顺铂作用于耐顺铂卵巢上皮癌细胞后其细胞生物学特性的改变

目的:探讨耐顺铂卵巢癌SKOV3/DDPⅡ细胞对于顺铂作用后其细胞周期、凋亡、增殖及铂类耐药相关基因ARHGDIB和CCND1表达量的变化。方法:采用流式细胞术检测不同浓度和时间顺铂作用后SKOV3/DDPⅡ细胞周期和凋亡率的变化,并与标记GFP的上皮性卵巢癌细胞株SKOV3-GFP(敏感株)相比较;通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测不同浓度和时间顺铂作用后细胞增殖的变化;实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测裸鼠体内瘤块耐药基因CC-ND1和ARHGDIB基因的表达情况。结果:半抑制浓度的顺铂作用48h后,SKOV3-GFP和SKOV3/DDPⅡ两株细胞分布于G0/G1期的比例相对于无顺铂处理组明显下降(P<0.01,P<0.05),SKOV3/DDPⅡ细胞分布于G2/M期的比例则相对于无顺铂处理组明显升高(P<0.01);而顺铂作用48h内SKOV3-GFP和SKOV3/DDPⅡ两株细胞凋亡率随时间和浓度的增大而增大;以9.9,19.8,29.7μmol/L浓度的顺铂处理6d以后,SKOV3/DDPⅡ的增殖抑制得到解除,并继续生长,而SK-OV3-GFP细胞则随顺铂作用时间延长增殖持续受到抑制。顺铂作用体内移植瘤5次后,CCND1在SKOV3/DDPⅡ-5的相对表达比SKOV3/DDPⅡ-0增高92.98倍,作用第8次后,ARHGDIB在SKOV3/DDPⅡ-8的相对表达比SKOV3/DDPⅡ-0增高2.51倍。结论:具有耐药表型的卵巢上皮癌细胞在顺铂作用下降低分布于G0/G1期细胞数使细胞生长受到一定程度的抑制,但在顺铂刺激后肿瘤细胞过度表达CCND1基因使细胞顺利通过G1/S检查点促进肿瘤细胞增殖,同时上调表达ARHG-DIB基因抵抗顺铂诱导的肿瘤细胞凋亡。     

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞株凋亡和周期的影响

目的:探讨雷帕霉素单独及联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞凋亡、周期的影响及可能的分子机制。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,流式细胞术检测雷帕霉素单独及联合顺铂对细胞凋亡及周期分布的影响;实时RT-PCR检测对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达的影响。结果:雷帕霉素单独作用可抑制细胞生长增殖,引起G1期阻滞,S期及G2-M期细胞明显减少,使得大部分细胞处于有丝分裂间期,进而促进细胞凋亡,呈现明显的时间依从性,72 h效果最明显;联合顺铂凋亡率明显高于单独用药组(P0.01)。实时RT-PCR结果显示,雷帕霉素作用24 h可引起mTOR mRNA表达下调,72 h抑制表达低于24 h(P0.05)。结论:雷帕霉素作用于PI3K/AKT/mTOR信号传导通路的mTOR位点,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,与传统化疗药顺铂有协同效应,可增强肿瘤细胞对于顺铂的化疗敏感性。     

促红素新型环性衍生肽 对顺铂诱导肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的：探讨促红素新型环性衍生肽（cyclic helix B peptide,CHBP）对顺铂诱导肾小管上皮细胞（NRK-52E）损伤的保护作用及可能机制。方法：体外培养NRK-52E细胞,分为（1）对照组：NRK-52E细胞（4×105个）单独培养;（2）顺铂组：10 μmol/L顺铂处理NRK-52E细胞;（3）CHBP干预组：顺铂处理NRK-52E细胞加入不同浓度CHBP干预,低浓度亚组为16 nmol/L CHBP,中浓度亚组为32 nmol/L CHBP,高浓度亚组为64 nmol/L CHBP。每个亚组分别干预12 h、24 h。采用流式细胞术及Annexin V-FITC-PI法检测NRK-52E细胞凋亡率。结果：顺铂组处理24 h凋亡率较12 h增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）;在处理12 h和24 h两个时间点,顺铂组凋亡率高于对照组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;在处理12 h后,低浓度亚组凋亡率与顺铂组比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,中、高浓度亚组的凋亡率低于顺铂组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）;在处理24 h时间点,各干预组凋亡率低于顺铂组,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论：CHBP对顺铂诱导NRK-52E细胞损伤具有保护作用。     

顺铂不同给药方式对鼻咽癌细胞毒性以及细胞周期影响体外研究

目的:采用细胞培养方法研究顺铂不同给药方式对鼻咽高分化鳞癌细胞株CNE-1的细胞毒性以及细胞周期的影响.方法:MTT方法检测顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞的半抑制浓度(IC50),1/5IC50为小剂量化疗参考剂量,而IC70则为MTD化疗参考剂量.细胞分4组进行如下处理:A组剂量为1/5IC50的顺铂连续作用96 h;B组剂量为IC70的顺铂连续作用3h;C组为IC70作用3h后间隔93 h;D组为未加入顺铂化疗的鼻咽癌细胞株同样条件下培养96 h.采用流式细胞仪进行细胞周期的检测.结果:顺铂对鼻咽癌CNE-1细胞株作用72 h的IC50值为0.26 μg/ml,1/5IC50为0.05 μg/ml,IC70为0.72 μg/ml.顺铂为0.05μg/ml剂量时对CNE-1细胞无明显毒性,但细胞周期研究发现,当其连续作用96 h时,与阴性对照组相比可引起明显G2/M期阻滞(P＜0.05);而顺铂剂量为0.72 μg/ml连续作用3h后间隔24 h以及93 h时检测细胞周期变化也出现显著G2/M期阻滞(P＜0.05);但在0.72 μg/ml的顺铂作用3h后立即检测细胞周期变化,与相应阴性对照组相比无统计学意义(P＞0.05).结论:体外低毒性的小剂量顺铂连续给药可诱导鼻咽癌细胞株CNE-1细胞周期G2/M期阻滞.     

顺铂联合足叶乙甙对卵巢癌治疗的机制研究

目的 研究顺铂联合足叶乙甙(EP)方案对卵巢癌细胞增殖和细胞周期的影响以及可能的作用机制,为EP方案用于卵巢癌的治疗提供理论依据.方法 体外培养的SKOV3细胞经不同浓度的顺铂和足叶乙甙作用24h,应用MTT法检测药物的细胞毒作用,测定其A值;流式细胞仪测定细胞周期分布的变化,免疫细胞化学法检测细胞周期因子CyclinB1、P34cdc2和Survivin蛋白的表达,探讨可能的机制.结果 足叶乙甙和不同浓度的顺铂联合应用,可明显抑制SKOV3细胞的增殖,引起细胞周期的S期和G2/M期细胞比例的增加,G0/G1期比例明显下降,且下调CyclinB1、P34cdc2和Survivin蛋白的表达.结论 顺铂联合足叶乙甙对SKOV3细胞具有显著的协同效应,加强了对细胞周期的阻滞,其机制可能与细胞周期因子CyclinB1、P34cdc2和Survivin的表达下调有关.     

Survivin反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株中survivin和SMAC/DIABLO基因表达的影响

目的 观察survivin反义寡核苷酸(ASODN)对人卵巢癌细胞株SKOV3中survivin、Smac/DIABLO表达的影响,探讨survivin、Smac/DIABLO在ASODN诱导卵巢癌细胞凋亡和细胞周期改变中的作用和分子机制.方法 用脂质体(LipofectamineTM 2000)介导survivin ASODN转染人卵巢癌细胞株SKOV3,用MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞学技术检测细胞凋亡指数、细胞周期分布及survivin、Smac蛋白表达改变,逆转录酶链反应检测survivin、Smac/DIABLO基因表达改变.结果 同对照组比较,不同浓度ASODN作用后细胞生长明显减慢,转染后48 h IC50在600 nmol/1左右.用600 nmol/LASODN转染48h后,细胞凋亡指数(AI)明显增加,(t=6.3671,P＜0.05);更多的细胞停留在G0/G1期(t=10.3832,P＜0.01).Survivin mRNA和蛋白表达明显下调(t=3.5031,P＜0.05,t=7.8146,P＜0.01),SmacmRNA和蛋白表达上调(t=2.8011,P＜0.05,t=11.3917,P＜0.01).结论 ASODN诱导细胞凋亡,使更多的细胞停留在G0/G1期,减少进入有丝分裂细胞数的作用,是通过下调survivin基因,上调Smac基因表达来共同完成的,survivin、Smac/DIABLO基因在调节SKOV3细胞周期、凋亡的功能上密切相关,二者的相互作用是卵巢癌发生、发展的重要分子机制之一.     

CKMT1A对人鼻咽癌HONE1细胞铂类化疗药物敏感性的影响及机制研究

近年来鼻咽癌患者五年生存率的提升难度明显增加,对铂类化疗药物的敏感性较差是主要原因,探讨耐药机制具有重要意义。本研究将鼻咽癌细胞转染分为空载体对照组(空载体质粒)、线粒体肌酸激酶1A(CKMT1A)过表达组(CKMT1A过表达载体质粒),分别进行MTT法检测、流式细胞术检测、实时荧光定量PCR检测和Western blot检测。结果显示随着顺铂浓度的增加,CKMT1A过表达组吸光度值下降幅度更明显(P<0.01)。根据顺铂IC₅₀结果选取2 μmol/L顺铂处理细胞24 h后,两组细胞均表现为G0/G1期比例明显下降,S期和G2/M期比例明显增多。2 μmol/L顺铂处理细胞48 h后,CKMT1A过表达组细胞凋亡率明显高于空载体对照组(P<0.01);CKMT1A过表达组c-PARP、Bax相对表达量明显高于空载体对照组,BCL-2相对表达量明显低于空载体对照组(P<0.05)。2 μmol/L顺铂处理细胞6 h后, CKMT1A过表达组p-STAT3相对表达量明显高于空载体对照组(P<0.01)。过表达CKMT1A可通过细胞凋亡信号通路下调STAT3磷酸化水平,抑制靶基因表达,促进人鼻咽癌细胞株HONE1凋亡,提升对铂类化疗药物的敏感性。     

过表达PDCD5对人胃癌BGC823细胞增殖活性的影响

目的通过体外实验研究过表达程序性细胞死亡5(PDCD5)因子对人胃癌BGC823细胞增殖抑制和顺铂敏感性的影响,探讨PDCD5因子与顺铂联合治疗胃癌的可行性。方法采用MTT法检测顺铂对实验组(过表达PDCD5)、阴性对照组(转染空载体)和BGC823细胞组的增殖抑制作用,荧光观察吖啶橙染色的各组细胞形态学变化,流式细胞仪检测顺铂对咅组细胞凋亡率和细胞周期的影响。结果顺铂对BGCS23细胞的生长有抑制作用,且呈时间-剂量依赖性,48 h顺铂抑制实验组、阴性对照组和BGC823细胞组的IC50分别为(14.25±1.68)、(20.85±2.01)和(22.03±1.85)μmol/L,实验组显著低于BGC823细胞组和阴性对照组(t=2.765,2.903;P0.05);16μmol/L顺铂作用实验组细胞48h,可诱导其产生明显的细胞凋亡特征,将细胞阻滞在G2/M期;实验组G2/M期细胞[(42.98±2.34)%]显著高于BGC823细胞组[(23.96±1.51)%]和阴性对照组[(2497±1.82)%],差异具有统计学意义(F=77.45d,P0.05);实验组G0/G1期细胞[(31.13±2.01)%]较BGC823细胞[(49.53±2.87)%]和阴性对照组[(47.58±1.86)%]显著下降(F=98.973,P0.05)。结论过表达PDCD5因子可以增强BGC823细胞对顺铂的敏感性,促进细胞凋亡。     

3-溴丙酮酸联合顺铂抑制肺癌细胞株A549的生长

目的 探讨3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BrPA)联合顺铂体外抗肺癌A549细胞的作用及其可能机制.方法 采用CCK-8检测不同浓度的3-BrPA、顺铂单用及联用对A549细胞的增殖抑制;选择低于半数抑制浓度(IC50)的40 μmol/L 3-BrPA与1 mg/L顺铂单独和联合作用A549细胞48 h后,用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡;不同浓度的3-BrPA作用A549细胞48 h后,流式细胞术检测细胞周期变化,己糖激酶(hexokinase,HK)活性检测试剂盒检测3-BrPA对细胞内HK活性的影响.结果 CCK-8结果显示,与阴性对照组比较,3-BrPA浓度大于20 μmol/L时对A549细胞有明显抑制作用(P＜0.01),与单用顺铂组比较,3-BrPA联合顺铂组可显著增强顺铂对A549细胞的毒性作用(P＜0.01);3-BrPA作用A549细胞48 h后,倒置显微镜观察到3-BrPA组大多数细胞出现凋亡,而联合用药组细胞凋亡更加明显,部分区域出现细胞碎片等坏死征象;流式细胞术结果显示,3-BrPA和顺铂单用组及联合用药组细胞凋亡率均明显高于阴性对照组(P＜0.01),且联合用药组细胞凋亡率明显高于单独用药组(P＜0.01);细胞周期检测结果显示3-BrPA可将A549细胞阻滞于G1期;HK活性结果显示:与阴性对照组比较,3-BrPA组HK活性明显降低(P＜0.01).结论 3-BrPA有抑制肺癌A549细胞增殖、诱导其凋亡的作用,且与顺铂具有协同抗肺癌A549细胞增殖作用,其机制可能为抑制肺癌细胞糖酵解,进而影响肺癌细胞能量代谢.     

顺铂耐药卵巢癌细胞化疗敏感性实验

【目的】研究顺铂（DDP）、洛铂（LBP）、紫杉醇（PTX）、吉西他滨（GEM）对卵巢癌SKOV3细胞及顺铂耐药SKOV3/DDP细胞增殖的影响。【方法】培养基中不含药物的处理组为对照组,加入不同浓度化疗药物的处理组为实验组。在相差显微镜下观察细胞形态变化;用MTT法测定单药应用、双药联合使用对两种细胞生长的影响;流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率的变化。【结果】SKOV3∕DDP细胞耐药指数为7.10&#177;2.19。紫杉醇、洛铂、吉西他滨对两种细胞的抑制率无明显差别。洛铂、紫杉醇、吉西他滨两药联合组与相应单一用药组相比,能显著抑制肿瘤细胞的生长,其中吉西他滨＋洛铂及紫杉醇＋洛铂组抑制率明显增高。相同浓度顺铂作用48h后,SKOV3/DDP细胞的凋亡率低于SKOV3细胞。洛铂、紫杉醇、吉西他滨作用两种细胞48h后,细胞凋亡率差异无统计学意义。顺铂、洛铂与紫杉醇、吉西他滨主要作用于不同的细胞周期。【结论】SKOV3/DDP细胞对紫杉醇、洛铂、吉西他滨无交叉耐药。联合用药有高效协同抑制细胞生长作用,临床治疗卵巢癌顺铂耐药患者可考虑选择吉西他滨＋洛铂、紫杉醇＋洛铂联合化疗。     

白藜芦醇对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药逆转的初步研究

目的探讨白藜芦醇对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药逆转作用及其作用机制。方法体外培养人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP,以MTT法检测单用白藜芦醇对SKOV-3/DDP的杀伤影响,确定其对此细胞株的逆转剂量;同法测定无毒剂量白藜芦醇干预后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化,通过流式细胞仪检测白藜芦醇逆转剂量干预细胞株后细胞的凋亡情况,采用RT-PCR方法检测白藜芦醇处理SKOV3/DDP细胞前后MDR-1和Bcl-2基因的表达。结果回归分析得出,当白藜芦醇终活性浓度<115.68 U/ml时,对SKOV-3/DDP细胞生长无明显抑制作用,其抑制率小于10%。DDP组于24、48、72 h作用耐药SKOV3/DDP细胞的IC50分别为（23.31±0.42）、（9.01±0.72）、（6.45±0.83）μg/ml,当与逆转剂量（100 U/ml）的白藜芦醇联合应用时白藜芦醇使DDP对耐药SKOV3/DDP细胞的IC50均降低,差异有统计学意义(（印）P（正）<0.05);与24 h RF值相比,48 h和72 h RF值差异均有统计学意义(（印）P（正）<0.05);与对照组相比,DDP组和白藜芦醇+DDP组人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡数、MDR-1 mRNA、Bcl-2 mRNA及MDR-1/Bcl-2值与对照组比较,组间差异均有统计学意义(（印）P（正）<0.05),且白藜芦醇+DDP组SKOV3/DDP细胞凋亡数、MDR-1/Bcl-2值明显高于DDP组(（印）P（正）<0.05)。结论白藜芦醇与卵巢癌发生、发展的密切相关,可有效逆转人卵巢癌SKOV3/DDP细胞的顺铂化疗耐药性,且可通过下调MDR-1和Bcl-2的mRNA表达以减少P-gp蛋白表达及药物外排,维持细胞内的DDP浓度。     

卵巢癌耐药细胞株SKOV3／DDP的建立及其与凋亡途径蛋白的关系

目的：通过顺铂（cisplatin,DDP）诱导卵巢癌细胞珠 SKOV3建立耐药细胞株 SKOV3/DDP,并研究其与凋亡途径蛋白的关系。方法应用倒置显微镜观察 DDP 对细胞形态的影响,四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法检测 DDP 对 SKOV3和 SKOV3/DDP 细胞的增殖抑制情况,流式细胞术（flow cytometry, FCM）检测细胞凋亡率以及细胞中 X链锁凋亡抑制蛋白（X-linked inhibitor-of-apoptosis protein,XIAP）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cysteine-aspartic acid protease-3,Caspase-3）、B 细胞淋巴瘤/白血病2（B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2）和生存素（Survivin）的表达情况。结果 MTT法检测发现DDP作用后,SKOV3/DDP细胞的增殖抑制率较 SKOV3细胞显著降低（P＜0．01）,且存在着浓度和时间依赖效应（P＜0．01）。由半数抑制浓度（50％concentration of inhibition,IC50）比较得 SKOV3/DDP 细胞24、48、72h 耐药指数（resistance index,RI）分别为2．434、2．950、3．780。FCM检测表明,DDP 作用后,SKOV3/DDP 凋亡率显著低于 SKOV3细胞（P＜0．01）。与SKOV3细胞相比,SKOV3/DDP细胞中XIAP、Bcl-2、Survivin蛋白高表达,Caspase-3蛋白低表达,差异有统计学意义（P＜0．01）。结论成功建立卵巢癌耐药细胞株 SKOV3/DDP,其耐药机制可能与 XIAP、Caspase-3、Bcl-2和Survivin蛋白的异常表达有关,表明这些蛋白参与了卵巢癌DDP耐药的形成。     

塞来昔布对高表达Her-2/neu的人乳腺癌SKBr3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人乳腺癌细胞SKB r3的抑制增殖及诱导凋亡作用。方法4种不同浓度的塞来昔布处理乳腺癌细胞系SKB r3细胞24、48 h,MTT法测定24、48 h后SKB r3细胞的增殖活性,流式细胞仪（FCM）检测48 h后各浓度塞来昔布诱导细胞凋亡情况及对细胞周期的影响。结果与对照组相比,塞来昔布以时间、剂量依赖性方式抑制SKB r3细胞增殖（P〈0.05）。作用48 h后,塞来昔布诱导SKB r3细胞凋亡并阻断了细胞周期进展,凋亡率随塞来昔布浓度的增加而增加（P〈0.05）,且随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞比例逐渐增加、S期及G2/M期细胞比例逐渐下降（P（0.05）。结论塞来昔布抑制高表达Her-2/neu的SKB r3细胞的增殖,诱导其凋亡。     

橙皮甙对人非小细胞肺癌A549/DDP细胞增殖的影响

目的 观察橙皮甙对耐顺铂的人非小细胞肺癌A549/DDP细胞增殖的影响.方法 培养A549及A549/DDP细胞,绘制细胞生长曲线 ;MTT法测定A549/DDP细胞对顺铂的耐药倍数 ;②测定6、12、24、48及96 mg/L橙皮甙在6、12、24及48 h对A549/DDP细胞增殖的抑制率.③用24 mg/L橙皮甙处理A549/DDP细胞24 h后,用流式细胞计量术分析细胞周期.结果 ①A549/DDP细胞和A549细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.68±0.11)h和(33.54±0.84)h; A549/DDP细胞对顺铂的耐药倍数为12.90.②橙皮甙对A549/DDP细胞的抑制率随橙皮甙浓度增加和(或)时间的延长而增强(Pearson相关分析P＜0.05).③24 mg/L橙皮甙作用A549/DDP细胞24 h后,实验组G2/M期和S期细胞数比对照组减少(P＜0.05).结论 ①A549/DDP细胞基本保留了A549细胞的生长特性,对顺铂有明显耐药性.②橙皮甙对A549/DDP生长有抑制作用.③橙皮甙可诱导A549/DDP细胞阻滞于G2/M期.     

紫草素对人肝癌细胞化疗增敏作用及机制研究

目的研究紫草素对人肝癌HepG_2细胞顺铂增敏作用并初探其可能的作用机制。方法取对数生长期人肝癌HepG_2细胞并分别给予紫草素组(紫草素0.5μg/ml)、顺铂组(顺铂40μg/ml)和联合干预组(紫草素0.5μg/ml+顺铂40μg/ml)干预治疗48 h,同步设空白对照组,每组设10个复孔(n=10)。检测细胞增值抑制率、细胞周期和细胞凋亡状况并计算细胞凋亡率及Bax mRNA、bcl-2 mRNA、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达情况。结果与顺铂组比较,联合干预组人肝癌HepG_2细胞增殖抑制率显著升高(P0.05),细胞周期G_0/G_1期显著延长(P0.05)、G_2/M期显著缩短(P0.01),凋亡细胞数量明显增多、细胞凋亡率显著升高(P0.01),Bax mRNA表达上调、bcl-2 mRNA表达下调(P0.05),且Bax/bcl-2比值显著升高(P0.01),Caspase-3蛋白表达上调(P0.05)。与空白对照组比较,紫草素组人肝癌HepG_2细胞周期G_0/G_1期延长、G_2/M期缩短,bcl-2 mRNA表达下调(P0.05)、Bax/bcl-2比值升高(P0.05),Caspase-3蛋白表达上调(P0.01)。结论紫草素具有提高人肝癌HepG_2细胞顺铂敏感性的作用,其机制可能与紫草素阻滞细胞周期及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

蒽醌修饰物4X触发内质网应激诱导卵巢癌细胞死亡模式研究

目的：探究蒽醌修饰物4X诱导卵巢癌细胞SKOV3和顺铂（DDP）耐药卵巢癌细胞SKOV3/DDP的死亡模式和作用机制。方法：分别将SKOV3细胞和SKOV3/DDP细胞分为对照组和不同浓度（2μmol/L、4μmol/L和8μmol/L）蒽醌修饰物4X组。采用MTT法检测细胞增殖率,苏木精-伊红（HE）染色观察细胞形态,线粒体绿色荧光探针观察线粒体形态,透射电镜观察细胞超微结构,western blotting法检测内质网应激相关蛋白（GRP78、PERK）、凋亡蛋白（CHOP）和铁死亡关键蛋白（GPX4）的表达。加入凋亡抑制剂Z-VAD-FMK,与蒽醌修饰物4X共处理,用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：蒽醌修饰物4X作用48 h后,SKOV3和SKOV3/DDP细胞增殖均明显受到抑制（P<0.05）。经蒽醌修饰物4X处理后SKOV3和SKOV3/DDP细胞质出现明显空泡,且部分空泡累及细胞核,SKOV3和SKOV3/DDP均有明显的线粒体损伤;经蒽醌修饰物4X处理后细胞线粒体固缩,膜密度增高,嵴消失。与对照组相比,蒽醌修饰物4X组SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡率升高（P...     

姜黄素逆转P—gp介导卵巢癌多药耐药机制的研究

目的探讨姜黄素对P糖蛋白（P—gP）介导的卵巢癌多药耐药的逆转作用及其可能机制。方法采用二苯基溴化四氮唑蓝（MTT）法检测人卵巢癌癌细胞株加药后的增殖,碘化丙啶（PI）染色法检测细胞凋亡率,western blot法检测P—Akt和P-gP的表达量。结果姜黄素合用顺铂处理细胞（OVCAR-3／DDP细胞株）48h,顺铂的浓度在0．05—5μg／ml时,加入姜黄素25μmol／L,耐药细胞生存率下降明显（P〈0．05）,尤以顺铂0．25μg／ml和姜黄素25μmol／L作用时耐药细胞生存率下降最明显。单用顺铂组细胞的凋亡率为（13．2±2．5）％,采用在顺铂基础上联合使用姜黄素后细胞凋亡率为（21．8±3．5）％,与单独使用顺铂相比,顺铂与姜黄素联合使用诱导细胞凋亡的作用显著增强（P〈0．05）。与单用顺铂0．25μg/ml相比,联合使用姜黄素后p-Akt和P-gP的表达量明显降低（P〈0．05）,2组间Akt的表达量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论姜黄素不增加顺铂对OVCAR-3细胞毒性作用;对于OVCAR-3／DDP细胞株,姜黄素明显增加顺铂细胞毒性;姜黄素明显抑制了p-Akt和P—gP蛋白的表达。姜黄素可能通过抑制Akt信号通路降低P—gP的表达进而逆转多药耐药。     

乳胞素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用和促凋亡作用

目的：探讨蛋白酶体抑制剂乳胞素（LAC）对体外卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法：体外培养卵巢癌SKOV3细胞,采用0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol·L^-1 LAC干预SKOV3细胞48 h,5μmol·L^-1 LAC干预SKOV3细胞0、24、48和72 h;将细胞分为对照组（细胞不经药物干预）、LAC组（加入5μmol·L^-1 LAC）、卡铂组（加入10、20、40及80μmol·L^-1卡铂）和LAC联合卡铂组（加入5μmol·L^-1 LAC和10、20、40、80μmol·L^-1卡铂）。采用MTT法和流式细胞术（FCM）检测各组卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制率和凋亡率。结果：MTT检测,随着LAC作用时间的延长和浓度的升高,SKOV3细胞的增殖受到明显抑制,48 h时LAC的半数抑制浓度（IC₅₀）为5.36μmol·L^-1;LAC联合卡铂组细胞的增殖抑制率较相同浓度卡铂组明显升高（P<0.05）,卡铂的IC₅₀由58.08μmol·L^-1下降至18.37μmol·L^-1。FCM检测,随着LAC作用时间的延长,SKOV3细胞凋亡率呈升高趋势;与卡铂组和LAC组比较,LAC联合卡铂组SKOV3细胞凋亡率明显升高（P<0.05）。结论：LAC可有效抑制卵巢癌SKOV3细胞的体外增殖且能诱导其凋亡,并可以明显增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞株的增殖抑制作用。     

不同浓度地塞米松对成骨样细胞OS-732细胞凋亡和细胞周期的影响

[目的]通过不同浓度地塞米松(DMX)体外培养成骨样细胞OS-732,观察糖皮质激素对其凋亡和细胞周期的影响.[方法]选择细胞密度为1×105/mL且贴壁生长良好的OS-732细胞,设不同浓度给药组(即DMX1、DMX2、DMX3组,分别加入浓度为10-7、10-8、10-9 mmoL/L的DMX与RPMI-1640培养)和空白对照组(仅加入RPMI-1640培养),于24 h和48 h两个时间点检测细胞各项DNA含量及细胞周期.[结果]在24 h时间点,DMX1组G2/M期DNA含量显著增加(P＜0.01);DMX2组各期与空白对照组比较,差异无显著性意义(P＞0.05);DM)(3组G0/G1期DNA含量显著减少(JP＜0.05).空白对照组和各给药组均出现了凋亡峰,DMX1组细胞凋亡率显著下降(P＜0.05),DMX3组细胞凋亡率显著上升(P＜0.01).在48 h时间点,DMX1组G2/M期DNA含量显著增加(P＜0.05),细胞凋亡率显著下降(P＜0.05);DMX2组和DMX3组细胞凋亡率显著上升(P＜0.01),S期DNA含量显著减少(P＜0.01).[结论]糖皮质激素使用的时间和量对成骨样细胞的作用不同,小剂量糖皮质激素(生理需要量)对成骨样细胞的增殖具有促进作用,高剂量糖皮质激素(超过生理需要量)对成骨样细胞的增殖和分化具有抑制作用.     

不同浓度菟丝子乙醇提取物对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的评估不同浓度的菟丝子乙醇提取物对宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响。方法将培养好的宫颈癌Hela细胞分为5组,对照组仅给予1%DMSO,其余4组为实验组,分别加入3.125、6.25、12.5、25mg/ml菟丝子乙醇提取物。分别在培养12、24、48h时检测HeLa细胞增殖情况,培养48h后分析各组的细胞周期以及细胞迁移和侵袭能力的变化;检测Caspase-3和Bcl-2蛋白的表达。结果与对照组相比,仅12.5、25mg/ml组G2/M期的细胞数比例显著增加,G0/G1期细胞比例下降（均P＜0.05）。培养24、48h时25mg/ml组对Hela细胞的增殖抑制率均显著高于其余各组（均P＜0.05）,12.5mg/ml组在24、48h的增殖抑制率均显著高于12h的增殖抑制率（均P＜0.05）,25mg/ml组的增殖抑制率随着时间增加显著增加（均P＜0.05）。迁移及侵袭实验中12.5、25mg/ml组的穿膜细胞数较对照组均明显减少,Hela细胞中Caspase-3表达较对照组显著增加,Bcl-2蛋白表达较对照组显著减少（均P＜0.05）。结论高浓度的菟丝子乙醇提取物可以通过阻滞细胞周期于G2/M期,抑制Hela细胞的侵袭和迁移,通过上调Caspase-3和下调Bcl-2促进Hela细胞凋亡,提示高浓度的菟丝子乙醇提取物具有抗宫颈癌的作用。