腹腔一次注射法构建百草枯致小鼠肺间质纤维化模型

目的建立一种简便易行的百草枯(PQ)致肺间质纤维化动物模型。方法 33只C57BL/6J小鼠随机分为实验组(30只)和对照组(3只)。实验组腹腔一次性注射PQ 10 mg/kg,并于染毒后第2、5、7、14、28天处死小鼠,对照组腹腔注射生理盐水并于第28天处死。观察两组小鼠的一般情况、肺组织大体结构和肺组织病理学改变。结果实验组小鼠在染毒后2 h即出现中毒性改变,肺组织在第28天出现了明显的纤维化改变。结论腹腔一次性注射PQ能简便、可靠的构建出肺纤维化动物模型,可用于进一步研究PQ中毒所致的肺间质纤维化发病机制和治疗方法。     

血液灌流对急性百草枯中毒兔肝组织炎症损伤的影响

目的观察血液灌流对急性百草枯中毒兔肝组织炎症损伤影响，并探讨可能的机制。方法将60只普通级雄性日本大耳白兔按随机数字表法分为4组，正常对照组6只，空白对照组18只，百草枯染毒组18只，血液灌流（HP）治疗组18只。正常对照组给予0.9%氯化钠溶液50mg/kg灌胃，空白对照组给予0.9%氯化钠溶液50mg/kg灌胃1h后给予HP治疗持续2h，百草枯染毒组给予20%百草枯50mg/kg灌胃染毒，HP治疗组百草枯灌胃染毒1h后给予HP治疗持续2h。于第1、3、7d麻醉处死，并留取肝脏。检测血浆ALT、AST和肝组织TBIL、TNF-α、IL-6和NF-κB基因和蛋白的表达。光镜下观察肝脏组织病理改变。结果与正常对照组相比，空白对照组各观察指标无变化，百草枯染毒组血浆AST、ALT、TBIL和肝组织TNF-α、IL-6、NF-κBmRNA和蛋白表达量在第1、3、7天明显升高（P＜0.05）。与百草枯染毒组相比，HP治疗组血浆AST、ALT、TBIL和肝组织TNF-α、IL-6、NF-κBmRNA和蛋白表达量在第1、3、7天显著下降（P＜0.05）。光镜下观察，百草枯染毒组兔肝组织病理损害在染毒后第3天最严重，在第1、3、7天，HP治疗组肝脏病理损害较百草枯染毒组轻。结论HP治疗可能够减轻百草枯对家兔肝脏的炎症损伤，对百草枯中毒所致的兔肝脏损伤具有保护作用。     

百草枯中毒小鼠肺组织转化生长因子β和缺氧诱导因子1α的表达

目的 探讨百草枯中毒小鼠肺组织转化生长因子β (TGF-β)和缺氧诱导因子1α(HIF-1 α)的表达变化.方法 将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组(n=10)和百草枯组(n=20).百草枯组腹腔注射百草枯20 mg/kg,对照组腹腔注射等体积生理盐水.在染毒后第7天处死10只百草枯组小鼠,第28天处死其余小鼠.通过苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色进行肺组织病理学观察;免疫组织化学法检测肺组织TGF-β和HIF-1α蛋白的表达.采用Pearson相关分析法分析TGF-β蛋白与HIF-1α蛋白表达的相关性.结果 HE染色和Masson染色结果均显示:在染毒后第7天,百草枯组可见肺纤维化表现;染毒后第28天,肺纤维化程度加重.染毒后第7天百草枯组小鼠肺组织TGF-β蛋白的表达明显高于对照组,染毒后第28天TGF-β蛋白的表达高于染毒后第7天,差异均有统计学意义(P＜0.05).染毒后第7天和第28天,百草枯组小鼠肺组织HIF-1α蛋白的表达均明显高于对照组(P＜0.05);染毒后第28天的HIF-1α蛋白的表达高于第7天,但差异无统计学意义(P＞0.05).在染毒后第7天和第28天,百草枯组TGF-β蛋白与HIF-1α蛋白的表达均无相关性(r=0.295,P=0.630;r=0.218,P=0.725).结论 百草枯中毒可上调小鼠肺组织的TGF-β和HIF-1α蛋白,TGF-β和HIF-1α可能通过不同途径参与了肺纤维化的形成.     

遗传性T淋巴细胞免疫缺陷在百草枯所致肺纤维化中的作用

目的 研究T淋巴细胞免疫缺陷在百草枯所致肺纤维化中的作用。方法 选择BALB/C(nu/nu)裸鼠与BALB/C(nu/+)小鼠作为实验动物模型,按照20 mg/kg的百草枯一次性灌胃,灌胃1 h后用GC-MS检测血浆中百草枯的药物浓度,在小鼠中毒第7天和第28天取肺组织做病理切片,H&E,MASSON染色。结果 2个品系的小鼠在染毒1 h后血浆中的百草枯药物浓度,差异无统计学意义（P> 0.05）。第28天的病理切片H&E、MASSON染色显示出2个品系的小鼠在肺纤维化程度方面,差异有统计学意义（P <0.05）。结论 T淋巴细胞参与了百草枯所致的肺纤维化的过程,但是T淋巴细胞的缺失没有完全避免百草枯诱导的肺纤维化。T淋巴细胞免疫缺陷不是百草枯所致肺纤维化的决定性因素。     

百草枯致肺纤维化的SD大鼠繁殖能力观察及其对仔鼠肺组织的影响

目的研究百草枯中毒肺纤维化的SD大鼠的繁殖能力及其对仔鼠肺组织影响,为临床实践提供理论依据。方法 36只雌雄各半的SD大鼠,正常组6雌6雄,实验组24只,雌雄各半。采用百草枯一次灌胃建立百草枯中毒动物模型,剂量50mg/kg,给药后观察其繁殖能力,及对子代肺组织的影响。实验组的一半于给药后d1、d3、d7、d14、d 28处死大鼠,进行肺组织HE及masson染色观察,并与正常对照组进行比较。实验组另一半雌雄同笼饲养,雌鼠怀孕后分开喂养,同样方法仔鼠再行怀孕,分别对两代仔鼠的肺组织进行HE及masson染色检查。结果 HE及masson染色结果显示实验组肺组织3天时已出现严重炎性反应,28d时观察肺组织呈现明显的纤维化改变;百草枯致肺纤维化的SD大鼠繁殖能力正常,随着繁衍代数的增加,仔鼠的肺纤维化消失,但肺部存在炎症且逐渐减轻。结论百草枯致肺纤维化的SD大鼠具有正常的繁殖能力,仔鼠肺组织基本正常,仅2代仔雌鼠肺组织存轻微炎症。     

百草枯致小鼠肺间质纤维化过程中Smad3蛋白的表达

目的使用免疫组织化学的方法观察百草枯(paraquat,PQ)致小鼠肺间质纤维化过程中Smad3蛋白的表达。方法58只雄性C57BL/6J小鼠随机分组。实验组48只,通过腹腔注射10 mg/kg PQ建立小鼠肺间质纤维化模型,对照组10只,腹腔注射等量生理盐水。小鼠在实验组染毒后第2、5、7、14天和对照组第7天时分别被安乐死,留取肺组织标本。标本进一步进行HE染色和Smad3蛋白的免疫组化研究。结果光镜观察小鼠染毒后第2~5天肺组织出现水肿、出血、炎症细胞浸润等改变,第7天有少量胶原沉积及斑片状的纤维化表现,第14天表现更加明显。免疫组化观察染毒小鼠肺组织Smad3蛋白表达,第2~7天肺中巨噬细胞和部分II型肺泡上皮细胞的细胞核中见到阳性表达。Smad3阳性表达和巨噬细胞数量呈正相关。第14天,在成纤维细胞灶增生的成纤维细胞核中,也可见到Smad3弱阳性表达。结论在PQ致肺间质纤维化过程中,Smad3蛋白异常表达并对肺纤维化的发生发展具有重要的作用。     

320排CT评价磨玻璃影相对体积对百草枯所致肺损伤的诊断价值

目的 应用320排CT测定肺部磨玻璃影 (ground glass opacity, GGO) 相对体积评估家兔百草枯中毒后肺损伤程度.方法 48只健康家兔随机分为4组, 以梯度浓度为25、35、45 mg/kg百草枯及等剂量生理盐水灌胃处理, 于中毒后第1、7、14及28 d行320排CT检查, 行GGO相对体积半定量分析, 并于上述时间点每组随机处死1只家兔取肺组织行病理观察.结果 3组实验组与正常对照组比较, GGO相对体积在各时间段均明显大于对照组 (P<0.05) ;3组中毒组家兔之间两两比较, 不同药物浓度作用时存在剂量依赖性 (P<0.05) , 即GGO相对体积随药物剂量增加而增加;光镜下中毒组家兔肺组织表现为不同程度炎性细胞浸润, 局灶性充血, 肺泡间隔增宽, 肺泡萎陷, 部分肺泡腔闭塞, 上述病理改变随时间延长加重.结论 320排CT测定GGO相对体积可以较好量化评价百草枯所致肺损伤, 为临床评价百草枯所致肺损伤提供客观依据.     

百草枯中毒致肺纤维化大鼠细胞因子表达及四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯的干预作用

目的探讨百草枯中毒致肺纤维化的机制。方法sD大鼠随机分为对照组6只、四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯（PDTC）对照组36只、百草枯染毒组36只、PDTC干预组36只。染毒组和PDTC干预组给予百草枯80mg／kg一次性灌胃后2h,染毒组给予等量生理盐水腹腔注射,PDTC干预组给予PDTC100mg／kg一次性腹腔注射;对照组和PDTC对照组予生理盐水1mL／kg灌胃后2h,对照组给予等量生理盐水腹腔注射,PDTC对照组给予PDTC100mg／kg一次性腹腔注射。于不同处理后1、3、7、14、28、56d观察大鼠中毒表现,并分别处死6只大鼠观察肺组织病理改变,测定肺组织羟脯氨酸含量,测定血清胰岛素样生长因子1（IGF-1）、转化生长因子β1（TGF-β1）、血小板源性生长因子（PDGF）水平及肺组织结缔组织生长因子（CTGF）的表达,分析它们与肺组织羟脯氨酸含量的关系。结果染毒早期（1—7d）病理特征为急性肺泡炎,表现为肺充血、肺水肿及炎性细胞浸润。后期（14—56d）炎性病变减轻,支气管周围、肺泡间隔及肺泡内大量成纤维细胞增殖、胶原纤维增生。干预组的肺部炎性改变及胶原纤维增生程度均明显减轻。与对照组比较,染毒组IGF-1含量3—56d明显升高（P〈0．01）,TGF．B,含量各时段均明显升高（P〈0．01）,PDGF含量7—56d显著升高（P〈0．01）。经PDTC干预后,上述细胞因子水平明显降低,相应时点差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。免疫组化显示,染毒组3d即有CTGF阳性表达,表达强度较弱,主要表达于炎症细胞;7、14d表达进一步增强,28、56d表达持续增强,主要表达于巨噬细胞和成纤维细胞。干预组CTGF阳性表达细胞与染毒组相同,但各时段表达强度均显著降低（P〈0．05或P〈0．01）。结论细胞因子IGF-1、TGF-β1、PDGF及CTGF的过度表达是参与百草枯致肺纤维化的重要机制。PDTC可能通过抑制NF-KB活化进而抑制上述细胞因子的表达,减轻百草枯中毒大鼠的肺损伤和肺纤维化。     

虎杖对肺纤维化大鼠肺组织中SOD、GSH、MDA的影响

目的：通过观察虎杖干预后肺纤维化大鼠肺组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性及谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）含量的影响,探讨虎杖防治肺纤维化的作用机制。方法健康雄性SD大鼠120只,随机分为5组：模型组30只,气管内一次性注入博莱霉素50.5mg/100g制作肺纤维化大鼠模型,当日予0.9%氯化钠溶液5ml/100g灌胃;预防组30只,于造模前2d开始予虎杖5ml/100g灌胃;肺泡炎组20只,于造模后第7天开始虎杖灌胃;肺纤维化组10只,于造模后第28天开始虎杖灌胃;对照组30只,于造模当日开始0.9%氯化钠溶液5ml/100g灌胃。各组大鼠灌胃均1次/d。5组大鼠分别于第3、7、14、28、42或56天分阶段处死5只,取肺组织制成匀浆,测定SOD活性及GSH、MDA的含量。结果模型组第3、7、14天肺组织中SOD活性及GSH含量低于对照组（均P＜0.05）,预防组上述指标较模型组升高（P＜0.05或0.01）,肺泡炎组、肺纤维化组与模型组的差异均无统计学意义（均P＞0.05）。模型组第7、14天肺组织中MDA含量明显高于对照组和预防组（均P＜0.05）。结论虎杖能通过增强肺组织局部抗氧化能力,减轻博莱霉素诱导的肺泡炎和肺纤维化程度,可能是治疗肺纤维化的有效药物。     

牛奶灌胃减轻大鼠急性百草枯中毒肺损伤的实验研究

目的探讨牛奶灌胃对大鼠百草枯中毒肺损伤的治疗效果。方法健康雄性SD大鼠随机分为3组,其中5只为空白对照组,牛奶实验组及生理盐水对照组各20只。百草枯染毒后1 h进行干预,染毒后3、6、24、48 h(每个时间点5只)处死大鼠,取肺组织进行组织切片,血液送检分析百草枯浓度。结果中毒后3、6、24和48 h牛奶实验组大鼠血浆百草枯浓度[(0.544±0.037)μg/ml、(0.460±0.047)μg/ml、(0.374±0.032)μg/ml和(0.126±0.031)μg/ml]低于生理盐水对照组[(3.592±0.164)μg/ml、(3.054±0.165)μg/ml、(2.350±0.184)μg/ml和(0.736±0.080)μg/ml](均P0.05)。组织病理学结果提示牛奶实验组大鼠肺组织的炎症细胞浸润、肺充血水肿及肺实变等损伤情况较生理盐水对照组明显减轻。结论牛奶灌胃可降低百草枯中毒大鼠的血浆百草枯浓度,减轻肺组织损伤。     

双氢青蒿素对百草枯致小鼠肺纤维化的治疗研究

目的:探讨双氢青蒿素(dihydroartemisin,DHA)对急性百草枯(paraquat,PQ)染毒小鼠的治疗作用。方法:将134只小鼠随机分成3组:正常对照组(n=24)、PQ染毒组(n=55,实际存活24只)和DHA治疗组(n=55,实际存活35只)。PQ组与DHA组:以100mg/kg PQ一次性灌胃;2h后DHA组以20mg/kg DHA灌胃治疗,PQ组与对照组灌胃等量蒸馏水,每日1次。观察给药后第3,7,14,21天小鼠的一般情况,比较生存率差异,计算肺系数,酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织TGF-β1的表达;HE及Masson染色观察小鼠肺组织病理变化。结果:PQ组21d生存率与对照组和DHA组比较差异有统计学意义(P<0.05)。PQ组肺组织中TGF-β1在第3,7,14,21天分别为(467.77±46.52)ng/L、(434.89±48.94)ng/L、(1 410.70±94.07)ng/L、(2 306.89±33.06)ng/L;DHA组一般情况较PQ组好,TGF-β1表达在第3,7,14,21天时分别为(441.54±23.58)ng/L、(443.22±46.83)ng/L、(750.49±29.96)ng/L、(1 554.95±92.30)ng/L,较PQ组差异显著(P<0.01)。随时间推移,PQ组肺泡炎加重,14d始伴随着TGF-β1的升高,肺组织出现纤维化改变,以第21天时最为明显,与对照组比较差异明显(P<0.01)。DHA组炎性细胞浸润较PQ组少,充血水肿轻,肺纤维化程度较PQ组减轻(P<0.05)。结论:DHA可能通过降低肺组织中TGF-β1表达,发挥对PQ中毒小鼠肺纤维化的治疗作用。     

实验性肺纤维化小鼠IL-1和TNF-α的动态表达及其意义

目的：探讨博莱霉素致肺纤维化小鼠各时期支气管肺泡灌洗液（BALF）及肺组织中白细胞介素1(IL-1)和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达规律及其意义。方法：40只雄性昆明种小鼠,随机分为对照组(n=10)和实验组（n=30）。分别于生理盐水和博莱霉素（5 mg•kg^-1）一次性气管内灌注后第3、7、14、28和56天行支气管肺泡灌洗并处死小鼠,取支气管肺泡灌洗液和肺组织,应用RT-PCR法测定其中的IL-1 mRNA和TNF-α mRNA相对转录水平。结果：①BALF中,实验组IL-1 mRNA和TNF-α mRNA表达均高于对照组（P<0.05）,且实验组中两者的表达高峰均在第14天。②肺组织中,实验组IL-1 mRNA和TNF-α mRNA表达水平均高于对照组（P<0.01）,且实验组中两者表达高峰分别在第7和14天,此后逐渐下降,但仍然保持高于正常水平表达。结论：IL-1 mRNA和TNF-α mRNA表达高峰时相均在肺纤维化发病早期,因此推断其在致肺纤维化损伤中发挥重要作用,并依IL-1 mRNA和TNF-α mRNA表达水平可判断病变发展进程和活动性。     

实验性小鼠肺纤维化过程中IL-31mRNA的动态表达及意义

目的:探讨博莱霉素(BLM)致肺纤维化小鼠各时期肺组织中白细胞介素31(IL-31)mRNA的表达规律及其意义。方法:将48只雄性昆明种小鼠随机分为对照组(n=24)和实验组(n=24)。分别给予生理盐水和博莱霉素(5mg/kg)一次性气管内灌注,于灌注第7、14、21和28天处死小鼠,取肺组织,应用RT-PCR法测定其中的IL-31mRNA的相对转录水平。结果:1实验组肺组织中IL-31mRNA表达水平在第7、14、21天均高于对照组(P<0.05)。2实验组中IL-31mRNA表达从第7天开始升高,第21天达到高峰。结论:IL-31在肺纤维化形成过程中存在高表达,尤其在介导中后期肺纤维化进程中发挥重要作用。     

IL-31与TGF-β1在小鼠肺纤维化过程中的表达及关系

目的 探讨白细胞介素31与转化生长因子β1在博莱霉素(BLM)致肺纤维化小鼠各时期肺组织中的表达规律以及关系.方法 取48只雄性昆明种小鼠,随机分为两组:对照组和实验组,分别给予生理盐水和博莱霉素(5 mg/kg)一次性气管内灌注后,第7、14、21和28 d处死小鼠,应用Western Blotting法测定肺组织中...     

FTY720对百草枯中毒小鼠肺损伤的保护作用

目的:探讨新型免疫抑制剂FTY720对急性百草枯(PQ)中毒小鼠肺损伤的保护机制。方法:8周龄C57BL/6j小鼠随机分为百草枯40mg/kg染毒对照组(PQ组)、百草枯40mg/kg染毒+FTY720 0.5mg/kg/d干预组(PQ+FTY720组)、生理盐水对照组(Control组)。PQ组和PQ+FTY720组分别经腹腔注射PQ40mg/kg,PQ+FTY720组于2小时后腹腔注射FTY720 0.5mg/kg,每日一次,连续14天;Control组腹腔注射等量生理盐水。各组分别于第3、第28天处死,观察28天生存率,留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。HE染色观察各组肺组织病理变化。BCA法测定BALF中总蛋白含量。ELISA法检测BALF中IL-6水平。Real-time PCR法测定肺组织中alpha-smooth muscle actin(α-SMA)、type I col1agen、type Ⅲcollagen mRNA的表达水平,免疫组化法观察肺组织中α-SMA的表达。结果:28天生存率PQ组与PQ+FTY720组分别为50%和70%。 HE染色显示FTY720干预后小鼠肺损伤程度较PQ组减轻。PQ+FTY720组在急性期BALF总蛋白含量、IL-6水平明显低于PQ组,慢性期肺组织中α-SMA、type I col1agen、type Ⅲcollagen在mRNA水平上表达较PQ组下调,且均具统计学意义。肺组织α-SMA阳性表达颗粒较PQ组减少。结论: FTY720可抑制部分肺损伤/纤维化相关因子的表达,对百草枯中毒肺损伤有治疗保护作用。     

布地奈德干预肺纤维化JAK-1/STAT1途径的研究

目的观察吸入布地奈德(BUD)对肺纤维化大鼠肺组织细胞黏附因子-1(ICAM-1)、Janus激酶-1(JAK-1)、信号转导子与转录激活子1(STAT1)表达的影响,并探讨其作用机制。方法实验分为博莱霉素(BLM)组、生理盐水(NS)组和BUD组,每组15只。BLM组、BUD组气管内灌注BLM,NS组气管内灌注NS,继之第0~6天每天雾化1次,BUD组雾化吸入BUD,BLM组和NS组雾化吸入NS,第7、14、28天分别处死3组大鼠各5只。用HE、Masson染色观察肺泡炎症和纤维化改变;免疫组化法测定肺组织中ICAM-1、JAK-1及STAT1的表达。结果第7、14天,BLM组肺泡炎程度重于BUD组(P<0.05);第7、14、28天,BLM组肺纤维化程度重于BUD组(P<0.05)。第7、14天,BUD组肺组织中ICAM-1、JAK-1、STAT1表达明显低于BLM组(P<0.05)。结论 JAK-1/STAT1信号途径参与了肺纤维化的发生发展,而吸入型BUD可分别通过抑制肺组织ICAM-1、JAK-1、STAT1的表达加强对肺组织的保护作用。