低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞中Gax基因表达及细胞增殖的影响

目的探讨低氧对肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)中生长终止特异性同源盒(growth arrest-spec ific homeobox,Gax)基因表达及细胞增殖的影响。方法以RT-PCR法、免疫细胞化学法和W estern blot法测定经低氧处理后的大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达3。H-TdR掺入法观察低氧处理后PASMCs增殖情况。结果RT-PCR、免疫细胞化学和W estern blot检测证实低氧(2.5%O2)处理后的PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达逐渐降低;与常氧组比较,低氧组Gax mRNA和蛋白的表达显著下降3。H-TdR掺入法测定结果示PASMCs3H-TdR掺入量在低氧6 h开始增加,随着低氧时间延长,3H-TdR掺入量逐渐增加,至低氧24 h时3H-TdR掺入量最高。结论低氧可下调大鼠PASMCs中Gax mRNA和蛋白的表达并诱导PASMCs增殖,提示Gax基因在低氧性PASMCs增殖过程中可能起着重要作用。     

二苯乙烯苷对低氧肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨二苯乙烯苷对低氧肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及其机制。 方法 SD大鼠PASMCs经低氧及TSG干预24h后, CCK-8检测细胞增殖及TSG的细胞毒作用,流式细胞仪分析细胞周期,实时定量PCR(RT-PCR)检测HIF-1α mRNA的表达,酶标仪检测活性氧(ROS)的产生。 结果 二苯乙烯苷能够抑制低氧PASMCs增殖,阻滞细胞周期于G₀/G₁~S期,并且实验浓度的二苯乙烯苷无明显细胞毒作用,进一步的研究发现二苯乙烯苷能够抑制HIF-1α mRNA的表达及ROS的产生。 结论 二苯乙烯苷可抑制低氧PASMCs增殖,其机制可能与抑制HIF-1α mRNA的表达及ROS产生有关。     

SOCS3基因转染对低氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的　探讨SOCS3基因对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)增殖的影响。方法　以脂质体为载体将pEFSOCS3和pSV2neo共转染至体外培养的PASMCs ,应用RT PCR和免疫细胞化学法测定转染前后细胞中SOCS3mRNA和蛋白表达。低氧处理PASMCs ,采用Westernblot法检测转染前后常氧 (N)、低氧 6h(H6)、低氧 12h(H12 )PASMCs中STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平变化 ;流式细胞仪、3 H TdR掺入法检测转染前后各时相点细胞增殖情况。结果　RT PCR和免疫细胞化学证实转染后细胞中有SOCS3mRNA和蛋白稳定表达 ;与同时相对照组 (包括未转染组和转染空载体组 )相比 ,SOCS3基因转染组细胞中STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平显著下降 (P <0 0 1) ;流式细胞仪分析显示SOCS3基因转染组细胞各时相点G0 /G1期细胞比例显著增多 (P <0 0 1) ,S G2 /M期细胞比例显著减少 (P <0 0 1) ;SOCS3基因转染组细胞在常氧和低氧条件下 3 H TdR掺入量显著低于同时相点对照组细胞 (P <0 0 1)。结论　SOCS3蛋白可能通过降低STAT3酪氨酸磷酸化水平抑制PASMCs增殖。     

不同低氧环境对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨不同低氧环境对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖活性的影响.方法 将原代培养的大鼠PASMCs分为常氧组(21% O2,5% CO2)、低氧组(10% O2,85% N2,5% CO2)、缺氧组(1% O2,94% N2,5%...     

进口与国产黄芩苷对低氧性肺动脉平滑肌细胞增殖影响的比较

目的 观察黄芩苷对低氧性人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)增殖的干预作用,并比较国产和进口来源黄芩苷的药效差异.方法 免疫荧光化学技术鉴定HPASMCs,在低氧条件下建立HPASMCs过度增殖模型,采用MTT法分别检测常氧和低氧环境中不同剂量国产与进口来源黄芩苷对HPASMCs增殖的影响.结果 24h开始低氧即可促进HPASMCs增殖,但此时黄芩苷干预对其无明显影响,而经48 h处理后HPASMCs被显著抑制,分别以终浓度5、10、20、40 μmol/L国产或进口黄芩苷处理异常增殖的HPASMCs,发现10 μmol/L国产黄芩苷和40 μmol/L进口黄芩苷表现出最佳的抑制效果,而从综合比较和药效程度而言以40μmol/L进口黄芩苷效果更显著(P＜0.01).结论 黄芩苷能有效抑制HPASMCs增殖,且进口黄芩苷的干预作用相对较强.     

低氧对大鼠不同级别肺动脉平滑肌细胞功能的影响

目的培养鉴定大鼠不同级别肺动脉平滑肌细胞（ pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs）,探讨其对缺氧刺激反应性的不同。方法酶消化法分离大鼠不同级别PASMCs并分为3组：大肺动脉组,包括肺动脉干及肺内一级主干;中动脉组,包括肺内主干的第二级和第三级分支;小肺动脉组,包括肺内主干四级分支后的更细小分支。分别给予常氧（ DMEM＋2%FBS、5%CO2、21%O2、37益）和低氧（ DMEM＋2%FBS、5%CO2、3%O2、37益）培养48 h,用四甲基偶氮唑盐（ methyl thiazolyl tetrazolium, MTT）比色法和Western blotting检测增生细胞核抗原（ proliferating cell nuclear antigen,PCNA）的蛋白表达水平的方法检测细胞的增生能力;应用伤口愈合实验检测细胞的迁移能力。结果倒置显微镜下PASMCs呈现长梭形,免疫荧光法检测平滑肌细胞标志物即平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）为阳性,生理情况下（常氧）,3组肺动脉平滑肌细胞增生及迁移能力均较一致;低氧培养48 h后,中小肺动脉平滑肌细胞的增生与迁移能力均显著高于大动脉,PCNA结果与MTT结果一致,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论在低氧条件刺激下,不同级别肺动脉平滑肌细胞反应性不同,中小肺动脉平滑肌细胞的增生及迁移能力均显著高于大肺动脉平滑肌细胞。     

冬虫夏草水提取物对慢性低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及癌基因c-fos、c-jun表达的影响

目的 探讨冬虫夏草水提取物对慢性低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及其可能的作用机制.方法 用MTT法测定不同浓度冬虫夏草水提取物对慢性低氧大鼠PASMCs增殖的影响,用流式细胞仪分析冬虫夏草水提取物对慢性低氧大鼠PASMCs细胞周期的影响,用免疫细胞化学染色法测定冬虫夏草水提取物对慢性低氧大鼠PASMCs增殖细胞核抗原(PCNA)和癌基因c-fos、c-jun表达的影响.结果 低氧对照组大鼠PASMCs吸光度(A)值明显高于常氧对照组,差异有统计学意义(P<0.01),1、10、100 mg/mL冬虫夏草组A值呈明显下降趋势,差异均有统计学意义(P<0.05);低氧对照组S+G2M 期细胞比例明显高于常氧对照组,差异有统计学意义(P<0.01),冬虫夏草组S+G2M期细胞比例明显低于低氧对照组,但高于常氧对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);冬虫夏草组PCNA阳性表达率明显低于低氧对照组,但高于常氧对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);冬虫夏草组细胞c-fos和c-jun 蛋白阳性染色平均积分光密度值(AIOD)明显低于低氧对照组,但高于常氧对照组,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 冬虫夏草水提取物呈浓度依赖性抑制慢性低氧导致的大鼠PASMCs增殖,其抑制作用可能是通过减少细胞内c-fos、c-jun基因和PCNA的表达、降低S期和G2/M期细胞比例来实现的.     

衰老和缺氧对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨衰老及缺氧对体外培养的肺动脉平滑肌(PASMCs)增殖的影响。方法 将细胞分为年轻常氧组、老年常氧组、年轻缺氧组、老年缺氧组。应用MTT比色法、^3H-TdR掺入法、流式细胞术、免疫组化方法检查细胞的增殖情况。结果 同年轻组比较，老年组PASMCs的生长曲线明显抬高，^3H-TdR掺入明显增加，进入有丝分裂期的细胞比例明显增加，总蛋白量减少，增殖细胞核抗原(PCNA)增加；同常氧组比较，缺氧组PASMCs的生长曲线明显抬高。^3H-TdR掺入先受抑制，后明显增加，进入有丝分裂期的细胞比例明显增加，总蛋白量减少，PCNA增加。结论 衰老和缺氧部能直接刺激平滑肌细胞的增殖．衰老的平滑肌细胞受缺氧刺激增殖最为明显。     

miR-34a在低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

【目的】观察miR-34a在低氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用并探讨其可能的机制。【方法】原代分离和培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）,并给予3%低氧处理后,用Real-time PCR法检测miR-34a和Notch1mRNA在大鼠PASMC中的表达;低氧条件下用细胞转染法过表达和抑制miR-34a、沉默Notch1基因的表达后用EDU法观察细胞增殖情况,并用Real-time PCR和Western blot法检测细胞核增殖抗原PCNA的表达。【结果】分离和培养大鼠PASMC并给予3%低氧处理后,大鼠PASMC中miR-34a表达明显降低,且低氧48h降低较明显,组间差异有统计学意义（P<0.05）。而Notch1的表达明显增高,且48h增高较明显,组间差异有统计学意义（P<0.05）。此外,过表达miR-34a和沉默Notch1后会显著抑制低氧引起的细胞增殖,抑制miR-34a的表达后则会促进细胞增殖,且组间差异有统计学意义（P<0.05）。【结论】在低氧诱导的PASMC细胞增殖过程中miR-34a参与了PASMC的增殖过程,且可能是通过上调Notch1引起了细胞增殖。     

亮氨酸脑啡肽对缺氧时肺动脉平滑平细胞增殖的影响

目的：研究缺氧对肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）增殖、ＤＮＡ合成和细胞周期的作用,并观察亮氨酸脑啡肽（Ｌ－Ｅｎｋ）和阿片受体阻断剂纳洛酮（Ｎａｌ）的影响．方法：离体培养兔ＰＡＳＭＣ,采用四唑盐比色试验（ＭＴＴ）,３Ｈ－ＴｄＲ参入技术和流式细胞仪分析细胞周期等方法,观察ＰＡＳＭＣ增殖、ＤＮＡ合成和细胞周期的变化．结果：ＰＡＳＭＣ缺氧培养１２ｈ,２４ｈ后,ＭＴＴ的Ａ值和３Ｈ－ＴｄＲ参入量分别为（１７９±１９．１）％,（１８５±２０．３）％和（１５８±１３．６）％,（１６７±１７．４）％,比常氧对照组（１００％）显著增加（Ｐ＜０．０１）．缺氧培养２４ｈ后,在Ｇ２,Ｍ期的细胞比例显著升高,Ｇ０,Ｇ１期的细胞比例显著减少（Ｐ＜０．０１）．Ｌ－Ｅｎｋ（１×１０－４ｍｏｌ／Ｌ）可明显抑制缺氧促进ＰＡＳＭＣ增殖和ＤＮＡ合成的作用（Ｐ＜０．０１）,该抑制作用可被Ｎａｌ阻断．结论：Ｌ－Ｅｎｋ可抑制缺氧时ＰＡＳＭＣ的增殖和ＤＮＡ的合成作用,该抑制效应是通过阿片受体介导的．     

C-myc反义核酸对内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖抑制作用的研究

应用不同浓度的Ｃ－ｍｙｃ反义寡核苷酸处理体外培养的经１０－８ｍｏｌ／Ｌ内皮素－１（ＥＴ－１）诱导的人肺动脉平滑肌细胞,通过细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值观察该反义核酸对细胞增殖及ＤＮＡ合成的抑制作用,应用斑点杂交法检测平滑肌细胞Ｃ－ｆｏｓ和Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ的表达水平。结果表明,１０、２０、５０μｇ／ｍｌ反义寡核苷酸对细胞计数和３Ｈ－ＴｄＲ掺入值与对照组相比抑制率分别为１１．９％和１２．３％（Ｐ＜０．０５）,２１．６％和１４．７％（Ｐ＜０．０１）,３６．３％和２７．２％（Ｐ＜０．０１）;对Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达抑制率分别为７１．３％（Ｐ＜０．０５）,８０．７％（Ｐ＜０．０５）,９２．５％（Ｐ＜０．０１）;５０μｇ／ｍｌ反义核酸对Ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ表达抑制率是７９．７％,１０、２０μｇ／ｍｌ组无抑制作用。Ｃ－ｍｙｃ反义核酸能显著抑制内皮素诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖,其作用系依赖反义核酸的序列特异性和剂量依赖。     

香烟烟雾提取物对兔气道平滑肌细胞毒性损伤及对一氧化氮生成的影响

目的探讨吸烟对气道平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）的影响。方法分别以０、５％、１０％和３０％的香烟烟雾提取物（ＣＳＥ）孵育兔ＡＳＭＣ，测定其细胞存活率、丙二醛（ＭＤＡ）含量、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）漏出及一氧化氮（ＮＯ）稳定代谢终产物亚硝酸盐（ＮＯ－２）水平。用ｏｎｅｗａｙＡＮＯＶＡ检验及直线回归作统计学分析。结果在４８ｈＣＳＥ显著增加了ＡＳＭＣ的ＮＯ－２释放（１０％、３０％ＣＳＥ分别较对照组增加７５．７％和１１５．３％，Ｐ＜０．０１）；降低了细胞存活率，增加了细胞ＭＤＡ含量和ＬＤＨ漏出（Ｐ均＜０．０１），毒性损伤指标与ＮＯ－２的释放高度相关（ｒ分别为－０．７２１、０．７０６和０．７７３，Ｐ均＜０．０１）。结论吸烟可能对ＡＳＭＣ具有直接损伤作用，ＣＳＥ可能通过ＮＯ介导气道炎症损伤过程。     

内源性一氧化氮对麻醉大鼠肺循环阻力的影响

目的研究内源性一氧化氮（NO）对麻醉SD大鼠肺循环阻力的影响。方法麻醉大鼠应用非选择性一氧化氮合酶（NOS）抑制剂N-硝基精氨酸甲酯（L-NAME）,分别实时监测系统动脉压（Psa）、肺动脉压（Ppa）、左心房压（Pla）、主动脉血流量（ABF）和气道压力（Paw）,观察大鼠肺循环阻力（PVR）的变化。结果麻醉大鼠应用L-NAME（10mg/kg）后,Psa迅速升高,ABF随Psa升高而降低,而Ppa、Pla和Paw没有出现明显变化,PVR受ABF降低的影响逐渐升高,给L-NAME 10 min后,PVR从基础值的（0.34±0.05）mmHg·min/mL升高到了（0.52±0.05）mmHg·min/mL,差异有显著性（P〈0.05）。结论内源性产生的NO没有参与肺动脉血管舒张度的调节。     

L－精氨酸抑制兔肺动脉巨噬细胞平滑肌细胞增殖

目的：观察Ｌ－精氨酸是否通过抑制巨噬细胞浸润和平滑肌细胞增殖而起抗动脉粥样硬化作用。方法：２０只成年雄性新西兰兔随机分为ＡＣ组（ｌ％胆固醇＋饮水含２．２５％Ｌ－精氨酸）；ＭＣ组（１％胆固醇＋饮水含０．９％蛋氨酸；Ｃ组（１％胆固醇）和ＮＣ组（普通饲料和自来水）；每组各５只。１０周后采血标本，处死兔取主肺动脉作形态学和免疫组织化学研究。统计学采取ｔ检验和方差分析。结果：Ｌ－精氨酸使肺动脉内膜增生明显减轻（１．９４至０．６７，Ｐ＜０．０５），巨噬细胞浸润及平滑肌细胞增殖显著减少（分别为７５％～１３％，和６８％～２１％，Ｐ均＜０．０１）；而蛋氨酸却无此作用。结论：Ｌ－精氨酸能抑制高胆固醇兔肺动脉粥样硬化，其机理主要与抑制巨噬细胞浸润和平滑肌细胞增殖有关。     

EFFECT OF HYPOXIA ON DNA SYNTHESIS AND C－MYC GENE EXPRESSION OF PULMONARY ARTERY SMOOTH MUSCLE CELLS

ＥＦＦＥＣＴＯＦＨＹＰＯＸＩＡＯＮＤＮＡＳＹＮＴＨＥＳＩＳＡＮＤＣ－ＭＹＣＧＥＮＥＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＰＵＬＭＯＮＡＲＹＡＲＴＥＲＹＳＭＯＯＴＨＭＵＳＣＬＥＣＥＬＬＳＬｕｏＬａｎ（罗兰）；ＬｉＳｈｉｑｉａｎｇ（李世强）ａｎｄＣａｉＹｉｎｇｎｉａｎ...     

东莨菪碱对动脉平滑肌细胞的作用

以培养的兔ASMC为材料,研究了Scop对细胞增殖的影响。有Ca~(2 )时,Scop抑制ASMC的增殖;缺Ca~(2 )时则表现为双向作用,即低浓度刺激、高浓度抑制ASMC增殖。培养液中有Cd~(2 )存在时,Scop对ASMC增殖仍表现为双向作用。     

同型半胱氨酸对体外培养的大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 :观察同型半胱氨酸 (HCY)对大鼠动脉平滑肌细胞 (ASMCS)增殖的影响。方法 :利用体外细胞培养技术 ,通过 MTT比色测定、细胞计数及流式细胞仪对细胞周期的测定 ,观察同型半胱氨酸对大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响。结果 :同型半胱氨酸能促进大鼠动脉平滑肌细胞的增殖 ,呈明显的剂量依赖关系。药物作用两天后 ,0 .2 m M· L-1HCY组与对照组相比 ,细胞数目增加 4 6 .4 8%,MTT比色OD值增加 4 5 .6 9%(P<0 .0 1) ;经细胞周期的测定 ,结果表明 HCY作用后 G0 ～ G1期细胞数由对照组的 87.2 2 %降低至 76 .6 5 %,减少了 12 .12 %;S期的细胞数由对照组的 0 .0 0 %增加到 6 .6 6 %,处于DNA合成期的细胞数明显增加。结论 :同型半胱氨酸能促进大鼠动脉平滑肌细胞的增殖 ,呈明显的剂量依赖关系。推测 HCY可能通过促进平滑肌细胞的增殖导致动脉粥样硬化的发生。     

川芎嗪对正常人体肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的作用

目的：研究川芎嗪（（tetramethylpyrazine,TMP））对正常人体肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道宏观电流（large-conductance Ca^2＋-activated potassium channels,BKCa）的作用,探讨TMP对BKCa的作用机制。方法：用急性酶分离法分离人体肠系膜动脉平滑肌细胞,采用全细胞穿孔膜片钳技术记录该细胞上的大电导钙激活钾通道宏观电流,并测试TMP对该电流的作用。结果：TMP在0.73、3.67mmol/L时可明显地可逆性地激活正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa,在0.73mmol/L浓度时,测试电压从-50～＋60mV时差异都有统计学意义,其中测试电压在-50mV时,电流密度从0.25±0.03pA/pF增加到0.34±0.039pA/pF（P〈0.01,n=12）,测试电压在＋60mV时,电流密度从8.37±1.75pA/pF增加到14.12±2.66pA/pF（P〈0.01,n=12）;TMP在3.67mmol/L时可明显地可逆性地激活正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa,测试电压从0～＋60mV时差异都有统计学意义,其中测试电压在0mV时,电流密度从1.25±0.23pA/pF增加到1.90±0.31pA/pF（P〈0.05,n=7）,测试电压在＋60mV时,电流密度从10.57±3.61pA/pF增加到20.32±4.68pA/pF（P〈0.05,n=7）。但TMP在8.07mmol/L时可明显地可逆性地抑制正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa,测试电压从-60～＋60mV时差异都有统计学意义,其中测试电压在-60mV时,电流密度从0.28±0.02pA/pF降低到0.15±0.04pA/pF（P〈0.01,n=6）,测试电压在＋60mV时,电流密度从10.49±0.44pA/pF降低到1.83±0.68pA/pF（P〈0.01,n=6）。结论：TMP在0.73、3.67mmol/L下,可激活正常人体肠系膜血管平滑肌细胞大电导钙激活钾通道,而在8.07mmol/L时可明显地可逆性地抑制正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa。在低浓度和较高浓度下TMP对正常人体肠系膜血管平滑肌细胞上的BKCa有不同效应的实验结果,为TMP应用于临床提供了实验依据     

慢性肺源性心脏病患者血清一氧化氮测定的临床意义

探讨一氧化氮在慢性肺源性心脏病心衰发病中的意义。方法分别测定肺心病心衰组，缓解期和对照组的ＮＯ浓度，动脉血氧分压、二氧化碳分压及１秒肺活量。结论ＮＯ可能反映肺心病心衰状况并与肺部的炎症有关。