FHIT基因转染对人结肠癌细胞系SW480增殖和侵袭力的影响

目的 探讨真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT对结肠癌细胞株SW480增殖和侵袭活性的影响。方法 将携有FHIT基因的重组真核表达质粒pRc/CMV2-FHIT转化大肠杆菌DH5α并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pRc/CMV2-FHIT体外转染SW480细胞（SW480-FHIT）,筛选稳定转染的细胞并扩增培养,以转染了空质粒pRc/CMV2的SW480细胞（SW480-pRc/CMV2）和正常SW480细胞为对照,用RT-PCR检测FHIT的表达情况,并用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）和细胞侵袭实验分别检测FHIT基因转染前、后SW480细胞增殖和侵袭活性的变化。结果 pRc/CMV2-FHIT的酶切鉴定证实含有目的基因FHIT;SW480-FHIT细胞的RT-PCR产物经凝胶电泳有明显的阳性条带,而对照组则无;MTT实验结果显示重组质粒转染组SW480细胞的增殖明显受到抑制;Transwell体外侵袭实验显示转染pRc/CMV2-FHIT能明显抑制SW480细胞的体外侵袭力(P<0.01)。结论 应用基因转染技术重表达FHIT基因能有效抑制细胞的生长、增殖及侵袭活性,为以FHIT为靶向的结肠癌基因治疗提供了新的思路和手段。     

抑癌基因FHIT在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的检测脆性组氨酸三联体基因（FHIT）在乳腺癌组织中的表达情况，分析FHIT与乳腺癌生物学特性的关系。方法应用免疫组织化学技术Envision二步法，检测FHIT在75例乳腺癌患者、38例非乳腺癌患者中的表达，分析其与乳腺癌临床病理参数及患者生存期的关系。结果FHIT在非肿瘤性乳腺组织、乳腺癌中的阳性表达率分别为92．1％和52．0％，差异有统计学意义（P〈0．05）。FHIT的表达强度与淋巴结转移成负相关（P〈0．05），与患者的月经状况、激素受体（ER、PR）及C—erbB-2的表达状态、肿瘤大小、临床分期及组织学分级均无关。结论（1）FHIT与乳腺癌的淋巴结转移密切相关。（2）FHIT在乳腺癌的发生、发展、浸润、转移中起重要作用。     

FHIT基因与头颈部肿瘤

脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad，FHIT)是Ohta等于1996年克隆并确定的一个人类候选抑癌基因，此基因位于3p14．2，包括FRA3B脆性位点、家族性肾癌相关染色体异位断裂点t(3；8)以及HPVl6整合位点，根据其cDNA推测的蛋白质一脆性组胺酸三联体蛋白(pFHIT)和有三价组胺酸结构域的HIT蛋白具有高度的同源性，故命名为FHIT。作为抑癌基因，FHIT与多种恶性肿瘤，包括头颈部肿瘤的发生有关，现就FHIT基因的结构功能及其与头颈部肿瘤的关系作一综述。     

非小细胞肺癌与淋巴结转移癌组织中FHIT基因异常表达的相关性

目的 :检测脆性组氨酸三联体 (FHIT)基因在正常肺组织、非小细胞肺癌 (non smallcelllungcancer)与淋巴结转移癌组织中表达 ,探讨FHIT基因与肺癌发生及转移的关系。方法 :用免疫组化SP(streptavidinperoxidaseconju gatedmethod ,SP)法检测 2 0例无淋巴结转移的肺癌组织 ,2 0例肺癌及其相应的淋巴结转移癌组织和 15例正常肺组织中FHIT基因的表达水平 ,用图像分析系统测量FHIT蛋白表达的阳性率和平均光密度。结果 :FHIT蛋白在正常肺组织、无淋巴结转移的肺癌、肺癌及其相应的淋巴结转移癌组织中的阳性率分别为 89.1%、6 0 .5 %、5 4 .1%、30 .4 % ,平均光密度分别为 (0 .2 74± 0 .0 2 3)、(0 .16 5± 0 .0 16 )、(0 .0 87± 0 .0 0 4 )、(0 .0 4 9± 0 .0 0 7)。肺癌组织FHIT蛋白表达阳性率和强度明显低于正常肺组织 (P <0 .0 1) ,淋巴结转移癌组织FHIT蛋白表达明显低于其它 3组 (P <0 .0 1)。结论 :在肺癌发生、浸润、转移病变阶段中 ,FHIT基因表达下调 ,这揭示肺癌的演进过程与FHIT有密切关系。     

膀胱移行细胞癌中FHIT蛋白表达丢失研究

目的探讨膀胱癌组织中FHIT蛋白表达缺失与膀胱癌临床病理指标的关系。方法采用免疫组化EnVision二步法检测膀胱癌组织中FHIT蛋白的表达情况。结果正常膀胱黏膜中FHIT蛋白表达均为阳性（100％）,在膀胱癌组织中FHIT蛋白表达缺失率为56．25％（27／48）,I级与Ⅲ级相比差异有显著性（P〈0．05）;在临床分期中表达缺失率Tis～T1期50％（18／36）,T2-T4期75％（9/12）,两者比较差异无统计学意义。结论FHIT蛋白是一种重要的抑癌基因,其异常表达可作为膀胱移行细胞癌的肿瘤标志物和监测预后的指标。     

下咽癌组织中FHIT基因表达的研究

脆性组氨酸三联体(FHIT)基因是1996年由Ohta等[1]克隆的一个位于3p14.2区域的候选抑癌基因.研究表明,FHIT在人类许多肿瘤组织或细胞系中呈现高频率的异常,与肿瘤的发生发展有关[2].本研究采用免疫组化法,检测 FHIT在下咽癌组织中蛋白的表达,并就其与临床病理指标的可能关系进行了研究.     

胃癌组织FHIT蛋白表达及其与幽门螺杆菌感染关系

目的 探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白在胃癌组织表达及其与幽门螺杆菌(HP)感染的关系.方法 应用免疫组化PV法检测52例胃癌、30例癌旁组织和48例远癌组织中FHIT蛋白的表达情况,硼酸亚甲蓝染色法检测HP.结果 FHIT蛋白在胃癌组织中的表达明显弱于癌旁及远癌组织(χ2=17.49、36.15,P<0.01);后两者比较差异亦有显著性(χ2=102.67,P<0.01).胃癌及癌旁组织中,HP阳性组的FHIT蛋白表达弱于HP阴性组(Z=-2.881、-2.550,P<0.05).FHIT蛋白表达与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移有关(Z=-2.124、-2.552,P<0.05).结论 FHIT蛋白的表达缺失或下降在胃癌发生发展中起着重要作用,HP感染可能通过影响FHIT蛋白表达促使胃癌发生.     

FHIT基因与肿瘤的关系研究进展

目的探讨脆性组氨酸三联体(FHIT)基因与人类肿瘤的发生和发展的关系,揭示癌基因和抑癌基因的激活或失活在肿瘤发生中的作用。方法检索并分析近几年国内外有关FHIT基因在人类多种肿瘤发病机制中的基础与临床研究状况。结果抑癌基因FHIT在人类多种肿瘤的发生、发展及侵袭和转移中也起着相当重要的作用。结论对FHIT基因的结构和功能进行深入细致的研究,有助于了解人类多种肿瘤发生的基本机制,为临床治疗提供重要的理论依据和指导。     

膀胱尿路上皮癌中FHIT的表达及其与预后的关系

目的 探讨膀胱尿路上皮癌中脆性组氨酸三联体(FHIT)蛋白的表达状况与临床预后的关系.方法 利用免疫组织化学SP法检测62例膀胱尿路上皮癌和35例正常膀胱组织中FHIT蛋白的表达,并对62例膀胱癌进行随访,对其随访资料进行Kaplan-Meier生存分析.结果 膀胱尿路上皮癌FHIT蛋白表达的阳性率为41.94%(26/62);正常膀胱组织为97.14%(34/35);FHIT蛋白表达的阳性率在癌组织分级中Ⅰ级癌中为54.05%(20/37),Ⅱ-Ⅲ级癌24.00%(6/25);FHIT蛋白表达的阳性率在病理分期Tis-T1和T2-T4分别是46.15%(18/39)和34.78%(8/23);各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).在膀胱尿路上皮癌的5年随访中,FHIT蛋白表达阳性与阴性的存活率分别为47.16%和52.83%,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 FHIT蛋白表达与膀胱尿路上皮癌组织学分级、病理分期及5年存活率密切相关,提示FHIT在膀胱尿路上皮癌的演化和进展过程中起着重要作用.     

抑癌基因FHIT的研究

脆性组氨酸三联体(FHIT)基因是一个位于染色体3p14.2 区域的抑癌基因,通过激活半胱天冬酶、抑制PI3K-Akt-survivin信号通路和IκB-α磷酸化以及与微管结合等途径发挥诱导细胞凋亡和抑制细胞生长的作用.FHIT的失活与肿瘤的发生密切相关.文章就FHIT基因的结构、生物学功能、失活与肿瘤发生的关系及基因治疗应用等方面的研究进行综述.     

纤维粘连蛋白EDA片段调控结肠癌SW480细胞的增殖、凋亡

目的研究纤维粘连蛋白EDA片段对结肠癌SW480细胞增殖、凋亡的影响。方法慢病毒感染结肠癌SW480细胞干扰纤维粘连蛋白EDA片段表达,建立纤维粘连蛋白EDA片段低表达的SW480细胞。利用MTT检测干扰前后细胞增殖的变化,并采用流式细胞术检测干扰前后细胞凋亡的变化。同时使用Western blot分别检测干扰前后凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达变化。结果慢病毒感染结肠癌SW480细胞后,纤维粘连蛋白EDA片段持续低表达。MTT法结果显示,干扰纤维粘连蛋白EDA片段24、48、72、96 h后细胞生长速度明显降低。转染组与未转染组及空载体组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术显示未转染组、空载体组及转染组的细胞凋亡率分别为(3.09±1.13)%、(3.71±0.42)%、(47.76±1.51)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot的结果显示干扰纤维粘连蛋白EDA片段后促凋亡因子Bax表达上调,同时,凋亡抑制因子Bcl-2表达降低。结论纤维粘连蛋白EDA片段对结肠癌SW480细胞具有促增殖、抗凋亡作用。     

miR-34a靶向调控NOTCH1基因对SW480细胞增殖的影响

目的 探讨miR-34a靶向调控NOTCH1基因表达而对结肠癌SW480细胞增殖的影响.方法 通过生物信息学预测,NOTCH1为miR-34a特异性靶基因.构建含miR-34a结合位点的NOTCH1基因3 '-UTR域荧光素酶报告载体.通过荧光素酶报告载体系统检测miR-34a与NOTCH1的3’-UTR相互作用对荧光素酶活性的影响;免疫印迹技术检测miR-34a对NOTCH1蛋白表达的影响.采用MTT法及流式细胞检测转染miR-34a对SW480细胞增殖的影响.结果 经过酶切及基因测序鉴定,NOTCH1基因3'-UTR序列的双荧光素酶报告重组质粒构建成功;荧光素酶结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的SW480组53.4％ (P=0.003 8);而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物和重组载体,荧光素酶的活性是只加入空载体的HEK293组145％(P=0.002 1),说明miR-34a有与NOTCH1的3’-UTR位点相结合.免疫印迹结果显示在SW480细胞中加入miR-34a的类似物,NOTCH1蛋白的表达水平是未处理SW480组下降53.6％(P＜0.05);而在HEK293细胞中加入miR-34a的抑制物,NOTCH1蛋白的表达水平较未处理HEK293组升高78.9％ (P =0.03),说明miR-34a负性调控NOTCHl蛋白的表达.miR-34a过表达的SW480细胞较未处理的SW480的生长速度明显减慢(P＜0.05),且阻滞在G0～G1期,说明miR-34a过表达后能抑制SW480细胞增殖.结论 miR-34a负性靶向调控NOTCH1基因的表达而抑制SW480细胞的增殖.     

马钱苷对结肠癌SW480细胞增殖的影响及机制初探

目的研究马钱苷对结肠癌SW480细胞增殖的影响及作用机制。方法 MTT法检测细胞增殖和生存活力;Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞凋亡;半定量RT-PCR法检测与细胞凋亡相关的Bax基因和Bcl-2基因mRNA的表达水平。结果与对照组比较,不同浓度药物组均对SW480细胞有抑制作用,且呈一定的量效和时效关系;Hoechst 33258染色可见较多凋亡细胞,流式细胞仪检测显示马钱苷能显著增加细胞凋亡率;半定量RT-PCR测得马钱苷对Bax mRNA的表达无影响,但会引起Bcl-2 mRNA的表达下调。结论马钱苷能抑制SW480细胞的增殖,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与影响Bcl-2基因的表达有关。     

siRNA靶向HDGF抑制大肠癌细胞SW480的生长

目的 肝癌衍生生长因子(HDGF)是近年来逐渐引起重视的一种细胞生长因子,在许多肿瘤细胞中高表达.本研究拟构建PNAi干扰慢病毒载体,沉默HDGF基因在大肠癌SW480细胞中的表达,观察细胞的增殖状态.方法 RT-PCR方法 检测HDGF基因在大肠癌中的表达.利用Invitrogen公司在线网站设计HDGF干扰序列,片段合成后构建慢病毒RNAi表达载体,随后利用293FT细胞将其包装成成熟慢病毒颗粒去感染SW480细胞,经Biasticidin抗性选择培养后,建立了稳定表达HDGF siRNA的SW480细胞株.实时荧光定量PCR和Western Blot检测HDGF基因在mRNA和蛋白水平表达变化;生长曲线和MTT法观察细胞增值情况的改变.结果 HDGF基因在大肠癌SW480细胞中表达较高.成功的构建了HDGF慢病毒KNAi表达载体,并建立了稳定表达靶向干扰HDGF基因表达的siRNA SW480细胞株.沉默HDGF基因在表达后,能明显体外抑制细胞的增殖.结论 针对HDGF基因的慢病毒RNAi载体能明显下调HDGF基因的表达,并在体外显著抑制大肠癌细胞增殖能力.     

桦木醇对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的: 研究桦木醇对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法: 培养结肠癌SW480细胞,传代后用于实验。SW480细胞分为对照组和不同剂量桦木醇(1、5、10、20、50和100 mg·L^-1)组,MTT法测定各组细胞的增殖抑制率;以不加桦木醇的SW480细胞为对照组,DAPI染色观察15 mg·L^-1桦木醇作用SW480细胞6、12和24h后的形态学变化;流式细胞术分析Sub-G₁细胞百分比即细胞凋亡率,体外caspase活力测定法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的激活情况,Western blotting法检测各组细胞caspase-3底物多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)断裂和凋亡蛋Bcl-2、Bcl-xL和cytochrome C的表达情况。结果: MTT法检测,与对照组比较,随着桦木醇剂量(1、5、10、20、50和100 mg·L^-1)增加SW480细胞的增殖抑制率逐渐增加(P<0.05或P<0.01),其增殖抑制率呈剂量效应关系,半数抑制浓度(IC₅₀)为12.875 mg·L^-1。DAPI染色,与对照组比较,15 mg·L^-1桦木醇组正常细胞数量减少,在12和24 h时呈现出典型的细胞凋亡特征(膜气泡,核固缩、变形及染色质浓缩等)。流式细胞术检测,与对照组比较,随着作用时间的延长,15 mg·L^-1桦木醇组SW480细胞中处于Sub-G₁期的细胞逐渐增多,即细胞凋亡率逐渐增加。caspase活力测定,与对照组比较,caspase-3和 caspase-9活性明显增加(P<0.05或P<0.01)。免疫印迹检测,与对照组比较,15 mg·L^-1桦木醇组SW480细胞中PARP出现断裂,凋亡蛋白Bcl-xL表达下调,cytochrome C表达上调,而Bcl-2蛋白表达无明显变化。结论: 桦木醇可抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是通过下调Bcl-xL表达启动线粒体介导的cytochrome C释放进而激活caspase-9凋亡途径实现。     

特异性小干扰RNA抑制诱骗受体3在结肠癌SW480细胞表达的研究

目的研究特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对诱骗受体3(decoy receptor 3,DcR3)基因在人结肠癌SW480细胞系中的抑制作用。方法设计特异性的DcR3 siRNA序列;构建DcR3的pSUPER表达质粒并鉴定,鉴定成功后用于转染SW480细胞。以RT-PCR的方法检测细胞转染后DcR3 mRNA的表达;以Western blotting的方法检测DcR3蛋白的表达情况,并作统计学处理。结果与对照组相比,本实验设计两段siRNA对SW480细胞中DcR3 mRNA及蛋白表达的抑制作用明显,实验细胞DcR3 mRNA及蛋白表达显著下降(P<0.01)。结论针对DcR3的siRNA质粒转染真核细胞后可抑制其mRNA及蛋白表达,为进一步探讨DcR3的功能及封闭DcR3基因表达而治疗肿瘤奠定了实验基础。     

STAT3-siRNA慢病毒表达载体的制备及其在SW480细胞中的表达

【目的】通过慢病毒感染SW480细胞观察RNAi对细胞内STAT3基因表达的影响。【方法】制备STAT3干扰质粒,与其它3种质粒共同转染至293T细胞中组装为STAT3-siRNA慢病毒表达载体。流式测定病毒滴度后选择最适滴度感染SW480细胞并进行分选。Real-time PCR及Western blotting分析该慢病毒在SW480细胞中对于STAT3基因表达的影响。【结果】测序结果说明制备的慢病毒表达载体符合实验预期。该siSTAT3慢病毒感染SW480细胞后,流式细胞仪检测发现SW480细胞凋亡比率增加,Real-time PCR检测发现慢病毒对于STAT3 mRNA表达量的干扰效率为78.68%,Western blotting检测发现STAT3蛋白表达量下降,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。【结论】本研究制备的STAT3-siRNA慢病毒表达载体,能够有效干扰结直肠癌SW480细胞株STAT3表达。