树鼩原代肝细胞培养及体内外感染HBV的研究进展

HBV感染是人类面临的重要健康问题,研究HBV的感染机制一直是这个领域的关键点,为开展HBV的相关研究,建立简单易得的HBV体内外感染模型是大势所趋。树鼩因与人和灵长类亲缘关系较近,使得HBV感染树鼩模型受到越来越多的关注。综述了国内外近年来树鼩体内外感染HBV的研究进展,特别是树鼩原代肝细胞体外培养的研究进展及取得的成绩,对未来的一些研究方向进行了展望。     

HBV动物模型研究进展

HBV感染动物模型是研究HBV致病机制、筛选新型有效抗HBV药物和治疗方法的重要工具,然而HBV感染具有高度组织特异性以及种属特异性,这给HBV感染动物模型的建立带来了困难。近年来,随着分子生物学、实验动物学、病毒学及免疫学等相关学科技术的进步,HBV感染或复制动物模型取得了明显进展。目前应用于HBV(包括与HBV具有相似特性的动物肝炎病毒)研究的动物模型主要包括黑猩猩、树鼩、土拨鼠及鸭HBV感染模型,HBV转基因小鼠、高压水动力注射介导的小鼠HBV复制模型和重组腺相关病毒载体介导的小鼠HBV复制模型,以及人源化人-鼠嵌合肝脏HBV感染模型,此外,钠离子-牛磺胆酸共转运蛋白转基因小鼠感染模型是近年的研究热点。本文就上述HBV动物模型的研究进展进行综述。     

用人工繁育的围生期和幼年树鼠句感染人乙型肝炎病毒的初步研究

目的通过用人工繁育的围生期和幼年树鼩接种人乙型肝炎病毒(HBV),并优选感染指标的检测方法,提高树鼩对HBV的感染率及检出方法的敏感性和可靠性。方法用人HBV阳性血清接种42只人工繁育的围生期和幼年树鼩,选择合适的引物,经巢式PCR(nPCR)技术检测它们肝组织及血清的HBV DNA,并对扩增出的DNA片段进行测序验证,以及对活检肝组织作病理组织学观察。结果接种后动物的肝组织和血清HBV DNA的阳性率分别为47.6%(20/42)和71.4%(30/42),肝组织和血清共同阳性的为40.5%(17/42),总阳性率为78.6%(33/42);扩增的DNA片段经测序与人HBV DNA相应片段的同源性为98%和99%;肝组织病理改变以轻度炎性病变较多见。结论用人工繁育的围生期和幼年树鼩感染HBV,可提高树鼩对HBV的感染效率;用nPCR技术及选择合适的引物配对检测肝组织和血清标本的HBV DNA,是评价树鼩感染HBV状况的敏感、可靠方法。     

树鼩实验感染丁型肝炎病毒后肝内抗原表达状态

目的 研究树鼩实验感染人丁型肝炎病毒的可能性。方法 用免疫组化方法,检测树鼩肝组织丁型肝炎病毒抗原(HDAg),乙型肝炎病毒表面抗原HBsAg),采用原位杂交方法检测部分动物肝内HDV RNA。结果 35只动物,HDV/HBV同时感染组和重叠感染组HDAg阳性率分别为94.5％(21╱22)和84.6％(11/13);HDAg在肝内主要定位于肝细胞,在肝小叶呈灶状或片状分布,肝内持续时间在同时感染组和重叠感染组稍有不同,前者多持续3～4周,后者则可长达12周以上;部分动物肝组织细胞浆或细胞核HDV RNA阳性。结论 人HDV可感染树鼩,树鼩可成为丁型肝炎研究的动物模型。     

新生期树鼩接种人乙型肝炎病毒的长期实验观察

目的 观察新生期树鼩接种HBV后体内HBV感染标志物的长期动态.方法 6只树鼩于新生期接种人HBV DNA阳性血清,每4-6周抽血1次和每6～12周做肝活体组织检查1次,应用巢式聚合酶链反应(nPCR)、荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)、Southern blot、酶联免疫吸附试验和免疫组织化学染色等方法动态观察血清和肝组织中HBV感染标志物的消长,用电镜寻找肝组织内的HBV颗粒和用光镜观察肝组织病理变化.结果 新生期树鼩接种后48周,3只动物(1、2和6号)血清和肝组织标本经多对引物进行的nPCR,均稳定显示HBV DNA阳性,肝组织HBVcccDNA阳性;FQ-PCR显示血清和肝组织HBV DNA的拷贝数分别为103-104/ml和每微克肝组织总DNA 107～108拷贝;Southern blot检测显示肝组织存在HBV复制中间体HBV cccDNA和HBV单链DNA;酶联免疫吸附试验检测显示血清HBsAg持续阳性;免疫组织化学染色可见数量逐步增多的HBsAg阳性肝细胞.其中的1号动物至接种后2年每微克肝组织总DNA仍可测得107～108拷贝的HBV DNA,电镜下可见疑似HBV颗粒.另3只动物除nPCR显示肝组织HBV DNA阳性条带和FQ-PCR显示低拷贝数(每微克肝组织总DNA103拷贝)HBV DNA外,其余的HBV感染标志物均为阴性或一过性阳性.结论 新生树鼩能够长期感染HBV,并且HBV能够在树鼩体内稳定复制和长期存在.     

丙型肝炎病毒感染离体培养树鼩肝细胞模型初探

本研究以树鼩为研究对象,采用体外两步灌流法分离肝细胞,然后用丙型肝炎病毒（HCV）RNA阳性血清直接感染原代培养的肝细胞,观察树鼩肝细胞对HCV的易感性,旨在建立较为实用的细胞感染模型,为深入研究HCV感染细胞的复制机制提供一定的实验依据。     

树鼩寄生虫研究进展

树鼩是最接近灵长类的小型哺乳动物,是模拟人类疾病的最好替代者,因此被广泛应用于各个研究领域。但是病原生物的感染是影响实验结果的重要因素。本文就树鼩所感染的寄生虫种类、感染率等情况作一综述。     

基于RNA-Seq技术的跨种属跨病因肝癌差异表达基因的筛选

目的:运用全转录组测序(RNA sequencing,RNA-Seq)技术和跨种属、跨病因筛选策略,定位出影响肝癌发生发展的关键因子.方法:运用RNA-Seq技术,对人肝癌、癌旁和正常肝组织,以及乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)和黄曲霉毒素B1(aflatoxins,AFB1)诱发的树鼩肝癌、癌旁和正常肝组织标本进行全转录组测序、基因表达水平分析和比较;分别筛选出人肝癌差异表达分子、HBV和AFB1致癌的树鼩肝癌差异表达因子,最后定位出跨人和树鼩两个物种、跨HBV和AFB1两种致癌因素的肝癌共同差异表达分子.结果:各标本总RNA提取质量合格,RNASeq测序数据质量合格,测序数据与参考基因对比匹配率合格,样品间基因表达相关性合格.人肝癌差异表达基因有68个,其中上调基因14个,下调基因54个;HBV诱发的树鼩肝癌差异表达基因有314个,AFB1诱发的树鼩肝癌差异表达基因有20个,HBV和AFB1诱发的树鼩肝癌共同差异表达基因11个,均为下调基因.人肝癌和树鼩肝癌共同差异表达基因为2个,分别是载脂蛋白F(apolipoprotein F,APOF)和人胰岛素样生长因子酸不稳定亚基(insulin-like growth factor binding protein,acid labile subunit,IGFALS),其mRNA表达水平在肝癌中均下调.结论:运用RNA-Seq技术,跨种属、跨病因筛选肝癌关键基因的研究策略有可能推动肝癌关键基因的定位;APOF和IGFALS有可能是影响肝癌发生发展的重要分子.     

中缅树鼩自然感染五种高致病性人腺病毒的血清流行病学分析

目的 分析中缅树鼩(Tupaiabelangeri, Tree Shrew)自然感染5种高致病性人腺病毒(Human Adenovirus, HAdv)的血清流行病学,以探讨人腺病毒感染树鼩的可能性。方法 采用固定病毒稀释血清法测定34份树鼩血清对Ad3、Ad4、Ad7、Ad14和Ad55的中和抗体水平。结果 4种B组腺病毒的中和抗体阳性率及中和效价较E组4型的大,阳性率由大到小依次为:Ad14(55.88%)、Ad3(47.06%)、Ad55(29.71%)、Ad7(14.71%)、Ad4(8.82%),树鼩血清主要表现为Ad3、Ad14和Ad55混合型多价抗血清。结论 中缅树鼩可自然感染5种人腺病毒,有望以树鼩为实验动物,建立一种成熟的人腺病毒感染模型。     

HBV小鼠动物模型的研发进展

HBV是导致肝硬化和肝细胞癌的主要原因。目前全球约有2.4亿HBV感染者,其中每年约100万人死于HBV所引起的肝脏疾病,是全球主要的公共卫生问题之一。然而HBV是宿主种属特异性极强的嗜肝病毒,只能在几种特定的动物中感染复制。因此,研究支持HBV感染的动物模型,对HBV感染和致病机制的认识,以及有效治疗方案的快速研发具有重要的作用。当前,HBV感染模型的不断升级有力推动了HBV的病毒学研究,特别是HBV小鼠模型的不断开发为HBV研究提供了便捷的研究工具,本文将对这一领域的研究作一综述。     

青少年高血压的研究进展

随着人们生活和行为方式的改变,高血压发病明显呈年轻化趋势。在青少年时期识别高血压病高危人群有助于早期进行有效干预和治疗,降低未来高血压的发生率及其严重性。现试从青少年高血压的诊断、发病因素、特点、治疗策略等方面的研究进展作一综述。     

Morbidity in cardiovascular diseases in immigrants in Sweden

INTRODUCTION: Although immigration to Sweden has increased in the last few decades, the incidence rates of cardiovascular disease and coronary heart disease in immigrants are unknown. The aim of the present study is to estimate whether place of birth affects the incidence rates of cardiovascular disease and coronary heart disease. MATERIAL AND METHODS: The study was designed as a follow-up study on morbidity in cardiovascular disease and coronary heart disease between 1 January 1997 and 31 December 1998, including three and a half million persons with age range 35-64 years, of whom 550 000 were born abroad, from the database MigMed consisting of the whole Swedish population. Incidence rates and relative risks were estimated by indirect standardization and a proportional hazard model. RESULTS: The age-adjusted risk of coronary heart disease was higher in most foreign-born groups than in Swedes. For example, in nine of 12 male groups, the relative risks varied between 1.1 and 2.2, and in seven of 12 female groups, the relative risks varied between 1.4 and 2.5. When also adjusting for level of education and employment status, the risks were still high, but on a lower level. CONCLUSIONS: Foreign-born people possess an over-risk of cardiovascular or coronary heart disease(CVD/CHD) compared with Swedish-born persons, also when level of education and employment status are taken into account.     

C·肉毒杀鼠素(冻干剂)应用研究

目的为研究C·肉毒杀鼠索对杀灭达乌尔黄鼠(简称黄鼠)的大面积应用情况和对家畜、家禽的毒害作用,进行了C·肉毒杀鼠素的应用研究.方法大面积投毒采用ES-2药饵撒播机[1],间隔约80m进行条投.羊、鸡采用直接灌胃.结果大面积应用的灭鼠率为83.72%.对羊、鸡最高剂量分别为500万MLD、150万MLD,均未出现中毒现象.结论 C·肉毒杀鼠素是较为理想的草原大面积杀灭黄鼠的理想、首选药物.     

Pulmonary sporotrichosis in Oklahoma in susceptibilities in vitro

Six cases of pulmonary sporotichosis were observed in 2 institutions in Oklahoma City, Okla. Three of the patients were treated with iodides with or without surgery. Although one patient required a second course of iodides, the patients have remained well after at least 34 months of follow-up. Three patients treated with amphotericin B, single course as well as multiple courses, and other antifungal agents (hydroxystilbamidine and miconazole) have all relapsed. These cases and a reviewed of more than 40 cases of pulmonary sporotrichosis susceptibilities of Sporothrix schenckii that we observed in vitro suggest that amphotericin B is not an effective agent for the treatment of pulmonary sporotrichosis. It is our opinion that the treatment of choice for pulmonary sporotrichosis is a supersaturated solution of potassium iodide. If the patient is allergic to the medication or fails to respond, then a combination of amphotericin B plus flucytosine may be tried.