高糖诱导人脐静脉内皮细胞fractalkine表达及其凋亡的研究

目的探讨高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)fractalkine(FKN)表达与细胞凋亡的可能机制。方法对数生长期的HUVECs,分为正常组(N)、高糖组(HG)、氯化锂(lithium chloride,LiCl)组(LiCl)、高糖+LiCl组(HG+LiCl)。5.5 mmol/L的低糖DMEM培养的HUVECs种板10 h后按以上分组加入10 mmol/L的LiCl预处理2 h,再用33.3 mmol/L的高糖干预48 h后,用TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化SABC法检测β-catenin及p-GSK-3β(Ser9),免疫荧光FITC法检测FKN蛋白水平变化,RT-PCR检测GSK-3β和FKN mRNA水平变化。结果①与正常组比较,高糖诱导的HUVECs凋亡率明显增加(P<0.05)。与高糖组比较,LiCl可明显降低高糖环境下HUVECs的凋亡率(P<0.05),但仍高于正常组(P<0.05)。②与正常组比较,高糖组HUVECsβ-catenin及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达降低(P<0.05);GSK-3βmRNA水平及FKN蛋白和mRNA水平升高(P<0.05)。③与高糖组比较,LiCl+高糖组HUVECsβ-catenin及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达升高(P<0.05),GSK-3βmRNA水平(P<0.05)及FKN蛋白和mRNA(P<0.05)水平降低。结论高糖诱导的HUVECs凋亡可能与Wnt信号通路抑制和抑制FKN表达上调有关。     

二氢杨梅素激活磷酸腺苷活化蛋白激酶抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡

目的 探讨二氢杨梅素对高糖诱导血管内皮细胞凋亡的影响及其与磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的关系.方法 体外培养原代人脐带静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),分为正常对照组(5.56 mmoL/L葡萄糖)、高糖处理组(33.36 mmol/L葡萄糖)、甘露醇高渗对照组(5.56 mmol/L葡萄糖+27.8 mmol/L甘露醇)、AMPK激动剂5-氨基咪唑4-甲酰胺-1-β-D-呋喃核糖苷(5-Aminoimidazole-4-carboxamide-1-β-D-ribofuranoside,AICAR)(10 nmol/L)+高糖处理组、二氢杨梅素(1μmol/L)+高糖处理组、AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L) +AICAR+高糖处理组和AMPK抑制剂compound C(5 mmol/L)+二氢杨梅素+高糖处理组.处理36 h后,CCK-8法检测细胞增殖活力,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测AMPK、p-AMPK、乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl-CoA carboxylase,ACC)和p-ACC蛋白水平.结果 与正常对照组比较,高糖处理组细胞活力明显降低(P＜0.05),细胞凋亡率显著增加(P＜0.05),p-AMPK、p-ACC水平显著降低(P＜0.05);二氢杨梅素或AICAR预处理均明显抑制高糖诱导的HUVECs细胞活力下降、细胞凋亡增加和p-AMPK、p-ACC水平降低(P＜0.05);Compound C预处理明显抑制AICAR和二氢杨梅素对高糖诱导HUVECs细胞凋亡的保护作用(P＜0.05).结论 二氢杨梅素通过促进AMPK活化抑制高糖诱导的血管内皮细胞凋亡.     

KLF9沉默对高糖刺激诱导的内皮细胞损伤的影响

目的:探讨Krüppel样因子9(KLF9)对高糖刺激下内皮细胞损伤的影响。方法:人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为4组,空白对照组不处理,其他3组分别给予高糖(33.5 mmol/L葡萄糖)刺激12、24、48 h,采用qRT-PCR检测细胞中KLF9 mRNA表达水平。另取HUVEC分为3组,ScRNA组(转染空载体ScRNA12 h后用5.5 mmol/L葡萄糖处理48 h)、HG-ScRNA组(转染空载体12 h后用33.5 mmol/L葡萄糖处理48 h)和HG-KLF9 siRNA组(转染KLF9 siRNA 12 h后用33.5 mmol/L葡萄糖处理48 h),采用CCK-8法检测各组细胞活力,TUNEL染色检测细胞凋亡,ELISA法检测细胞中炎症因子水平,氧化应激因子检测试剂盒检测细胞氧化应激水平,免疫荧光染色检测NF-E2相关因子2(NRF2)表达及核转位水平。结果:与空白对照组相比,高糖刺激24、48 h后细胞中KLF9 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与ScRNA组相比,HG-ScRNA组细胞中炎症因子(TNF-α、IL-1和IL-6)水平增高,细胞...     

高糖对小鼠足细胞(原)肾素受体表达的影响

目的 体外观察高糖刺激肾小球足细胞后(原)肾素受体(prorenin receptor,PRR)的表达变化,及PRR对足细胞凋亡的影响.方法 条件永生性小鼠足细胞用35mmol/L高糖刺激不同时间(0、1、3、6、12h),用不同浓度葡萄糖[35mmol/L甘露醇对照组、正常对照组(含5mmol/L葡萄糖)、10、20、35mmol/L组]刺激3h,Western blot及real-time PCR技术检测PRR的蛋白和mRNA表达;再将细胞分为35mmol/L高糖组、PRR的多肽阻断剂柄区肽(handle region peptide,HRP)(10-6mol/L)预处理组、氯沙坦(10-6mol/L)预处理组、HRP+氯沙坦预处理组,流式细胞仪法检测足细胞凋亡率.结果 (1)35mmol/L高糖刺激3、6、12h细胞PRR蛋白及mRNA表达较正常对照细胞显著上调(P＜0.05).(2)20mmol/L与35mmol/L浓度葡萄糖刺激足细胞PRR蛋白及mRNA表达较正常对照和甘露醇刺激细胞显著升高(P＜0.05).(3)氯沙坦、HRP及HRP+氯沙坦预处理细胞凋亡率较35mmol/L高糖刺激细胞显著降低(P＜0.05),HRP+氯沙坦预处理细胞凋亡率较氯沙坦预处理细胞降低(P＜0.05).结论 高糖刺激足细胞可通过上调PRR导致足细胞凋亡.     

线粒体生物合成的改变对高糖诱导的活性氧类生成的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖激活受体γ辅助激活因子1α(PGC-1α)对血管内皮细胞内线粒体生物合成的影响,明确线粒体的生物合成对葡萄糖诱导的活性氧类(ROS)生成的影响。方法将原代培养的人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)及小牛主动脉内皮细胞(BAECs)分成四大组,并分别将四组细胞模拟人体正常糖及高糖环境,浓度为5、30 mmol/L进行培养,测量细胞内ROS浓度。结果对BAECs和HUVECs分别进行协方差分析结果显示,在两种细胞中,不同组别之间差异均有统计学意义(P<0.01),不同糖水平对ROS浓度有影响(P<0.05);对BAECs单独进行分析发现,PGC-1α抑制表达组的ROS浓度在正常糖水平下显著低于对照组及空质粒组(P<0.01),高糖水平下也低于对照组及空质粒组(P<0.05);PGC-1α过度表达组的ROS浓度正常糖水平显著高于对照组(P<0.01),与空质粒组相比差异无统计学意义(P>0.05);对HUVECs分析发现,PGC-1α抑制表达组ROS浓度在正常糖水平和高糖水平下均低于空病毒Ad组和对照组(P<0.01);PGC-1αsiRNA转染组的ROS浓度正常糖水平显著高于对照组(P<0.01),与空质粒组差异无统计学意义(P>0.05)。结论高糖组较正常糖组血管内皮细胞产生更多ROS,过度表达PGC-1α后,细胞内ROS浓度显著降低;反之,ROS浓度显著升高。     

红景天苷对高糖条件下血管内皮细胞凋亡和氧化应激的调节作用

目的:研究红景天苷对高糖条件下血管内皮细胞凋亡和氧化应激的调节作用.方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)后分组处理,对照组用低糖培养基(5.5mmol/L葡萄糖)处理,高糖组用高糖培养基(33mmol/L葡萄糖)处理,红景天苷组用含有10μg/ml红景天苷的高糖培养基处理.处理24h后,检测细胞凋亡率、凋亡及氧化...     

吡格列酮对内皮细胞功能影响及其机制的体外研究

目的了解吡格列酮(PIO)对内皮细胞(EC)功能指标的影响及其可能的作用机理。方法体外原代培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分别加入5.5mmol/L葡萄糖(对照组)、30mmol/L葡萄糖(高糖组)以及30mmol/L葡萄糖 PIO(10-9mol/L、10-7mol/L、10-5mol/L)(PIO 高糖组),检测各组内皮细胞一氧化氮(NO)和可溶性细胞间粘附分子-1(sICAM-1)及细胞凋亡率,用激光共聚焦显微镜及Westernblotting杂交分别观察PKCα、PKCδ的位置变化及蛋白表达。结果高糖可诱导EC凋亡增加,NO浓度降低,sICAM-1水平增加;PIO可抑制高糖诱导的上述变化;PIO可抑制高糖诱导的HUVECs的PKCα由胞浆向胞核转移,并抑制PKCδ在高糖作用下由胞核向胞浆及胞膜转移;PIO可抑制高糖诱导的HUVECsPKCδ表达增强的作用,而高糖作用对HUVECs的PKCα表达影响不明显。结论PIO可纠正高糖诱导的EC功能异常,其保护作用可能部分是通过抑制PKCα及PKCδ的激活来实现。     

PGC-1 对血管内皮细胞内线粒体生物合成的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体辅激活因子1α(PGC-1α)对血管内皮细胞线粒体生物合成的影响.方法 将原代培养的人脐带静脉内皮细胞(HUVECs)及小牛主动脉内皮细胞(BAECs)分成4大组,分别为对照组、空质粒组(pcDNA3.1/V5-His-TOPO)或空病毒Ad组、pcDNA3.1/V5-His-TOPO-PGC-1转染组或d-PGC-1α感染组,以及PGC-1αsiRNA转染组.并分别将四组细胞置于正常糖(5 mmol/L)及高精(30 mmol/L)环境中进行培养.裂解细胞,提取细胞总DNA,应用Southern blot以细胞色素b cDNA为探针检测线粒体DNA拷贝数.结果 与对照组、空质粒组或空病毒组对比,通过质粒转染或腺病毒感染过渡表达PGC-1α,Southem blot显示高糖及正常糖环境下的血管内皮细胞内总DNA中细胞色素b的拷贝数增多,表明细胞内线粒体的生物合成增加,应用小分子干扰RNA转染技术抑制细胞内PGC-1α蛋白的表达,Southern blot显示高糖及正常糖环境下的血管内皮细胞内总DNA中细胞色素b的拷贝数增多,表明细胞内线粒体的生物合成减少.结论 血管内皮细胞内过度表达PGC-1α可以显著促进线粒体生物合成,抑制血管内皮细胞内PGC-1α的表达,线粒体生物合成显著降低.     

高糖刺激血管平滑肌细胞表达cbfα-1和OC的实验研究

目的 研究高糖在刺激大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)转分化过程中对相关骨基质蛋白如核心结合因子α-1(cbfα-1)和骨钙索(OC)表达的影响,并探讨高糖在诱导血管钙化发生过程中可能的作用机制.方法 原代培养VSMC,分为正常糖浓度组(5 mmol/L D-葡萄塘)、高糖组(25 mmol/L D-葡萄糖)和甘露醇组(5mmol/L D-葡萄糖+25 mmol/L甘露醇),在不同时间点检测各组VSMC的钙沉积指标;茜素红染色了解各组VSMC钙化程度;实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测各组cbfα-1和OC的mRMA水平和蛋白表达变化;碱性磷酸酶活性检测试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)的活性.免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平.结果 与正常糖浓度和甘露醇对照组相比较,高糖组VSMC钙沉积和钙化染色均明显增强,cbfα-1和OC的mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05),α-SMA蛋白表达下降(P<0.05),均呈时间依赖性.高糖刺激后VSMC的ALP的活性比对照组增加了近2倍.结论 高糖介导的平滑肌细胞钙化可能与高糖促进VSMC分泌骨基质蛋白cbfα-1和OC水平增加有关;高糖在促进VSMC钙化同时,使VSMC的α-SMA表达水平降低,促进其向成骨样细胞转分化.     

糖原合酶激酶-3β与内质网应激相互作用参与高糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤

目的糖原合酶激酶-3β（GSK-3β）与内质网应激（ERS）相互作用是否参与高糖引起的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损 伤。方法应用40 mmol/L葡萄糖作用HUVECs 24 h构建高糖血管内皮细胞损伤模型。应用Western blot法检测GSK-3β、糖调 节蛋白78（GRP78）、CHOP和cleaved caspase-3蛋白的表达水平;CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜 照相法测定细胞凋亡;DCFH-DA染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧（ROS）水平;罗丹明123（Rh123）染色荧光显微镜照相 法测定线粒体膜电位（MMP）。结果应用40 mmol/L葡萄糖处理HUVECs 3~24 h,磷酸化（p）-GSK-3β表达减少,与Con组比 较,差异具有统计学意义（P<0.05）;用高糖处理HUVECs 1~24 h,对促进GRP78 和CHOP蛋白表达呈显著的时间依赖性,与 Con 组比较,差异具有统计学意义（P<0.05）;氯化锂（LiCl,GSK-3β抑制剂）能减轻高糖引起的ERS,使GRP78 和CHOP蛋白 表达减少,与高糖组比较,差异具有统计学意义（P<0.01）;4-苯基丁酸（4-PBA,ERS抑制剂）减弱高糖对GSK-3β的激活作用, 使p-GSK-3β表达增多,与高糖组比较,差异具有统计学意义（P<0.01）。高糖处理HUVECs 24 h能引起细胞存活率降低、凋亡细 胞、cleaved caspase-3表达和ROS生成增多及MMP丢失等损伤;在高糖作用前,应用LiCl或4-PBA预处理60 min均减轻高糖引 起的上述损伤,与高糖组分别比较,差异均具有统计学意义（P<0.01）。结论在高糖损伤的HUVECs,存在GSK-3β与ERS的相 互作用并参与高糖对HUVECs的损伤。     

小檗碱对高糖诱导血管内皮细胞损伤中蛋白O-GlcNAc修饰和氧化应激的影响

目的观察小檗碱(BBR)对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤中蛋白O-GlcNAc修饰和氧化应激的影响及机制。方法将4～8代的HUVECs分为正常组、高糖组、高糖+腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C(CC)组、高糖+BBR组、高糖+CC+BBR组。通过Western blot法检测AMPK总蛋白、磷酸化蛋白和OGlcNAc蛋白变化,采用DHE和JC-1染色分别检测细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位变化。结果高糖刺激显著降低细胞AMPK蛋白磷酸化水平和线粒体膜电位,增加O-GlcNAc蛋白和ROS水平,差异有统计学意义(P0.05)。BBR能够增加细胞AMPK蛋白磷酸化水平和线粒体膜电位,降低O-GlcNAc蛋白和ROS水平,差异有统计学意义(P0.05)。CC能够显著抑制AMPK蛋白磷酸化水平,减弱BBR对高糖刺激下HUVECs降低O-GlcNAc蛋白和ROS水平和升高线粒体膜电位的保护作用。结论 BBR可能通过AMPK信号通路实现降低高糖刺激下HUVECs的蛋白O-GlcNAc修饰水平及氧化应激而发挥血管保护作用。     

高压氧联合血红蛋白对高糖引起的血管内皮细胞损伤的作用

摘要:目的 探究高压氧(HBO)联合血红蛋白(Hb)对高糖诱导的血管内皮细胞活力、侵袭、迁移及小管形成能力的 影响及其调控机制。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),CCK-8法检测不同剂量血红蛋白(2、4、6、8、10 μmol/L)和高压氧(0.10、0.15、0.20、0.25Mpa)对 HUVECs细胞活力的影响。建立高糖诱导的 HUVECs细胞模型,分 为6组:对照组(5.5mmol/L葡萄糖处理48h),甘露醇组(27.5mmol/L甘露醇处理48h),高糖组(33mmol/L葡萄糖 处理48h),高糖+0.25Mpa高压氧组,高糖+6μmol/L血红蛋白组,高糖+0.25Mpa高压氧+6μmol/L血红蛋白组。 通过 CCK-8法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测 LDH 水平;TUNEL 染色观察细胞凋亡情况;免疫印迹 (Westernblot)法检测凋亡相关蛋白表达;划痕实验和 Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;小管形成实验检测 血管生成;最后通过 Westernblot检测核因子 E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶1(HO-1)蛋白表达。结果 随着血 红蛋白或高压氧剂量的不断增加,HUVECs细胞活力未发生显著变化。与对照组相比,高糖组 HUVECs细胞活力、迁 移、侵袭和 小 管 形 成 能 力 下 降,LDH 水 平 升 高,凋 亡 率 增 加,且 Bcl-2、Nrf2 和 HO-1 蛋 白 表 达 减 少,Bax 和 cleaved Caspase-3蛋白表达增加。与高糖组相比,高糖+0.25Mpa高压氧组和高糖+6μmol/L血红蛋白组细胞活力、迁移、侵 袭和小管形成能力升高,LDH 水平降低,凋亡率下降,且 Bcl-2、Nrf2和 HO-1蛋白表达增加,Bax和cleavedCaspase-3蛋 白表达减少;而高压氧和血红蛋白两者联合作用时,影响更为显著。结论 高压氧联合血红蛋白促进高糖作用下 HUVECs的细胞活力、侵袭、迁移及小管形成能力并抑制细胞凋亡,其机制可能与激活 Nrf2/HO-1通路有关。     

Effect of high glucose concentration on expression of toll-like receptor-2 in ARPE-19cells

目的 观察高糖对体外培养的ARPE-19细胞Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)表达的影响及机制.方法 各组ARPE-19(RPE细胞系)细胞分别刺激48 h,正常糖浓度组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、中度高糖组(15.5 mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(25.5 mmol/L D-葡萄糖)、PKC-α抑制剂组(25.5 mmol/L D-葡萄糖加10 mmol/L Go6976 PKC-o抑制剂)、高渗对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖加20 mmol/L甘露醇).Western blot检测各组ARPE-19细胞TLR2蛋白表达水平,以及PKC-α蛋白胞浆向胞膜的转位情况;Real-time PCR分析各组ARPE - 19细胞TLR2的mRNA表达水平.结果 与正常糖浓度组相比,高糖组和中度高糖组TLR2的mRNA和蛋白表达,以及PKC-α转位均增加(P＜0.05),并且高糖组高于中度高糖组(P＜0.05).与高糖组比较,PKC-α抑制剂组的TLR2蛋白表达降低(P＜0.05),PKC-α蛋白转位显著降低(P＜0.01).结论 高糖可以上调ARPE-19细胞TLR2的mRNA和蛋白表达,刺激PKC-α转位;高糖可能是通过PKC-α通路上调ARPE-19细胞TLR2表达.     

高糖对视网膜色素上皮细胞Toll样受体2表达的影响

目的观察高糖对体外培养的ARPE-19细胞Toll样受体2(toll-like receptor 2,TLR2)表达的影响及机制。方法各组ARPE-19(RPE细胞系)细胞分别刺激48 h,正常糖浓度组(5.5 mmol/L D-葡萄糖)、中度高糖组(15.5 mmol/LD-葡萄糖)、高糖组(25.5 mmol/L D-葡萄糖)、PKC-α抑制剂组(25.5 mmol/L D-葡萄糖加10 mmol/L Go6976 PKC-α抑制剂)、高渗对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖加20 mmol/L甘露醇)。Western blot检测各组ARPE-19细胞TLR2蛋白表达水平,以及PKC-α蛋白胞浆向胞膜的转位情况;Real-time PCR分析各组ARPE-19细胞TLR2的mRNA表达水平。结果与正常糖浓度组相比,高糖组和中度高糖组TLR2的mRNA和蛋白表达,以及PKC-α转位均增加(P<0.05),并且高糖组高于中度高糖组(P<0.05)。与高糖组比较,PKC-α抑制剂组的TLR2蛋白表达降低(P<0.05),PKC-α蛋白转位显著降低(P<0.01)。结论高糖可以上调ARPE-19细胞TLR2的mRNA和蛋白表达,刺激PKC-α转位;高糖可能是通过PKC-α通路上调ARPE-19细胞TLR2表达。     

外源性硫化氢通过调控瘦素/瘦素受体通路抑制高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的探讨外源性硫化氢（H2S）能否通过调控瘦素/瘦素受体（LEPR）通路抑制高糖引起的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损 伤。方法CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst 33258核染色荧光显微镜照相检测凋亡细胞的形态学和数量改变;双氯荧光素 （DCFH-DA）染色荧光显微镜照相法检测细胞内活性氧（ROS）水平;罗丹明123（Rh123）染色荧光显微镜照相法检测线粒体 膜电位（MMP）水平;Western blotting法测定瘦素及瘦素受体蛋白的表达水平。结果应用40 mmol/L葡萄糖处理HUVECs 3~ 24 h可以明显上调瘦素、瘦素受体的表达水平,在高糖处理9 h时瘦素、瘦素受体的表达水平达到峰值;在高糖处理HUVECs前, 400 μmol/L 硫氢化钠（NaHS,为H2S 的供体）预处理30 min 能明显抑制高糖对瘦素及瘦素受体表达的上调作用;400 μmol/L NaHS预处理HUVECs 30 min、50 ng/mL瘦素拮抗剂（LA）预处理HUVECs 1 h均可明显抑制高糖引起的HUVECs损伤,使细胞 存活率升高,细胞凋亡数量减少,胞内活性氧（ROS）堆积及MMP降低（P<0.01）。结论外源性H2S通过抑制瘦素/瘦素受体通 路对抗高糖引起的HUVECs损伤。     

阿托伐他汀对同型半胱氨酸作用下人脐静脉内皮细胞Bcl-2启动子区甲基化水平的影响及其抗动脉粥样硬化机制

目的：探讨阿托伐他汀对同型半胱氨酸（Hcy）作用下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)Bcl-2基因启动子区甲基化水平及其表达的影响,阐明阿托伐他汀抗动脉粥样硬化(AS)的可能机制。方法：HUVECs分别采用含有0、2、4、8、16和32  mmol/L Hcy的RPMI 1640培养液作用48 h,采用MTT实验检测细胞增殖抑制率及半数抑制浓度(IC50),根据IC50结果将本实验分为对照组(0 mmol/L Hcy)、Hcy组(9.00 mmol/L Hcy)、阿托伐他汀组(9.00 mmol/L Hcy＋1×10-3 mmol/L阿托伐他汀)。各组细胞培养48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光定量PCR法检测Bcl-2 基因的mRNA表达,Western blotting 法检测Bcl-2蛋白表达水平,甲基化特异性PCR(MSP)联合巢式降落式PCR法检测Bcl-2启动子区甲基化水平。结果：与对照组比较,Hcy组细胞凋亡率上升(P<0.01), Bcl-2基因mRNA及蛋白表达水平下降（P<0.01）,Bcl-2基因启动子区甲基化水平降低（P<0.01）;与Hcy组比较,阿托伐他汀组内皮细胞凋亡率下降(P<0.01), Bcl-2基因mRNA及蛋白表达水平增加（P<0.05）,Bcl-2基因启动子区甲基化水平升高(P<0.05)。结论：阿托伐他汀可通过调节Hcy作用下的HUVECs Bcl-2基因甲基化水平抑制细胞凋亡。     

胰高血糖素样肽-1对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及相关机制

目的：探讨胰高血糖素样肽-1（glucagon—like peptide-1,GLP—1）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞huma numbilica lvein endothelial cells,HUVECs）凋亡的影响及相关机制。方法：HUVECs加入不同处理因素后分组,分别培养48h后,MTT检测细胞活力;流式细胞仪检测细胞早期凋亡率;Westernl印迹测定细胞P-Akt,p-eNOS水平;NO试剂盒检测NO浓度。结果：高糖（33mmol／L）培养48h后HUVECs细胞活力下降p〈0．05）,细胞凋亡率增加（p〈0．01）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均下降（P〈0．05）;高糖条件下加人GLP．1（3nmol／L）培养48h,与高糖组相比较,HUVECs细胞活力增加（P〈0．01）,细胞凋亡率减少（p〈O．05）,细胞p-Akt,p-eNOS,NO水平均增／JH（V〈0．05）;P13K抑制剂wortmannine（100nmol／L）可以阻断GLP-1的抗凋亡作用及其对P—Akt蛋白、p-eNOS蛋白及NO水平的影响;eNOS抑制剂L—NAME（100umol／L）仅能阻断GLP-1的抗凋亡作用及对NO水平的影响,不影响p-Akt蛋白的表达。结论：GLP．1可改善高糖诱导的HUVECs凋亡,该抗凋亡作用可能与P13K／Akt／eNOS通路的上调相关。     

IL-35在2型糖尿病合并颈动脉粥样硬化病变中的作用

目的: 探讨IL 35在2型糖尿病（T2DM）合并颈动脉粥样硬化（carotid atherosclerosis,CAS）病变中的作用。方法: 选取70例T2DM患者,其中单纯T2DM 36例,T2DM合并CAS 34例,同时选择年龄、体重指数（BMI）、性别匹配的健康人群35例作为对照组。实时定量PCR检测人外周血单个核细胞（PBMCs）P35 mRNA和EBI3 mRNA表达水平;通过液相芯片仪检测各组患者血清IL 35及可溶性血管细胞黏附分子1（sVCAM 1）浓度。体外建立高糖刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs）模型,设低糖处理组（5 mmol/L葡萄糖）、高糖处理组（25 mmol/L葡萄糖）、甘露醇组（25 mmol/L甘露醇）、IL 35+高糖组(50 ng/mL IL 35+25 mmol/L葡萄糖),流式细胞仪检测各组HUVECs凋亡率和VCAM 1阳性率。结果： 与对照组\[9.37（3.72~14.55）ng/mL\]相比,单纯T2DM组\[5.01（2.37~9.87）ng/mL\]和T2DM合并CAS组\[3.92（2.15~6.36）ng/mL\]患者血清IL 35浓度明显降低,且T2DM合并CAS组降低更明显（P<0.05）;与对照组\[687.4（664.2~832.6）\]相比,单纯T2DM组\[785.2（754.5~938.1）\]及T2DM合并CAS患者\[932.4（892.6~1 028.3）\]血清sVCAM 1浓度明显升高,且T2DM合并CAS患者sVCAM 1浓度升高更显著。与对照组相比,单纯T2DM组和T2DM合并CAS组外周血PBMCs 中P35 mRNA表达明显下降（P<0.05）。体外培养HUVECs后,高糖组刺激24 h及48 h后HUVECs凋亡率比低糖组明显增加（P<0.05）,IL 35+高糖组刺激48 h后HUVECs凋亡率比高糖组明显降低（P<0.05）;高糖组刺激48 h后HUVECs VCAM 1阳性率比低糖组明显升高（P<0.05）,IL 35+高糖组HUVECs VCAM 1阳性率比高糖组明显下降（P<0.05）。 结论： 体内外实验证实IL 35在高血糖相关的内皮细胞损伤中可能发挥保护作用。     

Vaspin通过Nrf2/ARE信号通路对高糖高脂诱导的INS-1细胞氧化应激的影响

目的:探讨Vaspin对高糖高脂诱导的INS-1细胞氧化应激的影响。方法:培养INS-1细胞,分为正常对照组(NC组)、高糖高脂组(HG+PA组)、高糖高脂+80 ng/mL Vaspin组(HG+PA+V1组)、高糖高脂+160 ng/mL Vaspin组(HG+PA+V2组)、高糖高脂+320 ng/mL Vaspin组(HG+PA+V3组)、高糖高脂+640 ng/mL Vaspin组(HG+PA+V4组)。通过DCFH-DA荧光探针染色法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;比色法、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测氧化应激相关指标;葡萄糖(3.3 mmol/L和16.7 mmol/L)刺激胰岛素分泌实验检测各组胰岛素分泌水平;流式细胞仪检测细胞凋亡水平;Western blot检测核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)蛋白表达水平。结果:①与HG+PA组相比,HG+PA+V4组中低糖和高...     

下调Drp1对高糖条件下肾小管上皮细胞凋亡、氧化应激及炎症因子表达的影响

目的:探讨下调线粒体动力相关蛋白1(Drp1)对高糖条件下肾小管上皮细胞凋亡、氧化应激及炎症反应的影响.方法:肾小管上皮细胞HK-2分为正常对照组和高糖组(给予30.0 mmol/L葡萄糖),采用Real-time PCR和Western blot法检测细胞中Drp1的表达.另取HK-2细胞分为正常对照组、高糖组、Lv...