竞争法酶联免疫吸附分析测定人类血浆载脂蛋白M监测方法的建立及应用

目的：建立人类血浆载脂蛋白M（ApoM）竞争法酶联免疫吸附分析检测方法。方法：建立人类血浆ApoM蛋白竞争法酶联免疫吸附分析（ELISA）检测方法,与人类重组ApoM蛋白标准含量进行对照,并利用该方法对932份健康人群血浆ApoM蛋白进行检测。结果：竞争法ELISA能准确测定人类血浆ApoM的浓度,健康人群血浆ApoM的中位数值为20.58mg/L。结论：竞争法ELISA操作方便、准确,可用于人类血浆ApoM蛋白的检测,为人类血浆ApoM的基础和临床研究提供了科学基础。健康人群血浆ApoM蛋白浓度为20.58mg/L。     

细胞酶联免疫吸附试验

免疫细胞表面表达有多种抗原或受体,如各种CD系列分子等,有的可作为临床实验室检定T、B细胞和CD细胞等参与免疫应答反应细胞的特异性标志,或用以研究细胞分子和粘附分子及其相应受体的变化,或用以探讨诸多表面分子参与免疫应答的机制,等等.     

乙型肝炎病毒标志物酶联免疫吸附试验若干问题探讨

现就我科乙型肝炎病毒标志物酶联免疫吸附试验(ELISA)中使用美国宝特ELX800型酶标仪波长的选择,试验中试剂空白的设定,阴性对照孔吸光度的确定等涉及质量控制的问题进行分析探讨。1酶标仪单波长或双波长的选择目前国内常用的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根过氧化物酶(HRP),底物通常为四甲基联苯胺(TMB)和邻苯二胺(OPD),其在双氧水的存在下,与HRP作用,分别氧化为2,2,-二氨基偶氮苯(DAB)和联苯醌。当pH值为5.0左右时,DAB在450nm波长处有广范围的最大吸收,当pH值降为1.0时,最大吸收波长移至492nm,同时摩尔消光系数变大,显…     

细胞-酶联免疫吸附试验及其应用

酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)问世数十年来,广泛应用于检测各种体液中的可溶性抗原或抗体.在传统的ELISA中,微孔板上包被的是可溶性的抗体或抗原,然而在免疫学研究和临床检测时,需要了解免疫活性细胞表面表达的特定分子以对细胞特性进行认定和分类,亦需测定抗某种细胞的抗体或评价某种细胞的功能,因而传统的ELISA中的包被物或受检物就要被替代,检测模式有所改变.1971年,Avrameas等[1]首次用酶标记抗体定量测定细胞表面的免疫球蛋白,又经数年的发展,形成了以细胞包被酶标板测定细胞表面特定分子的细胞-ELISA.近年来细胞-ELISA衍生出多种模式(方法),并筛选出适合细胞-ELISA的标记酶.目前已有多种成熟的细胞-ELISA的模式,并在检验医学中得到应用.     

胶体金法与酶联免疫吸附试验筛查人类免疫缺陷病毒临床应用评价

目的了解胶体金法和酶联免疫吸附试验(ELISA)的临床应用和价值,为实验室筛查人类免疫缺陷病毒(HIV)提供试剂选用依据。方法采用胶体金法和ELISA同时对4 599例监测对象的标本进行检测,阳性反应标本用Western blot确证。结果胶体金法和ELISA阳性率分别为5.04%和5.31%。确证后阳性率分别为4.37%和5.26%,两种方法检测结果比较差异有统计学意义(P<0.05)。胶体金法和ELISA的灵敏性分别为86.64%和99.18%。结论 ELISA具有较高的敏感性,用于筛查HIV感染者可降低漏检率。     

酶联免疫吸附试验在实验室应用中的质量控制

质量控制是运用现代科学管理技术和数据统计学的方法,使实验室的检验结果控制在允许的范围内所采取的一系列有效措施。酶联免疫吸附试验(ELISA)具有操作简单、灵敏度高、特异性强、快速稳定及不需要特殊设备等优点。ELISA已广泛应用于各种抗原和抗体测定,但其影响因素较多,其中任何因素控制不当都会对检测结果产生严重影响。因此,必须加强ELISA检测的全面质量控制,才能保证实验室检测结果的准确可靠。综合目前国内外总结资料,结合作者工作经验,现将ELISA使用过程中需要加以控制的关键因素综述如下。     

以合成肽为抗原检测人巨细胞病毒抗体的酶联免疫吸附试验的建立及评价

目的以合成多肽为抗原建立用于人巨细咆病毒（HCMV）抗体检测的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法以固相多肽合成技术合成了HCMV7个抗原性肽段,并对其抗原性进行了初步评价,选择高抗体反应的肽段为抗原,建立检测HCMV特异性抗体的间接ELISA。结果7个肽段中,抗体反应性较高肽段有4个;以合成多肽为抗原的间接ELISA对HCMV IgG抗体检测的敏感性和特异性分别为90．9％和100．0％,对于IgM抗体检测的敏感性和特异性分为90．0％和100．0％;与国外试剂盒测定结果有良好的符合性;该方法的精密度及稳定性良好。结论合成的HCMV多肽片段可作为抗原用于HCMV的检测,以此多肽为抗原建立的间接ELISA可用于临床HCMV特异性抗体的检测。     

以合成肽为抗原检测人巨细胞病毒抗体的酶联免疫吸附试验的建立及评价

目的以合成多肽为抗原建立用于人巨细胞病毒(HCMV)抗体检测的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。方法以固相多肽合成技术合成了HCMV 7个抗原性肽段,并对其抗原性进行了初步评价,选择高抗体反应的肽段为抗原,建立检测HCMV特异性抗体的间接ELISA。结果7个肽段中,抗体反应性较高肽段有4个;以合成多肽为抗原的间接ELISA对HCMV IgG抗体检测的敏感性和特异性分别为90.9%和100.0%,对于IgM抗体检测的敏感性和特异性分为90.0%和100.0%;与国外试剂盒测定结果有良好的符合性;该方法的精密度及稳定性良好。结论合成的HCMV多肽片段可作为抗原用于HCMV的检测,以此多肽为抗原建立的间接ELISA可用于临床HCMV特异性抗体的检测。     

微阵列酶联免疫吸附试验在临床输血检测中的应用

目的探讨微阵列酶联免疫吸附试验（Array-ELISA）的临床应用价值。方法用ELISA和Array-ELISA同时检测150例样本的人类免疫缺陷病毒抗体（抗-HIV）、梅毒螺旋体抗体（抗-TP）和HBsAg,观察对比两种检测方法的结果。结果两种方法对150例样本的检测结果经卡方检验证明差异无统计学意义。除了HBsAg检测结果的总符合率为96.7%,其余指标检测结果的总符合率均为100.0%。结论Array-ELISA与ELISA试剂盒有极高的符合率,初步证明其可以满足临床输血前检测的要求。     

细胞酶联免疫吸附试验

免疫细胞表面表达有多种抗原或受体 ,如各种ＣＤ系列分子等 ,有的可作为临床实验室检定Ｔ、Ｂ细胞和ＣＤ细胞等参与免疫应答反应细胞的特异性标志 ,或用以研究细胞分子和粘附分子及其相应受体的变化 ,或用以探讨诸多表面分子参与免疫应答的机制 ,等等。现有一些检测上述分子的方法 ,如免疫细胞化学法 ,荧光免疫染色法等。以流式细胞仪检测法 (ＦＡＣＳ)最为简便可靠 ,且能定量 ,缺点是需要贵重的仪器和成套的试剂 ,费用高。从方法学角度分析 ,还有几个问题限制了ＦＡＣＳ的广泛应用 ,如受检细胞为粘附性细胞时需要胰酶处理 ,因而可能破坏某…     

血清稀释度对捕捉法ELISA检测抗HAV IgM影响的探讨

在捕捉法ＥＬＩＳＡ检测抗ＨＡＶＩｇＭ时,分别使用了单克隆和多克隆抗ＨＡＶ－ＨＲＰ以确定血清标本的最适稀释度。发现抗ＨＡＶＩｇＭ阳性血清Ａ值均随稀释度增高而上升,绝大多数在１０－３达高峰。部分阳性血清原倍（１００）的Ａ＜临界值（假阴性）。部分抗ＨＡＶＩｇＭ阴性血清在低稀释度时不论加入ＨＡＡｇ与否,能与两种酶抗体结合物之一或同时反应呈假阳性,Ａ值随稀释度增高而下降。结果表明最适血清稀释度为１０－３,既能防止阳性漏检,也可防止因原倍血清所致的假阳性。本文还提示使用单克隆抗ＨＡＶ－ＨＲＰ能防止ＲＦ等因素对结果的干扰。     

改良ELISA快速检测风疹病毒IgM抗体方法的建立

目的　建立快速检测风疹病毒特异性IgM抗体的改良ELISA法。 方法　利用聚乙二醇 (PEG )能加速抗原抗体反应 ,促使其沉淀的特点 ,在常规间接ELISA法的一抗和二抗中加入 4%的PEG ,以缩短反应时间。结果　用该法测定 39份风疹阳性血清和 183份阴性血清的风疹病毒IgM抗体 ,阳性血清检出率为 97.4% ,与常规间接ELISA检测结果 (92 .3% )一致 ;阴性血清的检出率为 95 .1% ,高于间接ELISA(87.5 % ) ,经配对资料的 χ2 检验 ,差别有统计学意义。结论　在风疹IgM间接ELISA法稀释液中加入PEG ,可以缩短试验时间 ,提高检测的准确性     

HSV-1重组蛋白GST-G1为抗原的IgM捕获法ELISA的研究

目的研究单纯疱疹病毒1型(HSV-1)近期感染的IgM酶免疫诊断技术。方法用捕获法ELISA(G-ELISA)和HerpeSelect ELISA(H-ELISA)平行检测1296份孕妇血清HSV-1-IgM。结果 G-ELISA检出阳性血清12份,H-ELISA检出阳性血清11份。G-ELISA多捡出的1份阳性,并经其他试验证实为真阳性。乳胶凝集试验诊断为类风湿因子(RF)阳性的6份血清,经H-ELISA检出阳性血清2份,但经G-ELISA试剂盒检测全为阴性。结论在检测孕妇HSV-1-IgM方面,G-ELISA比H-ELISA可能敏感性更强,特异性更高。G-ELISA是诊断HSV-1近期感染的有效方法。     

Cloning and expression of an envelope gene of West Nile virus and evaluation of the protein for use in an IgM ELISA

West Nile virus (WNV) is a neurotropic flavivirus that has emerged globally as a significant cause of viral encephalitis. The early confirmatory diagnosis of WNV infections is important for timely clinical management and epidemiologic control in areas where multiple flaviviruses are endemic. The coexistence of WNV along with other members of flaviviruses like dengue and Japanese encephalitis in India has complicated the serodiagnosis due to cross-reactive antigens. In the present study, the development and evaluation of a highly sensitive and specific IgM enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) using the recombinant envelope protein (rWNV-Env) for rapid, early, and accurate diagnosis of WNV are reported. The gene coding for the envelope protein of WNV was cloned and expressed in pET 28a vector followed by purification of recombinant protein by affinity chromatography. An indirect IgM microplate ELISA using purified rWNV-Env protein was optimized having no cross reactivity with healthy human serum. Furthermore, the specificity of this assay was confirmed by cross checking with serum samples obtained from patients with dengue and Japanese encephalitis viruses. The comparative evaluation of this rWNV-Env protein–specific IgM ELISA with plaque reduction neutralization test assay using 105 acute phase of clinical samples revealed 95% concordance with sensitivity and specificity of 92% and 97%, respectively. The positive and negative predictive values of recombinant-based Env ELISA were 94% and 96%, respectively. The recombinant envelope protein–based WNV-specific ELISA reported in this study will be useful for rapid screening of large numbers of clinical samples in endemic areas during outbreaks.     

ELISA联合检测方法的建立及应用

目的在微孔板平台上建立多指标联合检测的方法,为急诊、门诊及基层等多种医疗机构提供1种新的血清学检测手段。方法本研究根据酶联免疫吸附法(ELISA法)原理,以卵泡刺激素(FSH)、泌乳素(PRL)、黄体生成素(LH)、生长激素(GH)为检测靶标,在自行设计的聚苯乙烯板孔上完成反应体系的优化,包括FSH、PRL、LH、GH包被抗体浓度及酶标抗体浓度,建立1种并行分析样品中多种指标的方法。结果成功确定4种垂体激素联合检测的条件,包括4种激素抗体包被浓度、酶标抗体浓度等,并成功应用于临床样本的检测。结论本研究首次建立了1种简单、特异性高、成本低、并行分析4种垂体激素的联合检测方法,提高了常规ELISA法的检测效率。     

捕获法ELISA检测抗蛋白酶3抗体对韦格纳肉芽肿的临床应用价值

目的探讨捕获法ELISA检测血液中抗蛋白酶3抗体对韦格纳肉芽肿(Wegener's granulomatosis,WG)的敏感性和特异性以及与间接免疫荧光法(indirec timmunofluorescence assay,IIF)的相关性。方法用捕获法ELISA、经典ELISA及IIF检测72例WG患者、206例健康献血员和24例其他自身免疫性疾病患者血清中的抗蛋白酶3(proteinase3,PR3)抗体和胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(cytoplasmic anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,cANCA)。结果PR3捕获法ELISA、经典ELISA测抗PR3对WG的敏感性分别为87.5%和73.6%,二者的特异性均为100%;单独用捕获法ELISA或IIF检测,对WG的检出率分别为87.5%和84.7%,而联合应用检出率可达到91.6%。结论捕获法ELISA检测抗PR3对WG的敏感性以及与IIF的相关性优于经典ELISA,对可疑WG患者,两法联合应用可提高WG的诊断率。     

检测人中性粒细胞防御素ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测人中性粒细胞防御素(HNP)的ELISA法,并探讨其临床应用价值。方法以纯化的HNP-1为抗原制备特异性抗-HNP单克隆抗体,建立ELISA夹心法,同时检测36名健康献血员血浆中HNP含量,并观察血库4℃保存的全血不同保存时间血浆中HNP含量的变化。结果ELISA法批内和批间变异系数分别为4.8%和9.3%,与进口试剂比较相关性良好(r=0.98,P<0.01),36名健康献血员血浆HNP含量为(46±48)ng/m l。库存全血随保存时间延长血浆HNP含量逐渐升高,保存25天的血浆HNP含量达到760 ng/m l。结论建立的ELISA定量检测法与进口试剂盒有良好的相关性,除血浆外,推测也能适用于细胞培养上清或各种体液中HNP的定量测定。     

一步法ELISA在HIV初筛中的应用探讨

目的探讨一步法ELISA试剂在HIV抗体初筛实验中是否存在高剂量钩状效应，及其影响程度和对策。方法分别采用一步法和二步法HIV抗体ELISA检测试剂盒对10例确诊抗体阳性样本进行检测以及样本梯度稀释后再复检。结果10例确诊样本二步法结果均阳性，一步法仅7例阳性；假阴性样本经10—1和10—2稀释后，再用一步法检测时结果均为阳性。结论ELISA一步法试剂的检测范围不可忽视。一步法双抗原夹心ELISA检测HIV抗体时的明显前带现象是潜在的漏检导致因素，应用于HIV初筛效果不如二步法。     

新型ELISA检测戊型肝炎病毒IgM抗体的敏感度与特异度评价

目的 评估基于戊型肝炎病毒（HEV）主要免疫表位多肽及其截短多肽的新型ELISA检测抗HEV IgM的敏感度与特异度.方法 根据抗HEV抗体与主要免疫表位多肽的高反应性以及与截短多肽的不反应性,分别以两种多肽为包被抗原,建立新型ELISA法,检测2007-2012年收集的612例可疑HEV感染者血清抗HEV IgM,并与万泰HEV IgM抗体诊断试剂盒检测结果比较,结果不一致血清用免疫印迹法（Western blotting）确认,χ^2检验比较两种试剂灵敏度和特异度.结果 抗HEV IgM检测中,新型ELISA阳性326例,阴性286例;万泰试剂阳性370例,阴性242例;两种试剂同时阳性320例,同时阴性236例.在万泰试剂阳性而新型ELISA阴性的50例中,Western blotting证实阳性21例,阴性29例;在万泰试剂阴性而新型ELISA阳性的6例中,Western blotting显示阳性与阴性各3例.以两种试剂同时阳性或Western blotting阳性为标准,万泰试剂与新型ELISA灵敏度分别为99.1％（95％ CI：0.972-0.998）和93.8％（95％ CI：0.907-0.961）,差异有统计学意义（χ^2=13.988,P＜0.001）;特异度分别为89.2％（95％ CI：0.847-0.925）和98.9％（95％ CI：0.965-0.997）,差异有统计学意义（χ^2=22.466,P＜0.001）.结论 与万泰试剂相比,新型ELISA检测抗HEV IgM敏感度略低,但特异度较好,可减少抗HEV IgM检测中的假阳性.     

分泌片ELISA方法的建立和应用

目的 建立检测SC的ELISA方法.方法 采用交叉方阵滴定法,比较3种封闭液、不同稀释度的包被抗体和酶标抗体对检测结果的影响,确定ELISA方法的最佳实验条件.结果 包被抗体浓度1:400,酶标抗体浓度为1:800,最适封闭条件为0.5%新生胎牛血清.检测240例肝脏病变患者血清和粪便中SC明显升高,与正常对照组比较均有显著性差异(P＜0.01).结论 建立的双抗体夹心EIJSA方法检测SC简便实用,可用于临床和科研研究.