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人白细胞介素31（IL-31）是近年在“Nature Immunology”杂志上报道的新细胞因子，为一具有4个螺旋结构的单链分子，主要由激活的T细胞产生，基因定位于12q24．31，大小为904bp，开放阅读框495bp，编码一条由164个氨基酸残基组成的多肽链，成熟的IL-31分子含有141个氨基酸。生理状态下，IL-31表达水平较低，在睾丸、骨髓、骨骼肌、肾脏、结肠、胸腺、小肠和气管有低水平表达。激活的CD4^＋T细胞表达IL-31，但CD8^＋T细胞表达水平较低。用抗CD3抗体、抗CD28抗体刺激后，Th2细胞表达增高。     

人白细胞介素-17F基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的 克隆人白细胞介素-17F基因，并构建含有该目的基因的重组原核表达载体，获得高效表达hIL-17F的基因工程菌。方法 利用RT-PCR法，以PHA活化的人外周血单个核细胞的总RNA为模板，扩增出hIL-17FFeDNA的编码序列，并分别亚克隆至pUCm-T载体和原核表达载体pGEX．5X-3中，进行PCR、酶切鉴定和DNA序列测定。将重组原核表达载体转化感受态大肠杆菌B121后经IPTG诱导表达获得包涵体融合蛋白，且Western印迹鉴定。结果 PCR产物大小及其单酶切鉴定均证明所克隆的基因是hIL-17F，DNA序列测定进一步证实与GeneBank报道的序列完全一致。成功构建了重组原核表达载体pGEX-5X．3／hIL-17F，并在大肠杆菌中获得高效表达，约占菌体总蛋白的55％，且Western印迹证实确为目的蛋白。结论 该基因系国内首次克隆，hIL-17F基因重组体的构建和在大肠杆菌BL21中的高效表达，为进一步探讨其生物学活性和应用奠定了基础。     

重组人白细胞介素—3在大肠杆菌中表达及纯化研究

将化学合成的人白细胞介素－３（ｈＩＬ－３）基因与表达质粒ＰＫＫ２２３－３重组并转化大肠杆菌ＪＭ１０５，重组菌在摇瓶中发酵并诱导表达，表达产量达菌体蛋白质总量的５３％么上。发酵菌经超声破碎后得到包本，经洗涤处理使包含体纯度达９０％以上。     

人白细胞介素—18的基因克隆及原核表达

目的 为进一步研究人白细胞介素（ｈＩＬ－１８）的生物学特性打下基础，进行ｈＩＬ－１８的基因克隆及原核表达。方法 采用反转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法从正常人外周血白细胞中克隆ｈＩＬ－１８基因，并重组于ＰＶＢ２２０表达载体上，经酶切初步鉴定后进行ＤＮＡ序列分析，继而观察重组ｈＩＬ－１８基因在大肠杆菌中不同诱导时间表达量的差异。结果 所克隆的基因与预期结果一致，并在４２℃诱导５ｈ时表达量最高。结论 成功     

人白细胞介素-18的基因克隆及原核表达

目的　为进一步研究人白细胞介素 (hIL - 18)的生物学特性打下基础 ,进行hIL - 18的基因克隆及原核表达。方法　采用反转录PCR(RT -PCR)法从正常人外周血白细胞中克隆hIL - 18基因 ,并重组于PBV2 2 0表达载体上 ,经酶切初步鉴定后进行DNA序列分析 ,继而观察重组hIL - 18基因在大肠杆菌中不同诱导时间表达量的差异。结果　所克隆的基因与预期结果一致 ,并在 42℃诱导 5h时表达量最高。结论　成功地克隆了hIL - 18基因 ,并使获得高效表达     

重组人白细胞介素－3在大肠杆菌中表达及纯化研究

将化学合成的人白细胞介素－３（ｈＩＬ－３）基因与表达质粒ｐＫＫ２２３－３重组并转化大肠杆菌ＪＭ１０５，重组菌在摇瓶中发酵并诱导表达，表达产量达菌体蛋白质总量的５３％以上。发酵菌经超声破碎后得到包含体，经洗涤处理使包含体纯度达９０％以上。用８ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍溶解包含体后直接透析复性，复性液经Ｓｅｐｈｏｒｏｓｅ－ＳＰ离子交换层析，得到纯化的重组ｈＩＬ－３，纯度达９８％。用ＴＦ－１细胞进行体外检测活性，比活达到１０８单位／ｍｇ蛋白质。本研究为重组人白细胞介素－３的大规模生产提供了条件。     

人白细胞介素-18基因克隆、重组表达及活性测定

白细胞介素 18（ Interleukin 18, IL-18）是单核巨噬细胞系统分泌的重要的 Th1类细胞因子,对 NK细胞的成熟、活化起到重要的调节作用,可以与 IL-12协同增强 NK细胞及 Th1细胞的细胞毒活性,并在细胞免疫的启动过程中起到重要作用。 IL-18基因缺陷鼠的细胞免疫不能被启动, NK细胞的体外活化能力明显下降。小鼠体内外实验显示 IL-18具有较显著的抗肿瘤效应。 IL-18为相对分子质量 18 500的单链活性蛋白,没有 N-糖基化位点,不形成链内二硫键,适于在大肠杆菌（ E.coli）中表达。本实验根据 IL-18成熟蛋白的 cDNA序列,设计引…     

人白细胞介素1受体拮抗基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

目的 获得一株重组人白细胞介素1受体拮抗蛋白的高效表达菌株,为研究各种急慢性炎症疾病的发病机制以及拮抗IL-1的生物学效应奠定基础。方法 分离人外周血淋巴细胞,提取mRNA,反转录PCR获得人白细胞介素1受体拮抗基因（hIL-1ra),克隆人大肠杆菌表达载体。从而构建高效表达人IL-1ra的重组菌株。结果 成功构建了IKL-1ra的高效表达菌株（pLDH-hIL1ra),序列测定与文献报道一致12%SDS-PAGE分析显示此菌株所表达的目的蛋白产物相对分子质量为23ku,与预期结果相符,光密度扫描重组hIL-1ra蛋白质占细菌总蛋白的30%。结论 大肠杆菌中成功地表达了hIL-1ra基因。     

人白细胞介素15基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 克隆人白细胞介素（IL）15全长cDNA,并在大肠杆菌中表达。方法从人外周血分离的淋巴细胞中提取总RNA,通过RT—PCR扩增出hIL-15全长cDNA。构建到原核表达载体pET28a（＋）中,通过卡那霉素平板筛选及PCR鉴定,挑出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,扩增后IPTG诱导表达。通过SDS-PAEG及Western-blot方法鉴定表达的融合蛋白。结果 成功构建人IL-15表达载体,并表达于大肠杆菌中。SDS—PAEG及Western-blot分析显示表达的融合蛋白分子量为16．1ku,与理论值相符。结论 获得了hIL-15融合蛋白,为hIL-15单克隆抗体的制备及其功能研究奠定了基础。     

人白细胞介素-10在大肠杆菌中的表达

目的克隆人IL-10 cDNA的全长序列，构建原核表达载体并诱导其表达。方法无菌条件下静脉采取正常人外周血10ml。加入等体积的生理盐水稀释后，加入淋巴细胞分离液，离心收集细胞，提取细胞总RNA。以细胞总RNA为模板，进行RT—PCR，克隆出IL-10 cDNA，经双酶切后插入表达载体pMon中，用pMon—IL10重组体转染大肠杆菌DH5a。用萘啶酮酸诱导使重组人IL-10在大肠杆菌中表达，对表达产物进行SDS—PAGE电泳及Western—blot分析。结果人外周血单核细胞经ConA刺激后，IL—10转录水平增加，有利于IL-10 cDNA的克隆；克隆的IL-10 cDNA经测序证实与基因库报告的序列完全一致，插入pMon载体后经萘啶酮酸诱导能够在大肠杆菌DH5a表达；表达的蛋白质能与兔抗人IL—10特异性结合。结论人IL-10 cDNA被成功克隆并能够在大肠杆菌中表达。     

人白细胞介素—9cDNA的PCR扩增及其在大肠杆菌的表达

利用ＰＣＲ技术从人外周血Ｔ细胞ｃＤＮＡ文库中扩增出人ＩＬ－９的ｃＤＮＡ，将其连入大肠杆菌表达载体后，可大大肠杆菌高效表达出人重组ＩＬ－９融合蛋白，表达量占菌体蛋白的２５％左右，有明显的刺激正常人骨髓细胞集落形成的活性。     

人白细胞介素－9cDNA的PCR扩增及其在大肠杆菌的表达

利用ＰＣＲ技术从人外周血Ｔ细胞ｃＤＮＡ文库中扩增出人ＩＬ－９的ｃＤＮＡ，将其连入大肠杆菌表达载体后，可在大肠杆菌高效表达出人重组ＩＬ－９融合蛋白，表达量占菌体蛋白的２５％左右，有明显的刺激正常人骨髓细胞集落形成的活性。     

人白细胞介素18cDNA的克隆及在大肠杆菌中的高效表达

获得ＩＬ－１８全长ｃＤＮＡ序列，研究ＩＬ－１８在大直菌中的表达。方法利用ＲＴ－ＰＣＲ方法人人外周血单个核细胞中扩增出人白细胞介素的ｃＤＮＡ，以Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法测序。     

采用T7启动子系统在大肠杆菌中高效表达人白细胞介素2

将人白细胞介素２ｃＤＮＡ重组于含Ｔ７启动子的表达质粒，转化专胜受体菌后得到工程菌，使ＩＬ－２在大肠杆菌中的表达效率（表达产物在菌体总蛋白中所占比例）提高到３２．０％，包涵体的纯度提高到８２．０％，便于ＩＬ－２变性溶解与重新折叠以恢复活性。以乳糖替代异丙基硫代－β－半乳糖苷作诱导剂可获得同样的结果，使诱导剂成本降低数百倍。新的工程菌更适合用于制备基因工程人ＩＬ－２。     

人白细胞介素-18在大肠杆菌中的高效表达

目的 在大肠杆菌中实现人IL－18成熟蛋白（mhIL-18）的高效表达。方法 采用RT－PCR由人肝脏Kupffer细胞中扩增mhIL-18基因，构建非融合型原核表达质粒petTT/mhIL-18，转化至大肠杆菌DH5α，用IPTG诱导热处理重组蛋白表达，超声裂解细胞提取包涵体，采用SDS－PAGE及Western blot分析重组蛋白的表达，包涵体蛋白经8mol/L尿素溶解，透析复性，ELISA检测重组蛋白诱导人外周血单个核细胞（PBMC）产生IFN－γ的能力。结果 所扩增的mhIL-18基因与GenBank公布的序列一到，经IPTG诱导，mhIL-18在大肠杆菌中的表达量占菌体蛋白的40％以上，，在细胞中以包涵体形式存在，复性的重组蛋白具有诱生IFN-γ的能力。结论 mhIL-18可在大肠杆菌中高效表达。     

在大肠杆菌高效表达人白细胞介素4融合蛋白

将在真核细胞表达的pCD-huIL-4质粒,经EcoRV及Bam H1酶切,获人IL-4 cDNA的 EcoRV—Bam H1片段,插入经相应 EcoRV及Bam H1酶切处理的pEX-2ΔH质粒,构成pR-hlL-4质粒。此质粒包含除5’-端9个bp缺失外的编码人成熟1L-4分子的全部bp序列。pR-hlL-4质粒酶切图谱鉴定正确,转化E.colipop 2136菌,表达分子量为60 kd的融合蛋白,它占全部菌体蛋白的30％。表达的融合蛋白无可测出的人IL-4的BCGF或TCGF活性。以融合蛋白免疫小鼠及家兔制成的抗血清,在免疫斑点试验中,与人rIL-4及融合蛋白呈特异反应,表明融合蛋白中具有人IL-4抗原分子。     

人白细胞介素10的克隆及分泌表达

目的：研究人白细胞介素10（hIL-10)的高效分泌表达。方法：根据Genbank报道的hIL-10基因序列，人工合成hIL-10基因，并将某些稀有密码子替换成E.Coli偏爱密码子，克隆至pUC18质粒中，测序结果与预期一致，将hIL-10基因克隆至PET22b，构建分泌表达克隆PET22b-hIL-10，经IPTG诱导在大肠杆菌BL21（DE3）中表达hIL-10天然蛋白。结果：SDS－PGAE电泳及凝胶密度扫描分析显示，重组蛋白分子量约为18KD和21KD(含信号肽），不同温度条件下重组蛋白的表达状态和表达量不同，结论：18摄氏度重组蛋白hIL-10的表达量为7．6％。     

人内皮细胞衍生的重组白细胞介素8在大肠杆菌中表达成功

将质粒ｐＭＳ－ｈＩＬ－８中的内皮细胞衍生ＩＬ－８（ＥＤｈＩＬ－８）ｃＮＤＡ片段连入本室构建的天然蛋白高效表达载体ｐＫＰＬ－３ａ中，在大肠杆菌中表达的ＥＤＩＬ－８占菌体总蛋白的５％～１０％。体外试验表明，表达的ＥＤｈＩＬ－８非融合蛋白对小鼠外周血多形核细胞具有明显的趋化活性。     

人白细胞介素7基因克隆及其真核表达载体的构建

目的：构建人白细胞介素7（hIL-7）的真核表达载体。方法：从人脾脏组织的总RNA中，用RT－PCR方法扩增出编码成熟hIL-7的cDNA，将其克隆于pMD18-T质粒中，并进行序列测定。再将hIL-7cDNA以正义及反义插入真核、原核双重表达载体pBK-CMV质粒，转化至大肠杆菌DH5α。最后将表达的lacz-hIL-7重组蛋白行SDS－PAGE电泳，并作考马斯亮蓝染色分析，western blot鉴定。结果：hIL-7序列测定结果与预期一致。pBK-CMV-hIL-7（正义插入）的无隆表达重组蛋白，western blot证实此蛋白为IL－7。结论：成功构建了hIL-7的真核表达载体，为进一步研究hIL-7的抗肿瘤作用创造了条件。