绞股蓝总皂甙对P-糖蛋白高表达急性粒系白血病细胞化疗药物敏感性的影响

目的　观察GP对P -糖蛋白 (Pgp)高表达急性粒系白血病 (AML)细胞药物敏感性的影响。方法　采用S -P免疫组化法检测Pgp表达。应用MTT比色分析法测定药物敏感性。结果　 16.67% ( 2 / 12 )初治患者和 58.33% ( 7/ 12 )难治或复发AML患者Pgp表达增高 (P <0 .0 5) ;Pgp高表达的AML细胞对阿糖胞苷(AraC)和柔红霉素 (DNR)药物敏感性低于低水平表达者 (P <0 .0 1)。无细胞毒剂量GP显著增强AraC和DNR对Pgp高表达AML细胞增殖的抑制作用 (P <0 .0 1)。结论　AML细胞Pgp高表达和其多药抗性相关 ,GP能增加高水平Pgp表达AML细胞对化疗药物的敏感性     

柔红霉素对HL-60敏感细胞miRNA-21等5种miRNA表达的影响

目的：通过观察柔红霉素（DNR）作用后急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株HL‐60敏感细胞中miRNA‐21、miR‐NA‐181d、miRNA‐125b、let‐7f和miRNA‐27a5种miRNA的表达变化，探讨他们与HL‐60细胞耐药性形成的相关性及其潜在的临床意义。方法常规培养HL‐60和HL‐60/A细胞。设置实验组、对照组1和对照组2，实验组使用小剂量DNR持续作用于HL‐60敏感细胞。对照组1和2分别是HL‐60/ADNR耐药细胞和不接受DNR持续作用的HL‐60敏感细胞。采用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测DNR对HL‐60细胞增的影响。采用实时荧光定量PCR（RT‐PCR）检测miRNA‐21等5种miRNA的表达量。结果MTT实验结果：随着小剂量DNR持续作用时间的延长，DNR对HL‐60敏感细胞的抑制作用减弱，并于加药后第10天左右，抑制率逐渐进入平台期。RT‐PCR检测结果：与对照组2比较，对照组1耐药细胞中的miRNA‐181d、miRNA‐27a和let‐7f的表达下调（P＜0．05），而实验组敏感细胞中这些miRNA的表达于加药后的第7天开始下调（P＜0．05）。相反，对照组1中的miRNA‐21和miRNA‐125b表达上调（P＜0．05），而实验组敏感细胞中这2种miRNA的表达则于加药后的第7天开始上调（P＜0．05）。结论miRNA‐21、miRNA‐125b、miRNA‐181d、miRNA‐27a和let‐7f5种miRNA表达的改变可能与HL‐60细胞耐药性有关。     

异搏定逆转HL-60/ADR细胞株耐药机理的初步探讨

目的 :深入了解异搏定 (VER)对鬼臼乙叉甙 (VP16)耐药逆转作用的机制。方法 :以多药耐药相关蛋白 (MRP)高表达的耐阿霉素人急性髓性白血病细胞株HL 60 /ADR为研究对象 ,应用DNA电泳、流式细胞仪观测细胞凋亡现象 ,用Westernblotting方法测定凋亡相关蛋白BCL 2表达水平。结果 :在作用 2 0h后 ,5mg·L-1VER可使VP16对HL 60 /ADR诱导凋亡作用增强 2 .8倍 ,并可下调BCL 2蛋白表达水平。结论 :VER对VP16的耐药逆转作用可能与其具有增强VP16诱导HL 60细胞凋亡作用有关 ;BCL 2蛋白可能是这一作用的靶点     

白血病细胞固有活性氧水平与As2O3促凋亡作用的关系

目的探讨白血病细胞株的固有活性氧(ROS)水平与细胞对三氧化二砷(As2O3)促凋亡作用的敏感性之间的关系. 方法用2μmol/L As2O3作用于四种髓系来源的人白血病细胞株(NB4、HL60、K562、U937),证实As2O3促凋亡敏感性在四种细胞之间的差异.然后在不加As2O3情况下,用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)或双氢罗丹明123(DHR)捕获ROS,通过流式细胞仪检测细胞的ROS水平. 结果四种白血病细胞凋亡敏感性与ROS水平存在对应关系,由高到低的顺序为:NB4、HL60、K562、U937. 结论白血病细胞固有的ROS水平与细胞对As2O3诱导凋亡的敏感性有关.     

m6A去甲基化酶FTO通过调控p53磷酸化抑制急性髓系白血病的发生发展

目的 研究FTO/p53在急性髓系白血病(AML)发生发展中的作用。方法 对2018年1月至2019年1月郑州大学第一附属医院收治的27例AML患者和15例健康对照外周血中FTO表达水平进行分析，并结合TCGA数据库分析，深入研究FTO在AML发生发展中的作用。结果 在AML患者外周血中，FTO表达水平升高。分析TCGA数据库发现FTO与p53磷酸化存在相关性，使用siRNA敲降白血病细胞系HL60和K562中FTO后，HL60和K562细胞凋亡增多，结果显示FTO表达水平降低后白血病细胞的凋亡增加。进一步通过体外功能实验显示FTO表达降低后p53磷酸化平均荧光强度增强。结论 m6A去甲基化酶FTO通过调控p53磷酸化抑制AML的发生发展。     

青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株凋亡抑制的实验研究

[目的]观察青蒿琥酯对不同急性白血病细胞株的增殖抑制作用及凋亡机制探讨。[方法]应用不同浓度青蒿琥酯作用U937、HL60、Jurkat细胞株,MTT法检测抑制率;细胞形态学、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡;Western-blot法检测细胞凋亡过程中Bcl-2、Bax、Caspase 8和ICAD蛋白表达的变化。[结果]青蒿琥酯能够明显抑制U937、HL60、Jurkat细胞增殖;8μg/ml以上浓度青蒿琥酯作用三种细胞24h、48h、72h抑制率均为Jurkat〉HL60〉U937(均P<0.01);其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;随药物浓度的增高Bcl-2和ICAD蛋白表达量下降,而Bax蛋白表达上调,Caspase8蛋白出现明显的剪切激活带。[结论]青蒿琥酯既能通过线粒体途径又能通过外源性途径诱导急性白血病细胞凋亡,对Jurkat的抑制最强。     

白血病细胞固有活性氧水平与As2O3促凋亡作用的关系

目的 探讨白血病细胞株的基因固有活性氧(ROS)水平与细胞对三氧化二砷(As2O3)促凋亡作用的敏感性之间的关系。方法 用2μmol/L As2O3作用于四种髓系来源的人白血病细胞株(NB4、HL60、K562、U937)，证实As2O3促凋亡敏感性在四种细胞之间的差异。然后在不加As2O3情况下，用活性氧捕获剂双氢—乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH—DA)或双氢罗丹明123(DHR)捕获ROS，通过流式细胞仪检测细胞的ROS水平。结果 四种白血病细胞凋亡敏感性与ROS水平存在对应关系，由高到低的顺序为：NB4、HL60、KS62、U937。结论 白血病细胞固有的ROS水平与细胞对As2O3诱导凋亡的敏感性有关。     

HSP90β在ATRA诱导的白血病细胞株HL60耐药中的作用研究

目的:通过检测HSP90β基因在白血病细胞株HL60及其耐药株HL60/ATRA中的表达差异,探讨HSP90β基因在ATRA相关多药耐药性发生中的作用.方法:采用ATRA浓度递增及间歇诱导法建立HL60/ATRA耐药细胞株;用MTT法和流式细胞检测技术(Flow cytometry,FCM),分别检测HL60和HL60/ATRA细胞的增殖及细胞周期;RT-PCR、Western blot法检测HSP90 β基因在HL60及HL60/ATRA细胞中的表达;通过MTT法检测HL60和HL60/ATRA细胞对常用化疗药物(VCR、CTX、VP-16、ADM)敏感性.结果:成功构建了白血病细胞耐药株HL60/ATRA;在mRNA和蛋白两个水平,均检测到HSP90β在耐药株HL60/ATRA中的表达较HL60明显增高(P＜0.01);药敏结果显示HL60/ATRA细胞对VCR、CTX、ADM、VP-16的耐药倍数分别为10.74、5.51、4.01、3.24.结论:ATRA能够诱导HL60细胞中HSP90 β高表达,经ATRA诱导后的HL60/ATRA细胞对抗癌药物的敏感性显著降低、耐药性增高,这提示HSP90 β可能在ATRA相关多药耐药性的发生过程中发挥着重要作用.     

IL-6对地塞米松诱导AML细胞凋亡的影响

目的 :检测IL 6对原代白血病细胞的影响 ,探讨其在地塞米松耐药机制中的作用。方法 :①不同条件下体外培养原代白血病细胞 ,用MTT法了解细胞增殖情况 ,②用形态学观察和原位末端标记法检测不同培养条件下HL 6 0细胞株的细胞凋亡。结果 :①IL 6可显著促进AML细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ,对ALL细胞则无影响 (P >0 .0 5 ) ,②地塞米松显著抑制AML细胞增殖 (P <0 .0 5 ) ,且这种抑制在部分病例可被IL 6逆转 (P >0 .0 5 ) ,③地塞松米可诱导HL 6 0细胞凋亡 ,凋亡率为 13.0 6 %。结论 :①地塞米松抑制AML细胞的增殖是诱导白血病细胞发生凋亡 ;②IL 6在急性白血病发病及地塞米松耐药中可能发挥着调控作用     

扶正祛邪中药复方含药血清抗白血病细胞HL60及HL60/VCR细胞的体外实验研究

目的通过体外实验观察扶正祛邪中药复方含药血清对急性早幼粒白血病细胞HL60及长春新碱诱导的耐药细胞株HL60/VCR细胞的生长抑制率。方法采用四氮唑蓝(MTT)比色法,选择白血病敏感细胞株HL60细胞以及长春新碱诱导的白血病多药耐药细胞株HL60/VCR细胞为靶细胞,观察不同浓度(5%、10%、15%、20%、25%)扶正祛邪含药兔血清对其的生长抑制率。结果扶正祛邪含药兔血清对HL60/VCR及HL60均有明显的抑制作用,且其对HL60/VCR的细胞毒作用呈剂量依赖性。结论扶正祛邪复方中药具有一定的抑制白血病细胞及耐药细胞的作用。     

急性髓系白血病细胞株APP表达及APP—siRNA对HL60细胞的沉默作用

目的：研究淀粉样前体蛋白（APP）基因在HL60、HL60／ADM、U937和kasumi-1细胞株中的表达及筛选针对APP基因的有效干扰片段。方法：采用荧光定量PCR和Western blot方法分别检测APP基因在4种细胞株中的mRNA和蛋白表达。用化学法合成4条针对APP的干扰片段和一条阴性对照,脂质体法转染HL60细胞,分别用定量PCR和Western blot检测APP表达。结果：在4种细胞株中,APP mRNA和蛋白表达由高到低依次为：kasumi-1、HL60、HL60／ADM和U937,kasumi-1和HL60均显著高于HL60／ADM、U937（P〈0．05）。同阴性对照相比较,4条干扰片段均能不同程度地抑制APP表达,其中siRNA-4效果最佳,APP mRNA和蛋白分别下降了约64％和65％。结论：APP基因在不同AML细胞株中表达差异显著。siRNA-4的干扰效果最佳。     

Role of Extracelluar Regulated Protein Kinases in FTY720-induced Apoptosis of Leukemia Cell Lines HL-60 and U937

The effects of a novel immunosuppressive agent FTY720 on proliferation inhibition and apoptosis of acute leukemia cell lines HL-60 and U937, and the role of extracelluar regulated protein kinase (ERK) in the course of proliferation inhibition and apoptosis induced by FTY720 were studied. The proliferation inhibition rate of HL-60 and U937 cells by various concentrations of FTY720 was detected by MTT assay. Cell apoptosis was detected by DNA fragmem analysis and flow cytometry. The phosphorylated ERK1/2 protein expression was observed by Western blotting. The change of intracellular distribution of ERK1/2 protein was identified by SP immunohistochemical staining. The results showed that FTY720 could inhibit the growth of HL-60 and U937cells effectively in a dose-dependent manner. After incubation with FTY720 for 24 h, apoptosis wasobserved in HL-60 and U937 cells. The intracellular expression of phosphorylated ERK1/2 protein was also down-regulated and the distribution of ERK1/2 protein in cell‘ nuclear was reduced during FTY720-induced apoptosis. So, that FTY720 inhibited ERK1/2 phosphorylation might mediate the role of FTY720-induced apoptosis and proliferation inhibition of leukemia cells.     

耐三尖杉酯碱白血病细胞株HL-60/H的建立及其耐药性和抗凋亡作用的检测

为了建立性能稳定的白血病耐药细胞株用于肿瘤细胞耐药性和促凋亡作用的研究, 通过逐渐增高三尖杉酯碱（Ｈ） 的剂量, 用极限稀释法克隆筛选出耐三尖杉酯碱（Ｈ） 的白血病细胞株ＨＬ－６０／Ｈ, 并用ＦＣＭ、透射电镜、ＤＮＡＬａｄｄｅｒ法、ＳＡＢＣ法对其进行耐药性和抗凋亡作用的检测。结果显示, ＨＬ－６０／Ｈ是亲代细胞ＨＬ－６０ 耐受Ｈ 的８９．２ 倍,ＨＬ－６０／Ｈ 在无药培养基中传代１６代, ＩＣ５０ 没有明显的降低。ＨＬ－６０／Ｈ细胞同时对多种药物产生耐受。Ｐ－１７０ 和ＢＣＬ－２在ＨＬ－６０／Ｈ 细胞的表达明显增多。药物不易在细胞内聚集,Ｈ不易诱导其发生凋亡。分析结果认为ＨＬ－６０／Ｈ是性能稳定的耐药细胞株,对耐药机制的研究和寻找逆转耐药的方法提供有利条件;多药耐药蛋白Ｐ－１７０ 介导的药物不易在细胞内聚集可能是ＨＬ－６０／Ｈ细胞产生耐药的重要机制; ＢＣＬ－２ 的高表达使ＨＬ－６０／Ｈ 细胞不易发生凋亡     

白血病细胞株HL60和HL60/DNR的多药耐药性

目的研究白血病细胞的多药耐药性（ＭＤＲ）。方法用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＨＬ６０，ＨＬ６０／ＤＮＲＭＤＲ１的ｍＲＮＡ表达，用流式细胞仪分析单抗ＵＩＣ２标记的细胞株Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）的表达，了解它们摄取和滞留荧光素Ｒ１２３的功能。结果ＨＬ６０／ＤＮＲ在ｍＲＮＡ水平高度表达ＭＤＲＩ，在蛋白质水平高度表达Ｐｇｐ，功能性试验中细胞内Ｒ１２３最终浓度ＨＬ６０为ＨＬ６０／ＤＮＲ的５０倍。结论ＨＬ６０／ＤＮＲ为典型的表达ＭＤＲ１的细胞株     

bcl-2基因过表达致急性髓系白血病对柔红霉素耐药机制的初步探讨

目的 探讨bcl-2基因过表达导致人急性髓系白血病对柔红霉素耐药的机制.方法 通过分子克隆技术构建质粒pcDNA3.1(+)/bcl-2,将其转染人急性髓系白血病U937细胞,分正常对照组、空载体对照组、转染组,与柔红霉素培养24 h,采用CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达变化,从而比较转染bcl-2基因前后,U937细胞对柔红霉素敏感性的变化.结果 成功构建质粒pcDNA3.1(+)/bcl-2,转染入U937细胞,PCR证实其转染效果;CCK-8法检测结果显示U937/ bcl-2组细胞存活率显著高于对照组和空载体对照组;bcl-2基因过表达降低caspase-3片段的裂解活化,降低U937细胞对柔红霉素的敏感性.结论 bcl-2过表达抑制caspase-3激活、抑制柔红霉素杀伤U937细胞,导致细胞对柔红霉素耐药.bcl-2可作为临床治疗急性髓系白血病的靶点.     

4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达

目的:研究共刺激分子4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系的表达及其生物学意义。方法:流式细胞仪检测4-1BBL分子在不同的人恶性血液病细胞系的表达;用可介导4-1BBL逆向信号的鼠抗人4-1BBL单抗(mAb1F1)作用于8个不同的人恶性血液病细胞系,细胞计数法和3H-TdR掺入法评价细胞系的体外生长和增殖。结果:FACS结果显示4-1BBL分子在人恶性血液病细胞系上有不同程度的表达,其中髓性白血病细胞系U937、HL60及B淋巴瘤细胞系Raji、Daudi上呈现较高水平的表达。细胞计数和3H-TdR掺入实验结果表明mAb1F1对髓性白血病细胞系U937和HL60,具有较强的促增殖效应。结论:共刺激分子4-1BBL分子在髓性白血病细胞系和B淋巴瘤细胞系上表达率较高;4-1BBL分子可通过介导逆向信号促进髓性白血病细胞系U937和HL60的生长和增殖。     

The effect of the Fas/FasL pathway during chemotherapeutic drug-induced apoptosis of leukameic cells

Chemotherapeutic drugskill tumor cellsnotonlyby direct acting on their respective targets,but alsoespecially by inducing cells apoptosis.The mecha-nism of chemotherapeutic drug- induced apoptosis re-mains to be fully elucidated.The Fas/Fas L pathwayis one of the essential ones for receptor/ligand sys-tems- mediated apoptosis.Recently several reportshave demonstrated thata variety of human leukaemiccell lines expressed Fas antigen and showed sensitivi-ty to apoptosis induced by Fas/Fas L pat…     

富铁对HL-60细胞Bcl-2基因表达的影响

目的 :探讨富铁对HL 60细胞Bcl 2基因表达的影响 ,揭示铁促进肿瘤细胞增殖的机制。方法 :体外加入不同浓度的三氯化铁培养HL 60细胞 6h、12h、2 4h、48h ,亲和免疫组化LSAB法检测HL 60细胞Bcl 2基因表达。结果 :Bcl 2表达在 5 0 μmol/L、10 0 μmol/L的三氯化铁作用HL 60细胞 12h、2 4h和 48h时最高 ,与对照组相比有差异 (P <0 0 5 )。结论 :铁可促进肿瘤细胞生长 ,铁诱导Bcl 2表达增高可能是铁促进HL 60细胞增殖的机制之一     

长链非编码RNA LINC01140对急性髓系白血病U937细胞增殖及周期的影响

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA) LINC01140对U937细胞增殖及周期的影响.方法 收集陆军军医大学第一附属医院血液科2016年7-12月20例急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML) 患者骨髓标本和2017年5-6月在血液科进行骨髓检查提示为正常的10例骨髓标本,采用qRT-PCR检测AML患者骨髓及白血病细胞中LINC01140的表达情况.通过构建LncRNA LINC01140-shRNA慢病毒干扰载体转染U937细胞(对照组为shR-NC,实验组为shR-1、 shR-2),采用qRT-PCR检测LINC01140的表达.细胞计数法、细胞克隆成球实验分别检测干扰LINC01140表达对U937细胞增殖和克隆成球能力的影响.流式细胞术、蛋白免疫印迹分别检测U937细胞周期和周期相关蛋白的变化.结果 ①LncRNA LINC01140在白血病患者和细胞中表达显著升高(P＜0. 01) .②下调LINC01140表达,U937细胞增殖减慢,细胞克隆成球数量减少,表明细胞增殖能力显著降低(P＜0. 01) .③流式细胞术检测结果显示干扰LINC01140表达可导致U937细胞G1期阻滞,其中shR-1和shR-2的G1期细胞的百分比分别为(62. 89 ± 1. 66) ％、(59. 03 ± 1. 00) ％,相对于对照组的(46. 25 ± 1. 06) ％,差异有统计学意义(P＜0. 01) .Western blot检测结果显示干扰LINC01140表达可下调U937细胞中G1期相关蛋白Cyclin E1的表达,并可升高G1期相关蛋白p21和p27的表达.结论LncRNA LINC01140在AML患者中高表达,在U937细胞中敲降LINC01140可导致细胞周期G1期阻滞,从而显著抑制细胞增殖.