蛋白激酶C- 核因子相关因子2 调节大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶-1 的表达

目的：探讨蛋白激酶C(PKC)- 红系衍生的核因子相关因子2 (Nrf2) 对香烟烟雾提取物(CSE) 诱导 的大鼠气道上皮细胞血红素加氧酶-1(HO-1) 表达的影响。方法：将25 只SD 大鼠的气道上皮细胞随机分为对 照组、CSE3h 组、RO318220(PKC 抑制剂) 组、Nrf2 siRNA 组和Nrf2 siRNA+RO318220 组,每组5 只。对照组 用DMEM/F12 正常培养,CSE3h 组用10% CSE 共培养3 h;RO318220 组则用3 mol/L RO318220 预处理0.5 h,余处理同CSE3h 组;Nrf2 siRNA 组先用Nrf2 siRNA 预处理,余处理同CSE3h 组;Nrf2 siRNA+RO318220 组则先用3 mol/L RO318220 和Nrf2 siRNA 预处理,余处理同CSE3h 组。用Western 印迹法分别检测HO-1, Nrf2 和PKC 蛋白表达,细胞免疫化学法观察HO-1 蛋白表达,反转录- 聚合酶链反应(RT-PCR) 法检测HO-1 mRNA 表达,免疫荧光法观察Nrf2 核转位,测定HO-1 活性。结果：CSE 明显诱导Nrf2 核转位,其诱导作 用可被RO318220 阻断。HO-1 蛋白在CSE3h 组强阳性表达,在对照组、RO318220 组、Nrf2 siRNA 组和Nrf2 siRNA+RO318220 组均弱阳性表达。CSE3h 组PKC 蛋白、HO-1 mRNA 和蛋白表达较对照组显著升高,HO-1 活性较对照组明显增强(P<0.05)。PKC 蛋白表达水平在Nrf2 siRNA 组和CSE3h 组无明显差异(P>0.05)。结论： CSE 通过PKC 信号通路诱导Nrf2 核转位,上调HO-1 的表达水平。     

红霉素抑制烟草烟雾提取物诱导人巨噬细胞炎症及其机制的研究

目的:初步探讨红霉素(EM)对烟草烟雾提取物(CSE)诱导的人巨噬细胞炎症的抑制作用及其可能机制.方法:将体外培养的人单核细胞U937用佛波脂(PMA)诱导分化为人巨噬细胞.CCK-8法检测不同浓度、不同时间CSE及EM对细胞活性的影响.细胞分为对照组、CSE组(1％CSE刺激24 h或48 h)、CSE+EM组(1 ...     

甲基强的松龙对香烟烟雾提取物诱导A549细胞I-κBα的影响

目的:观察香烟烟雾提取(CSE)诱导人类肺泡Ⅱ型上皮细胞A549后I-κBα的变化及甲基强的松龙(Mp)对其的影响.方法:体外培养A549细胞系,根据条件不同将其分为3组:(1)对照组:无血清DMEM处理.(2)CSE组:10%浓度CSE处理 .(3)CSE+Mp组:CSE刺激后加入0.015%甲基强的松龙处理.于不同时间段收集各组细胞裂解物后,应用免疫印迹法(Western blot)、酶联免疫法(ELISA)观察I-κBα的变化.结果: 对照组无变化,CSE组I-κBα从处理后15 min开始后减少,30 min后消失,CSE+Mp组I-κBα在15～30 min内始终有本底表达,3组间I-κBα蛋白的表达水平差异有统计学意义(P＜0.01).结论:甲基强的松龙能使CSE刺激后A549细胞I-κBα蛋白表达增加.     

转位蛋白配体XBD173对香烟烟雾提取物诱导小鼠肺炎症反应的减轻作用及其机制

目的：探讨转位蛋白(TSPO)配体XBD173对香烟烟雾提取物(CSE)诱导小鼠肺炎症反应和巨噬细胞M1型极化的影响,阐明其相关分子机制。方法：18只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、CSE组和CSE+XBD173组,CSE组小鼠采取20μL CSE滴鼻,CSE+XBD173组小鼠给予相同剂量CSE和腹腔注射10 mg·kg^-1 XBD173。采用HE染色和PAS染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现。培养小鼠RAW264.7巨噬细胞,分为对照组、CSE组和CSE+XBD173组,CSE给药浓度为1%,XBD173给药浓度为4 mg·L^-1,对照组给予相同体积的二甲基亚砜;刺激18 h后,流式细胞术检测各组RAW264.7细胞中CD80、CD86、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)和活性氧(ROS)表达水平及细胞凋亡率,Western blotting法检测各组RAW264.7细胞中核因子κB/p65 (NF-κB/p65)和磷酸化NF-κB/p65 (p-NF-κB/p65)蛋白表达水平。采用siRNA敲低RAW264.7细胞中TSPO表...     

转录因子Klf2和Nrf2/Bach1调控γ-谷氨酰半胱氨酸合酶在气道上皮细胞中的作用

目的通过研究锌指Krüppel样转录因子2（Klf2）及红系衍生核因子相关因子2（Nrf2）/BTB-CNC异体同源体1（Bach1）在经香烟烟雾提取物（CSE）刺激的大鼠气道上皮细胞中的表达,了解其感受氧化应激对靶基因γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）的调控作用。方法采用酶消化法提取大鼠原代气管-支气管上皮细胞,并用10%CSE干预细胞6 h,收集细胞,双酶法检测γ-GCS活性;通过免疫细胞化学法观察Nrf2/Bach1的核转位;采用Western blot和RT-PCR技术研究细胞中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS的蛋白及mRNA表达。结果大鼠气管-支气管上皮细胞经CSE诱导后其γ-GCS活性明显增高。免疫细胞化学结果显示Nrf2经CSE刺激后出现由核外向核内的转位,Bach1经CSE刺激后出现由核内向核外的转位。Western blot结果显示CSE处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS蛋白水平较对照组显著升高（P〈0.05）;RT-PCR结果显示CSE处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS mRNA水平较对照组显著升高（P〈0.05）。直线相关分析表明γ-GCS蛋白表达与Klf2、Nrf2、Bach1呈正相关（P〈0.05）。结论 CSE可能通过转录因子Klf2、Nrf2、Bach1调节γ-GCS的表达。     

Nrf2调控PI3K/Akt信号通路促进肺腺癌进展的机制研究

目的 探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B(Akt)信号通路促进肺腺癌进展的可能机制。方法 收集2020年10月至2021年10月在徐州医科大学附属医院住院并接受手术治疗的30例肺腺癌患者的癌组织及癌旁组织标本，通过RT-qPCR法、免疫组化法、Western blot法检测Nrf2在肺腺癌组织与癌旁组织中的表达情况；体外培养A549肺腺癌细胞株，转染Nrf2的小干扰RNA(siRNA)沉默片段与过表达质粒后随机分为Nrf2沉默表达组（si-Nrf2组）、沉默表达阴性对照组（si-NC组）、Nrf2过表达组（vector-Nrf2组）和过表达阴性对照组（vector组），通过EdU染色、Transwell实验检测Nrf2对肺腺癌细胞增殖、迁移能力的影响，并通过Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白的表达水平，探讨Nrf2对PI3K/Akt信号通路的调控作用。结果 肺腺癌组织中Nrf2 mRNA、蛋白表达水平均高于癌旁组织（均P<0.05）。Nrf2沉默显著抑制A549细胞增殖和迁移能力（均P<0.05）,Nrf2过表达则...     

软脂酸对人脐静脉内皮细胞PI3K/Akt表达的影响及六味地黄丸的干预作用

目的：研究软脂酸（palmitic acid,PA）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）PI3K/Akt表达的影响及六味地黄丸（liuweidihuang pill,LWDHP）含药血清的干预效应。方法：首先制备LWDHP含药血清,然后将培养的HUVEC作为研究对象,分为正常对照组,模型组,5% LWDHP含药血清治疗组,二甲双胍（metformin,MET）组,药物处理后采用RT-PCR及Western blot检测细胞内PI3K/Akt的mRNA和蛋白的表达。结果：RT-PCR结果显示模型组细胞的PI3K/Akt的mRNA表达量较正常对照组显著减少（PPI3K＝0.000,PAkt＝0.000）,5% LWDHP含药血清组（PPI3K＝0.012,PAkt＝0.000）及MET组（PPI3K＝0.000,PAkt＝0.000）细胞内的PI3K/Akt mRNA表达量较模型组增加,5% LWDHP含药血清组细胞内PI3K/Akt mRNA表达量与MET组比较有统计学意义（PPI3K＝0.000,PAkt＝0.000）。同时Western blot结果显示模型组细胞的PI3K/P-Akt的蛋白表达较正常对照组也显著减少（PPI3K＝0.000,PP-Akt＝0.000）,5% LWDHP含药血清组（PPI3K＝0.000,PP-Akt＝0.000）和MET组（PPI3K＝0.000,PP-Akt＝0.000）细胞内PI3K/ P-Akt蛋白表达量较模型组同样明显增加,5% LWDHP含药血清组细胞内PI3K/P-Akt 蛋白表达量与MET组比较有统计学意义（PPI3K＝0.003,PP-Akt＝0.001）。结论：LWDHP干预保护后可以促进PA诱导损伤的HUVEC内PI3K/Akt mRNA和蛋白的表达。     

siRNA沉默MUC16对胆囊癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨siRNA沉默黏蛋白(mucin,MUC)16基因对人胆囊癌细胞(GBC-SD)增殖和迁移的影响及其分子机制。方法采用慢病毒感染和siRNA干扰技术沉默GBC-SD中MUC16基因(GBC-SD+MUC16-siRNA组),同时设立阴性对照组(GBC-SD+NC组)和空白对照组(GBC-SD组)。RT-PCR检测各组GBC-SD细胞中MUC16表达情况,噻唑蓝实验检测GBC-SD细胞增殖能力,划痕实验检测GBC-SD细胞迁移能力,蛋白免疫印迹实验检测GBC-SD细胞中PCNA和CD44蛋白表达情况。结果GBC-SD+MUC16-siRNA组细胞增殖率和细胞迁移数目均低于GBC-SD组(P < 0.05);GBC-SD+MUC16-siRNA组MUC16、CD44蛋白表达均低于GBC-SD组、GBC-SD+NC组(P < 0.05~P < 0.01),PCNA蛋白表达亦低于GBC-SD+NC组(P < 0.05)。结论siRNA沉默MUC16具有一定的抑制胆囊癌细胞增殖和迁移作用,可为胆囊癌的治疗提供新的实验证据。     

香烟烟雾提取物诱导呼吸道上皮细胞间质性转化的实验研究

目的 探讨香烟烟雾提取物(CSE)在呼吸道上皮细胞间质性转化(EMT)中的作用,为进一步研究香烟烟雾提取物在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道重构发生机制提供新的线索.方法 用不同浓度(0％、0.5％、1.0％、2.5％、5.0％,其中浓度0作为对照组)的CSE刺激呼吸道上皮细胞BEAS-2B 72 h,逆转录PCR检测E钙粘蛋白(E-cad)、N钙粘蛋白(N-cad) mRNA表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中TGF-β1浓度;用2.5％CSE刺激BEAS-2B细胞不同时长(0、12、24、48h,其中时间0h作为对照),倒置显微镜下观察细胞形态变化,逆转录PCR检测E-cad、N-cad、补体C3 mRNA表达情况,ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1、过敏毒素C3a浓度.结果 在不同浓度的CSE刺激BEAS-2B细胞72 h后,CSE各浓度刺激组较对照组E-cad mRNA表达下调,N-cad mRNA表达增加,且呈浓度依赖性(P＜0.05);ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1水平,CSE各浓度刺激组较对照组增加(P＜0.05);2.5％CSE在不同时间点作用BEAS-2B细胞,刺激组细胞呈梭形改变,CSE各时间段刺激组较对照组E-cad mRNA表达减少,补体C3、N-cad mRNA袁这增加,且呈时间依赖性(P＜0.05),CSE各时间段刺激组细胞培养上清波中TGF-β1、C3a水平较对照组增加(P＜0.05).结论 CSE可诱导正常的呼吸道上皮细胞BEAS-2B发生EMT,补体C3激活可能参与此过程.     

寒痉汤对冷刺激诱导主动脉平滑肌细胞氧化应激的影响及机制

目的 观察寒痉汤对冷刺激诱导血管平滑肌细胞氧化应激的保护作用及其作用机制。方法 将实验细胞分为空白组、模型组、寒痉汤组及富马酸二甲酯组,以富马酸二甲酯为阳性对照,各组血管平滑肌细胞(A7r5)培养24 h后,4℃冷刺激4 h。采用CCK-8法检测各组细胞活力;采用化学法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)表达水平;采用DCFH-DA荧光法检测细胞活性氧(ROS)的表达;采用Elisa法检测细胞白细胞介素1β(IL-1β)、核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3 (NLRP3)表达水平;采用免疫印迹法检测细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)、NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)、核因子κB(NF-κB)、人核因子κB抑制蛋白α(IκBα)蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR技术检测NQO1 mRNA、NF-κB mRNA表达水平。结果 与空白组相比,模型组细胞活力、SOD表达降低(P<0.01),ROS、MDA、IL-1β、NLRP3表达升高(P<0.01);NF-κB、IκBα蛋白表达升高(P<0.01),Nrf2、NQO1蛋白表达降低(P<0.01...     

过氧化氢对PC12细胞PI3K、Akt表达的影响

目的探讨不同浓度过氧化氢(H202)对PC12细胞PI3K、Akt mRNA及蛋白表达的影响,为氧化损伤致PC12细胞凋亡提供实验依据。方法 PC12细胞贴壁后,换无血清DMEM培养液继续培养24 h,实验分为对照组、不同浓度H2O2组(100、150、200μmol·L-1)。24 h后,采用RT-PCR和Western Blot方法分别检测PI3K、Akt mRNA及蛋白的表达变化。结果与对照组相比,各浓度H2O2均可降低PI3K、Akt mRNA和蛋白的表达,且随着H2O2浓度增加,与对照组相比,PI3K、Akt mRNA表达逐渐降低(P<0.05);PI3K、Akt蛋白表达水平逐渐降低(P<0.05);且150μmol·L-1H2O2可显著降低PI3K、Akt mRNA及蛋白的表达(P<0.05)。结论 H2O2可剂量依赖性的降低PI3K、Akt mRNA和蛋白的表达,从而诱导PC12细胞的凋亡。     

Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对胰岛细胞半胱天冬酶-3表达的影响

目的 探讨核因子相关因子2 (Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路相互作用对2型糖尿病(T2DM)大鼠胰岛细胞凋亡和半胱天冬酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响及其可能机制.方法 将60只雄性Wistar大鼠分为正常对照组(NC组,n=20)、糖尿病模型组(DM组,n=20)和叔丁基对苯二酚干预组(tBHQ组,n=20),干预8周后处死所有大鼠,TUNEL检测胰岛细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清及胰腺组织中丙二醛(MDA)水平,Western blot检测AKT、p-AKT、总Nrf2、核Nrf2、血红素氧合酶1(HO-1)、Caspase-3在胰岛细胞中蛋白表达水平.结果 与NC组比较,DM组胰岛细胞凋亡率显著增加(P=0.000),而tBHQ组胰岛细胞凋亡率明显低于DM组(P=0.000).DM组血清及胰腺组织中MDA水平较NC组明显升高(P=0.000),而tBHQ组血清及胰腺组织中MDA水平明显低于DM组(P=0.000).DM组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均较NC组显著降低(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平较NC组明显升高(P=0.000);与DM组比较,tBHQ组p-AKT、总Nrf2、核Nrf2及HO-1蛋白的表达水平均明显增加(P=0.000),Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P=0.017);AKT蛋白表达水平在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Nrf2/ARE通路与PI3K/AKT通路相互作用对抑制胰岛细胞Caspase-3的表达及延缓胰岛细胞凋亡进程产生重要的保护作用.     

长链非编码RNA PlncRNA-1在前列腺癌中的表达及其意义

目的:探讨长链非编码RNA PlncRNA-1在前列腺癌中的表达及其意义.方法:选取12例前列腺癌患者病理组织为观察组(Pca组),另选取12例良性前列腺增生病理组织为对照组(BPH组),采用qRT-PCR方法检测两组间PlncRNA-1 mRNA相对表达水平间差异.同时将雄激素依赖的前列腺癌细胞系LNCaP分为两组,根据是否采用siRNA下调PlncRNA-1表达水平分为PlncRNA-1-siRNA组和Negative control(NC)组.采用qRT-PCR方法检测两组间PlncRNA-1 mRNA相对表达水平.采用Western Blot方法检测两组间细胞周期蛋白Cyclin D1表达水平.采用CCK-8法检测第1、2、3、4、5天两组细胞增殖情况,比较两组细胞间增殖速率间差异.结果:Pca组患者组织标本中PlncRNA-1 mRNA表达水平为(2.48±0.37),较BHP患者组织(1.19±0.28)显著升高(P=0.031).PlncRNA-1-siRNA组细胞中PlncRNA-1 mRNA相对表达量(1.43±0.69)较NC组细胞株(2.54±0.41)明显降低(P=0.028).经siRNA下调PlncRNA后,PlncRNA-1-siRNA组细胞中Cyclin D1蛋白水平显著较NC组降低(P<0.05).PlncRNA-1-siRNA组细胞株增值速率较NC组细胞明显下降(P<0.05).结论:长链非编码RNA PlncRNA-1的高表达参与了前列腺癌的发病过程,促进细胞周期蛋白Cyclin D1的表达从而促进肿瘤细胞增殖可能是其参与发病的机制之一.     

慢病毒载体介导的Nrf2表达下调对肝星状细胞生物学行为的影响

目的观察重组慢病毒载体介导Nrf2表达下调对肝星状细胞生物学行为的影响,同时探讨其可能的作用机制。方法利用重组DNA技术将特异性shRNA序列插入慢病毒表达载体pGLV3.GFP中,形成pGLV3.GFP.Nrf2.shRNA,将其转染至293T细胞中,随后进行病毒包装、滴度测定、转染率计算。采用实时荧光定量、Western blot测定转染肝星状细胞株(HSC-T6细胞)Nrt2 mRNA及蛋白的表达情况,利用Tunel染色法检测HSC-T6细胞的凋亡情况,同时对HSC-T6细胞中PI3K、Akt、p-Akt、p-Bad、Bcl-2、Bax蛋白水平进行测定。结果构建的重组病毒载体LV3-H1-GFP-shRNA可有效感染293T细胞。激光共聚焦显示空白组细胞凋亡率低于A组和B组,与A组比较,B组的细胞凋亡率降低(P0.05)。实时荧光定量PCR法结果显示空白组Nrf2 mRNA水平高于A组和B组(P0.05),与A组比较,B组mRNA水平升高(P0.05)。Western blot法显示空白组Nrf2蛋白水平高于A组和B组(P0.05),与A组比较,B组蛋白水平升高(P0.05)。与空白组相比,A组和B组PI3K、p-Akt、p-bad、Bcl-2的蛋白表达量增加(P0.05),Bax蛋白减少(P0.05),其中A组PI3K、p-Akt、p-Bad、Bcl-2的蛋白水平较B组增加(P0.05),Bax蛋白水平低于B组(P0.05)。结论 Nrf2基因的shRNA慢病毒载体pGLV3.GFP.Nrf2.shRNA在体外可抑制肝星状细胞活化,其作用机制可能与通过抑制PI3K-Akt通路促肝星状细胞凋亡有关。     

小干扰RNA干扰核因子κB信号通路对内毒素刺激巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α的影响

目的 探讨小于扰RNA(siRNA)抑制核因子κB(NF-κB)信号通路对细菌脂多糖(LPS)刺激的巨噬细胞释放肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 人单核细胞白血病THP-1细胞经氟波酯诱导为巨噬细胞后分2组,分别感染应用分子克隆技术构建的针对NF-κB P65的siRNA逆转录病毒质粒(siRNA病毒组)及乱序(Scramble)对照序列逆转录病毒质粒(Scramble病毒组).用终浓度50μg/ml的LPS持续刺激2组巨噬细胞,分别应用RT-PCR技术检测LPS刺激不同时间巨噬细胞NF-κB P65 mRNA和TNF-α mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测NF-κB P65蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验检测巨噬细胞培养上清液TNF-α含量.结果 LPS刺激12和24 h,siRNA病毒组巨噬细胞NF-κB P65 mRNA表达水平(0.97±0.02,0.89±0.01)明显低于Scramble病毒组(1.01±0.03,0.97±0.01,均P＜0.05);LPS刺激24和72 h,siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达水平(0.95±0.04,0.94±0.01)明显低于Scramble病毒组(1.07±0.06,1.03±0.05,均P＜0.05).LPS刺激4、8、12和24 h的各时点,siRNA病毒组TNF-α mRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组(0.92±0.02比0.98 ±-0.01,0.86±0.02比1.00±0.01,0.79±0.03比1.01±0.01,0.78±0.03比1.02±0.01,均P＜0.05).LPS刺激2、4、8、24、36、48、54和72 h的各时点,siRNA病毒组巨噬细胞培养上清液TNF-α含量均明显低于Sramble病毒组(均P＜0.01).结论 针对NF-κB P65的siRNA可抑制NF-κB信号通路的功能活性,进而抑制内毒素刺激引起的巨噬细胞活化和TNF-α释放,提示RNA干扰技术在急性肺损伤早期过度炎症反应的防治中具有潜在应用价值.     

姜黄素通过调控PPARγ/NF-κB信号通路减轻CSE诱导的人气道上皮细胞氧化应激反应

目的探讨姜黄素对香烟烟雾提取物（CSE）诱导的人气道上皮16HBE细胞氧化应激和炎症反应的抑制作用及相关的分子 机制。方法使用shRNA-PPARγ（shPPARγ）转染人气道上皮16HBE细胞下调PPARγ表达。将16HBE细胞分为5组即对照组、 姜黄素组、CSE组、CSE+姜黄素组和CSE+姜黄素+shRNA-PPARγ组。在0 h和24 h时使用MTT法对细胞活性进行检测;干预 24 h后使用qPCR对细胞TNF-α、iNOS和PPARγ mRNA表达进行检测,采用western blot检测16HBE细胞中iNOS、PPARγ蛋白 表达以及NF-κB p65磷酸化水平。结果16HBE细胞在干预24 h后各组之间细胞活性未有明显统计学差异（P>0.05）。与对照 组相比较,CSE干预24 h后PPARγ表达水平明显降低,TNF-α、iNOS表达及NF-κB p65磷酸化水平明显升高,差异均有统计学意 义（P<0.05）。但CSE组较CSE+姜黄素组和CSE+姜黄素+shPPARγ组PPARγ表达水平下降以及TNF-α、iNOS表达和NF-κB p65 磷酸化水平升高更显著,差异均有统计学意义（P<0.05）;且CSE+姜黄素+shPPARγ组较CSE+姜黄素组PPARγ表达水平下降以 及TNF-α、iNOS表达和NF-κB p65磷酸化水平升高更明显,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论姜黄素可以通过抑制PPARγ/ NF-κB信号通路减轻CSE诱导的人气道上皮16HBE细胞的炎症反应及氧化应激。为姜黄素应用于慢性阻塞性肺疾病等疾病 的临床治疗奠定了理论基础。     

异氟烷预处理激活Nrf2-ARE通路保护H9c2心肌细胞缺氧-复氧损伤

目的 研究异氟烷预处理对大鼠胚胎心肌细胞(H9c2)缺氧-复氧损伤及Nrf2-ARE信号通路的影响.方法 用大鼠H9c2细胞低氧模拟缺血性损伤,并将细胞分为空白对照组、缺氧-复氧组、异氟烷预处理组、转染Nrf2 siRNA组、转染非特异性siRNA组(Scramble组)、异氟烷预处理的Scramble组和异氟烷预处理的siRNA组.采用MTT法检测H9c2细胞存活率,TUNEL染色检测细胞凋亡,分别使用硫代巴比妥酸法(TBA)和分光光度法测定MDA和GSH水平,qRT-PCR及Western blot检测Nrf2、HO-1和NQO1基因的表达.结果 与空白对照组比较,缺氧-复氧组细胞活力降低,凋亡细胞数上升,MDA水平升高,GSH水平降低,同时H9c2细胞中Nrf2、HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达降低,差异均具有统计学意义(JP＜0.01).与缺氧-复氧组比较,异氟烷可提高H9c2细胞活力,降低凋亡细胞数,并降低MDA水平,升高GSH水平,上调Nrf2、HO-1和NQO1的表达(P＜0.05).siRNA转染组Nrf2的mRNA和蛋白表达与缺氧-复氧组和Scramble组相比均降低(P＜0.05),2％异氟烷对siRNA转染组Nrf2 mRNA和蛋白表达均无影响(P＞0.05);经2％异氟烷处理的siRNA转染组H9c2细胞存活率与空白对照组、2％异氟烷处理组和2％异氟烷处理的Scramble组相比降低,凋亡细胞数增多,MDA水平升高,GSH水平降低(P＜0.05).结论 异氟烷预处理对H9c2细胞缺氧-复氧损伤具有保护作用,这种保护作用与激活Nrf2-ARE信号通路有关.     

靶向热休克蛋白-27基因沉默对5-氟尿嘧啶诱导SW480细胞凋亡的影响及机制

目的：通过RNA干扰抑制热休克蛋白-27（HSP27）基因的表达,探讨沉默该基因对5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导大肠癌SW480细胞凋亡的影响及机制。方法：将细胞分为正常对照组（Normal组）、阴性siRNA转染组（NC组）、HSP27-siRNA转染组（siRNA组）、单纯5-FU组（5-FU组）、5-FU+阴性siRNA转染组（NC+5-FU组）、5-FU+HSP27-siRNA转染组（siRNA+5-FU组）,通过脂质体LipofectamineTM 2000将HSP27-siRNA导入SW480细胞,CCK-8法检测靶向HSP27的siRNA和5-FU对SW480细胞增殖的抑制作用,流式细胞技术观察转染后细胞在5-FU作用下的早期凋亡情况,Western blot方法检测凋亡相关蛋白Active-casepase-3、Active-caspase-9及细胞色素C（Cytc）的表达。结果：CCK-8法检测结果显示siRNA+5-FU组细胞增殖抑制率明显高于同期siRNA组和5-FU组,表明联合应用抑制率明显升高（P＜0.05）。流式细胞仪检测结果表明siRNA组和5-FU组均可诱导SW480细胞凋亡,两者联合应用细胞早期凋亡率明显升高,与Normal组及NC组比较,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;Western blot检测结果显示siRNA+5-FU组Active-casepase-3、Active-caspase-9、Cytc蛋白相对表达水平均高于siRNA组和5-FU组,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论：靶向HSP27-siRNA能有效抑制大肠癌SW480细胞HSP27蛋白的表达,上调Active-casepase-3、Active-caspase-9、Cytc蛋白的表达,增强5-FU诱导SW480细胞凋亡,逆转肿瘤细胞对5-FU的耐药。     

Toll样受体4在人肺泡上皮细胞株中的表达及其在细胞炎症反应中的作用

目的 明确人Ⅱ型肺泡上皮细胞是否表达Toll样受体4(TLR4),探讨TLR4在慢性阻塞性肺疾病(COPD)气道炎症中的作用.方法 将人Ⅱ型肺泡上皮细胞系A549细胞分为正常对照组、转染腺病毒E1A质粒(E1A+组)和转染不含有腺病毒E1A的空白质粒组(E1A-组),分别以不同浓度的脂多糖(LPS,0、0.1、1、10μg/ml)、白细胞介素1β(IL-1β,0、0.1 ng/ml)、香烟提取物(CSE,0、10%、20%、40%)刺激.刺激后12、24 h,用反转录聚合酶链反应技术检测各组细胞IL-8 mRNA和TLR4 mRNA的表达,用蛋白质印迹技术测定核因子κB(NF-κB)亚单位P65蛋白的表达.结果 10μg/ml LPS、0.1 ng/ml IL-1β或20%CSE刺激24 h后,E1A+组IL-8 mRNA表达量(2.82、1.87、4.70)明显高于正常对照组(0.95、0.78、1.02,均P<0.05)和E1A-组(0.97、0.81、1.12,均P<0.05).10μg/ml的LPS刺激后12、24 h,E1A+组细胞TLR4 mRNA表达水平分别为4.52、7.99,明显高于正常对照组(1.91、3.81,均P<0.05)和E1A-组(2.00、3.88,均P<0.05);IL-1β也可增加TLR4 mRNA表达.CSE刺激对各组细胞TLR4 mRNA表达水平均无明显影响.3种刺激因子均可引起各组细胞NF-κB亚单位P65蛋白表达水平增高.结论 人Ⅱ型肺泡上皮细胞表达TLR4,LPS、IL-1β引起IL-8释放可能与TLR4介导的NF-κB激活有关.     

干扰HMGB1表达影响视网膜母细胞瘤细胞恶性生物学行为的实验研究

目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)对视网膜母细胞瘤(RB)细胞增殖、凋亡等行为的调控作用及机制。方法 检测比较RB细胞株Y79细胞和正常视网膜上皮细胞株ARPE-19细胞HMGB1表达情况。通过转染慢病毒HMGB1-siRNA干扰Y79细胞HMGB1表达,分为对照组、siRNA NC组和siRNA HMGB1组,分析对细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。利用裸鼠成瘤模型研究干扰HMGB1表达对RB肿瘤生长的影响,并分析Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核转录因子-κB(NF-κB)表达情况,探讨其作用机制。结果 Y79细胞中HMGB1表达明显高于ARPE-19细胞(P<0.05),干扰HMGB1表达明显抑制Y79细胞增殖。siRNA HMGB1组细胞凋亡率明显高于对照组和siRNA NC组(P<0.05)。与对照组和siRNA NC组比较,siRNA HMGB1组细胞G₀/G₁期比例明显增高,S期和G₂/M期明显减少(P<0.05)。裸鼠成瘤模型显示siRNA HMGB1组...