YC-1对Aβ寡聚体毒性的保护作用及其相关机制

目的:探讨YC-1针对Aβ寡聚体(ADDLs)毒性的保护作用及其相关机制。方法:原代培养小鼠皮质神经元及星形胶质细胞混合培养体系,应用不同浓度ADDLs(500 nmol/L、1μmol/L、2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)干预以模拟体外AD模型,应用YC-1对此模型进行干预,以CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测NICD及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平,采用real-time PCR检测Caspase-3 mRNA水平。结果:浓度≥2μmol/L的ADDLs干预明显降低混合培养体系细胞活力水平,并呈现浓度依赖性(P<0.01)。10μmol/L ADDLs持续干预4 h显著降低细胞活力(P<0.01),YC-1可明显拮抗这种毒性作用(P<0.01)。10μmol/L ADDLs持续干预4 h明显上调NICD及HIF-1α水平(P<0.01),YC-1可拮抗这种提高(P<0.05或0.01)。10μmol/L ADDLs干预4 h显著提高Caspase-3的mRNA水平(P<0.01),YC-1可显著抑制这种上调(P<0.05)。结论:ADDLs表现出对原代培养小鼠皮质神经元及星形胶质细胞混合培养体系的毒性作用,YC-1可发挥保护作用。     

靶向卵巢癌HIF-1α基因siRNA真核表达载体的构建及鉴定

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是生物体内普遍存在于RNA水平上调节基因表达的方式,具有很强的转录后基因沉默作用,已广泛用于抗肿瘤的研究中。缺氧诱导因子-1α表达与肿瘤的耐药可能有密切关系,卵巢癌细胞中亦有HIF-1α蛋白的高表达,因此抑制卵巢癌细胞中HIF-1α基因的表达可能逆转肿瘤耐药。     

缺氧对人肝癌HepG2细胞HIF-1α、PCNA表达水平的影响

目的：探讨缺氧对人肝癌HepG2细胞中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）及增殖细胞核抗原（PCNA）表达的影响。方法：体外培养HepG2细胞,通过CoCl2化学模拟缺氧作用,采用实时荧光定量聚合酶链式反应实验（Real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,PCR）检测基因HIF-1α、PCNA mRNA水平变化,蛋白质印迹（Western Blot,WB）检测HIF1-1α、PCNA蛋白表达水平的变化,细胞化学染色检测HIF-1α、PCNA蛋白表达变化。结果：CoCl2导致的化学缺氧可诱导人肝癌HepG2细胞HIF-1α、PCNA的上调表达。结论：缺氧可提高HIF-1α的表达,可能促进肝癌细胞的进一步增殖。     

HIF-2α基因与人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的关系

目的：探讨小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）沉默缺氧诱导因子2α（hypoxia inducible factor-2 alpha,HIF2α）基因表达后,人肺腺癌A549细胞株对顺铂耐药性的变化.方法：构建靶向HIF-2α基因的siRNA真核表达载体并转染A549细胞,采用Reαl-time PCR检测HIF-2α mRNA的表达,采用Western blotting检测HIF-2α及多药耐药基因1（multidrug resistance-1,Mdr-1）蛋白的表达,采用MTT法检测顺铂处理后细胞的存活率.结果：在HIF-2α siRNA转染A549细胞后24、48 h后,HIF-2α在mRNA和蛋白水平的表达与空白对照组相比均显著下调（均P＜0.01）,Mdr 1蛋白的表达水平也明显降低（均P＜0.05）.与空白对照组相比,HIF-2α siRNA组细胞对顺铂的敏感性明显增加,各时间点的IC50值均显著降低,差异有统计学意义（均P＜0.01）.结论：靶向HIF-2α的siRNA表达载体能够有效抑制HIF-2α基因的表达,从而逆转A549细胞对顺铂的化疗耐药性.     

沉默缺氧诱导因子-1α对卵巢癌化疗敏感性的影响

目的观察沉默缺氧诱导因子HIF-1α对卵巢癌细胞化疗敏感性的相关影响并探讨其机理。方法构建HIF-1α基因短发夹RNA真核表达质粒,并转染卵巢癌细胞SKOV3（人卵巢浆液性囊腺癌细胞株）。实验可分为空白组,非特异对照组（转染pNonspecific-siRNA,即SKOV3NS）,目的siRNA组（转染pHIF-siRNA,即SKOV3siRNA）3组,用RT-PCR及Western Blot法分别检测各组HIF-1α基因的mRNA和蛋白的表达水平。细胞经过20μmol/L顺铂作用后,用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术（FCS）检测细胞凋亡率。结果 SKOV3siRNA转染组HIF-1α基因在mRNA水平和蛋白水平表达均明显降低,SKOV3siRNA组肿瘤细胞的生长抑制率和细胞凋亡率均明显增高（P〈0.05）。结论 RNA干扰技术沉默HIF-1α能够有效地抑制卵巢癌SKOV3细胞HIF-1α基因表达,增强其对化疗药物顺铂的敏感性。     

缺氧诱导因子-1α基因沉默对食管鳞癌细胞体外生长的影响

目的:探讨食管鳞癌细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因与食管鳞癌细胞增殖活力和细胞周期的关系。方法:以RNA干扰方法构建出HIF-1α基因沉默食管鳞癌细胞株,通过Westernblot检测HIF-1α基因在细胞中的表达,通过流式细胞术分析了解HIF-1α基因沉默后细胞周期的变化,通过细胞增殖实验观察HIF-1α基因沉默细胞与对照细胞、模拟缺氧细胞增殖活性的差异。结果:细胞增殖实验发现沉默HIF-1α基因后的Eca-109细胞增殖活力较对照细胞明显低下,为对照细胞的62.6%(0.4768±0.1743vs0.7611±0.2165,P=0.012),流式细胞仪分析表明,HIF-1α基因沉默后的Eca-109细胞与对照细胞相比,G1/G0期细胞明显增加(P<0.05),G2/M期细胞变化不大,S期细胞比例明显减少。结论:核糖核酸干扰HIF-1α的表达后,能抑制鳞癌细胞的增殖活力,并可能阻滞肿瘤细胞周期,抑制HIF-1α的表达,有可能导致肿瘤生长的抑制。     

靶向沉默Notch1基因对骨髓瘤细胞增殖的影响

目的:明确沉默Notch1基因对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响,寻找骨髓瘤治疗的新靶点。方法:在多发性骨髓瘤RPMI8226细胞中转染Notch1-shRNA靶向沉默Notch1基因,用CCK-8及流式细胞术评价Notch1基因沉默后骨髓瘤细胞增殖和凋亡的变化,应用荧光定量PCR方法分析Notch1 mRNA表达变化,用Western blot方法检测Notch信号通路相关蛋白Hes-1、Jagged-1、Jagged-2、BCL-2、PTEN、AKT、p-AKT的表达变化。结果:骨髓瘤细胞转染Notch1-shRNA后Notch1基因和蛋白表达均受到显著抑制,Notch1 mRNA相对表达量下调(66±0.1)%,Notch1蛋白相对表达量下调(88.0±3.4)%,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。转染后48 h实验组细胞增殖的速度明显减低;流式细胞术结果显示实验组瘤细胞凋亡明显增加;Notch1基因沉默后下游蛋白Hes-1、p-AKT和BCL-2表达水平明显下调,PTEN表达水平明显升高。结论:靶向沉默Notch1基因可以抑制骨髓瘤细胞增殖,促进细胞凋亡进程,其作用机制与p-AKT信号活化和PTEN基因功能复活有关,Notch1信号可作为潜在的骨髓瘤治疗靶点。     

DLL4/Notch1配体过表达抑制K562细胞生长机制研究

本研究旨在探讨Notch1信号通路的配体delta-like ligand4（DLL4）基因过表达对K562细胞增殖的影响及其可能的作用机制.采用脂质体介导将含配体DLL4基因的质粒pBudCE4.1-DLL4转染K562细胞,通过RT-PCR和Western blot检测转染48 h后DLL4基因的mRNA及蛋白表达,同样检测转染后Notch1受体胞内区（NICD）、下游靶基因Hesl的mRNA及蛋白表达;通过Western blot检测与Notch信号通路相关的细胞转录因子YY1、原癌基因C-MYC及抑癌基因Rb蛋白的表达水平;用CCK-8法检测转染后细胞的增殖情况;用流式细胞术检测转染质粒48 h后各组细胞的凋亡情况.结果表明,DLL4基因转染后的K562细胞中DLL4、NICD及下游靶基因Hesl的mRNA及蛋白表达量比对照组明显增多（P＜0.05）,说明DLL4的过表达激活了Notch1信号通路;Western blot方法检测显示,DLL4的转染增加了细胞转录因子YY1、原癌基因C-MYC及抑癌基因Rb蛋白的表达,从而抑制了K562细胞的生长,诱导细胞周期停滞于G1期及细胞凋亡的增加.结论：外源性DLL4基因过表达可有效活化K562细胞内Notch1信号通路,可能通过YY1、C-MYC及Rb等Notch信号通路相关基因的高表达诱导K562细胞的生长减慢及细胞凋亡.     

shRNA干扰AKT基因对Jeko-1细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默AKT基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响。方法:设计针对AKT基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建AKT shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白信号及通路相关蛋白p-AKT、Notch1、HES1的变化。结果:AKT shRNA转染Jeko-1细胞后,AKT的mRNA和蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P0.05);转染组细胞增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P0.05),AKT shRNA传染48 h后,凋亡率为(37.72±4.39)%,而NegshRNA组和空白对照组分别为(2.62±1.53)%、(1.57±0.42)%,差异有统计学意义(P0.01);凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、caspase-3、caspase-9表达上升;PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT磷酸化水平下降、Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下调。结论:干扰沉默AKT基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是特异性抑制PI3K/AKT信号通路也能下调Notch1信号通路的活性。     

纳米介导的缺氧诱导因子1α小干扰RNA抑制人食管鳞癌TE-1细胞生长

背景:纳米微粒作为一种比较理想的非病毒基因递送载体,具有无免疫原性和致瘤性等优越性.利用纳米技术和基因干扰技术阻断缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1α)在食管鳞癌组织的表达,降低癌细胞对化疗药物的耐药性,理论上成为能够抑制食管癌细胞生长的有效方法.目的:探讨HIF-1α小干扰RNA纳米微粒对人食管鳞癌TE-1细胞生长的抑制作用.设计、时间及地点:以体外培养的食管鳞癌TE-1细胞为对象,基因水平完全随机对照实验,于2007-01/2008-12在中山大学附属第三医院中心实验室完成.材料:由上海生物工程公司合成HIF-1α小干扰RNA,采用超声乳化法制备纳米微粒.人食管鳞癌TE-1细胞株购自中科院上海细胞库.方法:体外培养的人食管鳞癌TE-1细胞分为4组:分别为生理盐水组,不含基因的纳米微粒组,HIF-1α小干扰RNA组,HIF-1α小干扰RNA纳米微粒组.主要观察指标:RT-PCR检测HIF-1αmRNA的表达,Western-blot法检测HIF-1α蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;MTT法检测细胞增殖情况.结果:处理72 h后HIF-1α小干扰RNA纳米微粒组细胞的HIF-1αmRNA表达和HIF-1α蛋白表达低于其他3组(P＜0.01),细胞凋亡率高于其他3组(P＜0.01).HIF-1α小干扰RNA纳米微粒组细胞增殖受明显抑制,生长缓慢,与其他3组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).结论:HIF-1α小干扰RNA纳米微粒能够有效减少食管鳞癌TE-1细胞的HIF-1αmRNA和蛋白的表达,提高肿瘤细胞的凋亡,显著抑制TE-1细胞的生长.     

低氧诱导因子1α在G-CSF诱导小鼠造血干细胞动员中的表达变化

目的:探究小鼠骨髓微环境低氧诱导因子1α(HIF-1α)在G-CSF动员造血干细胞(HSC)过程中的表达变化及相关机制。方法:采用流式细胞术检测注射G-CSF前后小鼠外周血Lin^-Sca-1⁺c-kit⁺(LSK)细胞比例，并采用RQ-PCR、免疫组化等方法检测G-CSF动员不同时间点小鼠骨髓及骨内膜HIF-1α、骨钙素(OCN)mRNA和蛋白的表达水平，光学显微镜下观察小鼠股骨标本成骨细胞数。结果:G-CSF动员4 d小鼠外周血LSK细胞比例开始升高，动员5 d达到高峰，均较对照组显著升高(P<0.05);稳态小鼠HIF-1α mRNA在骨髓有核细胞和骨内膜成骨细胞中表达差异无显著统计学意义(P=0.073),OCN mRNA主要表达于骨内膜细胞，显著高于骨髓有核细胞(P=0.034);动员过程中HIF-1α基因、蛋白表达水平升高，OCN基因、蛋白表达水平下降，骨内膜成骨细胞数量减少(P<0.05);HIF-1α的表达变化晚于OCN(P=0.004),且与小鼠外周血LSK细胞比例变化趋势一致(P=0.000...     

低氧对Jurkat细胞低氧诱导因子-1α及其类泛素化的影响及意义

目的 探讨低氧条件下Jurkat细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)类泛素化的变化对其基因转录活性和蛋白稳定性的影响,以及对下游靶基因转录活性调控的影响和意义.方法 氯化钴(CoCl2)化学缺氧法模拟肿瘤缺氧不同时间,分别用荧光定量PCR、Western blot法检测HIF-1α基因及蛋白稳定性的变化,类泛素-1(SUMO-1)、类泛素蛋酶-1(SENP-1)蛋白水平的表达,VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1和survivin等基因转录活性的变化.结果 在缺氧诱导4、8、16、48、72 h后,HIF-1α基因转录活性分别为缺氧诱导前的(0.79 ±0.19)、(2.65±2.05)、(4.19±4.72)、(2.77±3.37)、(0.09±0.05)、(0.69±0.55)倍(P>0.01),而蛋白稳定性逐渐增高后减低(P<0.01).SEN-1蛋白的表达与SUMO-1蛋白表达呈相反趋势,前者逐渐增高后减低,而后者逐渐减低后增高(P<0.01).除survivin 基因外,VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1基因转录水平与HIF-1α蛋白稳定性相平行.结论 缺氧引起SENP-1表达变化,通过减低HIF-1α蛋白类泛素化作用而影响HIF-1α稳定性,从而改变下游VEGF、mdr1、mdr3、Mcl-1等基因的转录活性而最终影响细胞牛物学过程.     

缺氧对DEC1在肝癌细胞中表达的影响

目的探讨肝癌中分化型胚胎软骨发育基因1(differentiated embryo-chondrocyte expressed gene 1,DEC1)的表达水平,并评价缺氧对其表达的影响。方法选取人正常肝细胞系QSG-7701及肝癌细胞系BEL-7402、SMMC-7721,分别进行正常氧培养和缺氧培养(0、2、4、6、24和48 h),用RT-PCR和western blot检测各组缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)、DEC1 mRNA及蛋白质的水平,并进行相关性分析。结果正常氧培养时,BEL-7402、SMMC-7721细胞DEC1 mRNA和蛋白质表达均明显高于QSG-7701细胞(P均<0.01)。不同时相缺氧时HIF-1αmRNA表达无明显变化(F=1.995,P>0.05),但随缺氧时间延长,HIF-1α蛋白、DEC1 mRNA及DEC1蛋白表达显著增加(F分别为18.950、92.567和15.775,P均<0.01)。HIF-1α蛋白与DEC1 mRNA及DEC1蛋白的表达均呈正相关(r分别为0.885、0.826,P均<0.05)。结论 DEC1在人肝癌细胞中高表达,缺氧可诱导肝癌细胞中DEC1表达升高。     

金雀异黄素对氯化钴诱导的白血病K562细胞缺氧诱导因子-1α表达抑制作用的研究

为探讨金雀异黄素（genistein,gen）对氯化钴（CoCl2）诱导的人白血病细胞K562缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达的影响,本研究采用低氧模拟剂CoCl2模拟低氧环境。实验分为量-效关系组和时-效关系组,前者CoCl2取0、50、100及150μmol/L4个浓度点,培养72小时进行检测;后者则在CoCl2取100μmol/L浓度的基础上,选取0、24、48和72小时4个时间点进行检测。gen干预实验分为：①正常对照组;②CoCl2150μmol/L组;③CoCl2150μmol/L加gen50μmol/L组;④CoCl2150μmol/L加gen100μmol/L;组⑤CoCl2150μmol/L加gen200μmol/L组,培养72小时检测。采用RT-PCR及Western blot的方法分别检测HIF-1α mRNA及蛋白表达水平。结果发现：CoCl2诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达增加,并呈明显的浓度和时间依赖性关系（p〈0.01）;而对HIF-1α mRNA的表达无显著影响（p〉0.05）;gen呈明显浓度依赖性地抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α蛋白表达（p〈0.01）,对K562细胞HIF-1α mRNA表达无显著影响（p〉0.05）。结论：CoCl2呈浓度和时间依赖性诱导K562细胞HIF-1α蛋白的表达,无论常氧还是在CoCl2诱导下,HIF-1α mRNA呈组成型表达;gen可抑制CoCl2诱导的K562细胞HIF-1α的表达,这种抑制作用与mRNA水平无关,主要在蛋白水平。     

TACC2/p300/HIF-1α信号通路对结直肠癌增殖影响的研究

目的探讨靶向沉默TACC2基因的表达对人结直肠癌Lo Vo细胞增殖的影响及其主要机制。方法检测结直肠癌组织、癌旁正常组织和人结直肠癌细胞系Lo Vo、HCT116及SW480细胞中TACC2蛋白的表达,设计针对TACC2基因的siRNA,阴性对照siRNA-NC及及空白对照组Blank,检测各组对TACC2基因的沉默效果。MTT法检测siRNA、siRNA-NC和Blank各组细胞增殖能力,采用Western blot检测沉默TACC2对p300表达及HIF-1α表达的影响,活性光度法检测p300-HAT活性。结果 TACC2在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织。人结直肠癌细胞系Lo Vo中TACC2蛋白的表达明显高于HCT116和SW480细胞系。siRNA在各组中有最强的基因沉默效果。与siRNA-NC和Blank组相比,siRNA组细胞增殖能力明显降低(P 0. 05),沉默TACC2基因后p300表达无明显下降,但p300-HAT活性及HIF-1α表达明显降低。结论沉默TACC2基因可有效抑制结直肠癌细胞增殖,其作用机制可能与下调TACC2/p300/HIF-1α信号通路有关。     

小干扰RNA抑制PTTG基因对人胰腺癌细胞PANC-1侵袭能力的影响

目的研究P1TG基因沉默对胰腺癌细胞侵袭力的影响,探讨其与胰腺癌细胞侵袭性的关系及调控机制。方法阳离子脂质体转染PITG siRNA对PANC-1中的PITG基因进行干扰;利用RT-PCR和Western blot技术检测其基因沉默效应;通过Transwell小室法测定PANC-1细胞侵袭能力的改变。结果转染PTTG siRNA后,PANC-1细胞中PTTG的mRNA转录和蛋白表达受抑,显著低于未经处理的PANC-1细胞（P〈0．01）。利用PITGsiRNA对PITG进行RNA干扰后,PANC-1细胞的侵袭能力下降。结论设计的PITGsiRNA能有效抑制体外培养PANC-1细胞中PTIG的mRNA转录和蛋白表达水平,实现其基因沉默效应。P1TG与人胰腺癌的侵袭能力密切相关,其表达水平下降导致细胞侵袭能力降低。     

针刺督脉组穴对血管性痴呆大鼠海马CA1区NGB与HIF-1α表达的影响

目的：研究针刺对血管性痴呆（VD）大鼠海马CA1区脑红蛋白（Ngb）和低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法：随机分为假手术组、VD模型组以及电针治疗组,选用改良双侧CCA阻断法（2-VO）法建立VD大鼠模型,分别于造模后第3天和针刺治疗结束后,使用Morris水迷宫检测大鼠认知水平,Tunel法观察海马细胞形态,并检测各组海马中的ATP浓度,Western blot法检测Ngb和HIF-1α表达水平,RT-PCR法检测p53RFPmRNA、NgbmRNA、HIF-1αmRNA表达水平。结果：与假手术组比较,造模后大鼠的学习记忆功能受损,海马神经细胞凋亡增加,Ngb水平应激性升高（P<0.05）,HIF-1α表达水平增高（P<0.05）;较模型组,针刺组大鼠的学习记忆能力及神经元凋亡情况显著改善,ATP浓度增加,p53RFPmRNA下将,Ngb和HIF-1α表达水平显著增高（P<0.05）。结论：针刺可以通过增加海马区Ngb和HIF-1α的表达水平,抑制海马神经元的凋亡,从而改善血管痴呆模型动物学习记忆。     

Notch基因在慢性淋巴细胞白血病细胞的表达和介导抗凋亡、耐药机制的研究

目的:检测原代慢性淋巴细胞白血病细胞Notch基因的表达情况;研究阿糖胞苷及地塞米松作用后肿瘤细胞Notch蛋白的变化,探讨Notch基因介导慢性淋巴细胞白血病抗凋亡及耐药机制。方法:采集慢性淋巴细胞白血病24例初治患者的骨髓血或外周血单个核细胞,以健康体检者14例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测Notch及BCL-2、NF-κB基因的转录水平;应用Western blot检测L1210细胞株在化疗药物阿糖胞苷、地塞米松作用后Notch蛋白的变化。结果:CLL组的Notch1、Notch2、BCL-2、NF-κB基因的mRNA水平表达明显高于正常对照组,分别为0.8556±0.8726和0.6731±0.5334(P=0.0182)、1.2273±0.8207和0.6577±0.6424(P﹤0.0001)、8.0960±7.5661和0.5969±0.4976(P﹤0.0001)、1.0966±0.6925和0.5373±0.7180(P﹤0.0001),而2组的Notch3和Notch4基因的mRNA水平未见明显差异,分别为1.1914±2.4219和0.8713±0.7937(P=0.3427)、0.8174±1.0869和0.9752±1.3446(P=0.2402);L1210细胞在低浓度、中浓度阿糖胞苷作用24 h后,Notch1蛋白表达明显下降,在高浓度阿糖胞苷或延长中浓度阿糖胞苷组的作用时间,Notch1蛋白表达量增高。L1210细胞在地塞米松作用后,Notch1蛋白表达下降,但不随地塞米松的浓度及作用时间的变化而变化。结论:慢性淋巴细胞白血病细胞Notch基因转录水平明显高于正常人。Notch1蛋白在阿糖胞苷和地塞米松抑制肿瘤细胞增殖过程中表达下调。Notch信号通路可能介导慢性淋巴细胞白血病细胞抗凋亡及耐药过程。     

神经母细胞瘤细胞急性缺氧后不协调类33磷蛋白1和缺氧诱导因子-1α蛋白的表达变化

目的 探讨具有神经元特性的神经母细胞瘤细胞在急性缺氧后不协调类33磷蛋白1(Ulip1)与缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平的变化.方法 选择具有神经元特性的神经母细胞瘤细胞株KCNR和BE2,将细胞分别置于正常氧浓度(体积分数为20%O2)和缺氧条件下(1%O2)处理4 h,提取蛋白.采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)定量测定Ulip1和HIF-1α表达.结果 在KCNR和BE2细胞急性缺氧4 h后,HIF-1α表达水平均显著升高,Ulip1的两个异构体Ulip1a和Ulip1b表达水平均降低;其中HIF-1α表达水平在KCNR细胞内升高了1.6倍,在BE2细胞内升高了2.9倍;Ulip1a在KCNR细胞内降低了55%,在BE2细胞内降低了20%;Ulip1b在KCNR细胞内降低了44%,在BE2细胞内降低了13%.结论 Ulip1可能通过影响HIF-1α参与了缺氧诱导的神经细胞损伤及之后的修复过程.     

低氧及其模拟物CoCl2下调Foxp3的表达不依赖于HIF-1α

本研究探讨低氧条件下人T-淋巴细胞白血病Jurkat细胞株F0xp3表达水平及在该过程中HIF-1α的作用,并研究低氧影响调节性T细胞功能的作用机制。应用低氧（1％CO2）及其模拟化合物CoCl2处理Jurkat细胞并在不同时相后用Western blot检测HIF-1表达情况,同时应用real-timePCR检测Foxp3表达水平;应用RNA干扰技术抑制Jurkat细胞HIF—1α基因表达,然后分别检测HIF-1α及Foxp3的表达水平。结果表明：Jurkat细胞经过低氧（1％CO2）及其模拟化合物CoCl2处理后,HIF-1α有明显累积,而Foxp3表达明显下降;Jurkat细胞的HIF-1基因经siRNA干扰抑制后,低氧模拟化合物CoCl2依然可以下调Foxp3表达。结论：低氧及其模拟物CoCl2可以明显下调Foxp3表达,但该过程不依赖于HIF-1。