人膀胱癌阿霉素耐药株BIU—87／ADM的建立及其耐药机理的研究

以人膀胱癌细胞抗株ＢＩＵ－８７主亲本，经递增阿霉素（ＡＤＭ）剂量的方法，历时８个月，建立了一株耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ。此细胞株对ＡＤＭ的耐受程度较产本细胞提高了６．３倍，对柔红霉素（ＤＮＲ），表阿霉素，长春新碱和鬼臼乙叉甙有明显的叉耐药性，但对顺铂，丝裂霉素无交叉耐药性，与亲本细胞相比耐药亚株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对ＤＩＲ蓄积减少，     

人膀胱癌阿霉素耐药株BIU－87／ADM的建立及其耐药机理的研究

以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，经递增阿霉素（ＡＤＭ）剂量的方法，历时８个月，建立了一株耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ．此细胞株对ＡＤＭ的耐受程度较亲本细胞提高了６．３倍，对柔红霉素（ＤＮＲ）、表阿霉素、长春新碱和鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，但对顺铂、丝裂霉素无交叉耐药性。与亲本细胞相比，耐药亚株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对ＤＮＲ蓄积减少；免疫化学显示，７５％的耐药细胞Ｐ－ｇｐ过表达。因而耐药细胞内ＤＮＲ低聚集主要是Ｐ－ｇｐ膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致，是其产生耐药性的主要原因。但并非所有ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ均表达Ｐ－ｇｐ，其他耐药机理的共存是有可能的。ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ及其亲本细胞为寻求逆转人膀胱癌耐药的新型化疗增敏剂或综合化疗方案提供了良好的实验模型。     

人膀胱癌BIU—87细胞系多重抗药性的形成

应用阿霉素，大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，逐步诱导人膀胱癌移行上皮细胞系ＢＩＵ－８７，在体外持续培养６个月，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞。该细胞能在浓度为２．０ｇ／Ｌ的ＡＤＭ中持续增殖。通过测定抗癌药物５０％抑制浓度发现，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞对阿霉素的敏感性下降了２１倍同时对表阿霉素，长春新碱，足叶乙甙，也具有显著的交叉抗药性，对顺铂，丝裂霉素，５氟尿嘧啶和氨甲喋呤无抗     

人膀胱癌多药耐受性细胞亚系BIU—87PR的建立及生物学特征

多药耐受肿瘤细胞系是研究肿瘤多药耐受性的良好实验模型。本研究通过使用单一浓度阿霉素短时冲击诱导的方法,历时5月,成功地诱导建立了人膀胱移行上皮癌多药耐受细胞亚系BIU-87PR。生物学鉴定表明,BIU-87PR对阿霉素的耐药性较敏感细胞BIU-87提高了2.1倍。对足叶乙■的耐药性提高了4倍.对长春新碱的敏感性提高了2.4倍.BIU-87PR的生物学特性与BIU-87相似,生长速率较慢,融合密度略降低,细胞轻度异形性,染色体分析显示双微体略增多.     

人膀胱癌BIU－87细胞系多重抗药性的形成

应用阿霉素（ＡＤＭ），大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，逐步诱导人膀胱癌移行上皮细胞系ＢＩＵ－８７，在体外持续培养６个月，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞。该细胞能在浓度为２．０ｇ／Ｌ的ＡＤＭ中持续增殖。通过测定抗癌药物５０％抑制浓度（ＩＣ_（５０））发现，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞对阿霉素的敏感性下降了２１倍，同时对表阿霉素（４－ｅｐｉ）、长春新碱（ＶＣＲ）、足叶乙甙（ＶＰ－１６）也具有显著的交叉抗药性，对顺铂（ＤＤＰ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）、５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）和氨甲喋呤（ＭＴＸ）无抗药性；ＢＩＵ８７／ＡＤＭ细胞在脱离阿霉素诱导第８周时，其抗药性仍保持在９０％以上，结果表明：ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞具有多重抗药性（ＭＤＲ）表型，且抗药性较稳定，是研究人膀胱移行细胞癌ＭＤＲ机制和筛选抗药性逆转剂的理想模型。     

钙通道阻断剂逆转膀胱癌细胞耐药性的实验研究

采用ＭＴＴ、ＨＰＬＣ等方法对膀胱癌耐药细胞耐药性逆转进行实验研究，以钙通道阻断剂异搏定为逆转剂。结果表明：异搏定能有效地逆转膀胱癌细胞的抗药性，主要通过抑制Ｐ－ＧＰ糖蛋白的药物外流“泵”作用，增加了细胞内长春新碱（ＶＣＲ）的蓄积。抗药逆转剂（异搏定）与化疗药物联合应用进行膀胱腔内灌注可能是治疗和预防膀胱肿瘤抗药及复发的有效手段。     

膀胱癌多向耐药基因P—GP170表达的研究

应用ＭＤＲ（Ａｂ－１）和Ｃ２１９单克隆抗体，免疫组化法对４２例膀胱癌ＭＤＲ１和ＭＤＲ３基因编码的Ｐ－ＧＰ１７０的表达进行了研究，结果发现，３０例膀胱初发瘤Ｐ－ＧＰ１７０的阳性表达率为７０％（２１／３０），其中８例（２７％）为强性染色，１２例（４３％）为阳性或部分阳性染色。１２例化疗后复发的肿瘤切片，Ｐ－ＧＰ１７０的阳性表达率为８３．３％，２４例Ｇ１～２肿瘤Ｐ－ＧＰ１７０阳性表达率为７９％（１９／２     

抗P—糖蛋白单克隆抗体JSB—1和环孢素A协同逆转人膀胱癌MD…

为了证实抗Ｐ－糖蛋白单克隆抗体协同环孢素Ａ逆转入膀胱癌耐药细胞亚株的抗药性以及建立能有效地克服ＭＤＰ的治疗方案对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞系和ＢＩＵ－８７．ＡＤＭ耐药 株经柔红霉素与抗Ｐ－ｇｏ单克 抗 ＪＳＧＢ－１和单独或联合ＣｓＡ；ＪＳＢ－１和单独或联合异搏定自理后，采用Ｍ ＴＴ法评价细胞毒作用荧光光光度计检测细胞民内ＤＮＲ的聚集量。结果ＪＳＢ－１和ＣｓＡ能协同增加ＤＮＲＢＩＵ－８７／ＡＤ     

抗癌药物诱导人膀胱癌BIU—87和E—J细胞凋亡的作用

应用分子生物学方法，观察了丝裂霉素、喜树碱、顺铂和阿霉素对膀胱癌细胞系ＢＩＵ８７和ＥＪ体外生长和生存的影响，对抗癌药物诱导膀胱癌细胞凋亡作用进行了研究。结果：四种抗癌药均能在不同程度上抑制膀胱癌细胞生长，诱导膀胱癌细胞凋亡的能力与其生长抑制效应成正比。细胞形态学和ＤＮＡ分析显示喜树碱、顺铂处理的ＢＩＵ８７和丝裂霉素、阿霉素处理的ＥＪ细胞呈现典型的凋亡现象。揭示药物的抑癌作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的，它可能是抑制肿瘤生长的机理之一。不同膀胱癌细胞系对药物诱导凋亡的敏感性存在着差异。细胞凋亡现象为肿瘤化疗提供了新的领域。     

人膀胱癌多重抗药性逆转的实验研究

为探讨膀胱癌多重抗药性逆转机理，应用阿霉素（ＡＤＭ）大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞。通过测定细胞内ＡＤＭ聚积量和钙离子浓度，发现ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量显著低于ＢＩＵ８７细胞（Ｐ＜００５）；维拉帕米（ＶＰＬ）、奎宁能使ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量增加（Ｐ＜００５），两者协同应用基本上可逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性。结果表明：（１）细胞内ＡＤＭ聚积量减少是抗药细胞的重要变化，在细胞抗药性发生机理中可能起主导作用，（２）ＶＰＬ、奎宁能逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性，可能与增加细胞内ＡＤＭ聚积量有关，与钙通道无关。     

逆转肾癌细胞系GRC—1耐药的实验与机理研究

为探讨对ＧＲＣ１细胞系药物耐受的逆转，采用ＭＴＴ比色法测定了异博定、ＢＳＯ以及异博定联合ＢＳＯ在细胞系ＧＲＣ１对阿霉素耐药的逆转效果。结果两种逆转剂单独与阿霉素作用均可以提高阿霉素对ＧＲＣ１的杀伤作用，以两种逆转剂联合作用效果更好。流式荧光法显示异博定对ＧＲＣ１耐药的逆转是通过增加细胞内药物积累实现的。研究表明，逆转ＧＲＣ１的耐药可以通过其不同的耐药机制实现。     

免疫细胞化学技术检测P－糖蛋白在人膀胱癌MDR细胞亚株中的表达

为探讨肿瘤细胞耐药性，以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，以递增阿霉素剂量的方法，历时８个月，成功地诱导建立了一株耐药细胞亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ。通过生物学鉴定发现此细胞对阿霉素的相对时受度较亲本细胞提高了６．３倍，对阿霉素类似物柔红霉素、表阿霉素及天然生物碱类抗癌药长春新碱、鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，对顺铂、丝裂霉素则无交叉耐药性。为进一步阐明其耐药机理，应用链霉亲和素－生物素免疫细胞化学技术对其耐药性进行研究发现，约７５％的ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞Ｐ－ｇｐ过表达，而亲本细胞均为阴性。由此结果表明，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ耐药性的产生主要是由于Ｐ－ｇｐ膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致，是其产生耐药性的主要原因，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ的建立为进一步针对Ｐ－ｇｐ药泵功能逆转其抗药性的研究奠定了实验基础。     

雅胆子油乳诱导膀胱癌BIU—87细胞凋亡的研究

目的：研究雅胆子油乳对膀胱癌细胞的作用。探讨其抑制膀胱癌的机制。方法：将5ul/ml雅胆子油乳作用于人BIU-87膀胱癌细胞,利用流式细胞仪和透射电子显微镜分析和观察作用结果。结果：鸦胆子油乳阻止ＢＩＵ-87膀胱癌细胞由G0/G1周期进入S期,并诱导人BIU-87膀胱癌细胞的凋亡。结论：鸭胆子油乳抗癌作用机制之一是诱导人BIU-87膀胱癌细胞的凋亡。     

膀胱肿瘤的化疗耐药及逆转

肿瘤细胞的耐药性是肿瘤化疗的最大障碍，本文以分子生物学平复习了近年来膀胱肿瘤多药耐药的研究进展以及通过应用化疗敏感剂和肿药物基因治疗等方法逆转肿瘤细胞的耐药性。以指导膀胱肿瘤的化疗。     

反义N—rasl DNA片段对人膀胱癌BIU—87细胞系作用的研究

将载有反义人Ｎ－ｒａｓｌ（ｅｘｏｎｌ）ＤＮＡ片段的重组表达质粒ｆＰＧＶ１－ＭＴ－Ｎｒａｓｌ（Ａ）导入人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞系，可以导致ＢＩＵ－８７细胞恶性行为的部分改变，表现在生长速度减慢２１．７％～６５．６％，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入降低４５．８％，软琼脂克隆形成能力下降４８．３％，同时，Ｎ－ｒａｓ－ｍＲＮＡ３及Ｐ２１ｒａｓ表达减少。     

膀胱癌多药耐药基因产物的表达及临床意义

目的探讨膀胱癌组织的多药耐药基因（mdr－1）产物P-糖蛋白（P-GP）的表达情况。方法应用LSAB免疫组化技术研究25例初发膀胱癌及16例复发膀胱癌的P－GP阳性表达。结果初发膀胱癌P－GP阳性表达率48％,复发膀胱癌P-GP阳性表达率87.5％,复发性膀胱癌P－GP阳性表达率明显高于初发肿瘤（P＜0.05）。不同病理分级、临床分期间的P－GP阳性表达率无显著性差异（P＞005）。结论膀胱癌的P－GP阳性表达水平与肿瘤病理分级及临床分期无关。复发性膀胱癌有较高的P－GP表达是由于肿瘤接触化疗药物后,mdr－1基因扩增所致。P－GP的过度表达可能是膀胱癌腔内化疗失败的重要原因之一。     

5‘—FITC标记的PCNA反义寡核苷酸在人膀胱癌细胞BIU—87中的分？…

目的 观察硫代修饰型及天然型ＰＣＮＡ反义寡核苷酸在脂质体介导下或直接转染人膀胱癌细胞ＢＩＵ－８７后在细胞内的分布及其稳定性。方法 将异硫氰酸荧光素（５＇－ＦＩＴＣ）标记的１８ｍｅｒ硫代磷酸化修饰型及未修饰型ＰＣＮＡ反义寡核苷酸在脂质体介导下或直接转染人膀胱癌细胞ＢＩＵ－８７,应用荧光显微镜观察转染细胞及细胞内的时相分布。结果 修饰型反义核酸直接转染细胞后３０分钟,少数细胞胞浆荧光呈离散型、点状分布     

粉防己碱联合阿霉素对人膀胱癌BIU-87／ADM细胞裸鼠移植瘤抑瘤率影响的研究

目的观察粉防己碱（tetrandrine,Tet）联合阿霉素（adriamycin,ADM）对人膀胱癌BIU87／ADM细胞裸鼠移植瘤抑制率的影响。方法30只裸鼠腋部皮下接种BIU87／ADM移植瘤细胞,第22天扪及一小结节,随机分为对照组（生理盐水;6只）、ADM组（1．0mg／kgADM;6只）、Tet低剂量联合ADM组（1．0μg／mlTet＋1．0mg／kgADM;6只）、Tet中剂量联合ADM组（3．0ptg／m{Tet＋1．0mg／kgADM;6只）和Tet高剂量联合ADM组（5．0~g／mlTet＋1．0mg／kgADM;6只）,每4天于肿瘤局部注射生理盐水、ADM以及不同剂量的Tet＋1．0mg／kgADM,每4天测量肿瘤大小,并绘制肿瘤生长曲线;药物处理结束后取瘤并称取重量,依据公式计算抑瘤率。结果Tet各剂量联合ADM组肿瘤的体积、瘤重与对照组比较,差异有统计学意义（P％0．05）;Tet中、高剂量联合ADM组肿瘤体积、瘤重与ADM组比较,差异有统计学意义（P〈O．05）。结论Tet联合ADM能够明显增加ADM对膀胱癌细胞B1U一87／ADM移植瘤杀伤的敏感性,Tet剂量越高,抑制作用越明显。