微小RNA抑制胚胎细胞MAD2基因的表达

目的:探讨微小RNA(microRNA)抑制胚胎细胞MAD2基因表达的机理.方法:用定量real-time PCR比较microRNA转染前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时用western blot比较转染前后Mad2蛋白的表达水平.结果:对照组的MAD2基因mRNA拷贝数/GAPAH mRNA拷贝数为0.1780±0.0688,而转染microRNA重组质粒后,实验组的mRNA比值分别为0.1778±0.0689和0.1778±0.0670,经统计分析,两实验组细胞的内源性MAD2基因mRNA水平与对照组无显著性差异;而其中一实验组的蛋白水平在转染后有明显降低.结论:microRNA主要在翻译水平调节哺乳动物细胞内基因的表达,为研究基因表达的调控机制奠定了良好的基础.     

胚胎细胞MAD2基因表达对染色体分离的影响

目的探讨MAD2基因表达对染色体分离的影响.方法用定量RT-PCR比较RNA干扰前后的胚胎细胞内源性基因MAD2 mRNA表达水平,同时对染色体数目异常率进行比较分析.结果干扰后MAD2基因mRNA拷贝数/GAPDH基因mRNA拷贝数的均值为干扰前的20%,染色体数目异常率均值由干扰前的4.702%上升到28.498%.经统计学分析,RNA干扰后MAD2基因mRNA水平显著下降,染色体数目异常率显著增高.结论MAD2基因表达的降低会导致染色体分离的异常,本研究为染色体分离相关蛋白功能研究建立了新的研究手段和实验评价体系.     

微小RNA在直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的研究微小RNA（MicroRNA）在直肠癌组织与正常直肠组织中的表达差异。方法提取60例直肠癌及癌旁正常组织中总RNA,对标本中MicroRNA表达状况应用实时荧光定量PCR方法进行检测。对其他20例直肠癌组织及其癌旁正常组织应用问题分析（PAM）法进行定性判断。结果在直肠癌发生过程中有41种MicroRNA表达量显著下降（〈0.66）。对20例直肠癌组织应用PAM法进行定性判断的结果与病理检查结果基本一致。结论 MicroRNA与直肠癌联系密切,可以成为直肠癌早期预测和诊断的有效手段。     

基于数据库挖掘分析BUB1基因在卵巢癌中的表达及意义

目的探讨BUB1在卵巢癌(Ovarian cancer, OV)中的表达及与预后的关系。方法利用Oncomine数据库挖掘BUB1在各种肿瘤中的表达;通过GEPIA数据库分析BUB1在卵巢癌组织中的表达,采用Kaplan-Meier数据库分析BUB1在卵巢癌中的预后价值;通过Coexpedia数据库构建BUB1在卵巢癌中的共表达基因网络,并用FunRich软件对score>13的共表达基因注释。利用WebGestalt对其进行KEGG通路富集分析。按score高低筛选出关键基因,GEPIA进一步分析BUB1与关键基因的相关性。结果 (1)从Oncomine数据库检索出BUB1基因相关研究424项,其中高表达85项,低表达15项。(2)GEPIA分析表明,BUB1在卵巢癌组织中的表达高于正常组织(P<0.05)。(3)Kaplan-Meier数据库分析结果显示,BUB1基因低表达的卵巢癌患者总生存期(HR=1.2,P<0.05)增加。(4)BUB1的共表达基因主要有AURKA、DLGAP5、KIF2C、TPX2、BUB1B、DEPDC1、KIF23、CDCA3、TTK、...     

微小RNA与器官纤维化研究进展

微小RNA(miRNA)是一类长21～25个核苷酸的内源性非编码小RNA,在转录后水平调控靶基因的表达。近年来研究发现,miRNA也参与了机体多个器官如心脏、肺脏、肾脏、肝脏、皮肤的纤维化过程。本文对miRNA生物学特征及其在脏器纤维化过程中的作用的相关研究进展进行综述。     

BUB1B与胰腺癌的发生、免疫浸润细胞及预后的相关性分析

目的:利用在线数据库和生物信息学的方法,研究BUB1B在胰腺腺癌(pancreatic adenocarcinoma, PAAD)组织中的表达水平及与预后和免疫细胞浸润的相关性。方法:利用GEPIA数据库分析BUB1B在各种癌症中的表达情况;GEPIA、Kaplan-Meier Plotter数据库检索BUB1B的表达与PAAD患者预后的相关性;随后利用String数据库构建BUB1B共表达基因的蛋白互作网络,并用David数据库分析其GO生物学功能及KEGG信号通路;最后使用TIMER数据库分析BUB1B基因的表达与免疫浸润细胞之间的相关性。结果:在PADD组织中,BUB1B表达水平高于正常组织(P<0.01);BUB1B的高转录水平与性别、年龄、种族、肥胖状况、饮酒习惯、慢性胰腺炎、淋巴转移和癌症阶段密切相关(P<0.05);BUB1B mRNA表达水平与PAAD预后和免疫细胞浸润相关(P<0.05)。结论:BUB1B在PADD中高表达,与PAAD预后、免疫浸润相关,可作为胰腺癌诊断、预后、药物治疗的潜在标志物。     

微小RNA调控PD-L1表达在妇科肿瘤中的研究进展

微小RNA (miRNA)通过加速mRNA降解或阻断mRNA翻译来调控相应的靶基因表达。免疫系统作为一种外在的肿瘤抑制因子,通过破坏正在发展的肿瘤或抑制肿瘤扩张来影响肿瘤发生进展。近年来,肿瘤免疫治疗作为肿瘤临床研究的热点正在迅猛发展,免疫检查点抑制剂如PD-1以及其配体PD-L1抑制剂,已在妇科恶性肿瘤中取得了突破性的进展。目前,已有研究发现肿瘤中PD-L1的表达可能受多种miRNA的直接调控,miRNA可能通过肿瘤微环境中免疫状态改变、逆转肿瘤化疗耐药、调节肿瘤的免疫抵抗、诱导杀伤细胞靶向杀伤作用等多个方面调控PD-L1表达,从而影响肿瘤发展的病理过程。miRNA调控PD-L1表达在妇科肿瘤中的研究多集中在宫颈癌、卵巢癌及子宫内膜癌等常见妇科肿瘤。本研究拟综述当前微小RNA调控PD-L1表达在妇科肿瘤中的发展趋势和研究重点,以期为妇科肿瘤患者的临床治疗提供可靠的理论依据。     

微小RNA与肿瘤相关性研究

微小(microRNA,miRNA)是一种内源性的类似于siRNA的小RNA分子,由高等真核生物基因组编码、非编码蛋白,长度大约为22个核苷酸RNA片段,通过核酸序列的互补性结合到特定的靶mRNA上,并调节、翻译或降解靶mRNA来调控基因表达。近年来,miRNA作为生物体重要的基因调控分子与疾病的关系尤其是与肿瘤的关系备受关注。现就miRNA与肿瘤相关性作一综述。     

微小RNA在免疫调节中的作用研究进展

微小RNA(miRNA)是一类新发现的内源性非编码RNA分子,能在转录后水平调控基因的表达.研究证实,miRNA在细胞增殖、发育、分化、凋亡、代谢、信号转导以及肿瘤发生中发挥重要的调节作用.近年来,一系列的miRNA已被证实参与了免疫反应调控,如固有性免疫应答,T、B淋巴细胞的分化,病原体感染与免疫及炎症的免疫调控等.文中就miRNA在固有性与获得性免疫应答中的调控作用作一综述.     

BUB1在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨BUB1在鼻咽癌组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化EliVision二步法检测60例鼻咽癌组织、25例慢性鼻咽炎组织标本中BUB1蛋白的表达,并分析其与鼻咽癌患者临床特征的关系。结果鼻咽癌组织中BUBl的阳性表达率为45．0％（27／60）,低于慢性鼻咽炎组织的84．0％（21／25）,两者差异有统计学意义（P〈0．01）;鼻咽癌颈淋巴结转移组BUB1阳性表达率为30．8％（12／39）,低于无淋巴结转移组的71．4％（15／21）,两者差异有统计学意义（P〈0．01）;BUB1的表达与鼻咽癌临床分期相关,随临床分期的提高,BUBI的表达逐渐下降,差异有统计学意义（P〈0．01）;BUB1在鼻咽癌中的表达与患者年龄、性别、T分期、颅底破坏及颅神经损伤无相关性（均P〉0．05）。结论BUB1的低表达在鼻咽癌发生、发展中可能发挥重要作用,BUB1可作为鼻咽癌诊断及预后的参考指标之一。     

纺锤体检测点蛋白BUB1B在胃癌组织中的表达及意义

目的 检测胃癌组织中纺锤体检测点蛋白BUB1B的表达,探究BUB1B在胃癌发生中的重要意义.方法 采用荧光实时定量PCR检测30例胃癌组织及17例癌旁正常组织中BUB1B mRNA水平表达;免疫组织化学检测BUB1B在胃癌组织及癌旁组织中BUB1B蛋白的表达情况.结果 在mRNA水平,BUB1B在胃癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织,近(8.875±1.08)倍;免疫组织化学结果显示,胃癌组织中BUB1B的表达明显高于癌旁正常组织.按照评分标准统计显示,癌旁组织BUB1B表达均值为(92.12±12.99),胃癌组织表达均值为(133.39±8.49),两者之间存在明显差异(P＜0.05).且BUB1B表达与TNM分期相关,但与淋巴结转移,年龄,肿瘤大小及有无家族史无明显相关.结论 BUB1B的过表达在胃癌发生发展中起重要作用,为探索肿瘤发生机制及寻找更为有效的治疗提供新的思路.     

SATB1在鼻咽癌中的表达及意义

目的研究富含AT序列的特异结合蛋白1（special AT rich sequence binding protein 1,SATB1）在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）中的表达及意义。方法运用免疫组化法检测72例原发性NPC和30例鼻咽粘膜慢性炎症组织（chronic nasopharyngitis tissue,CNT）中SATB1蛋白的表达,并对NPC的临床病理参数进行统计分析。运用荧光定量PCR的方法检测高成瘤高转移鼻咽癌细胞株（SUNE-1亚株-5-8F）和只成瘤不转移鼻咽癌细胞株（SUNE-1亚株-6-10B）中SATB1的mRNA表达水平。结果 NPC和CNT中SATB1蛋白的阳性表达率分别为52.8%（38/72）和13.3%（4/30）,与CNT比较,NPC中SATB1表达上调,差异有统计学意义（P〈0.05）。NPC伴有淋巴结转移和无淋巴结转移SATB1阳性表达率分别为64.3%（27/42）和36.7%（11/30）,有远处转移和无远处转移的阳性表达率分别为88.9%（8/9）和47.6%（30/63）,两者比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。NPC原发灶中SATB1高表达与患者性别、年龄、T分级和临床分期无关（P〉0.05）,与N分级及M分级有关（P〈0.05）。此外,SATB1mRNA在5-8F细胞的表达量为6-10B细胞的4.09倍。结论 SATB1表达上调可能参与NPC的侵袭和转移。     

西藏小型猪IGF-1基因在不同生长发育阶段和不同组织器官中的差异表达

目的 测定西藏小型猪的IGF-1基因在不同年龄阶段、不同组织中的表达分布情况,为未来的研究提供基础数据。方法 采用实时荧光定量PCR技术,以GAPDH基因为内参照,检测了IGF-1基因在西藏小型猪不同组织和不同生长阶段间的表达变化。结果 （1）IGF-1基因表达的时序性研究表明在0、0.25、0.5、1、2岁时肌肉组织的表达量最低,在0、0.25、0.5岁时皮肤组织中表达量最高,在0.1、2、3岁时肝组织的表达量最高。（2）IGF-1基因在在7个不同组织中均有表达,0.25岁时其在表达丰度由高到低依次为：皮肤、肺、肝、肾、脾、心脏和肌肉。且在皮肤中的表达量最高且极显著高于其他各组织（P<0.01）。同时在不同年龄阶段的表达中,IGF-1基因0.25岁时在各组织中的表达均达到峰值。结论 西藏小型猪的IGF-1基因的表达呈现出明显的时空特异性。     

淋巴细胞肿瘤病人外周血单个核细胞中Elf-1基因表达特点

目的　了解T细胞特异性转录因子Elf-1基因在T细胞和B细胞肿瘤病人中的表达特点。方法　采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR和相对定量分析法检测20例健康人外周血及49例淋巴细胞肿瘤病人[急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）7例、T细胞非霍奇金淋巴瘤（T-NHL）6例、急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）10例、慢性B淋巴细胞白血病（B-CLL）7例和B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）19例]外周血单个核细胞中Elf-1基因表达情况,以β2微球蛋白基因（β2M)作为内参,采用公式2-△Ct×100%计算Elf-1基因表达水平。结果　与健康对照组（2.044±1.321%）相比,T细胞肿瘤组（12.050±10.334%）与B细胞肿瘤组（14.144±21.576%）患者外周血Elf-1基因表达均明显上升（P<0. 01,P<0. 01）。T细胞肿瘤组Elf-1基因表达水平与B细胞肿瘤组的差异无统计学意义（P>0.05）。但五种类型淋巴细胞肿瘤Elf-1基因表达水平有所不同,其中以B-ALL最高,T-ALL次之,而B-NHL组的Elf-1基因表达水平最低。结论　Elf-1基因在T细胞和B细胞肿瘤病人外周血单个核细胞中均呈高表达状态,其表达上调可能与机体T细胞免疫缺陷相关。     

beclin-1基因在乳腺癌中的表达及其与临床病理因素的关系

目的 探讨beclin-1基因在乳腺癌中的表达及其与临床病理因素的关系.方法 采用实时定量PCR和免疫组化方法 检测56例乳腺癌中beclin-1基因及蛋白的表达并分析其与临床病理因素的关系.结果 beclin-1 mRNA及蛋白在乳腺癌中的表达显著下调,但与临床病理因素无显著相关性.结论 beclin-1可能在乳腺癌中负调控而引起肿瘤的发生.     

原发性食管癌组织中多药抗药性基因1的表达

用ＲＴＰＣＲ方法，定量检测了３０例食管癌和相应切断正常粘膜组织中多药抗药（ＭｕｌｔｉＤｒｕｇＲｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）性基因１的表达。结果：癌组织中３３．３％的病例存在ＭＤＲ１基因的表达，而相对应的切断正常粘膜组织中，仅有１３．３％的病例存在ＭＤＲ１基因的表达，皆为低中度表达。Ｐ＜０．０５，２者间差异有显著性。但ＭＤＲ１基因的表达与食管癌临床病理资料如性别、年龄、肿瘤大小、分级、淋巴结转移、ＴＮＭ分期等无关。结果提示：ＭＤＲ１基因的表达在食管癌的发生中起一定的作用，它可能与食管癌的原发性耐药有关。     

RT-PCR检测胃癌NY-ESO-1抗原的表达及其基因克隆

目的:研究NY-ESO-1基因在胃癌中的表达,以便了解为胃癌患者是否可以使用NY-ESO-1抗原为基础的疫苗治疗。方法:采用RT-PCR方法检测了NY-ESO-1基因在60例胃癌组织和相应的癌旁正常组织中的表达,采用分子克隆的方法从胃癌组织中克隆了NY-ESO-1cDNA。结果:NY-ESO-1基因在胃癌组织中的表达率为55%(33/60),在相应的癌旁正常组织中的未见表达,克隆的NY-ESO-1cDNA序列与GenBank报道一致。结论:NY-ESO-1基因在胃癌中的高表达率,NY-ESO-1抗原可以被具有HLA-1类分子限制性CTL识别。     

人重型肝炎相关基因Fas、TNFR1真核表达载体和microRNA表达载体的构建及其体外干预效应的初步研究

目的 构建人Fas(hFas)和人TNFR1(hTNFR1)基因的真核表达质粒pcDNA3.0-hFas、pcDNA3.0-hTNFR1和microRNA(miRNA)干扰质粒p-hFasmiRNA、 p-hTNFR1miRNA,初步验证其在体外细胞系对Fas和TNFR1基因表达的干预效应.方法 从人肝癌细胞HepG2细胞中获得模板cDNA,通过PCR扩增出hFas和hTNFR1全长片段,将目的 片段通过T载体过渡克隆至表达载体pcDNA3.0,得到重组质粒pcDNA3.0-hFas和pcDNA3.0-hTNFR1.利用miRNA设计软件,针对Fas和TNFR1基因分别设计3对pre-microRNA(pre-miRNA)序列,通过T4连接酶将pre-miRNA克隆至pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA表达载体,同时构建非相关干扰质粒.构建成功的p-hFasmiRNA1、p-hFasmiRNA2、p-hFasmiRNA3和p-hTNFR1miRNA1、p-hTNFR1miRNA2、p-hTNFR1miRNA3分别与pcDNA3.0-hFas和pcDNA3.0-hTNFR1共转染至人293T细胞,通过Real-time PCR和Western blot检测转染48 h后对基因表达的干预效应.结果通过测序鉴定表明Fas和TNFR1基因的真核表达载体和miRNA干扰质粒均构建成功. Real-time PCR结果显示干预组的Fas和TNFR1基因的表达与对照组比较明显减少,抑制效率分别可达到87%和80%.Western blot结果也同样证实干预组的Fas和TNFR1基因的蛋白表达量与对照组比较明显减少.结论 成功构建了hFas和hTNFR1的真核表达载体和microRNA干扰质粒,并初步证实构建的microRNA干扰质粒在细胞水平对hFas和hTNFR1的表达具有特异性的抑制效应.