富血小板血浆复合物促进兔前交叉韧带重建后腱骨愈合的组织学研究

目的探讨富血小板血浆(PRP)复合小牛脱蛋白松质骨(DPB)对兔前交叉韧带(ACL)重建术后腱骨愈合的影响。 方法取36只成年新西兰大白兔,随机分为3组：PRP+ DPB组,PRP组,空白对照组,每组12只。建立右侧膝关节ACL完全断裂模型,行白体半腱肌重建ACL。于PRP+ DPB组和PRP组骨隧道内分别植入PRP凝胶结合DPB和PRP凝胶,空白对照组骨隧道内单纯植入肌腱。术后6、12、18周行大体观察、组织学、免疫组化评价腱骨愈合情况。 结果大体观察术后各个时间点,与其他2组比较,PRP+ DPB组移植肌腱与骨隧道壁纤维组织连接更为致密。HE染色显示PRP+DPB组在各时间点腱骨界面的胶原纤维连接及纤维组织分级结果均优于其他2组。PRP+ DPB组、PRP组及空白对照组标本术后6周时TGF-β1表达量平均分别为119.5±9.3、93.0±7.3、73.3±5.4,12周时平均分别为76.8±5.7、48.0±6.7、26.8±4.7;术后6周时VEGF的表达量平均分别为117.5±8.4、90.5±8.2、69.8±5.8,12周时平均分别为76.6±5.7、48.0±6.7、26.8±4.7,以上指标3组之间两两比较差异均有统计学意义(P＜0.05),PRP+DPB组优于其他2组。术后18周时3组标本TGF-β1及VEGF的表达量差异均无统计学意义(P＞0.05)。 结论在兔膝关节ACL重建模型中,PRP复合DPB能促进术后的腱骨愈合。     

脱蛋白骨复合骨形态发生蛋白对前交叉韧带重建术后腱-骨愈合的影响

目的 探讨兔异体脱蛋白松质骨(DPB)复合骨形态发生蛋白(BMP)对前交叉韧带(ACL)重建术后腱-骨愈合的影响. 方法取96只成年新西兰大白兔,分为四组,每组24只:DPB+BMP组、DPB组、BMP组及空白对照组,分别用自体半腱肌腱进行膝关节ACL重建,DPB+BMP组在股骨隧道内植入DPB-BMP复合体,DPB组和BMP组分别在股骨隧道内植入DPB、BMP,空白对照组的骨隧道内不植入其他材料.于术后2、4、6、8周时分别处死各组中的6只动物,切取骨隧道内标本,通过大体观察及组织学观察分析腱-骨愈合进程. 结果术后2周时BMP+DBP组的骨隧道内新骨生成活跃,肌腱周围出现较多纤维软骨组织;4周时骨隧道内出现钙化的纤维软骨,肌腱末端与钙化软骨融合为一体,并见Sharpey's纤维形成;6周时隧道内出现了更多的钙化软骨,肌腱与骨的结合区出现潮线,具有正常ACL止点的结构特点;8周时肌腱与骨的连接更加成熟,钙化软骨增多.其他三组的腱-骨愈合过程均迟于DPB+BMP组.结论 DPB复合BMP能促进ACL重建术后的腱-骨愈合.     

兔自体半腱肌重建前交叉韧带拉伸断裂后组织学研究

目的观察骨形态发生蛋白(BMP)复合异体脱蛋白松质骨(DPB)行自体双股半腱肌肌腱重建前交叉韧带(ACL)术后移植物断裂部位及组织学形态。方法将64只骨骼成熟新西兰大白兔分成四组,其中一组为空白对照组,其他三组选取每只兔的左侧膝关节进行手术,术中于骨隧道内植入BMP结合DPB、BMP、DPB。分别于术后第3、6、12、24周取材,保留股骨下段及胫腓骨上段,包埋后行移植物抗拉测试,观察移植物完全断裂部位及断面组织学结构,采用苏木精-伊红染色观察其变化过程。结果术后第3周,移植物断裂部位DPB组及空白对照组位于股骨隧道内,断端仅为纤维组织,BMP组及BMP结合DPB组均位于隧道内口,断端可见少量软骨样组织。术后12周各组移植物断裂部位均位于关节腔内,断端均可见大量胶原纤维,空白对照组及DPB组胶原纤维排列不规则,BMP组及BMP结合DPB组胶原纤维较规则,纤维软骨细胞增多。术后第24周各组断裂部位位于关节腔内移植物中段或近止点处,BMP结合DPB组及BMP组断端胶原纤维排列整齐、规则,可见短杆状及椭圆形细胞,空白对照组及DPB组仅见胶原纤维排列较前规则,未见软骨细胞。结论术后第24周BMP结合DPB组较其他各组更早发生爬行替代,在组织学形态上与正常前交叉韧带更相似。     

富血小板血浆复合小牛脱蛋白骨重建前交叉韧带腱-骨愈合的组织学观察

目的前交叉韧带(anterior cruciate ligament,ACL)重建术腱-骨愈合情况是手术成败的关键因素。将不同浓度富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)/异种小牛脱蛋白骨(deproteinized bone,DPB)凝胶复合物作为骨隧道填充物,观察ACL重建后腱-骨愈合的组织学变化,探讨该复合物对腱-骨愈合的促进作用,并确定PRP的最佳浓度。方法取新西兰大白兔耳中央动脉血8mL,采用Landesberg方法制备PRP,并将上清液作为稀释剂,制备浓度分别为30%、60%、100%的PRP。取新鲜新生小牛股骨骺端松质骨,经30%H2O2、乙醚交替浸泡24h,连续6次,制备DPB。将DPB浸泡于不同浓度PRP中并加入激活剂制备PRP/DPB凝胶复合物。取54只8～12月龄新西兰大白兔,体重(2.5±0.4)kg,随机分成3组(n=18),分别为30%PRP/DPB凝胶复合物组(A组)、60%PRP/DPB凝胶复合物组(B组)、100%PRP/DPB凝胶复合物组(C组)。实验动物制备双侧ACL缺损模型。随机取一侧下肢以对应浓度的PRP/DPB凝胶复合物作为骨隧道填充物,以自体半腱肌肌腱重建ACL,作为实验侧;另一侧行自体半腱肌肌腱重建ACL,作为对照侧。术后观察各组动物一般情况,于术后3、6、12周取材行大体观察及HE染色,光镜下观察腱-骨愈合情况,并参照Demirag等标准对腱-骨界面愈合情况进行Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级半定量评价。结果大体观察:术后3周各组关节滑液稍增多,股骨隧道内未见骨样组织;6周时各组无关节积液,隧道内口见瘢痕组织增生;12周时各组移植肌腱与骨隧道壁纤维组织连接致密。组织学观察:A组实验侧术后3周,腱-骨界面间形成新生肉芽组织界面;6周时腱-骨界面间出现宽度不一的Sharpey样纤维;12周时腱-骨界面Sharpey样纤维排列有序,形成不规则、模糊的"潮线"。B组实验侧在各时间点腱-骨界面胶原纤维连接均优于其他各组;术后3周腱-骨界面发现排列较规整的类软骨细胞;6周时腱-骨界面骨隧道类软骨细胞单位面积数量明显多于其他组;12周时腱-骨界面可见移植物类软骨细胞增生,分化成熟,Sharpey样纤维连接致密有序。C组实验侧3周时腱-骨界面胶原纤维连接与A组实验侧及对照侧相似,6、12周相对成熟的致密结缔组织分化较差。参照Demirag等标准对腱-骨界面愈合进行分级,术后3、6周B组实验侧和对照侧、术后12周B组实验侧与C组实验侧,比较差异均有统计学意义(P0.05);其余各组实验侧之间以及同组实验侧与对照侧比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论 PRP浓度为60%时,其与DPB的复合物形成凝胶后具有良好的生物相容性和骨诱导作用,可提高兔ACL重建术后腱-骨愈合。     

自体半腱肌复合骨形态发生蛋白和同种异体骨重建前交叉韧带后腱-骨愈合的生物力学研究

目的研究骨形态发生蛋白(BMP)复合同种异体骨(DPB)对自体半腱肌肌腱重建前交叉韧带后腱-骨愈合的影响。方法取64只成年新西兰大白兔,分成4组,建立左侧膝前交叉韧带(ACL)完全断裂模型。重建ACL时,于股骨隧道内分别植入BMP结合DPB、BMP、DPB。结果术后3、6、12及24周BMP结合DPB腱-骨愈合及移植物抗拉强度大于其他各治疗组,P<0.05。结论缓释载体DPB能延长BMP作用时间,提高移植物生物力学特性,拮抗骨吸收因子的负面效应,促进腱-骨愈合。     

富血小板血浆复合物对前交叉韧带重建术后影响的影像学观察

目的前交叉韧带（anterior cruciate ligament,ACL）重建成功的关键是移植肌腱与骨隧道之间的牢固愈合,从而恢复韧带的功能。本实验通过影像学观察评价富血小板血浆（platelet rich plasma,PRP）复合小牛脱蛋白松质骨（deproteined bone,DPB）对ACL重建术后腱-骨愈合的影响,为临床应用提供实验依据。方法将36只新西兰大白兔随机分为四组,即PRP＋DPB组（实验组）9只、PRP组（对照组1）9只、DPB组（对照组2）9只、单纯重建组（空白组）9只,每只兔均取自体单股半腱肌移植重建双膝ACL。实验组在骨隧道中填塞PRP＋DPB复合物,对照组1在骨隧道中填塞PRP,对照组2在骨隧道中填塞DPB,空白组不填塞任何材料,分别于术后4、8、12周取材行大体观察及Micro-CT扫描,测量腱-骨结合部新生骨组织的骨密度值（mg/cm3）及骨隧道关节侧入口处的直径大小,观察对比腱-骨愈合情况以及骨隧道扩大情况。结果在ACL重建后的各个时间点上,实验组腱-骨结合部新生骨组织的骨密度值均高于对照组1、2和空白组,其差异具有统计学意义;对照组1腱-骨结合部新生骨组织的骨密度值高于对照组2及空白组,但其差异无统计学意义;对照组2腱-骨结合部新生骨组织的骨密度值与空白组相比无显著性差异。实验组的骨隧道扩大程度小于对照组1、2和空白组,其差异具有统计学意义;对照组1的骨隧道扩大程度小于对照组2及空白组,但其差异无统计学意义;对照组2的骨隧道扩大程度与空白组相比无显著性差异。结论富血小板血浆复合物可显著提高兔ACL重建术后腱-骨界面的骨密度,预防骨隧道的扩大。     

富血小板血浆与异体脱蛋白骨复合物颗粒促进前交叉韧带重建术后腱骨愈合的临床研究

目的观察富血小板血浆(PRP)与异体脱蛋白骨(DPB)复合物颗粒促进前交叉韧带(ACL)重建术后腱骨愈合的临床效果。方法将42例接受ACL重建术的患者随机分为实验组及对照组,对照组按常规方法行ACL重建术,实验组在两端骨隧道中填充入PRP+DPB复合物颗粒,术后6个月行CT检查,通过计算机图像分析软件测量出骨隧道扩大数值,并行Lysholm评分及IKDC评分。结果随访时间6～21个月,平均11.8个月。末次随访时,两组Lysholm评分及IKDC评分与术前比较,差异均有统计学意义(P<0.05);但两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组间术后CT测量的骨隧道直径扩大的数值差异具有统计学意义(P<0.05)。结论与对照组相比,PRP+DPB复合物颗粒可促进ACL重建术后骨腱愈合,减少骨隧道扩大,临床效果满意。     

酸性成纤维细胞生长因子复合胶原蛋白对兔前交叉韧带重建后腱-骨愈合的影响

目的观察酸性成纤维细胞生长因子(a FGF)复合胶原蛋白对兔前交叉韧带(ACL)重建后腱-骨界面愈合的影响。方法将30只新西兰白兔随机分为实验组与对照组,每组15只,均取趾长伸肌腱作为移植物。实验组将a FGF/胶原蛋白复合物植入到重建的ACL腱-骨界面,对照组单纯行ACL重建。于术后第4、8、12周分别处死动物取材,将股骨与胫骨端分别固定于生物力学试验机上,测试移植肌腱的腱-骨界面抗拉伸强度,取其绝对值作比较;同时,将股骨隧道和胫骨隧道纵向剖开,取下标本组织学观察移植物界面愈合情况。结果术后第4、8、12周抗拉力强度实验组强于对照组,差异有统计学意义(P0.001)。两组动物均在第4周时移植物与骨隧道之间均形成了纤维结缔组织。术后第12周,实验组肌腱移植物在骨隧道内形成了纤维软骨移行带,类似于正常的纤维软骨连接,而对照组则形成了走向与骨隧道轴向垂直的Sharpey样纤维。结论a FGF复合胶原蛋白能促进兔ACL重建腱-骨界面的早期直接愈合。     

金葡素促进兔前交叉韧带重建后腱骨愈合的实验研究

目的 :探讨兔膝关节前交叉韧带(ACL)重建后,金黄色葡萄球菌滤液制剂(金葡素)对移植肌腱与骨隧道愈合的作用。方法:将3月龄新西兰大白兔24只(体重平均2.56 kg,雌雄不限)随机分为实验组和空白对照组,每组12只。采用兔自体趾长伸肌腱建立膝前交叉韧带重建后的腱骨愈合模型。实验组分别于术中及术后第2天向胫骨端腱骨界面处缓慢均匀注射金葡素0.1 ml,对照组以相同时间和方法注射等量0.9%Na Cl注射液。术后双膝不予制动,以青霉素注射液80万U/d连续肌肉注射3 d。分别于术后4、8和12周各处死动物8只,完整获取腱骨愈合标本并分别进行组织学分析,肉眼观察判断ACL重建大体情况,苏木精-伊红染色进行Yamakado腱骨界面组织形态分型评价,苦味酸-天狼猩红染色观察腱骨界面胶原纤维情况,血管内皮生长因子免疫组化染色定量评价腱骨界面再血管化情况,甲苯胺蓝染色定量评价腱骨界面新骨生成情况。结果:大体观察显示全部动物术后伤口Ⅰ期愈合,关节功能恢复良好,未见感染、死亡及金葡素注射不良反应。腱骨界面形态学分型结果显示术后各时间点实验组腱骨界面愈合质量均优于对照组(P0.05))。苦味酸-天狼猩红染色显示实验组胶原纤维术后4周生成少,8周大量生成,12周Sharpey纤维有序排列,集结成束,各时间点胶原纤维生成情况均优于对照组。基于血管内皮生长因子免疫组化染色和甲苯胺蓝染色的定量分析显示实验组术后4、8和12周腱骨界面新生血管面积和新骨生成面积均高于对照组(P0.05)。结论:金葡素能够在葡萄球菌肠毒素C等多种明确成分的协同作用下,通过局部启动无菌性炎症反应,加快腱骨界面血管生成和血液供应,激活骨细胞和纤维细胞大量增殖,有效促进兔ACL重建后腱骨愈合,有望成为促进ACL重建后腱骨愈合的新的临床方法。     

PRP明胶海绵复合物在前交叉韧带重建术后腱骨愈合的作用

[目的]观察复合有富血小板血浆(platlet rich plasma,PRP)明胶海绵复合物的自体肌腱移植物对前交叉韧带重建术后骨隧道与肌腱间愈合过程的影响,探讨其在腱与骨愈合中发挥的效果。[方法]新西兰大白兔36只,无菌条件下获取自体PRP,制备PRP明胶海绵复合物,左下肢行自体跟腱移植前交叉韧带重建术。A组(实验组)使用PRP明胶海绵复合物;B组(对照组1)使用PRP;C组(对照组2)仅为肌腱。植入2、4、8、12周后,制作标本,进行大体及HE、Masson染色和TGF-β1免疫组化观察。[结果]A组标本大体观察:前交叉韧带连续性及张力良好,术后2周骨隧道口见少量瘢痕组织;4周骨道口见小部分骨样组织,8周骨道口较多瘢痕呈现,12周骨道口现较多骨样成分。组织学观察:HE染色显示,A组出现Sharpey样纤维和软骨细胞明显早于B组和C组;同样在Masson结果中,A组出现有规则的胶原纤维也明显多于B组和C组。TGF-β1免疫组织化学观察:2、4、8周,A组阳性率明显高于B、C组,差异具有统计学意义(P<0.05)。而在术后12周时,各组之间的表达无明显差异(P>0.05)。[结论]PRP明胶海绵复合物可促进前交叉韧带重建后腱骨的早期愈合。     

骨形态发生蛋白诱导移植物成骨化促进腱－骨愈合

目的探讨骨形态发生蛋白(BMP)诱导肌腱移植物成骨化对肌腱－骨隧道愈合(简称腱－骨)的影响。 方法取健康成年新西兰兔26只建立腱－骨愈合模型,实验组采用BMP处理移植物及腱－骨界面,对照组仅采用生理盐水处理。术后12周时研究对象进行大体解剖观察、组织形态学检测及CT扫描,采用t检验比较各组之间腱－骨愈合情况。 结果12周时,实验组移植肌腱质地变硬,与宿主骨组织紧密连接、局部相互融合。苏木精－伊红染色(HE)和Masson染色显示实验组腱－骨界面以纤维软骨及Sharpey’s纤维连接为主。肌腱内部及界面之间均可见新生骨组织形成,部分区域新生骨与宿主骨组织形成骨性连接。而对照组移植物肌腱形态结构无变化,腱－骨界面间隙明显,以纤维结缔组织连接为主、未见新生骨形成。组织学评分结果显示BMP处理组腱－骨愈合更加成熟(6.6±0.8) vs( 2.7±0.7),(t＝13.361,P <0.01)。CT扫描检测结果显示实验组肌腱移植区域骨密度(191±17),明显高于对照组(11±4)(t＝31.591,P <0.01),提示肌腱移植区域发生成骨化。 结论BMP能够诱导肌腱移植物成骨化并促进腱－骨愈合。     

保留残迹对前交叉韧带移植物腱骨愈合影响的实验研究

目的探讨保留残迹重建前交叉韧带对移植物腱骨愈合的影响。方法 32只新西兰兔一期行双侧前交叉韧带重建术,一侧保留残端纤维,对侧切除残端纤维。重建术后6、12、18及24周时,采用HE染色、甲苯胺蓝染色观测,分析移植物腱骨愈合变化情况。结果重建术后各观察时间点上,保留残迹组移植物腱骨界面组织构建更接近正常,术后24周时保留残迹组腱骨界面软骨细胞含量明显高于切除残迹组[（56.5±2.4）vs（45.7±2.7）,P〈0.05]。结论保留残迹重建前交叉韧带有助于移植物腱骨愈合。     

富血小板血浆对大鼠跟腱断裂早期愈合的影响

目的富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)具有促进损伤组织修复作用。通过观察PRP局部注射对大鼠跟腱断裂早期愈合的影响,为临床应用提供实验依据。方法 SPF级SD大鼠46只,雌雄不限,体重190～240 g。取10只大鼠心脏动脉血制备PRP及贫血小板血浆(platelet-poor plasma,PPP);其余36只随机分为3组(n=12),分别为空白对照组、PPP组及PRP组。大鼠制备双侧跟腱断裂模型后,PPP组和PRP组跟腱周围局部对应注射PPP及PRP,每侧100μL,每周1次至处死;空白对照组不作处理。术后观察大鼠一般情况,于1、2、3、4周取双侧跟腱,行大体、组织学及免疫组织化学染色观察,测量新生跟腱Ⅰ型胶原纤维含量;并于4周行生物力学测试。结果大鼠均存活至实验完成。随着时间延长,各组大鼠跟腱水肿逐渐减退,滑动性逐渐改善;术后3周内各组跟腱粘连逐渐加重,4周时减轻,1、4周时各组跟腱粘连程度分级差异均无统计学意义(P>0.05)。术后1周PRP组炎性细胞浸润、毛细血管及胶原纤维增殖较空白对照组、PPP组明显,之后炎性反应及毛细血管生成逐渐减少。各时间点各组均可见Ⅰ型胶原纤维阳性表达,术后1、2、3周PRP组Ⅰ型胶原纤维阳性密度值多于空白对照组和PPP组(P<0.05),4周时3组差异无统计学意义(P>0.05)。生物力学测试:术后4周3组跟腱最大滑动距离比较,差异均无统计学意义(P>0.05);PRP组跟腱弹性模量及最大抗拉力明显高于空白对照组及PPP组(P<0.05)。结论大鼠跟腱断裂早期于断端周围注射PRP能促进跟腱愈合。     

Enveloping the tendon graft with periosteum to enhance tendon-bone healing in a bone tunnel: A biomechanical and histologic study in rabbits

Purpose: Fixing and incorporating the tendon graft within the bone tunnel is a major concern when using grafts for ligament reconstruction. The periosteum contains multipotent stem cells and has the potential to form osteogenic and chondrogenic tissues. This study uses histologic and biomechanical analyses to examine the effect of periosteum on tendon-bone healing within a bone tunnel. Type of Study: Experimental study in an animal model. Methods: In this study, 36 adult New Zealand White rabbits were used. The long digitorum extensor tendon was transplanted into a bone tunnel of the proximal tibia. The periosteum from the proximal tibia was sutured on the surface of the tendon portion. The tendon was pulled through a drill-hole in the proximal tibia and attached to the medial aspect of the tibia. Histologic examination of the tendon-bone interface and biomechanical test for maximal pullout load were evaluated at 4, 8, and 12 weeks after operation. Results: Histologic analysis of the tendon-bone interface showed a fibrous layer formed between the tendon and the bone by the periosteum. This layer became progressively integrated with the tendon and bone surface during the healing process. At 4 weeks, the cancellous bone lining in the bone tunnel was interdigitated with the fibrous interface tissue. At 8 weeks, progressive new bone grew into the interface fibrous layer. At 12 weeks, collagen fibers anchored to the bone and organization with fibrocartilage formation developed between the tendon and bone. Biomechanical testing revealed higher maximal pullout strength in the periosteum-enveloped group at all time points, with a statistically significant difference at 8 and 12 weeks. The periosteum-treated group had a higher interface strength-to-length ratio and significant increase at 8 weeks and 12 weeks. Conclusions: The histologic and biomechanical studies demonstrated that, if periosteum was sutured on the tendon that was transplanted within a bone tunnel, it resulted in a superior healing process and better healed strength. When doing ligament reconstruction with a tendon graft, the periosteum can be sutured to the graft to enhance tendon-bone healing.Arthroscopy: The Journal of Arthroscopic and Related Surgery, Vol 19, No 3 (March), 2003: pp 290–296     

骨-髌腱-骨自体移植重建前十字韧带的研究

目的探讨使用骨-髌腱-骨自体移植重建前十字韧带(ACL)术后1年内重建物生物力学性能和组织学变化。方法在39只成年犬单侧后肢行骨-髌腱-骨自体移植重建ACL手术。术后分别在4、8、12、26和52周时处死动物,对正常对照侧ACL和手术侧重建物在屈膝90°行拉力试验直到完全断裂,记录断裂位置,计算横断面积、强度、刚度和应力,观察关节内和隧道内韧带转化过程及隧道内骨块-隧道壁、髌腱-隧道壁和骨块-髌腱三个界面的组织学愈合过程。结果术后隧道内骨块-隧道壁界面4周时愈合;髌腱-隧道壁界面52周时有Sharpey样纤维跨过,出现潮线,软骨细胞有成行排列的趋势;术后骨块-髌腱界面未钙化的纤维软骨层消失,52周时仍未重现;韧带在关节内和隧道内部分的转化过程相似,其结构均于26周时与正常ACL相似。生物力学试验显示所有重建物均在韧带部断裂。52周时,移植髌腱的强度、刚度和应力分别为对照侧的38%、58%和50%,差异有统计学意义。骨隧道内的骨-骨界面术后4周时愈合,早于骨-腱界面;骨-腱界面52周时表现为间接止点,界面出现成行排列趋势的软骨细胞,界面的愈合过程仍在继续。结论用挤压螺钉固定的重建物在手术4周以后,力学薄弱处始终位于韧带本身,在指导患者进行康复锻炼时不必担心固定止点的力学性能。挤压螺钉固定的止点不仅在术后即刻稳定,而且在止点愈合、韧带化过程中仍然保持力学性能可靠。术后1年时虽然韧带在组织学上与正常ACL相似,但力学性能显著低于正常,在剧烈活动时患者需配带支具等进行保护。