CIH对仔鼠胰腺基因芯片测序及相关生物信息学的影响研究

目的 利用基因芯片测序技术筛选宫内慢性间断性缺氧(CI H)雄性仔鼠胰腺的差异表达基因(DEGs),分析相关生物信息.方法 12只怀孕SD大鼠分为正常组和缺氧组,缺氧组制作CIH模型,提取两组分娩后第12周的雄性仔鼠胰腺组织总RNA,纯度验证合格后,进行基因芯片测序:包括基因芯片DEGs筛选、GO功能分类、pathway富集分析等,并验证结果的可靠性.结果 缺氧组雄性仔鼠空腹血清胰岛素、空腹血糖、以稳态模式评估胰岛素抵抗(HOMA-IR)均高于正常组雄性仔鼠(P<0.05),差异有统计学意义.CIH后缺氧组雄性仔鼠胰腺较正常组雄性仔鼠胰腺的分子功能、细胞组分、生物学过程的分析均有改变.共检测23088个基因,表达明显上调的基因2628个、明显下调的2321个(Fold Change≥2且P≤0.05).结论 妊娠期CIH可致成年雄性仔鼠胰腺表达基因、GO功能分类、胰岛素分泌等pathway富集转录通路等的失调,成年雄性仔鼠呈现胰岛素抵抗.     

CIH对仔鼠胰腺基因芯片测序及相关生物信息学的影响研究

目的 利用基因芯片测序技术筛选宫内慢性间断性缺氧(CI H)雄性仔鼠胰腺的差异表达基因(DEGs),分析相关生物信息.方法 12只怀孕SD大鼠分为正常组和缺氧组,缺氧组制作CIH模型,提取两组分娩后第12周的雄性仔鼠胰腺组织总RNA,纯度验证合格后,进行基因芯片测序:包括基因芯片DEGs筛选、GO功能分类、pathway富集分析等,并验证结果的可靠性.结果 缺氧组雄性仔鼠空腹血清胰岛素、空腹血糖、以稳态模式评估胰岛素抵抗(HOMA-IR)均高于正常组雄性仔鼠(P<0.05),差异有统计学意义.CIH后缺氧组雄性仔鼠胰腺较正常组雄性仔鼠胰腺的分子功能、细胞组分、生物学过程的分析均有改变.共检测23088个基因,表达明显上调的基因2628个、明显下调的2321个(Fold Change≥2且P≤0.05).结论 妊娠期CIH可致成年雄性仔鼠胰腺表达基因、GO功能分类、胰岛素分泌等pathway富集转录通路等的失调,成年雄性仔鼠呈现胰岛素抵抗.     

胰腺癌组织中XAF1基因启动子区甲基化状态及XAF1蛋白的表达

目的:探讨胰腺癌组织中X染色体连锁凋亡抑制因子相关因子1(XAF1)基因启动子区甲基化状态及蛋白的表达。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)及免疫组化SP法检测胰腺癌组织(48例)、胰腺良性疾病组织(26例)和正常胰腺组织(15例)中XAF1基因启动子区甲基化状态及蛋白的表达。结果:胰腺癌、胰腺良性疾病及正常胰腺组织中,XAF1基因启动子区甲基化率分别为31.3%、7.7%和0%,XAF1蛋白的阳性表达率分别为52.1%、84.6%及88.9%,3组比较差异均有统计学意义(P=0.005;χ2=11.169,P=0.004)。XAF1基因启动子区甲基化状态及蛋白的表达均与胰腺癌的TNM分期、分化程度及淋巴结转移关系密切(P<0.05)。胰腺癌组织中XAF1基因启动子区甲基化状态与蛋白表达呈负关联(rP=-0.463,P<0.001)。结论:XAF1基因启动子区甲基化是该基因失活的重要机制之一,XAF1甲基化修饰水平在胰腺癌的发生、发展中起重要作用。     

宫内发育迟缓对大鼠肝糖异生关键酶的影响

目的：通过检测宫内发育迟缓(IUGR)仔鼠肝组织中糖异生关键酶磷酸烯醇丙酮酸羧激酶(PEPCK)和葡萄
糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的mRNA表达变化,探讨IUGR个体发生胰岛素抵抗的机制。方法：通过孕期全程给予孕鼠10%
低蛋白饲料建立IUGR仔鼠模型,对照组给予孕鼠21%正常蛋白饲料建立正常出生体质量仔鼠模型。每组仔鼠出生1
周、3周、8周时测定其体质量、空腹血糖、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数,并采用反转录-聚合酶链反应(RTPCR)
法检测仔鼠肝组织中PEPCK和G-6-Pase的mRNA表达。结果：IUGR组仔鼠出生体质量明显低于对照组(P<0.001),
1周、3周、8周时亦低于对照组(P<0.05)。各时间点IUGR仔鼠空腹血糖、血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数与对照组
无明显差异(P>0.05)。IUGR仔鼠各时间点肝组织PEPCK和G-6-Pase mRNA的表达水平均高于对照组(P<0.01)。结论：
IUGR仔鼠肝糖异生关键酶PEPCK和G-6-Pase的表达明显增高,可能增加肝糖异生,是IUGR个体发生胰岛素抵抗和糖
尿病的重要机制之一。     

胶质瘤中GDNF基因启动子Ⅱ区甲基化修饰发生变化

目的 检测胶质瘤组织中神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)基因启动子Ⅱ区甲基化修饰水平,以期探讨其与目的基因在胶质瘤组织中高转录的关系.方法 基因测序技术检测胶质瘤组织中GDNF基因启动子Ⅱ区碱基序列是否发生突变;采用BSP检测GDNF基因启动子Ⅱ区的甲基化修饰水平;通过qPCR检测胶质瘤组织中GDNF基因mRNA的表达水平.结果 胶质瘤组织中GDNF基因启动子Ⅱ区没有发生有意义的突变位点;启动子Ⅱ区总甲基化修饰率在正常组、低级别、高级别胶质瘤中分别为:25.57％,15.42％,42.19％,各组间比较均有明显差异(P＜0.05);在低级别组中增强子的甲基化水平最低,而高级别组中沉默子甲基化水平最高;qPCR结果显示胶质瘤组织中GDNF mRNA水平较正常脑组织显著升高.结论 在胶质瘤组织中,GDNF基因启动子Ⅱ区甲基化修饰水平发生显著变化,此甲基化修饰形式的变化可能参与目的基因在胶质瘤组织中的高表达机制.     

丙型肝炎病毒核心蛋白对Wnt信号抑制因子SFRPs甲基化修饰的影响

目的 探讨丙型肝炎病毒核心蛋白是否通过对Wnt信号抑制因子SFRPs的甲基化修饰,从而活化Wnt信号通路.方法 将编码HCV核心蛋白的腺病毒(AdCore)或GFP对照腺病毒(AdGFP)感染SMMC-7721细胞,采用逆转录PCR(RT-PCR)方法检测SFRPs基因mRNA的表达;用5-氮杂-2′-脱氧胞苷(DAC)对AdCore或AdGFP腺病毒感染的SMMC-7721细胞进行去甲基化处理,进一步采用甲基化特异性PCR (MSP)和DNA甲基化测序,检测SFRPs基因启动子区CpG岛的甲基化程度,Western blot检测甲基化转移酶Dnmts的表达.结果 在HCV核心蛋白过表达的SMMC-7721细胞系中,SFRP2和SFRP5基因mRNA的表达量与对照组相比明显降低(P＜0.05);甲基化分析结果表明:SFRP5基因启动子区CpG岛呈现高甲基化修饰;甲基化转移酶Dnmt1、Dnmt3a表达量增加(P＜0.05).结论 HCV核心蛋白可以促进SFRP5基因启动子区CpG岛的甲基化修饰,参与HCV相关疾病的发生.     

脂肪组织缺氧与胰岛素抵抗的相关性研究

目的:检测人脂肪组织缺氧并探讨其与胰岛素抵抗的相关性。方法:收集16名非肥胖(BMI<28 kg/m2)与18名肥胖(BMI>28 kg/m2)女性腹部脂肪组织,Real-time PCR测定缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA的表达,Western Blot检测HIF-1α蛋白的表达。检测空腹外周血血糖(FBG)和胰岛素(FINS),计算HOMA指数评估胰岛素抵抗。检测HIF-1α表达与HOMA指数的相关性。结果:与非肥胖组相比,肥胖组腹部脂肪组织HIF-1αmRNA和蛋白的表达均显著升高(P<0.028,P<0.005);且肥胖组HOMA指数显著高于非肥胖组(P<0.01);HIF-1αmRNA和蛋白表达与HOMA指数之间存在相关性(r=0.360,P<0.05;r=0.343,P<0.05)。结论:肥胖患者脂肪组织HIF-1α的表达升高并存在周身胰岛素抵抗,且两者具有相关性。     

结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化对其表达 水平的影响及其临床意义

目的:研究结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化状态对Kiss-1基因表达的影响,分析其与结直肠癌临床病理特性的关系及临床意义。方法:收集126例结直肠癌组织及其癌旁正常结直肠组织,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测Kiss-1基因启动子区甲基化状态,采用实时荧光定量 PCR和Western blotting法检测结直肠癌组织和正常结直肠组织中Kiss-1基因mRNA和蛋白的表达水平。结果：结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化阳性率（83.33%）高于癌旁正常结直肠组织（30.16%）（P<0.05）。结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化阳性组Kiss-1基因mRNA和蛋白表达水平均低于Kiss-1基因启动子甲基化阴性组（P<0.05）。结直肠癌组织中T3+T4组Kiss-1基因启动子甲基化阳性率高于T1+T2组（P<0.05）,但Kiss-1基因mRNA和蛋白表达水平低于T1+T2组（P<0.05）;
中和低分化组Kiss-1基因启动子甲基化阳性率高于高分化组（P<0.05）,Kiss-1基因mRNA表达水平低于高分化组（P<0.05）;淋巴结转移组甲基化阳性率高于无淋巴结转移组（P<0.05）,但Kiss-1基因mRNA及蛋白表达水平低于无淋巴结转移组（P<0.05）;远处转移组Kiss-1基因启
动子甲基化阳性率显著高于无远处转移组（P<0.05）,但Kiss-1基因mRNA及蛋白表达水平低于无转移组（P<0.05）。Kiss-1基因启动子甲基化阳性率与患者的性别、年龄、肿瘤部位和大小无明显关联（P>0.05）。结论：结直肠癌组织中Kiss-1基因启动子甲基化与Kiss-1基因表达
水平及结直肠癌的恶性转化特性（特别是转移）有关联,Kiss-1基因甲基化状态有望成为评估结直肠癌转移风险的重要指标。     

瘦素基因甲基化水平与妊娠期糖尿病的相关性

目的 分析妊娠期糖尿病(GDM)孕妇及糖耐量正常(NGT)孕妇瘦素及其基因启动子区甲基化的动态变化水平,以进一步探索妊娠期糖尿病发病机制.方法 采用放射免疫法检测45例(GDM组20例,NGT组25例)孕妇妊娠晚期血清瘦素水平;逆转录PCR(RT-PCR)及实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测两组孕妇胎盘组织中瘦素mRNA的表达,并进一步应用蛋白印迹法(Western blot)检测瘦素蛋白的表达.利用氧化亚硫酸盐测序法及亚硫酸盐测序法检测两组孕妇瘦素基因启动子区甲基化及羟甲基化水平.结果 GDM组孕妇妊娠晚期血清瘦素水平明显高于NGT组(P<0.05);GDM孕妇胎盘组织瘦素mRNA及瘦素蛋白表达水平高于NGT组;两组孕妇瘦素基因启动子区均发生甲基化及羟甲基化,GDM组甲基化水平高于NGT组(P<0.05);两组孕妇部分位点羟甲基化水平存在差异,但无统计学意义.结论 妊娠期糖尿病孕妇瘦素水平高于糖耐量正常孕妇.瘦素基因启动子区甲基化动态变化过程与妊娠期糖尿病的发病有一定相关性.     

刺血疗法对急性痛风性关节炎大鼠局部IL-1β、IL-10启动子甲基化的影响

目的?观察刺血疗法对急性痛风性关节炎大鼠造模关节局部白介素-1β（IL-1β）、白介素-10（IL-10）基因的相对表达及启动子区甲基化水平的影响,探讨刺血疗法治疗急性痛风性关节炎的相关表观遗传调控机制。方法?36只SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物组、刺血组。右踝关节腔注射尿酸钠建立急性痛风性关节炎大鼠模型。刺血组在右侧昆仑穴点刺放血,药物组以布洛芬灌胃治疗。评价造模关节肿胀程度,光镜下观察关节腔组织形态学改变,qPCR和焦磷酸测序检测大鼠造模关节局部软骨及其周围软组织IL-1β、IL-10的mRNA表达水平及基因启动子区甲基化水平。结果?与模型组、药物组比较,刺血组关节肿胀指数明显降低（P<0.01）。刺血疗法能减少关节腔内尿酸盐结晶沉积,抑制炎性细胞的侵润,改善关节滑膜的组织形态结构。与模型组比较,刺血组IL-1β mRNA的相对表达量明显降低（P<0.01）。但IL-1β基因启动子区甲基化水平与其mRNA表达不呈负相关。与正常组、模型组、药物组比较,刺血组IL-10 mRNA的相对表达量升高（P<0.01）,IL-10平均甲基化率降低（P<0.05~0.01）。IL-10基因启动子甲基化水平与其mRNA表达呈显著负相关(r=-0.899,P<0.01)。结论?刺血疗法通过DNA甲基化的表观遗传修饰调控IL-10基因表达可能是刺血疗法发挥抗炎效应的重要机制之一。      

胰腺癌中人RUNT相关转录因子3基因启动子区甲基化及其临床意义

目的检测胰腺癌人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因启动子的甲基化情况并探讨其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)检测56例胰腺癌组织及癌旁组织、14例正常胰腺组织、3株人胰腺癌细胞株(PANC1、CFPAC-1、SW1990)、1株正常肝细胞株(HL-7702)中RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化状态。检测用甲基化抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-cdR)处理前后胰腺癌细胞株RUNX3 mRNA的表达。分析RUNX3异常甲基化与胰腺癌临床特征的关系。结果56例胰腺癌组织中,51.79%(29/56)存在RUNX3基因启动子区CpG岛的异常甲基化,癌旁胰腺组织有10.7%(6/56)存在异常甲基化,而正常胰腺组织中未检测到RUNX3基因异常甲基化。RUNX3基因异常甲基化与患者病理分化程度(r=0.314,P=0.018)、淋巴结转移(r=0.370,P=0.005)显著相关。在5-Aza-cdR处理前,胰腺癌细胞株PANC1、CFPAC-1、SW1990的RUNX3 mRNA无表达或低表达,经5-Aza-cdR处理后各胰腺癌细胞株RUNX3 mRNA恢复表达。结论胰腺癌组织及胰腺癌细胞株均存在RUNX3基因CpG岛异常甲基化;RUNX3启动子的高甲基化与其基因表达降低有关,与胰腺癌组织分化程度、淋巴结转移相关。     

散发性结直肠癌中hMLH1基因甲基化的实验研究

[目的]检测散发性结直肠癌患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态,分析该基因甲基化与患者临床病理特征的相关性.[方法]采用重亚硫酸盐修饰测序法检测患者肿瘤组织和配对正常组织hMLH1基因甲基化状态,采用免疫组化方法检测其蛋白表达水平,并将甲基化状态与相应的蛋白表达水平及临床病理学资料进行统计学分析.[结果]正常组织的所有CpG位点均为非甲基化.肿瘤组织中CpG岛1(CGI-Ⅰ)甲基化阳性率为20%(6/30).hMLH1蛋白表达阳性率为50%(15/30).经X2检验,CGI-Ⅰ甲基化组与非甲基化组的hMLH1蛋白表达阴性率有显著性差异(P<0.05);低分化组的甲基化阳性率(100%)显著高于高中分化组(14.29%)(P<0.05).[结论]hMLH1基因启动子区CpG岛1甲基化可能导致hMLH1蛋白不表达;甲基化还与肿瘤的分化程度存在关联,提示甲基化还可作为结直肠癌预后的参考指标之一.     

PTEN甲基化及其异常表达与膀胱移行细胞癌的关系

目的探讨PTEN基因启动子甲基化及其mRNA异常表达与膀胱移行细胞癌临床及病理特征的关系。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)法检测膀胱移行细胞癌组织(48例)和正常膀胱组织(15例)PTEN基因启动子甲基化状态,应用RT-PCR技术检测其mRNA的表达水平。结果膀胱癌组织中PTEN启动子甲基化率为47.9%(23/48),而在15例正常膀胱组织中其启动子未发生甲基化,两组间差异具有统计学意义(P<0.01);PTEN基因mRNA在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别是56.2%(27/48)和100.0%(15/15),两组间差异有统计学意义(P<0.01);PTEN基因启动子甲基化率与其mRNA表达水平在不同病理分级、临床分期间差异有统计学意义(P<0.05),且PTEN启动子甲基化与其mRNA表达存在明显关联性(χ2=21.372,r=0.555,P<0.01)。结论 PTEN基因启动子甲基化可导致其mRNA表达的缺失,对膀胱移行细胞癌的发生及转移有着极其重要的影响。     

细胞衰老过程中POLD1基因表达下调的甲基化调控机制

目的 探讨人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)衰老过程中POLD1基因表达下降的甲基化调控机制。方法 按传代情况将2BS分为年轻细胞组(25PD)、衰老细胞组(55PD)。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测2BS衰老过程中POLD1 mRNA和蛋白表达水平的变化,利用亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)分析2BS衰老过程中POLD1基因启动子区甲基化状态的变化,应用甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dc)处理2BS(48PD),RT-PCR检测处理前后POLD1 mRNA表达变化,分析2BS衰老过程中POLD1基因甲基化及去甲基化对POLD1 mRNA表达的影响及二者之间的关系。结果 与年轻细胞组比较,衰老细胞组POLD1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01),POLD1启动子区甲基化水平显著增高(P<0.01),且POLD1 mRNA表达水平与其启动子区甲基化水平呈负相关(n=6,r²=0.853,P=0.009);经5-Aza-dc处理后,POLD1 mRNA表达水平增高(P<0.01)。结论 POLD1启动子区甲基化水平的改变与其增龄性表达下调存在密切关系。     

慢性间歇性低氧对大鼠肠道菌群与血糖的影响研究

目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)对大鼠肠道菌群失调与血糖变化的影响。方法 选取30只健康雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为正常对照组(NC组)、CIH 4周组(CIH4组)、CIH 8周组(CIH8组),每组10只。分析大鼠肠道菌群种类及丰度表达,检测静脉血中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)、胰岛素(INS)、空腹血糖(FBG)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),观察胰腺及肠道组织病理学改变及核因子-κB(NF-κB)表达。结果 CIH4组、CIH8组大鼠FBG、LPS、HOMA-IR、TNF-α水平均高于NC组(P<0.05),且CIH8组变化更明显(P<0.05)。CIH8组大鼠INS水平均高于NC组、CIH4组(P<0.05),但NC组与CIH4组比较差异无统计学意义(P>0.05)。CIH可导致肠道组织广泛黏膜糜烂,上皮细胞脱落,固有层广泛可见较多炎性细胞浸润;胰腺组织腺体杯状细胞消失,有的地方可见腺体脱落,残留基底组织。CIH8组大鼠胰腺和肠道组织中NF-κBp65表达高于NC组(P<0.05),其余组间比较差异均无统计学...     

慢性间歇性缺氧条件下大鼠胰岛功能与mTOR通路相关蛋白表达的变化

目的:探讨慢性间歇性低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)条件下哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)及相关通路激活对大鼠胰岛β细胞增殖的影响及可能机制?方法:24只成年雄性SD大鼠按随机数字法平均分为两组?CIH组通过低氧舱造模,低氧条件(60 S/N2,60 S/空气,交替充入,保证舱内氧气浓度在5%~21%之间波动,每天8:30~16:30,共35 d)?酶联免疫法检测两组血糖?血清胰岛素水平并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和β细胞胰岛素分泌功能(HOMA-β)?口服葡萄糖法检测两组大鼠糖耐量,免疫荧光法检测胰岛β细胞增殖情况,免疫印迹法检测胰腺组织mTOR及通路相关蛋白指标表达?结果:与对照组相比,CIH组大鼠空腹血糖?血清胰岛素水平及胰岛素抵抗指数升高(P < 0.01);葡萄糖耐量?胰岛β细胞功能降低(P < 0.05);ki67染色阳性的β细胞约增加了5倍;胰腺组织mTOR通路相关蛋白激活?结论:CIH条件下大鼠发生胰岛素抵抗?葡萄糖耐量降低?胰岛β细胞功能下降,而mTOR相关通路的激活可能在胰岛β细胞增殖中发挥作用?     

辐射诱发胸腺淋巴瘤Kras基因的表达及其启动子甲基化

目的： 研究辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤Kras基因mRNA和蛋白表达的变化,并检测其启动子CpG岛甲基化状态,探讨辐射致癌的发生机制。方法：采用X射线照射30只BALB/c小鼠,建立胸腺淋巴瘤动物模型,取胸腺淋巴瘤和正常胸腺组织,分别提取总mRNA、合成cDNA和总蛋白,采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）和Western blotting法分别检测Kras基因mRNA和蛋白表达水平,采用硫化测序PCR (BSP)法检测Kras基因启动子CpG岛甲基化状态。 结果：RT-PCR法检测,胸腺淋巴瘤Kras基因mRNA相对表达水平明显高于正常胸腺组织（P<0.01）;Western blotting法检测,胸腺淋巴瘤Kras基因蛋白表达水平高于正常胸腺组织近1.41倍;BSP法检测,正常胸腺组织Kras基因启动子有4个CpG位点发生甲基化,而辐射诱发胸腺瘤Kras基因启动子有1个CpG位点发生甲基化,呈去甲基化状态。结论：电离辐射可能通过Kras基因启动子去甲基化而引起Kras基因mRNA和蛋白表达水平改变,进而导致肿瘤的发生,其可能是辐射致癌的发生机制之一。     

大肠癌组织白细胞介素-6表达与其甲基化之间的关系

目的:检测大肠癌中白细胞介素-6(IL-6)表达及启动子甲基化状态,进一步阐明大肠癌(CRC)的发病机制。方法:实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测20例CRC癌组织及癌旁组织IL-6mRNA水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测IL-6蛋白浓度,亚硫酸氢盐测序(BSP)检测IL-6启动子甲基化状态。结果:与癌旁组织相比,癌组织中IL-6mRNA及蛋白表达均显著增高(P<0.05),并且其蛋白表达随着Dukes分期逐渐升高,差异具有显著性(P<0.05);癌组织中,IL-6启动子-633、-611、-575、-575bp位点甲基化水平均低于相应癌旁组织(P<0.05),且非甲基化概率随着Dukes分期和分化程度增加而增高(P<0.05)。结论:IL-6在大肠癌中表达增加,并与Duke分期相关,其启动子区低甲基化或去甲基化可能是其表达增高的机制之一;初步筛选出IL-6基因启动子区低甲基化位点,为后续研究奠定基础。     

肾透明细胞癌中β-环连蛋白抑制基因1启动子CpG岛甲基化与其失表达相关

目的:探讨肾透明细胞癌中β-环连蛋白抑制基因1(dapper homolog 1,antagonist of beta-catenin,Dact1)表达与其启动子CpG岛甲基化状态的关系,并探究他们之间的关系及在肾透明细胞癌发生中的作用。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)分别检测30例癌组织及相应的癌旁对照组织中Dact1基因mRNA的表达和其启动子甲基化状态。结果:癌组织组中,19例Dact1基因mRNA失表达(63%),7例表达低于癌旁对照组(23%);癌旁对照组织组中,2例Dact1基因mRNA低表达(6%)。Dactl基因在癌组织、癌旁对照组织中的甲基化阳性率分别为70%、6%,2组比较差异有统计学意义(P < O.001),Dactl基因mRNA的失表达或低表达与其启动子甲基化状态的相关性分析有统计学意义(P < 0.05)。结论:Dact1基因mRNA的失表达或低表达可能参与了肾透明细胞癌的发生发展,其失表达可能与Dactl启动子区异常甲基化相关。     

乳头状甲状腺癌TSHR基因转录表达和启动子区甲基化研究

目的观察抑癌基因促甲状腺激素受体(TSHR)在乳头状甲状腺癌(PTC组)中的表达,分析其启动子甲基化与肿瘤发生的关系。方法选择50例PTC和32例良性甲状腺肿瘤(对照组,包括20例结节性甲状腺肿,12例甲状腺腺瘤)患者,对两组患者手术获取的标本提取RNA后,反转录为cDNA,进行PCR检测TSHR基因的表达情况;运用甲基化特异性PCR(MSP)检测上述组织中TSHR基因启动子区甲基化的情况。结果PTC组患者中有34例(68%)TSHR基因启动子发生甲基化,16例(32%)TSHR基因mRNA表达缺失;对照组患者中有7例(21.9%)TSHR基因启动子发生甲基化,4例(12.5%)TSHR基因mRNA表达缺失。PTC组织TSHR基因启动子甲基化率及TSHR基因mRNA表达缺失率均显著高于对照组(χ2值分别为16.61和4.02,P<0.05)。34例发生了TSHR基因启动子甲基化的PTC患者中,有14例(41.2%)TSHR mRNA表达缺失;16例未发生甲基化的PTC患者中,2例(12.5%)发生了mRNA表达缺失,二者mRNA表达缺失率差异有统计学意义(χ2=4.11,P<0.05)。TSHR基因mRNA在...