人肺腺癌A549细胞系多重抗药性的形成

本文采用阿霉素逐步诱导人肺腺癌Ａ５４９细胞系，在体外持续培养６个月，获得了具有抗药性的Ａ５４９／Ｒ２细胞，该细胞能在０．２μｇ／ｍｌ ＡＤＭ下持续增殖。通过测定抗癌药物作用的５０％抑制浓度发现，Ａ５４９／Ｒ２细胞对ＡＤＭ的抗药性为Ａ５４９的７－１１８倍，同时对表阿霉素、长春新碱、足叶乙甙（ＶＰ－１６）也具有显著抗药性，对氮芥、丝裂霉素和卡铂低度抗药、对５－氟脲嘧啶、氨甲喋呤和平阳霉素无抗药性。Ａ５     

紫杉醇对人肺腺癌细胞系A549生长抑制作用的研究

目的:评价紫杉醇对肺腺癌细胞A549的生长抑制作用,以及诱导凋亡与G2-M期阻滞的关系。方法:紫杉醇不同浓度、不同时间分别处理A549细胞,采用MTT试验和流式细胞术进行检测及分析。结果:紫杉醇对A549的细胞毒性呈时间依赖性(P<0.05),10~1 000 nmol/L的浓度对A549生长的影响差异不显著(P>0.05)。紫杉醇浓度≤100 nmol/L时,G2-M期细胞的比率随浓度增加而增高(P<0.05);凋亡的比例在低浓度范围内(0.1~10 nmol/L)呈浓度依赖性,浓度进一步增加,反而降低。10 nmol/L作用时,凋亡的发生呈时间效应;1 000 nmol/L作用时,G2-M期阻滞表现出时间效应,但不如低浓度诱导凋亡出现的早。紫杉醇诱导的凋亡和G2-M期阻滞无相关性(P>0.05)。结论:紫杉醇对A549的生长抑制作用呈时间依赖性,但在一定浓度范围内剂量效应不明显;低浓度紫杉醇虽然对G2-M期阻滞的影响较小,但却能比高浓度更早诱发凋亡,延长作用时间亦可达到有效抑制肿瘤细胞增殖的目的。     

阿奇霉素对人肺腺癌多药耐药细胞株A549/ADM的耐药逆转研究

目的研究阿奇霉素（AZM）对人肺腺癌多药耐药细胞株A549／阿霉素（ADM）的耐药逆转作用。方法使用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测不同浓度AZM对细胞株A549／ADM的抑制率，确定其非细胞毒性浓度。用MTT法分别检测ADM、顺铂（DDP）、长春新碱（VCR）、氨甲蝶呤（MTX）对细胞株A549、A549／ADM以及使用AZM处理后的A549／ADM的半数抑制浓度（IC50）。使用流式细胞仪检测A549以及加入AZM前后的A549／ADM内ADM的荧光强度。结果≤10mg／L的AZM对A549／ADM无明显细胞毒作用。A549／ADM对ADM、VCR、DDP、MTX均有不同程度的耐药。使用5mg／LAZM处理后，A549／ADM对上述4种药物的敏感度均有不同程度的提高。AZM的浓度提高至10mg／L时，A549／ADM对上述药物的敏感程度提高更明显。A549／ADM经AZM处理后细胞内ADM荧光强度明显提高。结论AZM可以部分逆转A549／ADM的耐药，其逆转效果与剂量相关。     

马蔺子素对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549DDP耐药逆转及可能的机制

顺铂 (ＣＤＤＰ)耐药阻碍临床疗效的发挥 ,迄今尚无可完全逆转顺铂耐药的药物。马蔺子素[1] (ＡＮＫＡ)是国内外唯一开发成功的乏氧细胞放射增敏剂 ,我们以耐顺铂人肺腺癌细胞系Ａ54 9ＤＤＰ为靶细胞 ,研究马蔺子素对顺铂耐药的逆转效应及其可能的机制。一、材料与方法1.主要材料 :ＤＭＥＭ培养基 (美国ＧＩＢＣＯ公司产品 ) ,噻唑兰 (ＭＴＴ) (美国Ｓｉｇｍａ产品 ) ,顺铂 (昆明三戌贵金属药业有限公司产品 )。马蔺子素由三戌投资发展有限公司提供。谷胱甘肽 (ＧＳＨ)检测试剂盒购于南京建成生物工程研究所。ＭＲＰ单抗本室自制 ,谷胱苷肽…     

光动力疗法对人肺腺癌细胞系A549凋亡的影响

目的:探讨光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的人肺腺癌细胞系A549凋亡的影响.方法:以人肺腺癌细胞系A549为研究对象,用MTT法筛选最佳PDT参数.实验分为对照组(不进行PDT)和PDT组,在PDT 24 h后,采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的梯形条带、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率、TUNEL标记法测定细胞凋亡指数(AI).结果:血卟啉衍生物(HPD)浓度10 mg/L、激光剂量10 J/cm2是PDT对A549细胞杀伤作用的最佳条件.当激光剂量均为10 J/cm2时,采取6组不同的功率时间组合测得的D492值无统计学差异.在最佳PDT条件下,琼脂糖电泳结果可见PDT组产生了特征性的DNA梯形条带;流式细胞术检测显示PDT组发生了G0/G1期生长停顿,凋亡率为(18.443±7.122)%,显著高于对照组的(0.301±0.361)%(P<0.01);TUNEL标记法也证实该组可见明显的棕黄色凋亡细胞,AI为(18.480±9.555)%,明显高于对照组的(0.880±0.944)%(P<0.01).结论:PDT通过诱导凋亡对体外培养的A549细胞产生杀伤作用.     

自噬在A549肺腺癌细胞耐厄洛替尼中的作用研究

目的探讨自噬在A549肺腺癌细胞耐厄洛替尼中的作用。方法不同水平厄洛替尼处理A549细胞及其获得性耐厄洛替尼细胞(A549/ER)后,细胞免疫荧光和Western blot观察自噬标记蛋白微血管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(MAP1-LC3-Ⅱ)的变化;应用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制自噬,流式细胞仪(FCM)检测用药后细胞周期及凋亡率。结果低水平(1、5μmol/L)厄洛替尼作用下两种细胞MAP1-LC3-Ⅱ表达水平较对照组(0.1%DMSO)均升高,高水平(25μmol/L)厄洛替尼作用下A549细胞MAP1-LC3-Ⅱ表达水平较低水平时降低,而A549/ER细胞MAP1-LC3-Ⅱ表达水平较低水平时仍升高。厄洛替尼水平提高至100μmol/L可诱导A549/ER细胞凋亡,3-MA抑制自噬后A549/ER细胞的凋亡率从7.76%上升至18.85%。结论自噬增强了A549/ER的耐厄洛替尼作用,抑制自噬可增强厄洛替尼的抗肿瘤作用。     

三氧化二砷逆转A549细胞对TRAIL耐药的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)逆转人非小细胞肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)耐药的机制。方法将处于对数生长期的A549细胞分为对照组(仅加入DMEM)及实验组,实验组又分为As2O3组(1μmol/LAs2O3处理)、TRAIL组(100μg/L TRAIL处理)及联合组(1μmol/L As2O3、100μg/L TRAIL联合处理)。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测A549细胞核因子kappa B(NF-κB)、caspase-3、survivin mRNA的表达。结果作用24、48、72h后,联合组A549细胞的增殖抑制明显增强(P<0.05),且呈时间依赖性。As2O3、TRAIL联合作用48h可明显下调NF-κB、survivin mRNA,上调caspase-3mRNA的表达。结论 As2O3通过NF-κB通路下调survivin,上调caspase-3,从而增强TRAIL诱导A549细胞的凋亡。     

Monastrol对人肺腺癌细胞系A549有丝分裂影响的研究

目的：探讨Monastrol对人肺腺癌细胞系A549有丝分裂的影响。 方法：Monastrol处理A549细胞,免疫荧光染色观察细胞形态并计数,流式细胞术分析细胞周期变化。 结果：Monastrol阻滞人肺腺癌细胞系A549有丝分裂于前中期,且分裂期细胞表现为单极纺锤体。结论：Monastrol影响肺癌细胞有丝分裂,抑制肺癌细胞生长,可用于肺癌药物治疗。     

姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响

目的探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线,MTY法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h 后,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率.以20μmol/L的姜黄素作用细胞24h 后,流式细胞仪分析细胞周期.结果亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.24±0.24)h和(32.88±0.11)h(P＞0.05);顺铂处理A549和A549/DDP细胞72h 后,半数抑制浓度(IC50)分别为13.57 μmol/L 和146.79 μmol/L,A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数为10.82.姜黄素对A549/DDP细胞增殖有抑制作用,并且呈时间浓度依赖性(P＜0.05).姜黄素作用后,Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染荧光成团块分布.流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).20 μmol/L的姜黄素作用细胞24h,引发G2期阻滞.结论姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖.其作用可能是通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的.     

反义核酸对人肺腺癌细胞多药耐药逆转的实验研究

目的　探讨反义核酸对人肺腺癌细胞多药耐药的逆转效果。方法　以mdr1cDNA -9— 6为靶位点 ,合成反义核酸 (ATCCATCCCGACCTC)并用正义链作为对照 (GAGGTCGGGATGGAT) ,通过脂质体将其导入肺腺癌细胞A5 49/R ,分别采用逆转录聚合酶链反应、流式细胞仪、罗丹明试验及药敏试验观察两组细胞的mdr1mRNA、P糖蛋白 (Pgp)表达、罗丹明的聚集和对阿霉素的敏感性。结果　反义核酸处理的细胞mdr1mRNA下降 5 1 2 % ,正义组细胞和对照组细胞无明显变化、反义组细胞Pgp含量明显降低 ,细胞内罗丹明聚集 ,反义组 ,正义组和对照组的阿霉素IC50 分别为 0 0 0 9μg/ml、0 17μg/ml和 0 18μg/ml。 结论　反义核酸具有逆转人肺腺癌多药耐药的作用 ,其作用水平在mRNA或DNA水平 ,使Pgp的表达受到明显抑制 ,对阿霉素的敏感性明显提高。     

吉非替尼耐药人肺腺癌细胞的建立及耐药机制的研究

目的建立吉非替尼耐药的人肺腺癌细胞株A549/GR,并初步探讨其生物学特性及其耐药机制。方法采用逐步增加吉非替尼剂量法诱导人肺腺癌细胞A549形成吉非替尼耐药的细胞株A549/GR;CCK-8法检测细胞的半数抑制浓度(IC50)及绘制细胞生长曲线,并计算耐药指数;显微镜下观察吉非替尼作用前后A549、A549/GR细胞形态学的改变;直接测序法检测EGFR基因在酪氨酸激酶区的基因突变;q RT-PCR法检测EGFR基因在m RNA水平表达的改变。结果 CCK-8法测得A549/GR细胞的耐药指数为6.00,显示成功建立了吉非替尼耐药的细胞模型,其倍增时间较亲代细胞缩短;形态学观察显示A549/GR细胞极性消失,有变长梭形的趋势;A549/GR细胞系EGFR基因酪氨酸激酶区未发现基因突变;q RT-PCR法显示A549/GR细胞EGFR基因在m RNA水平较亲代细胞轻度上调。结论成功建立吉非替尼耐药人肺腺癌A549/GR细胞模型,A549/GR细胞耐药性的产生与EGFR基因18-21外显子区域突变无关。     

多药耐药细胞系A549/ADM的建立及部分特性

目的建立多药耐药细胞系A549/ADM和初步探讨人肺腺癌细胞多药耐药的发生。方法对肺腺癌细胞A549采用持续低浓度和逐渐增加阿霉素浓度间歇诱导,建立多药耐药细胞系;使用流式细胞仪器分别检测敏感细胞系和耐药系的P-gp和MRP的表达;采用MTT法检测其对多种常用化疗药物的耐药程度。结果与母细胞系相比,耐药细胞系A549/ADM对ADM的耐药程度增加了14.29倍,对VCR、DDP、VP-16均有不同程度的耐药,对5-FU无耐药性;耐药细胞系A549/ADM表面P-GP、MRP表达分别为74.8%和61.2%(P<0.01)。结论A549/ADM对多种常用肿瘤化疗药物表现有不同程度的耐药,其耐药性可能与P-GR和MRP高表达有关。     

利福霉素逆转多药耐药细胞系A549/ADM的实验研究

目的:探讨利福霉素逆转人肺腺癌细胞多药耐药的发生及逆转机制.方法:采用流式细胞仪检测敏感细胞系、耐药细胞系的P糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)表达;MTT法检测其对多种化疗药物的耐药程度及利福霉素对其耐药的逆转效果;采用细胞内阿霉素含量的方法测定利福霉素对多药耐药的逆转作用.结果:多药耐药细胞系A549/ADM的P-gp、 MRP表达分别为74.8%和61.2%;加用利福霉素后,A549/ADM细胞内ADM的含量显著增加,A549/ADM对ADM敏感性增加了2.51倍,对VCR、DDP及VP-16敏感性分别增加7.38倍、1.29倍、2.86倍.结论:A549/ADM对多种常见肿瘤化疗药物表现不同程度耐药,其耐药性可能与P-gp、MRP高表达有关;利福霉素对A549/ADM的多药耐药有一定的逆转作用.     

人金属硫蛋白1H基因对肺腺癌细胞A549耐药性的影响

目的：探讨金属硫蛋白1H（metallothionein 1H,MT1H）基因对人肺腺癌A549细胞耐药性的影响．方法：构建真核表达载体pcDNA3．1（-）-MT1H,利用脂质体介导将其转染肺腺癌A549细胞,G418筛选阳性克隆．分别以RT—PCR和Western方法检测MTIH mRNA和蛋白表达情况,MTT法检测细胞对顺铂的药物敏感性;流式细胞仪（FCM）检测顺铂诱导细胞凋亡率．结果：转染pcDNA3．1（-）-MT1H的细胞,其MT1H mRNA和蛋白表达水平显著高于亲本细胞及转染空载体细胞,细胞对顺铂药物敏感性明显下降,顺铂诱导的凋亡率明显降低．结论：MT1H能促进A549细胞耐药,可能和降低顺铂诱导细胞凋亡有关．     

多西紫杉醇诱导人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549／CDDP凋亡的研究

目的探讨凋亡在多西紫杉醇对人肺腺癌细胞A549及其多药耐药细胞A549／CDDP作用中的地位及其机制。方法应用透射电镜、流式细胞术、Annexin V／PI和免疫细胞化学等方法，观察多西紫杉醇对A549及A549／CDDP细胞形态学、细胞周期、凋亡以及Fas等蛋白表达的影响。结果多西紫杉醇作用后，A549及A549／CDDP细胞内空泡明显增多，可见少数凋亡小体和脱落的不舍细胞器成分的细胞质，后者还出现大量多微核化细胞。多西紫杉醇具有显著的G2期阻滞作用。可同时诱导细胞凋亡、坏死和胞质自切。并以后两者为主。Fas蛋白在多西紫杉醇作用后表达明显增强。结论多西紫杉醇对A549及A549／CDDP细胞均具有显著的G2／M期阻滞作用，能同时诱导其凋亡、坏死和胞质自切。以后两者为主。Fas基因可能在多西紫杉醇抗肿瘤作用中具有重要作用。     

异钩藤碱脂质体逆转人肺腺癌细胞A549／DDP对顺铂耐药的研究

目的研究异钩藤碱脂质体(Isorhynchophylline Liposomes,IR-L)在体外对人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的逆转作用。方法采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定细胞内顺铂浓度。结果IR-L无细胞毒浓度组(2.0μg/mL)使A549/DDP细胞对DDP的IC50由16.81 mg/L降至3.36 mg/L;低细胞毒浓度组(7.0μg/mL)的IC50降至2.34 mg/L;两组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度,从0.92μg/L分别提高到4.62μg/L和6.89μg/L。结论IR能部分逆转A549/DDP细胞的MDR,其作用机制可能与增加细胞内药物浓度有关。     

木犀草素抑制人肺腺癌A549细胞株的运动及其机制研究

目的:研究木犀草素(luteolin)对人肺腺癌A549细胞株运动的影响,并探讨其作用的相关机制。方法:MTT法检测木犀草素对人肺腺癌A549细胞株细胞活力的影响;伤口愈合实验观察木犀草素对A549细胞运动的影响;蛋白水平检测局部黏着斑激酶(FAK)及其磷酸化FAK的表达变化。结果:木犀草素作用于A549细胞后,呈剂量依赖性抑制A549细胞的增殖,IC50约为54.4μmol·L-1;木犀草素在15μmol·L-1剂量下,24 h和48 h后显著抑制A549细胞向损伤区域的迁移能力;蛋白水平检测发现木犀草素剂量依赖性地降低FAK磷酸化的水平,此外,FAK总蛋白的含量也有所下降。结论:木犀草素在对细胞生长无显著抑制效应的剂量下,通过作用于FAK这一关键分子抑制肿瘤细胞的运动。