苎麻叶萃取物体外抗甲型流感病毒(H1N1)和抗氧化活性测定

目的:研究苎麻叶不同溶剂萃取物对甲型流感病毒(H1N1)的体外抑制作用和抗氧化活性,以扩大苎麻植物的药用部位并开发天然抗病毒、抗氧化药物。方法:取苎麻叶以95%乙醇提取,分别用水加热溶解醇提物浸膏,再以不同溶剂分别萃取,制得苎麻叶石油醚相、三氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相萃取物。考察50～400μg/mL的苎麻叶水相萃取物对犬肾细胞(MDCK)的毒性作用;以利巴韦林为阳性对照,采用甲型流感病毒(H1N1)攻击MDCK细胞,并采用Western blotting法检测相同质量浓度的苎麻叶石油醚相、三氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相萃取物溶液(均为100μg/mL),不同质量浓度的苎麻叶水相萃取物溶液(50、100、200、400μg/mL)以及不同质量浓度的利巴韦林溶液(0.31、0.63、1.25μg/mL)对病毒感染的细胞中核蛋白(NP)表达水平。以维生素C为阳性对照,采用羟基自由基(·OH)清除试验、DPPH自由基清除试验和还原试验考察各相萃取物的体外抗氧化活性。结果:苎麻叶水相萃取物质量浓度在400μg/mL以内时对MDCK细胞无毒性;苎麻叶石油醚相、三氯甲烷相、乙酸乙酯相、水相萃取物质量浓度在100μg/mL时均能显著降低甲型流感病毒(H1N1)感染的细胞中NP蛋白表达水平(P<0.01);而不同质量浓度(50～400μg/mL)的水相萃取物均能显著降低NP蛋白表达水平(P<0.01),且呈一定浓度依赖趋势;其石油醚相和乙酸乙酯相萃取物的抗氧化活性与维生素C较为接近。结论:苎麻叶水相萃取物具有较好的体外抗甲型流感病毒(H1N1)作用;其石油醚相和乙酸乙酯相萃取物表现出较好的体外抗氧化活性。     

一清胶囊抗甲型H1N1流感病毒作用

目的 研究一清胶囊抗甲型H1N1流感病毒作用。方法 采用小鼠气管内注入甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)病毒液建立病毒感染小鼠模型,以肺指数、肺指数抑制率、小鼠累积死亡率为指标,评价一清胶囊体内抗甲型H1N1流感病毒作用。结果 7.3 g·kg^-1一清胶囊(原生药)可降低病毒感染小鼠的肺脏指数(P<0.05)和小鼠感染病毒后7~9 d内的死亡率(P<0.01)。结论 一清胶囊具有明显的抗甲型H1N1流感病毒作用。     

松针叶绿素-胡萝卜素软膏的体外抗甲型流感病毒作用研究

目的 观察松针叶绿素-胡萝卜素软膏的体外抗甲型流感病毒作用.方法 接种甲型流感病毒于狗肾传代细胞(MDCK),评价松针叶绿素-胡萝卜素软膏的细胞毒性及体外抗病毒作用.结果 松针叶绿素-胡萝卜素软膏对MDCK细胞的半数中毒浓度(TC50)为56 μg· mL-1,治疗和预防给药方式均有抗甲型流感病毒作用,半数抑制浓度(IC50)分别为30、29μg·mL-1,治疗指数(TI)均为1.9.结论 松针叶绿素-胡萝卜素软膏具有明显的抗流感病毒作用,且在安全浓度范围内呈现一定的量效关系,浓度越高抗病毒作用增强.     

知母宁体外抗甲型流感病毒作用研究

目的:考察知母宁体外抗甲型流感病毒作用.方法:以利巴韦林作阳性对照药物,用中性红染色法测定知母宁不同加药方式对甲型人流感病毒H1N1的体外抑制作用及其时效关系.结果:知母宁对甲型人流感病毒具明显的综合抑制作用及抑制病毒吸附后的复制增殖作用,这两种作用的半数有效浓度(EC50)分别为0.70及0.76 mg·ml-1.知母宁对病毒吸附的预防作用弱,无直接杀伤病毒的作用.随药物作用时间延长,知母宁在低浓度抗病毒有效率呈减小趋势,在高浓度时(≥1.4 mg·ml-1)其抗病毒能力基本不变.同时知母宁可明显降低病毒的感染性.结论:知母宁具有明显的体外抗甲型人流感病毒作用.     

中西医结合体外抗甲型流感病毒的实验研究

目的研究中西医结合药物体外对甲型流感病毒的抑制作用。方法体外接种甲型流感病毒鼠肺适应株H1N1于狗肾细胞（MDCK）,观察各组药物体外抗病毒作用。结果根据实验,测得各组药物对甲型流感病毒的选择指数,利巴韦林注射液组为4.68;痰热清注射液组为5.50;达菲组为5.53;中西医结合组为14.48。结论中西医结合组具有明显的体外抗甲型流感病毒的作用。     

清热解毒软胶囊体内抗甲型H1N1流感病毒的作用研究

目的:观察清热解毒软胶囊(ADSC)体内抗甲型H1N1流感病毒作用,为其用于临床治疗甲型H1N1流感病毒感染提供实验依据。方法:将BALB/c小鼠随机分为正常对照组,模型对照组,阳性药物高、中、低剂量组[磷酸奥司他韦胶囊,0.04、0.02、0.01g/(kg·d)]和ADSC高、中、低剂量组[1.5、0.75、0.375 g/(kg·d)]。除正常对照组外,其余各组小鼠均经鼻腔滴入滴度为1.6×10-5.2的甲型H1N1流感病毒悬液复制染毒小鼠模型,造模6~8 h后ig相应药物,每天1次,连续5 d。给药结束后,观察7 d内小鼠体质量变化,计算15 d内小鼠的死亡率、死亡保护率及平均存活天数。另取小鼠,分组、给药同上,末次给药8 h后,测定小鼠肺指数和肺指数抑制率。结果:模型组小鼠体质量从第5天开始明显下降,第8天开始出现死亡(15 d内死亡率为85.7%),肺指数较正常对照组明显升高(P<0.01)。ADSC和磷酸奥司他韦胶囊均可减缓染毒小鼠体质量下降趋势,降低小鼠死亡率和肺指数,延长小鼠的平均存活天数。其中ADSC高剂量组和阳性药物高、中剂量组小鼠的平均存活天数显著高于模型对照组(P<0.05);除ADSC低剂量组外,其余各给药组小鼠的肺指数均显著低于模型对照组(P<0.05)。结论:ADSC对小鼠具有一定的体内抗甲型H1N1流感病毒的作用。     

重组小鼠β防御素3体内抗甲型流感病毒H1N1作用

目的 观察重组小鼠β防御素3(rMBD3)对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用。方法 以10 mg·kg^-1·d^-1rMBD3腹腔注射3月,观察小鼠的一般状态,以及对主要脏器的影响。BALB/c小鼠,♀,分为正常对照组、模型对照组、rMBD3高剂量组(10 mg·kg^-1·d^-1)、rMBD3低剂量组(5 mg·kg^-1·d^-1)和利巴韦林组(100 mg·kg^-1·d^-1)。采用流感病毒液滴鼻感染建立甲型流感病毒H1N1感染小鼠模型,感染病毒12 h后分别腹腔注射给药。每日观察小鼠一般情况和死亡情况。于攻毒第3天检测肺泡灌洗液流感病毒滴度、血清γ干扰素含量、肺指数和肺组织病理变化。结果 小鼠腹腔注射10?mg·kg^-1·d^-1 rMBD3 3月,未发现明显异常反应或死亡,各重要脏器的未见明显病理改变。rMBD3各剂量组肺泡灌洗液中的病毒滴度、肺指数抑制率均降低,肺组织病理改变减少。结论 rMBD3对小鼠无明显毒性作用,在体内具有抗流感病毒、保护流感小鼠的活性。     

通窍止咳液体外抗甲型人流感病毒作用研究

目的:研究通窍止咳液体外抗甲型人流感病毒的作用。方法:以利巴韦林作阳性对照药物,采用存留细胞结晶紫染色法测定通窍止咳液不同加药方式对甲型人流感病毒H3N2的体外抑制作用及其时效关系。结果:通窍止咳液对甲型人流感病毒具有良好的综合抑制作用及抑制病毒吸附后的复制增殖作用;通窍止咳液对病毒吸附的预防作用弱,无直接杀伤病毒的作用;随药物作用时间延长,通窍止咳液在低浓度时的抗病毒有效率呈降低趋势,在高浓度时的抗病毒能力基本不变。结论:通窍止咳液具有较好的体外抗甲型人流感病毒的作用。     

山银花水提物体外抗甲型H1N1流感病毒的作用研究

目的:考察山银花水提物(SYHW)体外抗甲型H1N1流感病毒(H1N1病毒)的作用。方法:以H1N1病毒感染体外培养的犬肾小管上皮细胞(MDCK细胞),计算病毒的半数组织培养感染剂量(TCID_(50));以不同质量浓度SYHW作用MDCK细胞24 h,考察其最大无毒浓度。然后将试验分为正常细胞组、病毒对照组和SYHW预防给药组、治疗给药组和直接杀灭给药组(均给予最大无毒浓度的SYHW,并以100 TCID_(50)H1N1病毒感染细胞),测定SYHW的抗病毒有效率(ER);将试验分为正常细胞组、病毒对照组和SYHW治疗给药组、直接杀灭给药组(给药及病毒感染方法同上),分别测定细胞增殖指数(PI)和细胞凋亡率的变化。结果:H1N1病毒的100 TCID_(50)为1.26×10~(-7),SYHW对MDCK细胞的最大无毒浓度为50μg/m L(细胞存活率为91.3%)。SYHW预防给药组、SYHW治疗给药组和SYHW直接杀灭给药组的ER分别为0、80.3%、52.7%。与正常细胞组比较,病毒对照组细胞的PI值显著降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率显著升高(P<0.05);与病毒对照组比较,SYHW直接杀灭给药组细胞的PI值显著升高、早期凋亡率显著降低(P<0.05),SYHW治疗给药组细胞的早期凋亡率显著降低(P<0.05)。结论:SYHW具有体外抗H1N1病毒的作用,且以治疗给药和直接杀灭给药抗病毒作用较好。     

220例甲型H1N1流感病例流行病学调查分析

目的：进一步熟悉、掌握甲型H1N1流感流行病学特点,为预防和控制甲型H1N1流感提供科学依据。方法：回顾分析某定点医院收治的220例甲型H1N1流感病人的相关资料。结果：输入性病例74例,其中境外输入57例;周边地区转诊病例15例,本土病例131例;男109例,女111例;平均年龄19.4&#177;9.3岁;学生183例,占83.2%,以在校集中居住的初高中学生及大学生为多的聚集性群体发病为主,84.1%的患者与甲型H1N1流感疑似或确诊病人接触及感冒病人有明确接触史,潜伏期2.22&#177;0.92d。结论：甲型H1N1流感传染源、传播途径、易感人群3个环节控制难度大。     

金莲花醇提物体外抗甲型流感病毒作用研究

目的研究金莲花醇提物的抗呼吸道甲型流感病毒作用。方法采用鸡胚培养流感病毒,并用鸡红血球凝集试验检测药物对病毒在鸡胚尿囊液中增殖的抑制作用。结果在药物和病毒先在体外直接作用后的共同接种试验中,金莲花醇提物对甲型流感病毒具有体外直接灭活作用;在甲型流感病毒先感染鸡胚后再接种药物试验中,金莲花醇提物可抑制病毒在鸡胚内的增殖。结论金莲花醇提物在体外对甲型流感病毒具有直接杀灭作用,对甲型流感病毒在鸡胚中的增殖具有抑制作用。     

抗病毒1号中药有效部位体外对乙型流感病毒的抑制作用

为开发研制安全有效的抗流感病毒新药,本研究采用细胞培养技术,以病毒唑为阳性对照药,观察抗病毒1号中药有效部位(ADl)在MDCK细胞中对乙型流感病毒的抑制作用。结果表明ADl半数中毒浓度(TC_(50))为19.8mg/ml;抗乙型流感病毒的半数有效浓度(EC_(50))为1.47mg/ml;治疗指数(TI)为13.5;染毒后0-8小时分别给药均能抑制病毒增值,且对乙型流感病毒的抑制作用存在明显的量效反应关系。     

抗甲型流感H1N1病毒红树林内生放线菌的筛选及菌株HA12210的鉴定

目的对红树林内生放线菌进行抗H1N1病毒活性检测,并对具有较高活性的菌株HA12210进行鉴定。方法采用嗜杀酵母系统和CPE+MTT联合法模型对菌株发酵液进行抗H1N1病毒活性的初筛和复筛;对菌株HA12210进行培养和形态特征、生理生化特征的鉴定,测定其16SrDNA序列并进行系统发育分析。结果菌株HA12210发酵液稀释20倍后对H1N1病毒的抑制率达到73.2%。HA12210与Micromonospora marina JSM1-1T形态和生理生化特征接近,并与其16SrDNA序列相似性最高(99.70%),且在发育树上聚为同一分支。结论鉴定活性菌株HA12210为Micromonospora marina,本文首次报道了该菌株的抗H1N1病毒活性。     

湘西地区甲型H1N1流感危重患儿4例临床特点分析

目的探讨湘西自治州少数民族地区甲型H1N1流感危重患儿临床特点及诊疗体会。方法回顾性分析资料完整的本院儿科住院4例甲型H1N1流感危重患儿临床表现、实验室检查及影像学资料。结果 4例患儿早期无特异性表现,均为流感样症状。3例发热,1例病初体温未测,4例均咳嗽,少量痰液,病情加重可出现咳嗽加重,均有呼吸困难,无腹泻呕吐,2例3d未排大便,伴腹胀;随着病情进展都有多脏器功能不全,其中以肺脏受累最为突出。实验室检查：白细胞计数正常、降低或升高,多有肝肾功能异常。X线胸片提示双肺均有广泛受损害,表现为大片状高密度影。结论甲型H1N1流感危重患儿病情凶险,进展迅速,病死率高。因此,为了降低发病率,特别是降低危重症发病率,必须加强小于5岁的农村儿童甲型H1N1流感疫苗接种及防控工作,同时注重针对合并营养性缺铁性贫血儿童的早期治疗。早发现,早诊断,早期综合治疗,是降低甲型H1N1流感危重症病死率的关键。     

Immunodepression induced by influenza A virus (H1N1) in lymphoid organs functions as a pathogenic mechanism

In recent years, the frequency of influenza epidemics around the world has posed a great threat to the lives of people, especially those in developing countries. However, it is unclear which organs are the targets of influenza A viruses (IAVs) and what histopathology is caused by IAVs. In this study, BALB/c female mice were infected with H1N1 by nasal inoculation for 5 days. After euthanasia, the brain, heart, lungs, thymus, liver, spleen, hilar lymph nodes, pancreas, kidneys, and adrenal glands were collected. Among these organs, only the lungs, thymus, spleen, and hilar lymph nodes showed lesions. Lung histopathology was characterized by widening of the septum, lymphocyte infiltration, alveolar effusion, and alveolar hyaline membrane formation. The thymus and spleen exhibited atrophy due to the apoptosis of numerous lymphocytes. Although the hilar lymph nodes were enlarged, lymphocyte apoptosis still occurred. The nucleocapsid protein (NP) of IAVs was present not only in the lungs but also in the thymus, spleen, and hilar lymph nodes. In peripheral blood, CD19⁺B lymphocyte levels clearly decreased whileCD3⁺CD8⁺T and CD3⁺CD4⁺T lymphocyte levels temporarily decreased but subsequently increased. These results demonstrate that H1N1 in the lungs could reach lymphoid organs, induce the depletion of B and T lymphocytes in peripheral blood and lymphoid organs, and suppress adaptive immunity.     

防己诺林碱阻断自噬抑制 H1N1病毒感染的研究

目的 探索防己诺林碱在细胞水平抗H1N1病毒的作用,阐明防己诺林碱调控细胞自噬抑制H1N1病毒复制的分子机制。方法 CCK-8法检测0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0、10.000 0、20.000 0、40.000 0、60.000 0 μmol·L^-1的防己诺林碱对MDCK细胞活力的影响;MDCK细胞设置对照组、模型组和防己诺林碱（2.5、5.0、10.0 μmol·L^-1）组,除对照组外,以感染复数（MOI）为0.1的H1N1病毒感染MDCK细胞,加入防己诺林碱共同孵育12 h,同时设置防己诺林碱（10.0 μmol·L^-1）与病毒共同孵育4、8 h组,通过实时荧光定量PCR （qRT-PCR,检测HIN1 mRNA表达）和Western blotting ［H1N1病毒核蛋白（NP）］检测防己诺林碱对病毒复制的抑制作用;PI/Hoechst 33342染色检测防己诺林碱（10.0 μmol·L^-1）对MDCK细胞死亡的影响;qRT-PCR法检测防己诺林碱检测防己诺林碱预处理、病毒感染早期药物处理、病毒感染晚期药物处理以及吸附和进入阶段给药对病毒复制的影响;MDCK细胞转染EGFP-LC3或EGFP-mCherry-LC3双荧光质粒,观察防己诺林碱对EGFP-LC3的荧光强度、EGFP-mCherry-LC3共定位的影响,设置自噬诱导剂雷帕霉素（0.5 μmol·L^-1）、自噬晚期抑制剂氯喹（10 μmol·L^-1）、巴佛洛霉素A1 （100 nmol·L^-1）对照。转染过EGFP-LC3质粒的MDCK细胞感染H1N1病毒,免疫荧光检测防己诺林碱对LC3与胞内的病毒NP蛋白共定位的影响;体外培养A549细胞,以MOI为0.1的H1N1病毒感染,Western blotting检测防己诺林碱对LC3II/LC3I蛋白表达的影响。结果 防己诺林碱对MDCK细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为40.19 μmol·L^-1 ;与模型组比较,防己诺林碱以浓度相关性的方式抑制HIN1 mRNA表达,以浓度和时间相关性的方式抑制NP蛋白表达（P＜0.01、0.001）;显著减少H1N1诱导的细胞死亡（P＜0.001）;抑制H1N1病毒进入过程。与对照组比较,防己诺林碱处理诱导LC3荧光聚集,诱导EGFP-LC3和mCherry-LC3双荧光共定位显著增加（P＜0.001）。与模型组比较,防己诺林碱处理明显减少NP的荧光数量（P＜0.001）,同时造成LC3荧光积累并与胞内的病毒NP蛋白共定位;引起LC3II积累（P＜0.01、0.001）。结论 防己诺林碱同氯喹和巴佛洛霉素A1一致,阻断自噬途径,使病毒粒子在自噬体内滞留,破坏病毒生命周期。     

金荞麦提取物体外抗流感病毒作用研究

目的 研究金荞麦提取物的体外抗流感病毒作用。方法 采用血凝试验,考察金荞麦提取物对鸡胚内流感病毒增殖的抑制作用;采用MTT法检测细胞活性,考察金荞麦提取物对流感感染细胞活性的影响。结果 与病毒对照组比较,金荞麦提取物高剂量组（10 mg·mL^-1）、中剂量组（5 mg·mL^-1）均能显著降低鸡胚尿囊液的血凝滴度（P<0.01）,而低剂量组（2.5 mg·mL^-1）则无显著性差异;在0.63~2.50 mg·mL^-1浓度内,金荞麦提取物各剂量组流感感染细胞的活性均明显高于病毒对照组,组间均存在显著性差异（P<0.01）,且病毒抑制率随着药物浓度的增大而增高,呈一定的量效关系,其中金荞麦提取物最大无毒浓度（2.5 mg·mL^-1）对流感病毒的直接抑制率达66.12%。结论 金荞麦提取物具有一定的体外抗流感病毒作用。