细胞钠／钙交换可能参与高血压的发病机制

当前不论从组织水平,细胞水平还是亚细胞水平均证实血管平滑肌(VSM)细胞膜上存在着Na/Ca交换这一胞内Ca~(2+)调节机制。它可以利用Na~+的跨膜电化学梯度(g_(Na~+)来逆向转运Ca~(2+)。视Na~(2+)与Ca~(2+)电化学梯度的不同,它既可以介导Ca~(2+)进入细胞也可以将Ca~(2+)转运出细胞。 VSM细胞Ca~(2+)代谢的异常是高血压发病的一个重要原因。那么这一异常是否与Na/Ca交换有关呢?答案似乎是肯定的。在高血压病人的红细胞,自发性高血压大鼠(SHR)的红细胞或VSM细胞中Na~+与Ca~(2+)的含量均比正常对照明显增高。后者看来与Na~+,K~+-ATPase的抑制有关,因为不少证据显示高血压病人或动物血液中一种可以抑制Na~+,K~+-ATPase的内源性洋地黄类物质(endogenous digitalis)的水平升高。用高血压患者去蛋白     

反义p38 MAPK寡核苷酸对AT1R介导的血管收缩的影响及其机制

目的研究反义p38 MAPK寡核苷酸在血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）介导的血管平滑肌收缩反应中的作用及其机制。方法采用反义寡核苷酸（ASODN）基因封闭技术来特异性调控p38 MAPK的表达,观察p38 MAPK在AT1R介导的大鼠主动脉血管平滑肌收缩中的作用及其与血管平滑肌肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的关系。结果 AngⅡ诱导大鼠主动脉产生浓度依赖性的收缩,AT1R拮抗剂losartan和p38 MAPK-ASODN处理均可拮抗AngⅡ诱导的血管收缩反应。同时,AngⅡ处理可明显升高血管MLCK的活性,AT1R拮抗剂和p38 MAPK-ASODN也明显抑制了AngⅡ的这一作用。结论 p38 MAPK参与了AT1R介导的血管收缩反应的调节,其机制与MLCK调节途径有关。     

精氨酸加压素对慢性肾衰大鼠心功能及其心肌细胞钠-钾-ATP酶活力的影响

用SD大鼠制作慢性肾衰(CRF)动物模型,观察其血浆与心肌精氨酸加压素(AVP)含量的变化;CRF大鼠静脉分别注射AVP及其抗血清,观察其对平均动脉压、左心室压峰值和心肌细胞钠-钾-ATP酶(Na~+,K~+-ATP酶)活力的影响。结果表明,CRF~+大鼠血浆及心肌AVP含量与血肌酐水平同步增高;静脉注射AVP标准品,可使心肌Na~+,K~+-ATP酶活力明显降低,并加重心功能指标的异常变化;而给予AVP抗血清,则可改善心功能,对心肌有明显的保护作用。提示ATP含量异常增高所引起的Na~+,K~+-ATP酶泵转运动力学损害,可能参与CRF时心功能不全的病理过程。     

大鼠颅脑损伤后心肌损害和血浆及心肌血管紧张素的变化

应用大鼠颅脑损伤模型。测定颅脑损伤后血浆AngⅡ水平。用免疫组织化学方法检测心肌组织AngⅡ和AT1受全的表达。同时测定血清肌酸磷酸激酶同工酶（MBisoenzyme of creatine kinase,CK-MB)的含量，并观察HE染色及超微结构的心肌病理形态学改变。表明大鼠颅脑损伤组血浆AngⅡ含量显著升高，心肌AngⅡ和AT1受体表达增加，与此同时血清CK-MB含量亦显著升高，HE染色及超微结构的病理观察均见心肌病理损害。大鼠颅脑损伤可导致血浆AngⅡ，心肌组织AngⅡ受体水平显著升高。     

肾性高血压大鼠血浆ET、CGRP、AngⅡ水平变化及缬沙坦、贝那普利干预的影响

目的:研究肾性高血压大鼠血浆内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)等血管活性物质的变化及降压药物缬沙坦、贝那普利干预对收缩压和ET、CGRP、AngⅡ的影响。方法:采用两肾一夹方法复制肾性高血压大鼠模型,成模大鼠随机分为缬沙坦组(30mg/kg/天,n=8)、贝那普利组(10mg/kg/天,n=8)、肾性高血压模型组(n=8);假造模大鼠作为假手术组(n=10),前两组以缬沙坦和贝那普利溶液、后两组以等量生理盐水每日灌胃。分别于术前及术后每周末测定各组大鼠收缩压变化,并在灌药治疗8周后用放免法测定各组血浆ET、CGRP、AngⅡ含量变化。结果:两肾一夹术后4周可形成稳定肾性高血压大鼠模型。缬沙坦组、贝那普利组大鼠经灌胃治疗8周后血压明显下降(P<0.01)。肾性高血压模型组ET、CGRP、AngⅡ血浆浓度均高于假手术组(P<0.05或P<0.01);缬沙坦组、贝那普利组CGRP浓度高于肾性高血压模型组(P<0.05),贝那普利组AngⅡ浓度低于肾性高血压模型组和缬沙坦组(P<0.05);肾性高血压模型组血浆ET与AngⅡ浓度呈正相关(r=0.62,P<0.05)。结论:肾性高血压大鼠血浆ET、CGRP、AngⅡ浓度增高,缬沙坦、贝那普利可能通过调节血管活性物质水平而降低收缩压。     

血管紧张素Ⅱ2型受体对大鼠血管平滑肌增殖的影响及其机制

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）2型受体（AT2R）对培养的大鼠血管平滑肌细胞 （VSMC）增殖的影响。方法： 将AT2R cDNA转染到培养的大鼠VSMC中， 分别观察AngⅡ、AngⅡ＋losartan、AngⅡ+PD123319等不同处理因素处理对VSMC的 细胞数目以及PCNA、 NOS表达的影响。 结果：losartan 处理组细胞数目和PCNA表达量少于AngⅡ处理组，NOS表达量高于AngⅡ处理组， 而PD123319处理组细胞数目和PCNA表达量显著高于AngⅡ处理，NOS表达量较之为少。结论： 激活AT2R能拮抗AngⅡ的由AT1R介导的促细胞增殖作用，这种作用可能与激活AT2R后NOS表达增多使 NO合成增多有关。     

内皮素1和血管紧张素Ⅱ对大鼠肝细胞核核苷三磷酸酶活性的影响

核被膜核苷三磷酸酶 (nucleosidetriphosphatase ,NTPase)为通过细胞核孔复合体转运mRNA的限速酶。本实验探讨内皮素 1(ET 1)和血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对大鼠肝细胞核NTPase活性的影响。体外分离的大鼠肝细胞核与ET 1或AngⅡ单独或分别与ET 1的ETA受体拮抗剂JKC30 1、ETB受体拮抗剂BQ788或AngⅡ的AT1受体拮抗剂Losartan、AT2 拮抗剂PD12 3177共同孵育肝细胞核 ,分别测定ATP和GTP作底物时 ,肝细胞核NTPase活性。结果发现ATP和GTP作底物时 ,ET 1(10 -11～ 10 -9mol/L)或AngⅡ (10 -11～ 10 -9mol/L)孵育肝细胞核均浓度依赖地增强其NTPase活性 (均P <0 0 1) ,ET 1和AngⅡ对NTPase的刺激作用可分别被JKC30 1(10 -6mol/L)和Losartan (10 -6mol/L)阻断 (P <0 0 1)。ET 1和AngⅡ共同孵育后 ,核NTPase活性与ET 1或AngⅡ单独孵育相比显著增加 (均P<0 0 1)。结果表明 :ET 1和AngⅡ可分别通过ETA和AT1受体刺激肝细胞核NTPase活性     

地塞米松抑制肾素-血管紧张素系统减轻大鼠急性肺损伤

目的：观察肾素-血管紧张素系统（RAS）在大鼠急性肺损伤中的作用及地塞米松（DEX）的影响。方法: 在大鼠失血性休克的基础上,腹腔注射内毒素（二次打击）造成急性肺损伤模型,直接插管法检测大鼠平均动脉血压（MAP）;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)观察各组大鼠肺脏组织中血管紧张素转换酶（ACE）、血管紧张素原（AGT）、血管紧张素II 1型受体（AT1）和血管紧张素II 2型受体（AT2）mRNA的表达及测定大鼠血清血管紧张素I (AngⅠ)、血管紧张素II（AngⅡ）的变化。结果: 二次打击组（HL）大鼠平均动脉血压恢复很慢,而地塞米松治疗组（HLD）平均动脉血压恢复的速度较HL明显增快,且平均动脉血压水平的升高具有明显差异。与对照组（C）相比,HL组ACE、AGT mRNA表达水平明显增高,而HLD组明显低于HL组。AT1、AT2 mRNA各组表达水平则无明显差异。与C组相比,HL组AngⅡ的含量明显升高,HLD组大鼠血清AngⅡ的含量比HL组均明显减低,Ang I含量的变化不明显。结论: 失血性休克后LPS诱发的急性肺损伤可能与激活肺脏的肾素－血管紧张素系统有关,抑制肺脏的肾素－血管紧张素系统的激活是DEX轻这种急性肺损伤的机制之一。     

耗竭心肌细胞内糖原对缺血后再灌注心肌的保护作用及其机制

本工作在离体大鼠等容收缩心脏模型上观察耗竭心脏细胞内糖原对心肌缺血再灌注损伤的影响。心脏富氧灌流30 min后,随机分为三组:Ⅰ、富氧组:富氧灌流75min。Ⅱ、对照组:常规K-H液富氧灌流15min,旷置30min,再灌流30min。Ⅲ、耗竭糖原组:先用充N_2(95%N_2:5%CO_2)的K-H液灌流15min,余同组Ⅱ。结果表明。耗竭心肌细胞内糖原可提高再灌注后心脏血液动力学的恢复;冠脉流出液中LDH活性及心肌组织MDA含量降低,线粒体及胞浆液中GSH-Px有较高的活性;心肌组织Na~+,Ca~(2+)超负荷减轻。说明耗竭心肌细胞内糖原可通过减少细胞内H~+的生成抑制Na~+/H~+交换,从而明显减轻心肌缺血再灌注损伤。     

血管紧张素Ⅱ在过度训练致大鼠急性肾损伤中的作用

目的:研究过度训练大鼠血浆和肾组织血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的变化及其意义。方法:健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为对照组(n=6)和体力衰竭(力竭)组(n=24);建立大鼠游泳至力竭模型;于力竭即刻、力竭后6h、12h和24h,分别检测各组大鼠血清肌酐(Cr)、尿素(Ur)、磷酸肌酸激酶(CK)及尿γ-谷氨酰胺转肽酶(γ-GT)水平;观察肾组织结构变化和肾组织细胞凋亡;测定血浆和肾组织AngⅡ含量。结果:力竭即刻血清Ur、Cr、CK即明显升高,6h达高峰(P<0.05),24h恢复到对照水平;力竭后6h尿γ-GT明显升高,力竭后12h和24h升高更为明显(P<0.05);力竭即刻至力竭后24h大鼠肾组织结构变化轻微,但肾组织凋亡细胞明显增加(P<0.05);力竭即刻,血浆AngⅡ明显增高(P<0.01),力竭后6h～24h则逐渐降低,24h降低至对照组水平;力竭即刻至24h,肾组织AngⅡ进行性增高(P<0.01);肾组织AngII浓度与肾组织细胞调亡率呈明显正相关(r=0.76,P<0.01)。结论:过度训练大鼠血浆AngII浓度的变化主要参与力竭后早期肾损伤的发生,而肾组织中AngⅡ的增加可能通过组织细胞凋亡在力竭后延迟性肾损伤中发挥重要作用。     

血管紧张素Ⅱ诱导高血压大鼠肠系膜动脉PP2A激活的机制研究

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的高血压大鼠肠系膜动脉中蛋白磷酸酶2A (PP2A)被激活的可能机制。方法:选用雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠,采用皮下埋置微量渗透泵持续灌注AngⅡ(500 ng·kg~(-1)·min~(-1), 14 d)的方法复制高血压模型。40只大鼠被随机分为4组,即对照(control)组(n=10)、AngⅡ组(n=10)、坎地沙坦(CAN;AngⅡ1型受体阻滞剂)+AngⅡ组(n=10)和CAN组(n=10)。CAN+AngⅡ组和CAN组均于埋置微量渗透泵后第1天开始予以坎地沙坦酯(10 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃。术后第15天处死大鼠,留取血清和肠系膜动脉。用无创大鼠血压测量仪检测大鼠尾动脉收缩压,采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法测定血清AngⅡ含量,采用Western blot方法检测肠系膜动脉中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达、eNOS Ser1177磷酸化水平、PP2A催化亚基(PP2Ac)蛋白表达、PP2Ac Tyr307磷酸化水平及PP2A内源性抑制蛋白I■表达水平,采用PP2A活性检测试剂盒测定肠系膜动脉PP2A活性变化。结果:(1)与control组相比,AngⅡ组大鼠收缩压显著升高(P0.05);与AngⅡ组相比,CAN+AngⅡ组和CAN组收缩压显著降低(P0.05)。(2)与control组相比,AngⅡ组和CAN+AngⅡ组大鼠血清AngⅡ含量显著升高(P0.05)。(3)与control组相比,AngⅡ组肠系膜动脉eNOS Ser1177磷酸化水平显著降低(P0.05),PP2A活性显著增高(P0.05),且二者变化呈负相关(r=-0.842,P0.05);与AngⅡ组相比,CAN+AngⅡ组eNOS Ser1177磷酸化水平显著上调(P0.05),PP2A活性显著降低(P0.05)。(4)与control组相比,AngⅡ组PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I■蛋白表达均显著降低(P0.05);与AngⅡ组相比,CAN+AngⅡ组PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I■蛋白表达显著增高(P0.05)。(5) CAN组各项指标差异无统计学意义,各组间eNOS及PP2Ac蛋白表达差异亦均无统计学意义。结论:在AngⅡ诱导的高血压大鼠肠系膜动脉中,AngⅡ通过其1型受体介导,降低PP2Ac Tyr307磷酸化水平和I■蛋白表达,激活PP2A,进而引起eNOS S1177磷酸化水平下调,最终导致血管内皮功能障碍的发生。     

缺碘致甲状腺功能减退大鼠肾脏抗氧化能力降低

目的研究甲减大鼠肾脏抗氧化能力的变化,探讨甲状腺激素水平对肾脏的影响。方法Wistar大鼠随机分2组:甲减组(HT)和对照组(Control)。2组大鼠通过不同碘含量饮食复制甲减动物模型;肾脏形态定量学观察;比色法测定肾脏组织丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)及生物膜Na+,K+-ATPase活性;RT-PCR方法测定肾脏Na+,K+-ATPaseα1亚基的基因表达。结果与对照组比较,HT组FT3、FT4、TT3、TT4显著降低(P<0.01);肾小球萎缩;MDA含量和GPx活性显著升高(P<0.05),而SOD和Na+,K+-ATPase活性显著降低(P<0.05);Na+,K+-ATPaseα1亚基的基因表达下降(P<0.05)。结论甲状腺激素不足可导致肾脏抗氧化能力下降,肾小球萎缩。     

ACE2基因敲除小鼠止血带休克后肾组织ACE/AngⅡ表达的变化及其与肾损伤的关系

 目的： 通过观察血管紧张素转换酶2(ACE2)基因敲除(KO)小鼠止血带休克(TS)后肾组织血管紧张素转化酶/血管紧张素Ⅱ（ACE/AngⅡ）的表达及损伤程度的变化,探讨ACE2在休克后急性肾损伤中的作用。方法： 小鼠双下肢用止血带结扎缺血2 h、松带后再灌注4 h复制TS模型。将雄性6月龄野生型（WT）C57BL/6小鼠和相同背景的ACE2 KO小鼠各12只分为4组,即WT组、WT+TS组、KO组和KO+TS组,每组6只。Western blotting测肾组织ACE蛋白的表达;ELISA法测定肾组织AngⅡ表达;利用化学比色方法测定肾组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、血尿素氮（BUN）和血清肌酐（Cr）含量。结果： 与WT小鼠相比,WT+TS小鼠肾组织ACE/AngⅡ表达明显增加,出现肾组织氧化应激损伤和功能改变;与WT小鼠相比,KO小鼠肾组织ACE/AngⅡ表达增加,但未见明显的氧化应激损伤和功能变化;与WT+TS小鼠相比,KO+TS小鼠肾ACE/AngⅡ表达进一步增加,肾组织氧化应激和肾功能损伤明显加重。结论： ACE2基因缺失可能通过增加ACE/AngⅡ表达加重止血带休克肾的氧化应激损伤,针对ACE2靶f点的药物有可能成为防治止血带休克时急性肾损伤的策略之一。     

芪苈强心颗粒对心肾综合征大鼠肾组织细胞凋亡的影响

目的:探讨芪苈强心颗粒对心肾综合征(cardiorenal syndrome,CRS)模型大鼠肾组织细胞凋亡的影响及可能作用机制。方法:采用左冠状动脉前降支结扎结合肾脏急性缺血再灌注损伤制备CRS模型,根据实验需要分为6组:2周假手术(2w sham)组、2周模型(2w CRS)组、2周药物(2w CRS-Q)组、4周假手术(4w sham)组、4周模型(4w CRS)组和4周药物(4w CRS-Q)组,2周和4周药物组分别给予芪苈强心颗粒(4 g·kg~(-1)·d~(-1))灌胃治疗2周和4周。ELISA法检测血清胱抑素C(Cys-C)、血浆血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)和尿微量白蛋白(UMA)含量;肌氨酸氧化酶法检测血清肌酐(Cre)含量;HE染色观察大鼠肾组织病理学变化;RT-qPCR法和Western blot检测大鼠肾组织中Ang Ⅱ、Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白表达水平;TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡。结果:与sham组比较,2w CRS和4w CRS组大鼠血清Cys-C、血清Cre、血浆Ang Ⅱ、UMA和尿NGAL含量均显著升高(P0.05),肾组织中Bax和Ang Ⅱ的mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P0.05),Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P0.05),肾组织损伤均严重,肾组织细胞凋亡均明显;与CRS组比较,2w CRS-Q和4w CRS-Q组大鼠血清Cys-C、血清Cre、血浆Ang Ⅱ、尿NGAL和UMA含量均显著降低(P0.05),肾组织中Bax和Ang Ⅱ的mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P0.05),Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P0.05),肾组织损伤均有所改善,肾组织细胞凋亡率均显著降低(P0.05)。结论:芪苈强心颗粒可抑制CRS大鼠肾组织细胞凋亡,改善肾功能,其机制可能与抑制Ang Ⅱ的表达有关。     

糖尿病肾病大鼠血清AT1-AA与肾皮质中miRNA-155之间的相关性研究

目的研究糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠血清血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(angiotensinⅡtype 1receptor agonistic autoantibody,AT1-AA)与肾皮质中miRNA-155之间的相关性。方法雄性SD大鼠36只,随机分为正常对照(NC)组和模型组,模型组大鼠给予高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立DN大鼠模型。模型成功后持续观察12周,应用ELISA技术检测模型组大鼠血清AT1-AA,根据检测结果选择12只纳入DN组,并分为AT1-AA阳性DN(AT1-AA positive DN,APD)和AT1-AA阴性DN(AT1-AA negative DN,AND)2个亚组。实验结束时,检测DN大鼠肾功能生化指标;光镜和电镜观察肾脏病理学特征变化;RT-PCR测定肾组织miRNA-155的表达。结果 DN组大鼠AT1-AA阳性率及OD值均高于NC组大鼠(P0.001)。DN大鼠肾组织中miRNA-155的表达显著高于NC大鼠(P0.001),进一步比较发现,AND亚组大鼠miRNA-155表达亦明显高于APD亚组大鼠(P0.05)。结论 AT1-AA参与了DN大鼠肾脏功能损害过程并且其产生与miRNA-155的表达有关。     

AT1受体自身抗体对糖尿病肾病大鼠肾脏细胞凋亡及JNK表达的作用

 目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体（angiotensin Ⅱ type 1 receptor autoantibody,AT1-AA）对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠肾脏细胞凋亡及内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）相关的JNK表达的作用。方法:高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素腹腔注射制备DN大鼠模型,采用ELISA法检测大鼠AT1-AA阳性率,根据检测结果随机选择AT1-AA阳性和AT1-AA阴性大鼠共12只纳入DN组,同时选择6只正常大鼠纳入NC组;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;Western blotting技术测定肾组织ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白78 （GRP78）及凋亡蛋白p-JNK的表达水平。结果:DN组大鼠肾脏细胞凋亡率较NC组显著升高,且AT1-AA阳性大鼠凋亡率明显高于AT1-AA阴性大鼠（P<0.01）。Western blotting结果显示,GRP78和p-JNK蛋白在DN组大鼠肾组织中的水平较NC组显著升高,AT1-AA阳性DN大鼠肾组织中,前述蛋白的改变较AT1-AA阴性DN大鼠更为明显（P<0.05）。结论: AT1-AA可诱导DN大鼠肾脏ERS反应,并通过ERS相关的JNK凋亡途径介导肾脏细胞凋亡,损害肾脏功能。     

血管紧张素Ⅱ对大鼠再灌注心律失常的影响和机制

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对离体大鼠心肌缺血后再灌注心律失常的影响及可能机制。方法:用双冠脉分别灌流大鼠心肌缺血模型,将不同药物注入左冠脉,经12 min低流量缺血,观察再灌注后5 min室性心动过速(AT)及室颤(VF)的发生率。结果:脱氧肾上腺素(PH)可明显加重再灌注心律失常,单独应用AngⅡ无明显作用。而AngⅡ2型受体阻滞剂PD123319(PD)与AngⅡ合用可明显增加再灌注心律失常。用选择性Na⁺/H⁺交换(NHE)阻滞剂HOE642及蛋白激酶C阻滞剂GF109203X(GF),可完全阻断此作用。结论:AngⅡ可通过兴奋AngⅡ1型受体加重再灌注心律失常。AngⅡ2型受体的兴奋可能有抑制再灌注心律失常的作用,机制可能与PKC中介的NHE活性增加有关。     

1,6-二磷酸果糖对阿霉素引起大鼠心肌细胞内游离钙和肌浆网Ca2+-ATP酶活性改变的影响

目的:探讨1,6-二磷酸果糖(FDP)对阿霉素(ADR)所引起的大鼠心肌细胞内游离钙及心肌肌浆网钙-ATP酶(SRCa²⁺-ATPase)活性变化的影响。方法: 给大鼠腹腔注射ADR(2.5 mg·kg^-1,隔日1次,共6次),给ADR处理的大鼠腹腔注射不同剂量的FDP(隔日1次,共21次)进行干预。采用双抗体双夹心ELISA法定量测定血清肌钙蛋白I(CTnI);采用抗肌酸激酶同工酶(CK-MB)单克隆抗体包被小球测定血清CK-MB;用荧光分光光密度计测定心肌细胞内游离钙(MyoCa²⁺)浓度;用无机磷酸根法测定心肌肌浆网钙-ATP酶(SRCa²⁺-ATPase)活性。结果:FDP(300、600、1 200 mg·kg^-1)干预ADR处理的大鼠后,可显著降低血清CtnI、CK-MB及心肌细胞内MyoCa²⁺值,显著增高SRCa²⁺-ATPase活性(P＜0.01)。结论: FDP能通过降低心肌细胞内游离钙和对SRCa²⁺-ATPase活性的改变,起到减轻ADR对心肌的毒性作用。     

AngⅡ/AT_1R通路下调内皮型一氧化氮合酶磷酸化的机制研究

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)/血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensinⅡtype 1 receptor,AT_1R)通路通过激活蛋白磷酸酶2 A(protein phosphatase 2 A,PP2 A)导致大鼠肠系膜动脉中内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,e NOS)磷酸化水平下调的机制。方法:采用体重160~180 g成年雄性SD大鼠90只,在无菌条件下分离大鼠肠系膜动脉。首先明确AngⅡ下调大鼠肠系膜动脉中e NOS(Ser1177)磷酸化的效应,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组和AngⅡ组,AngⅡ组用浓度为1×10~(-7)mol/L、1×10~(-6)mol/L和1×10~(-5)mol/L AngⅡ分别孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h;然后进一步探讨AngⅡ使eNOS(Ser1177)发生磷酸化下调的分子机制,将肠系膜动脉随机分为正常对照(control)组、AngⅡ组和坎地沙坦(candesartan,CAN;AT_1R特异性抑制剂)+AngⅡ组(用1×10~(-5)mol/L CAN预处理大鼠肠系膜动脉血管1 h后,再用1×10~(-7)mol/L AngⅡ继续孵育12 h)。采用Western blot法检测肠系膜动脉中eNOS蛋白表达和eNOS(Ser1177)磷酸化水平,以及PP2Ac的蛋白表达、PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I~2~(PP2A)的表达水平,并用PP2A活性检测试剂盒测定大鼠肠系膜动脉PP2A活性变化。结果:(1)与control组比较,AngⅡ孵育离体大鼠肠系膜动脉血管6 h、12 h和24 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平均明显降低(P0.05),且12 h组和24 h组eNOS(Ser1177)磷酸化水平下降均出现明显浓度依赖性,但不同浓度组间eNOS蛋白表达水平差异均无统计学显著性;(2)与control组比较,1×10~(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,eNOS(Ser1177)磷酸化水平降低(P0.05);CAN预处理可明显上调eNOS(Ser1177)磷酸化水平(P0.05),且各组间eNOS蛋白表达水平差异无统计学显著性;(3)与control组比较,1×10~(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和I_2~(PP2A)蛋白表达均降低(P0.05);CAN预处理可使PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和IPP2A2蛋白表达均增加(P0.05),但各组间PP2Ac蛋白表达的差异无统计学显著性;(4)与control组比较,1×10~(-7)mol/L AngⅡ孵育肠系膜动脉血管12 h后,PP2A活性增高(P0.05);CAN预处理可明显抑制AngⅡ对PP2A的激活作用(P0.05)。结论:AngⅡ可通过AT1R通路激活PP2A,从而介导大鼠肠系膜动脉eNOS(Ser1177)磷酸化水平下调,其分子机制可能与PP2Ac(Tyr307)磷酸化水平和PP2A内源性抑制蛋白I_2~(PP2A)表达降低有关。     

抗血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型抗体对成年大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的：研究抗血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型（AT1受体）抗体对成年大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]．）的影响。方法：用AT1受体胞外第2肽段合成肽免疫Wistar大鼠，以硫酸铵沉淀法粗提血清抗体后再以亲和层析法纯化抗体，并以ELISA和Bradford的方法对抗体进行定量。以Fluo-3AM作为细胞内游离Ca^2＋示踪剂，通过激光共聚焦显微镜检测分离的成年大鼠心室肌细胞[Ca^2＋]．的变化，以判断抗体活性，分AngⅡ组，抗AT1受体抗体组，抗AT1受体抗体＋氯沙坦组和对照组。结果：AngⅡ刺激后引起[Ca^2＋]．快速上升至峰值，随后快速下降（157．4±52．5）％；而在抗AT1受体抗体刺激下，呈双相反应，[Ca^2＋]．快速上升至峰值，随后进入平台期（164．0±34.0）％，与AngⅡ组相比无统计学意义（P〉0．05）。其效应部分被氯沙坦阻断（79．7±13．2）％，与前两组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：抗AT1受体抗体可以引起大鼠心室肌细胞内[Ca^2＋]，浓度增加，呈快速的峰值和持续的平台期的双相反应，主要依赖于细胞内储存钙离子的释放。