噪声暴露后豚鼠耳蜗电生理和超微结构的改变

目的 观察豚鼠噪声暴露后其耳蜗电生理与毛细胞超微结构的改变,探讨哺乳动物在毛细胞受损后能否自我修复.方法 将30只豚鼠分为四组,正常对照组5只,噪声暴露后0.5 h组5只,7天组10只,3周组10只,后三组豚鼠暴露于 120 dB SPL白噪声中2 h,分别于结束暴露后0.5 h及7天、3周后检测听性脑干反应(auditory brainstem response, ABR)及40 Hz听觉相关电位(40 Hz-AERP),扫描电镜观察耳蜗超微结构的变化.结果 豚鼠噪声暴露后7天组、3周组ABR及40 Hz-AERP较0.5 h组有所恢复,但未恢复至正常水平,差异仍具有统计学意义.扫描电镜观察噪声暴露后耳蜗毛细血管内的红细胞随时间延长逐渐增加,外毛细胞倒伏现象有改善.结论 噪声暴露后外毛细胞可能有自我修复功能.     

噪声对豚鼠耳蜗基底膜乙酰化组蛋白H2B表达的影响

目的 观察噪声性聋豚鼠耳蜗基底膜毛细胞乙酰化组蛋白H2B表达水平的变化,探讨组蛋白乙酰化与噪声性听力损失的相关性.方法 成年雄性白色红目豚鼠60只随机分为噪声组和对照组,两组豚鼠分别进行听性脑干反应(ABR)检测后,噪声组给予高强度窄带噪声(122 dB SPL,3小时)暴露,对照组不予任何处理;噪声组于噪声暴露后1小时、3天、7天、14天和21天分别行ABR检测;并以免疫荧光染色和Western blot方法检测两组豚鼠耳蜗基底膜听觉细胞中乙酰化组蛋白H2B的表达水平.结果 噪声暴露后1小时、 3天、7天、14天、21天噪声组豚鼠ABR各频率反应阈均较噪声暴露前及对照组显著增高,且随时间的延长听力逐渐恢复,14天时趋于稳定,达到永久性阈移.免疫荧光染色显示在噪声组豚鼠耳蜗内外毛细胞及Hensen's细胞中乙酰化组蛋白H2B荧光强度较正常对照组减弱,Western blot结果显示噪声组豚鼠耳蜗基底膜中乙酰化组蛋白H2B的表达(H2B-AcK5/β-actin比值为0.310 2±0.083 9)较对照组(0.617 9±0.126)明显下调,两组差异有统计学意义(P<0.01).结论 噪声可导致豚鼠内耳感觉细胞乙酰化组蛋白H2B表达水平下降,乙酰化组蛋白失衡有可能参与了噪声性聋的发生.     

电子自旋共振技术观察急性声损伤后耳蜗自由基改变

目的:应用电子顺磁自旋共振(ESR)技术观察急性声损伤后豚鼠耳蜗自由基的变化规律.方法:将正常白毛红目豚鼠48只分为3组:A组(对照组)取6只豚鼠不给予噪声刺激,分别在检测听功能后测定自由基和硝酸银染色.B组21只豚鼠在(125±1)dB SPL稳态噪声暴露2h后分别于即刻、2h、6h,12h、24h、48h、72h施行ABR测试和ESR检测耳蜗自由基,检测方法为断头后快速取出耳蜗,液氮速冻.样品处理后放入ESR系统谐振腔中检测自由基含量.C组21只豚鼠在噪声暴露后于上述时间点检测听觉功能并取基膜行硝酸银染色观察Corti器毛细胞形态改变.结果:①正常豚鼠耳蜗中有少量自由基存在,其相对自由基值为(21.68±1.27).噪声暴露后即刻取样组自由基值明显升高,在暴露后2h达峰值(147.01±4.95)dB SPL,此后逐渐下降,至72h恢复至接近正常水平(53.12±2.57)dB SPL;②在125dB SPL的急性噪声暴露后,豚鼠的听阈明显提高,至6h达到峰值(73.89±2.41)dB SPL,直至72h仍未恢复到暴露前正常水平(50.28±1.48)dB SPL;③急性声损伤后形态学改变表现为外毛细胞纤毛紊乱、排列不规则,部分区域可见毛细胞缺失.结论:①急性噪声暴露后,豚鼠耳蜗内自由基水平明显增高,并在2h达峰值;②应用ESR技术检测耳蜗组织中自由基含量的方法具有直接、客观和灵敏的特点,ESR技术可用于某些内耳急性损伤动物模型的实验观察.     

西地那非对豚鼠噪声性听觉损伤阈移的影响

目的 探讨西地那非(sildenafil)对豚鼠噪声性听觉损伤阈移的影响.方法 将豚鼠按随机数字表法分为对照组、噪声暴露组和西地那非给药组,每组10只.西地那非组及噪声组豚鼠在白噪声(A计权声压级110 dB)暴露1周后分别腹腔注射西地那非10 mg/(kg·d)及生理盐水4mL/(kg·d),连续给药4周.分别测试噪声暴露前1日、噪声暴露后1、2及4周听性脑干反应(ABR)阈值,并通过扫描电镜观察噪声暴露后4周豚鼠耳蜗毛细胞的形态变化.结果 噪声暴露1后,噪声暴露组豚鼠ABR阈值(声压级)平均提高19.1 dB,随着时间推移,阈移逐渐加大,暴露后4周,阈值平均提高22.0 dB;西地那非组噪声暴露后ABR阈值提高19.8 dB,给药后阈移逐渐减小,给药后4周,阈值仅平均提高4.8 dB.西地那非组与噪声暴露组相比,除噪声暴露结束后这一时间点以外,其余给药后各时间点ABR阈值差异均具有统计学意义(P值均＜0.05).扫描电镜显示,噪声组豚鼠耳蜗内、外毛细胞均出现听毛紊乱、融合及缺失;而西地那非组耳蜗病变较轻,听毛仅有轻微倒伏、融合现象.结论 西地那非能够减轻噪声对豚鼠耳蜗毛细胞的损害,降低噪声性听觉损伤引起的ABR阈值升高.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对噪声性耳蜗损伤的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对噪声性耳蜗损伤的影响.方法 45只豚鼠随机分为EGCG+噪声组、生理盐水+噪声组、正常对照组,每组15只.EGCG+噪声组和生理盐水+噪声组豚鼠在接受噪声暴露(120 dB SPL, 4 h)前一日及每次暴露前1 h分别腹腔注射EGCG(25 mg/1 000 g)和等量生理盐水,正常对照组不予任何处理.噪声暴露后即刻和第1、3、7、14天检测三组豚鼠听性脑干反应(ABR),第14天分离各组豚鼠耳蜗,行耳蜗基底膜、血管纹铺片及免疫组化染色,观察各组豚鼠耳蜗基底膜、血管纹细胞形态及外毛细胞运动蛋白(Prestin)、3-硝基酪氨酸(3-NT)分布的变化.结果 噪声暴露后,EGCG+噪声组各时间点的ABR反应阈均高于对照组,但低于生理盐水+噪声组,从第3天开始,与两组间ABR反应阈差异缩小,但差异仍有统计学意义(均为P<0.05).免疫组织化学染色显示,正常对照组Prestin蛋白显绿染的耳蜗三排外毛细胞排列整齐,无细胞缺失,3-NT主要分布于毛细胞胞质及表皮板;与生理盐水+噪声组相比,噪声暴露后,EGCG+噪声组豚鼠外毛细胞形态较好,Prestin染色清晰;基底膜、血管纹处损伤轻,细胞排列规则,3-NT分布减少.结论 预防性腹腔注射EGCG可减轻噪声引起的耳蜗损伤,对噪声性听力损伤有一定的防护作用.     

5-磷酸二酯酶抑制剂对噪声性聋影响的实验研究

目的探讨5-磷酸二酯酶(PDE5)抑制剂对豚鼠噪声性聋的影响。方法豚鼠随机数字表法分为对照组、噪声暴露组和西地那非给药组,每组15只。西地那非组及噪声组豚鼠在白噪声暴露1周后分别腹腔注射西地那非10mg/(kg.d)及生理盐水4 ml/(kg.d),连续给药4周。分别测试噪声暴露前1天、噪声暴露后1、2及4周听性脑干反应(ABR)阈值及80dB HL下ABRⅠ波潜伏期,并通过扫描电镜观察噪声暴露后4周豚鼠耳蜗毛细胞的形态变化。结果与噪声暴露前相比,西地那非组ABR阈值及Ⅰ波潜伏期均小于噪声组,差异具有统计学意义(P值均<0.01)。扫描电镜显示,噪声组豚鼠耳蜗内、外毛细胞均出现听毛紊乱、融合及缺失;而西地那非组耳蜗病变较轻,听毛仅有轻微倒伏、融合现象。结论西地那非能够减轻噪声对豚鼠耳蜗毛细胞的损害,降低噪声性听觉损伤引起的ABR阈值升高,缩短其引起的Ⅰ波潜伏期延长。     

两种噪声刺激对豚鼠听觉早期损伤的比较

目的比较相同强度的不同噪声刺激后豚鼠听力和耳蜗外毛细胞损伤程度。方法将19只豚鼠分为娱乐噪声组(8只)、白噪声组(7只)和正常对照组(4只),白噪声组和娱乐噪声组声刺激平均强度均为105dBSPL,5小时/天,连续给声刺激5天。各组豚鼠在给噪声前及连续给噪声刺激5天结束后进行ABR和DPOAE检测,并在测试结束后取耳蜗应用异硫氰光素标记的鬼笔环肽(phalloidin-FITC)标记表皮板和静纤毛,应用碘化丙啶(PI)标记外毛细胞核,在激光共聚焦显微镜下观察毛细胞受损情况(包括核肿胀、核固缩、核缺失)。结果白噪声组和娱乐噪声组两种噪声刺激前后豚鼠ABR阈值分别为17.5±3.80、16.88±4.03dBSPL和64.64±5.36、45.94±4.55dBSPL;两组刺激前后DPOAE幅值均有所下降(P<0.05),且白噪声组比娱乐噪声组更为明显。白噪声组可观察到大量核肿胀和核固缩的外毛细胞及核缺失的毛细胞,娱乐噪声组观察到受损外毛细胞以核固缩为主,损伤总数远远低于白噪声组。结论相同强度白噪声和娱乐噪声刺激均可造成豚鼠一定程度的听力损失,娱乐噪声刺激后外毛细胞损伤以早期病变为主,其受损程度低于白噪声组。     

高强度低频噪声对豚鼠听力及耳蜗毛细胞的影响

目的观察高强度低频噪声对听力及耳蜗的影响。方法听力正常豚鼠,体重在250~300g之间,经强度为130dBSPL中心频率在100Hz的窄带噪声持续爆震4小时,分别于即刻、震后1天,作脑干诱发电位检测,以及耳蜗形态学观察。结果经130dBSPL强噪声暴露后,豚鼠听力有20dB左右的暂时性阈移产生。1天后,听力有所恢复,但听阈仍然高于正常。耳蜗形态学观察到,强噪声暴露后,耳蜗毛细胞虽未有损伤的表现,但凋亡前期蛋白Caspase3已经出现。结论高强度的低频噪声能产生暂时性阈移和永久性阈移,但可部分恢复。噪声对耳蜗毛细胞短期虽未观察有明确的损伤,但却开启了凋亡的程序。     

神经生长因子减轻噪声性阈移的透射电镜观察

目的　探讨神经生长因子 (nervegrowthfactor,NGF)对豚鼠噪声性听力损伤的防治作用。方法　豚鼠每天暴露 115dB(A)白噪声连续 6d (45min/d) ,在暴露全部结束后不同时间 (1h、1d、2d、3d和 6d)分别测试皮层反应阈 ,并用透射电镜观察耳蜗螺旋器细胞内变化。结果　A(每日肌内注射NGF 10 0 0U/kg体重 )、B(每日肌内注射NGF 2 0 0 0U /kg体重 )和C(每日肌内注射NGF 30 0 0U/kg体重 ) 3个实验组动物听反应阈偏移幅度均小于生理盐水对照组 (每日肌内注射 1ml/kg体重 ) ,差异有非常显著性意义 (方差分析 ,P值均 <0 0 1) ;实验B、C两组动物在噪声暴露后 3d听反应阈已基本恢复 ,而对照组动物在噪声暴露后 6d仍有 (16 43± 6 91)dB( x±s)的阈移。透射电镜观察显示 ,对照组耳蜗病变在 3排外毛细胞 ,以底回末段损伤最重 ,主要有纤毛内微丝解聚、线粒体肿大和毛细胞轻度水肿 ;外毛细胞表面下池和传出神经末梢也有轻度肿胀的表现。实验A组耳蜗病变程度比对照组轻 ,多局限在第 3排外毛细胞。而实验B、C两组动物内耳损伤甚微。结论　在慢性声损伤中 ,外源性NGF能够减轻噪声对耳蜗毛细胞的损害 ,对噪声性听力损伤具有较明显的保护作用。     

天麻素对噪声性耳蜗损伤防护作用的实验研究

目的观察天麻提取液-天麻素对噪声性耳蜗损伤的防护作用.方法豚鼠28只随机分成3组,正常组8只、噪声组10只和天麻素组10只,暴露于噪声的同时加用天麻素.所有豚鼠均作ABR、耳蜗基底膜铺片和扫描电镜观察.结果噪声组(64.37dB)和天麻素组(31.25dB)ABR阈值均显著高于正常组(20dB),但天麻素组显著低于噪声组(P＜0.01).天麻素组耳蜗毛细胞和静纤毛损害均轻于噪声组.结论天麻素能降低豚鼠噪声暴露后的ABR阈值,减轻毛细胞损害,对噪声性耳蜗损伤有防护作用.     

The effect of Hath1 r-expression in of guinea pig cochlea at one month after noise damage

Objective To study effects of Adenovirus-mediated Hath1 expression in guinea pig cochlea at one month after exposure to intensive noise. Methods Normal hearing guinea pigs, weighing 250-300g, received exposure to 200 rounds of impulse noise at 170 dB sound pressure level (SPL). The virus vector was inoculated into the left cochlea 1 month after noise exposure. Animals were tested using ABR and prepared for morphological examinations includeing immunocytochemistry and SEM 4 weeks after vector inoculation. Results The adenovirus mediated report gene expressed in the damaged area. There were no significant differences between treated and control animal in ABR threshold and morphologic changes. No new hair cells appeared in the Hath1 reated animals. Conclusion Forced hath1 ver-expression in the cochlea 1 month after noise exposure does not lead to appearance of new hair cells.     

The effect of Hath1 over–expression in of guinea pig cochlea at one month after noise damage

ObjectiveTo study effects of Adenovirus–mediated Hath1 expression in guinea pig cochlea at one month after exposure to intensive noise.MethodsNormal hearing guinea pigs, weighing 250–300g, received exposure to 200 rounds of impulse noise at 170 dB sound pressure level (SPL). The virus vector was inoculated into the left cochlea 1 month after noise exposure. Animals were tested using ABR and prepared for morphological examinations includeing immunocytochemistry and SEM 4 weeks after vector inoculation.ResultsThe adenovirus mediated report gene expressed in the damaged area. There were no significant differences between treated and control animal in ABR threshold and morphologic changes. No new hair cells appeared in the Hath1 treated animals.ConclusionForced hath1 over–expression in the cochlea 1 month after noise exposure does not lead to appearance of new hair cells.     

碱性成纤维细胞生长因子真核表达载体的构建及其在内耳基因治疗中的实验研究

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)双顺反子真核表达载体在豚鼠耳蜗中的表达 ,及噪声损伤后对毛细胞的保护作用。方法　利用脑炎心肌炎病毒的内部核糖体进入位点 (internalribosomeentrysite,IRES) ,构建人bFGF与增强型绿色荧光蛋白 (enhancegreenfluorescenceprotein ,EGFP)基因真核表达载体pIRES bFGF EGFP。采用硬脂胺 (stearylamine ,SA)脂质体介导bFGF基因转染豚鼠内耳 ,噪声暴露即刻通过圆窗向豚鼠耳蜗注入含有bFGF基因作为治疗基因的真核表达载体 ;或在噪声暴露前 7d ,作为保护因子转导转染豚鼠耳蜗。结果　构建的pIRES bFGF EGFP在转染 2 4h后开始表达 ,48h达到最高 ,表达时间可持续 1个月。治疗组在噪声后听性脑干反应平均阈值均低于噪声组 ,在保护组 :pIRES bFGF EGFP对耳蜗毛细胞有明显的保护作用。结论本研究成功地构建了pIRES bFGF EGFP真核共表达载体 ,具有bFGF、EGFP的双重活性 ,IRES可引导外源基因bFGF在内耳毛细胞表达     

用于毛细胞再生研究的噪声性聋动物模型的建立

目的观察高强度脉冲噪声暴露后豚鼠听功能及耳蜗结构的变化,探讨用于毛细胞再生研究的噪声性聋动物模型的建立方法。方法健康成年白色红目豚鼠50只,雌雄不限,体重250～300g。随机分成2组,正常对照组10只,噪声暴露组40只。给予脉冲噪声（压力峰值为175．0dB SPL,脉宽0．25ms,间隔时间20秒）连续暴露200次。于噪声暴露前及暴露后1周、4周、8周检测听性脑干反应（auditory brainstem respons,ABR）,毛细胞计数及耳蜗铺片免疫组化观察耳蜗结构变化。结果高强度脉冲噪声暴露后1周,40只豚鼠中有21只（52．5％）双耳各频率ABR阈值≥95dBSPL。继续观察至噪声暴露后4周及8剧,ABR阈值没有恢复,1周、4周、8周各频率ABR阈值比较无统计学差异（P〉0．05）。毛细胞计数结果显示,噪声暴露敛极重度聋后1周,内毛细胞平均缺失率为91．4％,外毛细胞平均缺失率为97．2％。免疫组化染色分析结果显示,噪声暴露致聋后1周,内、外毛细胞胞核大部分缺失,内毛细胞内侧及外毛细胞外侧的支持细胞的胞核存存。结论高强度脉冲噪声暴露可造成豚鼠极重度感音神经性聋,耳蜗毛细胞广泛缺失且无法内行恢复,而支持细胞夫部分仔留,是进行毛细胞再生研究的理想动物模型。     

银杏叶提取物对顺铂耳蜗毒性的拮抗作用

目的 研究银杏叶提取物对顺铂耳毒性的拮抗作用。方法 杂色健康豚鼠27只，随机分为生理盐水组、顺铂（CDDP）组、银杏叶提取物（Egb CDDP）组，动态观察动物听阈变化及耳蜗外毛细胞形态学改变，并在损伤6天后，观察外毛细胞损伤率、耳蜗毛细胞凋亡情况。结果 CDDP组听阈及外毛细胞损伤率显著性升高，凋亡现象明显；Egb CDDP组外毛细胞的损伤率及听阈损伤均明显减轻，仅出现早期凋亡表现；生理盐水组各项指标均无明显变化。结论 Egb对顺铂所致的耳毒性具有明显拮抗作用。     

脑源性神经营养因子对耳蜗螺旋神经节的保护作用

目的　观察腺病毒携带的脑源性神经营养因子 (brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)在豚鼠耳蜗中的表达 ,及噪声损伤后对螺旋神经节的保护作用。方法　 2 7只白色纯种豚鼠 ,暴露于135dBSPL ,4kHz的窄带噪声 4h。 7d后 ,12只经圆窗注入腺病毒携带BDNF(adenoviral mediatedBDNF ,ad BDNF) ,12只经圆窗注入ad LacZ ,3只注入人工外淋巴液。分别于 1、4、8周后取材 ,石蜡包埋中轴切片后 ,用免疫组化方法 (ABC法 )检测BDNF的表达。于光镜下计数螺旋神经节细胞。结果　在耳蜗各回中BDNF均有表达 ,4、8周组动物较 1周组动物表达弱。在 8周 ,注入ad BDNF组较ad LacZ组和人工外淋巴组螺旋神经节发生退行性病变的数目少 ,螺旋神经节细胞计数结果经统计学t检验 ,P <0 0 1,差异有显著性。结论　腺病毒携带的神经营养因子在耳蜗中能高效表达 ,在噪声损伤情况下腺病毒携带的脑源性神经营养因子对螺旋神经节有保护作用。该研究为基因治疗感音神经性聋提供了坚实的实验基础