靶向STAT5的siRNA诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的 采用RNA干扰技术阻断STAT5基因的表达,观察其对人肝癌SMMC-7721凋亡的影响.方法 构建3种靶向STAT5的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,采用LipofectamineTM2000转染肝癌细胞SMMC-7721;分别采用半定量RT-PCR、Western blot技术检测转染前后SMMC-7721细胞STAT5 mRNA和蛋白质表达的变化;采用透射电镜技术观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 3条靶向STATS的序列特异性的siRNA可以有效地抑制SMMC-7721细胞STATS mRNA和蛋白质表达,STAT5 mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,STAT5蛋白表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%;转染靶向STAT5的siRNA真核表达载体48 h后出现凋亡细胞的典型形态学变化,并诱导25.61%的SMMC-7721细胞发生凋亡.结论 靶向STAT5的siRNA真核表达载体可以有效、特异地阻断SMMC-7721细胞STAT5基因的表达,并能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,STAT5 siRNA在人肝癌的基因治疗中可能具有潜在的应用价值.     

表阿霉素对人肝癌SMMC-7721细胞bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨表阿霉素诱导SMMC-7721细胞凋亡的可能分子机制。方法 采用流式细胞仪间接免疫荧光法检测表阿霉素作用于人肝癌SMMC-7721细胞后bcl-2蛋白的表达。结果 随着表阿霉素的浓度增加，作用于SMMC-7721细胞时间的延长，细胞bcl-2蛋白的表达逐渐降低，SMMC-7721细胞bcl-2蛋白的表达与表阿霉素作用浓度EY时间呈负相关。结论 Bcl-2基因表达下调可能是表阿霉素诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的重要机制之一。     

5-Fu,HCPT诱导人肝癌细胞凋亡的对比性实验研究

用不同浓度的传统的化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)、羟基喜树碱(HCPT)作用人肝癌SMMC-7721细胞,于不同时间,用定性的方法观察有无细胞凋亡的产生,用定量的方法对两药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果进行比较.结果:5-Fu,HCPT均能诱导人肝癌SMMC-7721细胞产生凋亡,两药物诱导人肝癌细胞产生的最高凋亡率的作用时间为48 h,最佳浓度为7.5 μg/mL,1 mg/mL,最高凋亡率分别为38.7%,42.6%.经统计学处理,两药物诱导人肝癌细胞凋亡的效果相当,而与对照组有显著性差异.结论:小剂量的5-Fu,HCPT均可作为凋亡诱导剂用于临床肝癌治疗.     

白英提取物诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其对凋亡相关基因表达的影响

目的探讨白英提取物(Solanum lyratum Thunb extract,STE)对乳腺癌MCF-7细胞凋亡及凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法体外培养MCF-7细胞,以2.5、5、10 mg/L STE处理MCF-7细胞48小时,并以2.5 mg/L顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,TUNEL法检测凋亡率,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达。结果与正常对照组比较,STE各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),caspase-3 mR-NA表达显著上升(P<0.001),survivin mRNA表达明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论STE具有诱导MCF-7细胞凋亡作用,其分子机制可能与上调caspase-3及下调survivin基因表达有关。     

姜黄素通过内质网应激信号通路诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及对细胞活性影响分析

目的 分析姜黄素通过内质网应激信号通路诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的作用及对细胞活性影响。方法 选取2017年4月～2018年3月期间为研究时间段,以此期间购置的肝癌SMMC-7721细胞为试验样本,利用不同浓度姜黄素处理试验样本,先经流式细胞仪检测细胞凋亡情况,后经CCK8法分别在试验开始后24 h检测其细胞活力,再经流式细胞仪检测肝癌细胞ROS含量。结果 姜黄素浓度越高,肝癌细胞存活率呈逐步下降趋势,同空白对照样本比较,有显著性差异(P0.05);姜黄素浓度越高,MFI值呈逐步升高趋势,同空白对照样本比较,有显著性差异(P0.05);不同浓度姜黄素处理的试验样本细胞凋亡率,呈逐渐上升趋势,与空白对照样本比较,有显著性差异(P0.05)。结论 利用姜黄素可有效地抑制肝癌细胞活性,诱导肝癌细胞凋亡。     

survivin反义寡核苷酸诱导人肝癌细胞凋亡的相关信号转导途径

目的 利用人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,探讨survivin基因诱导肝癌细胞凋亡的相关信号转导途径。方法 采用脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞。采用Western印迹及原位杂交检测细胞内survivin蛋白及mRNA的表达。采用流式细胞仪及TUNEL染色检测细胞凋亡的变化。采用western印迹,免疫沉淀,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及激酶活性检测方法测定细胞内丝裂原活化蛋白激酶p38(p38MAPK)及半胱氨蛋白水解酶3表达及活性的变化,观察p38MAPK与半胱氨蛋白水解酶3活性变化之间的关系。结果 脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸后,SMMC-7721肝癌细胞内survivin蛋白及mRNA表达可分别被下调84.6%及69.7%。凋亡细胞比率由转染前的0.70%增加至31.51%。转染后细胞内p38MAPK及半胱氨蛋白水解酶3表达无明显变化。但其活性显著升高,其中p38MAPK活性升高发生于半胱氨蛋白水解酶3活性升高之前。结论 转染survivin反义寡核苷酸可以有效诱导肝癌细胞发生凋亡,其诱导肝癌细胞凋亡的信号通过顺序激活p38MAPK-半胱氨蛋白水解酶3信号途径传导。     

姜黄素对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制和诱导凋亡的初步研究

目的:观察姜黄素对人肝癌细胞SM MC - 7721生长抑制和诱导凋亡的影响.方法:以不同浓度(10μmol/L、30μmoL/L、90μmol/L)的姜黄素作用于体外培养的SMMC - 7721细胞48h,MTT法检测姜黄素对细胞的生长抑制率;基于AnnexinV - FITC/PI双染的流式细胞方法检测不同浓度姜黄...     

抑制survivin表达对前列腺癌细胞pc-3凋亡的影响

[目的]研究survivin与前列腺癌的关系,探讨survivin对前列腺癌细胞pc-3凋亡的影响及其机制。 [方法]运用RNA干扰技术阻断survivin在前列腺癌细胞pc-3中的表达,采用流式细胞计数等方法检测survivin 被阻断后,对前列腺癌细胞pc-3凋亡的影响。[结果]阻断survivin在前列腺癌细胞pc-3中的表达后,能够引起 pc-3细胞的凋亡,其机制可能是由于活化了凋亡通路的caspase-3。[结论]Survivin可以做为治疗前列腺癌的一个潜在的基因靶点。     

染料木黄酮对顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的增敏作用

目的: 探讨染料木黄酮增强顺铂对人肝癌SMMC-7721细胞生长抑制、诱导凋亡及NF-κB表达的影响.方法: 采用MTT法、透射电镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪和免疫组化技术研究染料木黄酮,顺铂,染料木黄酮与顺铂联合3组药物处理肝癌细胞后生长抑制、形态学变化、诱导凋亡和对NF-κB表达的影响.结果: MTT法证实联合组对细胞抑制作用最强,作用24 ,48 h后(A570nm: 0.497±0.030→0.295±0.098,0.791±0.042→0.312±0.019,P<0.01).镜下可见细胞出现典型凋亡细胞形态学改变.流式细胞仪检测凋亡以联合组最强,细胞周期阻滞于G2/M期.免疫组化技术检测顺铂作用后NF-κB表达(64.9±5.4)%,联合组作用后(23.4±2.1)%(P<0.01).结论: 染料木黄酮通过抑制激活NF-κB表达,增强顺铂诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡.     

重组人内皮抑素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响

目的 初步研究Wnt通路在重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin,ES)诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡过程中的作用及可能机制.方法 分别以50、100、200、400 μg/ml ES体外处理人肝癌细胞株SMMC-7721,利用MTT比色法检测不同浓度、时间ES作用下的细胞增殖状态;利用流式细胞仪检...     

羟基喜树碱通过线粒体途径诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡的观察

目的:研究羟基喜树碱是否可通过线粒体途径诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡. 方法: 将不同浓度的羟基喜树碱作用于肝癌细胞SMMC-7721,用MTT法检测细胞增殖,光镜观察细胞形态;用荧光染料MitocaptureTM检测线粒体跨膜电位、用Western blot法检测细胞色素C从线粒体的释放;用Annexin Ⅴ-FITC,hoechst法及电镜检测细胞的凋亡状况. 结果:羟基喜树碱对肝癌细胞SMMC-7721的增殖有明显的抑制作用,IC50约是80 mg/L. 当用80 mg/L羟基喜树碱作用不同时间后:线粒体膜跨电位下降并伴随有细胞色素C从线粒体至细胞质的释放;细胞膜的磷脂酰丝氨酸外翻;细胞核染色质固缩,呈致密浓染的凋亡状态. 结论:羟基喜树碱通过线粒体途径引起线粒体跨膜电位下降与细胞色素C的释放可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一.     

瑞香素对SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因mRNA表达的影响

目的探讨瑞香素对SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2/Bax基因mRNA表达的影响,并探讨其作用机制。方法 (1)流式细胞仪检测1.95～250μg/mL的瑞香素作用SMMC-7721细胞后与细胞对照组(等体积、细胞培养代替瑞香素)比较其对细胞周期和凋亡的影响;(2)荧光定量PCR检测瑞香素作用SMMC-7721细胞后与细胞对照组比较其Bcl-2、Bax mRNA表达的变化。结果 (1)流式细胞仪检测结果显示瑞香素在1.95～250μg/mL浓度范围可诱导SMMC-7721细胞凋亡,凋亡率为35.9%～77.57%;(2)瑞香素组细胞处于G2/M和S期的百分率高于细胞对照组;(3)瑞香素在1.95～250μg/mL浓度范围时与细胞对照组比较Bcl-2基因表达明显降低,而在31.25～250μg/mL浓度范围时Bax基因表达则明显升高。结论瑞香素在1.95～250μg/mL浓度范围对SMMC-7721细胞生长均有不同程度的抑制作用;其机制可能与诱导细胞G2/M和S期阻滞,下调凋亡抑制Bcl-2基因的表达和上调促进细胞凋亡Bax基因的表达有关。     

阿司匹林对SMMC-7721人肝癌细胞增殖的影响

目的:探讨阿司匹林对肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖的影响。方法:SMMC-7721细胞体外培养,阿司匹林处理细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖程度,Tunel法检测细胞凋亡指数。结果:不同浓度的阿司匹林能明显抑制细胞增殖,且抑制程度呈现剂量和时间依赖关系。细胞凋亡指数也随阿司匹林浓度的增加而增加。结论:阿司匹林对SMMC-7721的增殖具有抑制作用,抑制程度与阿司匹林的浓度和作用时间呈正相关,其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡来抑制细胞的增殖。     

Knockdown of Survivin Expression by siRNA Induces Apoptosis of Hepatocellular Carcinoma Cells

Survivin, a newly identified member of lAP family, is a powerful apoptosis-inhibiting factor. It is expressed in embryonic tissues as well as in the majority of human cancers, but not in most normal adult tissues. The cancer-specific expression of survivin makes it a potential target for cancer treatment. A survivin-specific small inhibitory RNA （siRNA） was introduced into hepatocellular carcinoma cells to investigate its effect on cancer cell apoptosis, growth and sensitivity to chemotherapeutic drugs. It was found that expressions of survivin protein and proliferation index （PI） in siRNA groups were significantly decreased, the apoptosis index （AI） of siRNA groups was significantly higher than those of others groups, and the growth inhibition rate （GIR） of chemotherapeutic drugs in siRNA groups were significantly higher than those of other groups. Our study suggests that the expression of survivin may be significantly decreased in hepG2 cell after siRNA transfection. siRNA targeting survivin could induce cell apoptosis, inhibit cell proliferation and sensitize hepatocarcinoma cells to chemotherapy. Our findings provide preliminary evidence for the therapeutic use of survivin-targeted RNA interference for human tumors that express high levels of this molecule.     

橙皮素衍生物对肝癌细胞SMMC-7721的促凋亡作用

目的 以橙皮素为原型,合成了新型化合物HY-12,研究其体外对SMMC-7721细胞的促凋亡作用及机制.方法 在3个时间点(24、48、72 h)采用 MTT 比色法观察不同浓度HY-12对肝癌细胞、肝细胞增殖的影响,计算半数抑制率(IC50).根据结果选取了24 h,12.5×10-6,25×10-6,50×10-6 mol/L 3个浓度进行下述实验.通过Annexin V/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率;制备细胞爬片, Hoechst 33342染色,在荧光倒置显微镜下观察细胞凋亡的形态学改变;采用Western blot 法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白水平的表达情况.结果 ① MTT法显示在对肝细胞活性无显著影响的前提下,HY-12在体外可抑制SMMC-7721细胞的增殖,且具有剂量-时间依赖性;② 流式细胞仪检测显示HY-12作用后,SMMC-7721细胞凋亡率增加,且呈浓度依赖性趋势;③ 经Hoechst 33342染色,药物处理后细胞核皱缩断裂呈现亮蓝色新月状;④ Western blot 结果显示药物处理可以使Bax蛋白表达上调,相反地Bcl-2蛋白表达下调.结论 橙皮素衍生物HY-12有明显抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖作用.其机制可能是通过调节Bcl-2、Bax表达以诱导细胞凋亡.HY-12可能成为治疗肝癌的有效化疗药物.     

柴胡皂甙D对SMMC-7721细胞株体外分化的研究

摘要：目的　观察柴胡皂甙D（SSD）对SMMC-7721细胞的体外分化诱导作用,并初步探讨其作用机制。方法　通过观察细胞毒作用、平均核面积、细胞周期改变和P38MAPK、NF-κB信号转导分子的表达变化初步揭示其作用机制。结果　SSD具有明显的细胞抑制作用且,呈一定的量效关系;SSD2.5 mg/L、5 mg/L处理组能明显缩小平均核面积（p<0.05）;能使细胞周期阻滞于G0/G1期（p<0.005）;能明显上调P38MAP kinase表达（p<0.05）,显著抑制NF－κB的核内表达 (P<0.05)。结论　SSD对SMMC－7721细胞具有显著诱导分化作用;并且将SMMC-7721的细胞周期明显阻滞于G0/G1期,从而使细胞增殖活性降低,进而趋于分化或凋亡;其作用机制可能是通过上调 P38MAPK,下调NF－κB表达有关。     

Ursolic acid induces human hepatoma cell line SMMC-7721 apoptosis via p53-dependent pathway

Background Ursolic acid （UA） is a ubiquitous molecule in the plant kingdom with specific anticancer effects that have been shown in vitro and in vivo. Although UA can inhibit the proliferation of liver cancer cells and induce apoptosis of many types of tumor cells, the molecular mechanism of its anti-hepatoma activity is still not well defined. The objective of this study was to investigate the inhibitory effect and mechanisms of UA on the human hepatoma cell line SMMC-7721. Methods After treatment with UA, the growth inhibition of SMMC-7721 cells was assessed by MTT assay. Cells were also evaluated by flow cytometric analysis, Wright-Giemasa staining, Hoechst 33258 staining and transmission electron microscope after they were induced by UA. DNA microarray technology was used to investigate the gene expression pattern of SMMC-7721 cells exposed to UA 40 pmol/L. The molecular mechanism of cells death was analyzed by real-time RT-PCR and Western blotting. Results The proliferation of SMMC-7721 cells was significantly inhibited in a dose- and time-dependent manner after UA treatment. UA induced cell cycle arrest and apoptosis. The DNA microarray analysis indicated that 64 genes were found to be markedly up- or down-expressed, including GDF15, SOD2, ATF3, and fos. The result of Western blotting showed the apoptotic proteins p53 and Bax were up-regulated while the anti-apoptotic protein Bcl-2 was down-regulated. Real-time RT-PCR confirmed UA could up-regulate the mRNA expressions of GDF15, SOD2, ATF3 and down-regulate the mRAN expression of fos. Meanwhile these effects were partly blocked by pretreatment with the p53 inhibitor Pft-a. Conclusion Activation of the p53 pathway is involved in UA inhibition of SMMC-7721 human hepatocellular carcinoma cell growth and induction of apoptosis.