after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). PRCA occurs in cases of major ABO mismatch between donor and recipient and is believed to be due to inhibition of donor erythroid progenitors by residual host isohemagglutinins. The purpose of our study was to further evaluate the efficacy of human adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (AMSC) as the salvage therapy for refractory PRCA after major ABO-incompatible HSCT. Two patients with refractory pure red cell aplasia received intravenous infusions of AMSC at a dose of 1.5 × 10⁶/kg of the patients’ weight, and rapid recovery from PRCA without any side effects was observed. We conclude that AMSC seems to be a promising therapeutic option in patients with PRCA after ABO-mismatched HSCT, in whom conventional treatment fails.     

骨髓间充质干细胞对大脑中动脉缺血再灌注大鼠治疗作用的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对大脑中动脉缺血再灌注大鼠的治疗作用。方法雄性SD大鼠30只,以线栓法制成缺血再灌注模型,成功大鼠23只,随机分为3组,早期MSC治疗组(8只)、晚期MSC治疗组(8只)和对照组(7只)。术后每3天对各组大鼠进行神经功能评估,28天后处死大鼠,荧光倒置显微镜下观察MSC进入大鼠体内后神经元特异性烯醇化酶的表达。结果早期MSC治疗组大鼠神经功能恢复较对照组明显提前,MSC治疗14天后与对照组比较无显著差异。MSC治疗28天后梗死灶边缘可见少量神经元特异性烯醇化酶和5-溴脱氧尿嘧啶双染细胞。晚期MSC治疗组大鼠神经功能恢复与对照组比较无显著差异。结论大鼠大脑中动脉缺血再灌注后早期静脉注射MSC治疗可明显加速神经功能的恢复。     

大鼠大脑中动脉阻塞模型建立时的麻醉方式选择

目的探讨腹腔麻醉与吸入麻醉方式对建立大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)脑缺血再灌注模型的影响。方法将64只大鼠随机分为两组,分别应用水合氯醛腹腔注射麻醉法和气管插管2%七氟烷混合30%氧气吸入麻醉法进行麻醉,Longa法建立MCAO模型。观察两组大鼠的麻醉诱导、持续及苏醒时间的差异,对比分析血气分析、血糖、肛温、脑温、神经功能缺失评分、48h存活情况以及梗死体积的差异。结果水合氯醛腹腔注射麻醉对呼吸有明显抑制,血气分析显示有严重的呼吸性酸中毒[pH7.29±0.03,PCO2(56.8±4.2)mmHg,PO2(119.1±15.6)mmHg],吸入麻醉组辅助呼吸,血气分析正常[pH7.48±0.06,PCO2(36.2±0.3)mmHg,PO2(219.1±27.4)mmHg]。两组大鼠的pH值、PCO2、PO2相比差异均有显著性(P<0.01)。腹腔麻醉能显著降低脑温和肛温[梗死区皮质温度(33.3±0.8)℃、纹状体温度(33.6±0.3)℃、肛温(34.7±0.5)℃],吸入麻醉对脑温和肛温影响较小[梗死区皮质温度(35.1±0.3)℃、纹状体温度(36.2±0.3)℃、肛温(35.1±0.3)℃],两组间脑温比较差异有显著性(P<0.01),而肛温间差异无显著性(P>0.05)。大鼠48h存活只数及脑梗死体积在腹腔麻醉组与吸入麻醉组之间差异均无显著性(P>0.05)。结论建立大鼠MCAO模型时,应用吸入麻醉明显优于腹腔麻醉,其对呼吸、血糖、脑温等指标影响较小,有利于建立稳定的大鼠MCAO模型。     

动脉内溶栓治疗大脑中动脉完全闭塞的临床分析

目的评价动脉内溶栓治疗大脑中动脉闭塞的血管再通率及临床疗效。方法回顾性分析动脉内溶栓治疗大脑中动脉闭塞患者168例。根据溶栓药物分为尿激酶组122例，重组组织型纤溶酶原激活剂（rt-PA）组46例，通过数字减影血管造影（DSA）分析闭塞大脑中动脉再通率，采用Moil分级标准评价血管再通程度，格拉斯哥预后评分（GOS）评价患者预后。结果①尿激酶组：血管完全再通占37．7％（46／122）；部分再通占46．7％（57／122）；未通占15．6％（19／122），溶栓后脑出血占6．6％（8／122）；预后恢复良好为51．6％（63／122），轻度残障22．1％（27／122）重度残障19．7（24／122），植物状态0．8％（1／122），死亡5．7％（7／122）。②rt—PA组：血管完全再通占41％（19／46）；部分再通占52％（24／46）；未通占6％（3／46），出血6％（3／46），恢复良好54％（25／46），轻度残障24％（11／46），重度残障15％（7／46），植物状态2％（1／46），死亡4％（2／46）。两组血管再通率、出血率及其GOS评分比较，差异无统计学意义，P〉0．05。结论动脉内溶栓可有助于再通完全闭塞的大脑中动脉和改善患者预后。尿激酶和rt—PA溶栓效果相近。     

Mesenchymal stem cells obtained after bone marrow transplantation or peripheral blood stem cell transplantation originate from host tissue

Mesenchymal stem cells (MSC) obtained from human bone marrow have been described as adult stem cells with the ability of extensive self-renewal and clonal expansion, as well as the capacity to differentiate into various tissue types and to modulate the immune system. Some data indicate that leukapheresis products may also contain non-hematopoietic stem cells, as they occur in whole bone marrow transplantation (BMT). However, there is still controversy whether MSC expand in the host after transplantation like blood progenitor cells do. Therefore, we were interested in finding out if graft MSC can be detected in leukapheresis products and in bone marrow after BMT and peripheral blood stem cell transplantation (PBSCT). Every sample from total bone marrow transplants exhibited growth of MSC after in vitro culture, but not one of nine leukapheresis products did. In addition, bone marrow aspirates of 9 patients receiving BMT and of 18 patients after PBSCT were examined for origin of MSC. Almost all MSC samples exhibited a complete host profile, whereas peripheral blood cells were of donor origin. We conclude that even if trace amounts of MSC are co-transplanted during PBSCT or BMT, they do not expand significantly in the host bone marrow.     

Mesenchymal stem cells: harnessing cell plasticity to tissue and organ repair

Plastic behavior of cells is a hallmark of embryonic development. The emergence of primary mesenchyme from within the inner cell mass entails the first epithelial-mesenchymal transition step that is then followed by sequential transitions; the formation of new tissues and organs requires transitions from mesenchyme into epithelium and vice versa. Although it is currently believed that in the adult such transitions do not persist, the frequent occurrence of mesenchymal stem cells (MSCs) in various tissues of the adult organisms, and the reported plasticity of such adult mesenchymal cells, raises the question as to whether the frequency of mesenchymal epithelial transitions in the adult have been underestimated. Indeed, adult mesenchymal stem cells have been reported to differentiate in culture into a multitude of mature cell types including epithelial cells. This opens the way to the use of these stem cells for the construction of new tissues and organs for therapeutic purposes, but the question is still open as to whether mesenchymal stem cells transdifferentiate also in vivo. The molecular mechanism that underlies the plasticity of mesenchymal stem cells and their capacity to transdifferentiate is unresolved. We found that these cells have a promiscuous gene expression pattern; mesenchymal cells, whether primary or cloned cell lines, express T cell receptor (TCR) beta and alpha genes, along with other components of the TCR complex. These cells may therefore be in a standby state, in which many gene families are expressed at a low level thereby making the cell readily capable of shifting fates.     

大鼠左右大脑中动脉缺血再灌注模型比较

目的探讨大鼠左右大脑中动脉缺血再灌注模型的差异。方法选择右利雄性Wistar大鼠48只,按照随机数字表分为左侧大脑中动脉缺血再灌注组(左侧优势组)、右侧大脑中动脉缺血再灌注组(右侧非优势组),每组24只,每组使用各自侧别的假手术对照。血管内线栓法阻塞大脑中动脉2h,然后再灌注。测试神经功能,取脑分别进行常规TTC染色和HE染色,测量脑梗死体积,光镜下观察脑组织病理变化。结果左侧优势组再灌注24、48和72h神经功能缺损评分明显低于右侧非优势组(P<0.05)。左侧优势组缺血程度较右侧非优势组重。左侧优势组神经元数量严重缺失,海马细胞排列紊乱,脑梗死体积明显大于右侧非优势组[(102.1±8.8)mm3 vs(97.0±11.2)mm3,P<0.05]。结论大鼠优势半球大脑中动脉阻塞后,神经功能缺损程度较非优势侧严重,脑梗死体积更大。大鼠优势半球局灶性脑缺血模型重复性好,而且可靠。     

间充质干细胞胰岛样细胞分化研究进展

间充质干细胞是存在于成体多种器官的多能干细胞,具有多胚层分化能力.近年研究发现在体内体外特定微环境作用下,它可以分化为胰岛样细胞,分泌一定量的胰岛素,并且具有降血糖的功能.这一技术可以同时解决胰岛移植中供体紧缺及免疫排斥反应两大难题,为临床糖尿病细胞治疗开辟了一条新的途径.