PGA无纺网与PDLCs的3D共培养物在裸鼠体内的生长观察

目的：通过研究人牙周韧带细胞(PDLCs)与聚羟基乙酸(PGA)无纺网共培养物在裸鼠体内的生长，探讨PGA无纺网作为支架应用于牙周组织工程的可能性。方法：将共培养7d的人PDLCs与PGA无纺网复合物接种于BALB／C裸小鼠一侧背部皮下，另一侧植入空白PGA为对照。分别于1、2、3、4周取材进行大体及HE和Masson‘s染色及Ⅰ型胶原免疫组织化学观察，并进行新生毛细血管记数。结果：随着。PGA无纺网在体内的逐渐降解，PDLCs同步增殖，分泌胞外基质。体内2周时即可见实验侧植入物血管化良好并有胶原束的形成，Ⅰ型胶原表达阳性。结论：PGA无纺网具有良好的生物相容性和生物安全性，并易于新生血管的形成，作为牙周组织工程的细胞支架有良好的应用前景。     

口腔黏膜上皮细胞及成纤维细胞与PGA的生物相容性研究

目的：观察口腔黏膜上皮细胞与成纤维细胞在聚羟基乙酸(PGA)上的粘附生长情况，在体外形成活的黏膜样组织的能力。方法：口腔黏膜上皮细胞无血清、无饲养层体外培养、扩增至第二代，与PGA混合培养形成细胞一生物材料复合物；口腔黏膜成纤维细胞体外培养、扩增至第二代，与PGA混合培养形成细胞一生物材料复合物；①光镜、扫描电镜下观察两种细胞分别与PGA的粘附生长情况；②用MTT法检测口腔黏膜上皮细胞及成纤维细胞在PGA上的增殖情况，绘制细胞生长曲线。结果：口腔黏膜上皮细胞与成纤维细胞能够在PGA上粘附生长，其生长增殖能力优于平皿培养。结论：PGA与口腔黏膜上皮细胞或成纤维细胞具有良好的生物相容性，其降解产物无毒。不影响细胞生长及分泌基质。     

用PGA支架体外构建人口腔黏膜固有层的实验研究

目的:探讨利用可吸收生物材料聚羟基乙酸(polyglycolicacids,PGA)和口腔黏膜成纤维细胞(oralfibroblast,OFC)在体外构建组织工程化口腔黏膜固有层的可能性。方法:取细胞经体外培养,扩增至第3代,与PGA混合培养,形成细胞—生物材料复合物,每2d换液一次。动态观察细胞形态和粘附生长状况,于体外培养1周左右,取组织作电镜观察、组织学和RT-PCR检测。结果:复合物体外培养6d,OFC粘附在生物支架上,沿PGA纤维纵轴方向向两极伸展,细胞分泌基质并形成拉网状结构。HE染色和Masson染色均提示胶原纤维形成,RT-PCR显示胶原成分主要为Ⅰ型胶原。结论:应用PGA支架可以在体外成功构建口腔黏膜固有层组织。     

人牙周韧带细胞与壳聚糖-胶原支架体外培养的实验研究

目的:探讨壳聚糖-胶原支架在人牙周韧带细胞(PDLC)体外培养中的作用.方法:将体外培养PDLC接种于壳聚糖-胶原支架上,通过MTT法测定细胞增殖情况,通过半定量PCR检测细胞mRNA合成变化.结果:与传统的平板培养相比,PDLC在壳聚糖-胶原支架上的增殖及mRNA合成情况有显著性差异(P<0.05).结论:该复合支架可以作为PDLC的载体;对PDLC的增殖及细胞外基质的合成均有较好地促进作用.     

Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中表达的比较研究

目的比较人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞在胶原基质合成方面的差别,并探讨其意义。方法采用组织块法体外培养人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞,利用免疫细胞化学技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原在两种细胞中的表达,通过图像分析探讨其表达的差异。结果Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙周韧带细胞中表达阳性,在牙龈成纤维细胞中染色较弱。统计学分析显示,Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞的免疫细胞化学染色结果具有显著性差异(P<0.01)。结论牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞胶原基质的合成或分泌存在差异,这种差异可作为鉴别两种细胞的标志之一。     

聚己内酯电纺纤维支架培养人牙周膜细胞的体外研究

目的：研究聚己内酯（PCL）电纺纤维支架上人牙周膜细胞的生物学行为，初步探讨PCL电纺纤维支架材料应用于牙齿再生和牙周组织工程研究的可行性。方法：采用静电纺丝法制备PCL电纺纤维支架。组织块法培养人牙周膜细胞（PDLC），传代扩增后接种于PCL电纺纤维支架上。激光共聚焦显微镜、扫描电镜观察人PDLC在支架材料上的黏附、生长情况，MTT法检测PCL电纺纤维支架对PDLC增殖的影响。结果：PCL电纺纤维支架呈无纺多孔网状结构，直径范围为338～424nm，纤维形态光滑均一。激光共聚焦显微镜、扫描电镜显示PDLC在支架上贴附牢固，伸展充分，增殖旺盛并分泌大量的细胞外基质。MTT法检测显示：PCL电纺纤维支架材料对PDLC生长增殖的影响与对照组培养板相比无统计学差异（P〉0．05）。结论：PCL电纺纤维支架具有良好的生物相容性，有望作为一种新型的支架材料应用于牙周组织工程。     

牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞生长特性及其胶原表达的比较研究

利用体外细胞培养技术及四唑盐比色法观察了牙周韧带细胞(PDLC)和牙龈成纤维细胞(GF)在体外生长、增殖的情况,用免疫荧光法观察了其细胞外基质表达的差异。结果显示GF较PDLC更容易成活,其增殖速度更快,且GF中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达均较PDLC强,提示在相同生长环境下,GF较PDLC可能有更强的生长能力。     

体外诱导鼠骨髓间充质干细胞构建人工骨的研究

目的：体外诱导鼠骨髓间充质干细胞，与聚乳酸-聚羟基乙酸支架材料体外复合构建人工骨进行研究。方法：分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，并进行体外诱导和成骨能力检验；而后与聚乳酸-聚羟基乙酸支架材料复合构建三维培养体系，进行扫描电镜、碱性磷酸酶和骨钙素活性检测。结果：对已构建三维培养体系，扫描电镜检测见有大量细胞粘附生长；均检测到碱性磷酸酶和骨钙素活性。结论：已构建三维培养体系内鼠骨髓间充质干细胞仍具有良好的增殖能力和成骨活性，可用于构建人工骨。     

人牙周韧带成纤维细胞与壳聚糖-磷酸三钙复合材料相容性的扫描电镜观察

目的：探讨人牙韧带成纤维细胞与壳聚糖—磷酸三钙复合材料的生物和容性。方法：采用冷冻干燥法制备壳聚糖-磷酸三钙复合材料，组织块法培养人牙周韧带细胞，传代扩增后接种到材料上，体外继续培养，扫描电镜观察。结果：扫描电镜下可见材料具有良好的多孔网状结构，人牙周韧带细胞伸出多个伪足样突起，紧密贴附在材料表面，细胞沿材料的孔隙边缘生长并连接成片。结论：人牙周韧带成纤维细胞与壳聚糖-磷酸三钙复合材料具有良好的生物相容性。     

人牙周膜细胞体外三维立体培养模型的建立

目的：建立人牙周膜细胞（PDLC）体外三维立体培养模型，初步探讨两种支架材料应用于牙周组织工程的可行性，为进一步研究牙周组织生理病理及牙周组织工程奠定实验基础。方法：组织块法培养人PDLC，传代扩增后，接种于珊瑚和珊瑚转化羟基磷灰石（CHA）两种三维支架上，体外继续培养3d，进行细胞计数和扫描电镜观察。结果：细胞在两种支架材料上均能形成良好贴附并增殖，扫描电镜可见两种支架材料均具有良好的多孔网状结构，细胞在支架材料上生长旺盛，伸展充分。结论：可通过将人PDLC接种到珊瑚或CHA上建立体外三维立体培养模型，珊瑚和CHA均有望成为牙周组织工程的支架材料。     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究——细胞形态、生长曲线及碱性磷酸酶活性测定

目的 :建立人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外培养模型并对其生物学特性作初步探讨。方法 :采用组织块法常规条件下分别进行牙龈和牙周韧带成纤维细胞的培养 ,通过光镜、透射电镜、生长曲线及碱性磷酸酶测定等手段对其部分生物学特性进行研究。结果 :两种培养的原代及传代细胞在光镜下细胞排列及结构无明显差别 ,传代培养时牙龈成纤维细胞有接触抑制现象 ,而牙周韧带成纤维细胞则可呈复层生长 ,牙周韧带成纤维细胞排列方向性较明显 ,生长曲线表明牙周韧带成纤维细胞增殖活性高于牙龈成纤维细胞 ;碱性磷酸酶活性测定及染色法显示两者有明显的差别。结论 :体外培养的两种细胞在形态及排列上相似 ,但在细胞亚型的组成上存在差异。     

Cementum-periodontal ligament complex regeneration using the cell sheet technique

Background and Objective: In the present study we evaluated if a multilayered human periodontal ligament cell sheet could reconstruct the physiological architecture of a periodontal ligament–cementum complex. Material and methods: Human periodontal ligament cells were isolated and then cultured in dishes coated with a temperature‐responsive polymer to allow cell detachment as a cell sheet. In the control group, human periodontal ligament cells were cultured in Dulbecco’s modified Eagle’s minimal essential medium containing 10% fetal bovine serum and 1% antibiotics. In the experimental group, human periodontal ligament cells were cultured in Dulbecco’s modified Eagle’s minimal essential medium and osteodifferentiation medium containing dexamethasone, ascorbic acid and β‐glycerophosphate. After 3 wk, scanning electron microscopy was carried out, in addition to staining for alkaline phosphatase activity and for calcium (using the Von Kossa stain). Then human periodontal ligament cell sheets were multilayered and placed onto dentin blocks. The constructs were transplanted subcutaneously into the back of immunodeficient rats. At 1 and 6 wk after transplantation, the animals were killed. Demineralized tissue sections were stained using hematoxylin and eosin, and Azan, and then analyzed. Results: After 3 wk of culture in osteodifferentiation medium, human periodontal ligament cells produced mineral‐like nodules and also showed positive staining for alkaline phosphatase, calcium (Von Kossa) and mRNA expression of type I collagen. By contrast, in the control group only weak alkaline phosphatase staining was observed, the Von Kossa stain was negative and there was no mRNA expression of type I collagen. Six weeks after transplantation with human periodontal ligament cells cultured in osteodifferentiation medium, most of the dentin surfaces showed a newly immature cementum‐like tissue formation and periodontal ligament with perpendicular orientation inserted into the newly deposited cementum‐like tissue. Conclusion: This study suggests that the multilayered temperature‐responsive culture system can be used as a novel strategy for periodontal regeneration. The human periodontal ligament cell sheet technique may be applicable for regeneration of the clinical periodontal ligament–cementum complex.     

牙周膜干细胞膜片的构建及其生物学特性的研究

目的:探讨牙周膜干细胞膜片的构建及其生物学特性.方法:采用胶原酶消化人牙周膜组织,获得牙周膜干细胞(Periodontal ligament stem cells,PDLSCs),经体外鉴定、扩增后构建PDLSCs细胞膜片,并通过倒置显微镜、HE染色、扫描电镜(SEM)对PDLSCs细胞膜片形态学进行检测.此外,细胞膜...     

狗牙周膜细胞三维立体培养的体外实验研究

目的 :探讨异体脱矿松质骨基质 (CBM )和纳米羟基磷灰石材料 (nHAC)两种支架材料应用于牙周组织工程的可行性 ,为建立牙周组织工程的动物模型及下一步进行牙周组织工程的动物实验奠定实验基础。方法 :组织块法培养狗牙周膜细胞 ,传代扩增后 ,接种于CBM和nHAC 2种三维支架上 ,体外继续培养 3d ,进行细胞计数和扫描电镜观察。结果 :狗牙周膜细胞在 2种支架材料上均能形成良好贴附并增殖 ,扫描电镜可见 2种支架材料均具有良好的多孔网状结构 ,细胞在支架材料上生长旺盛 ,伸展充分。结论 :CBM和nHAC均有望成为牙周组织工程的支架材料     

兔脂肪源干细胞与牙周膜成纤维细胞共培养的实验研究

目的:研究脂肪源干细胞能否与牙周膜成纤维细胞直接共培养,在共培养状态下,脂肪源干细胞能否促进牙周膜成纤维细胞胶原特异基因的表达。方法:分别从新西兰白兔皮下脂肪和牙周膜组织中分离出脂肪源干细胞和牙周膜成纤维细胞,体外常规培养;将两种细胞等量混合共培养,利用光镜和F-actin染色标记细胞骨架的方法观察共培养细胞的形态变化,并与单纯培养的细胞比较;利用DAPI染色标示细胞核细胞计数法检测共培养细胞的增殖情况;利用定量PCR法检测特异基因I型胶原在单纯培养和共培养细胞中的表达。结果:脂肪源干细胞和牙周膜成纤维细胞能直接共培养;共培养细胞形态近似牙周膜成纤维细胞;共培养对细胞增殖无明显影响;脂肪源干细胞可提高牙周膜成纤维细胞I型胶原基因的表达。结论:脂肪源干细胞可与牙周膜成纤维细胞共培养,并促进牙周膜成纤维细胞的胶原分泌。     

纳米羟基磷灰石材料复合碱性成纤维细胞因子促进牙周组织再生的实验研究

目的:探讨新型纳米羟基磷灰石材料—纳米羟晶/胶原仿生骨材料(nHAC)作为生长因子载体和牙周组织工程支架材料应用的可行性,观察评价其对牙周组织再生修复的影响和意义。方法:将人牙周膜细胞(HPDLCs)接种于nHAC三维支架上复合培养,体外扫描电镜观察HPDLCs在nHAC支架上的附着、生长情况,并将碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与nHAC复合植入动物人工牙周组织缺损,表面覆盖聚四氟乙烯(e-PTFE)膜,以空白对照组和单纯置膜组作为对照。术后8周进行组织学观察和测量,分析评价其牙周组织的再生情况。结果:扫描电镜可见nHAC具有良好的多孔网状结构,PDLCs在nHAC支架上贴附紧密,生长旺盛,伸展充分,动物实验结果显示nHAC/bFGF/膜复合植入组较空白对照组和单纯置膜组有更多新生的牙槽骨、牙周膜和牙骨质生成,结果具有显著性差异。结论:nHAC具有良好的三维空间结构和细胞相容性,与bFGF复合植入牙周缺损后可显著促进牙周组织再生,提示nHAC有望成为理想的生长因子载体和牙周组织工程支架材料。     

用组织工程的方法建立人牙髓细胞体外三维立体培养模型

目的：建立人牙髓成纤维细胞体外三维立体培养模型,为研究牙髓生理病理奠定基础。方法：组织块法培养人牙髓细胞,扩增后,接种于聚乙醇酸（PGA）三维支架上,继续培养,通过倒置显微镜、扫描电镜和透射电镜观察细胞的生长情况。结果：细胞接种24h后开始贴附于PGA纤维上,然后开始伸展并增殖,PGA纤维上的细胞不断增长。扫描电镜可见细胞在PGA纤维上生长良好,呈长梭形。透射电镜观察表明PGA上的细胞超微结构正常。结论：将牙髓细胞接种于PGA无纺网上,可以有效地建立牙髓细胞三维立体培养模型。