尾加压素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮和前列环素的影响

目的：观察不同浓度的尾加压素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮、前列环素，以及对一氧化氮合酶活性的影响，进而探讨尾加压素Ⅱ舒张血管的机制。 方法：实验于2005-04／08在武汉大学人民医院老年病科实验室完成。根据所加人尾加压素Ⅱ的浓度不同（10^-9 -10^-7 mol/L），将体外培养的人脐静脉内皮细胞随机分为4组：空白对照组、10^-9 mol/L组、10^-8 mol／L组及10^-7mol／L组。干预24h后，用化学比色法检测细胞培养上清液中NO2^-，NO3^-的水平及一氧化氮合酶的活性，用放射免疫法检测碘[125Ⅰ]6-酮前列腺素F1α的水平。 结果：①一氧化氮水平：后三组与空白对照组相比，NO2^-，NO3^-的含量呈浓度依赖性增加，其中10^-7 mol／L浓度组显著高于空白对照组（21．37&;#177;2．21，16．51&;#177;1．33，P〈0．01）。②一氧化氮合酶活性：后三组与空白对照组相比，一氧化氮合酶呈浓度依赖性增加，其中10^-7 mol／L浓度组显著强于空白对照组（70．65&;#177;15．63，36．62&;#177;11．16，P〈0．01）。③前列环素水平：后三组与空白对照组相比，6-酮前列腺素F1α含量呈浓度依赖性增加，其中10^-7 mol／L浓度组显著高于空白对照组（572．69&;#177;1．86，563．93&;#177;2．66．P〈0．01）。 结论：尾加压素Ⅱ能刺激人脐静脉内皮细胞释放一氧化氮及前列环素．提示尾加压素Ⅱ可能通过刺激一氧化氮和前列环素的产生而发挥舒张血管的作用。     

搏动信号对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合成酶表达的影响

目的：观察搏动信号对人脐静脉内皮细胞中反映内皮细胞活性的内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响。 方法：实验于2004-06／2005-03在湘雅二医院心胸外科生物材料研究室和上海生物工程有限公司进行。将取自剖宫产产妇自愿捐献的无菌脐带的人脐静脉内皮细胞培养、传代，传4代后分为两组：①搏动培养组：先静放6-8h待细胞贴壁后，用自行设计的细胞搏动培养装置，进行搏动培养。搏动参数：搏动频率150次／min，搏出量0．3mL／次，搏动产生的压力30／9mmHg（1mmHg=0．133kPa）。②静态培养组：不进行搏动，其余条件同搏动培养组。每组每个时间点5个样本。用反转录-聚合酶链反应方法，分别在第1，2，4，6，9，12，15，18天检测两组的人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达水平（相对吸光度值）。 结果：人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶mRNA表达：①培养第1，4天，静态培养组明显高于搏动培养组（1．0&;#177;0．55比1．10&;#177;0．35；1．17&;#177;0．23比1．42&;#177;0．44，P〈0．05）。②培养第2天两组比较差异不显著（1．16&;#177;0．18比1．25&;#177;0．35，P〉0．05）。③培养第6，9，12，15，18天，搏动培养组明显高于静态培养组（1．52&;#177;0.14比1．27&;#177;0.30；1．60&;#177;0.19比1．16&;#177;0.33；1．68&;#177;0.44比0．99&;#177;0.31；1．7&;#177;0.24比1．1&;#177;0.94；1．7&;#177;0.16比1．0&;#177;0.28，P〈0．05）。 结论：搏动信号能提高人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶的表达。提示搏动信号在维持细胞发挥正常的生理功能方面起到重要的作用，能增强细胞的生物活性。     

搏动信号对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合成酶表达的影响

目的:观察搏动信号对人脐静脉内皮细胞中反映内皮细胞活性的内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响。方法:实验于2004-06/2005-03在湘雅二医院心胸外科生物材料研究室和上海生物工程有限公司进行。将取自剖宫产产妇自愿捐献的无菌脐带的人脐静脉内皮细胞培养、传代,传4代后分为两组:①搏动培养组:先静放6～8h待细胞贴壁后,用自行设计的细胞搏动培养装置,进行搏动培养。搏动参数:搏动频率150次/min,搏出量0.3mL/次,搏动产生的压力30/9mmHg(1mmHg=0.133kPa)。②静态培养组:不进行搏动,其余条件同搏动培养组。每组每个时间点5个样本。用反转录-聚合酶链反应方法,分别在第1,2,4,6,9,12,15,18天检测两组的人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶mRNA的表达水平(相对吸光度值)。结果:人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶mRNA表达:①培养第1,4天,静态培养组明显高于搏动培养组(1.0±0.55比1.10±0.35;1.17±0.23比1.42±0.44,P<0.05)。②培养第2天两组比较差异不显著(1.16±0.18比1.25±0.35,P>0.05)。③培养第6,9,12,15,18天,搏动培养组明显高于静态培养组(1.52±0.14比1.27±0.30;1.60±0.19比1.16±0.33;1.68±0.44比0.99±0.31;1.7±0.24比1.1±0.94;1.7±0.16比1.0±0.28,P<0.05)。结论:搏动信号能提高人脐静脉内皮细胞的内皮型一氧化氮合酶的表达。提示搏动信号在维持细胞发挥正常的生理功能方面起到重要的作用,能增强细胞的生物活性。     

恒磁场对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶活性的影响

目的:观察恒磁场(staticmagneticfield,SMF)对培养的人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendotheliumcell,HUVEC)一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,NOS)活性表达的影响,以探讨SMF能否用于经皮腔内冠状动脉成形术(percutaneoustransluminalcoronaryangioplasty,PTCA)及冠脉内支架植入术后冠脉再狭窄(restenosis,RS)的防治。方法:用含100g/L小牛血清的DMEM培养液体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV304),分别在给予SMF和无SMF条件下培养,行ABC免疫酶染色法,采用图像分析法分析SMF对HUVEC的NOS活性的影响。结果:实验组内皮细胞结构型NOS(endotheliumconstructiveNOS,ecNOS)表达较对照组增强,差异显著(P<0.01),实验组与对照组诱生型NOS(inducedNOS,iNOS)均无表达。结论:恒磁场增强了培养的HUVEC的ecNOS的表达;恒磁场对PTCA支架植入术后的冠脉再狭窄可能具有防治作用。     

川芎嗪对缺氧损伤的人脐静脉内皮细胞分泌一氧化氮的影响

目的 观察川芎嚎对缺氧损伤的人脐静脉上皮细胞分泌一氧化氰功能的影响。方法 以连二亚硫酸钠作为耗氧剂，建立体外人脐静脉上皮细胞缺氧损伤模型，与不同浓度的川芎嗪共同孵育后测定细胞培养液中的一氧化氮和一氧化氮合酶的含量。结果 在以终浓度为1μmol／L的川芎嚎的条件下。细胞培养液中的一氧化氮和一氧化氮合酶的含量显著高于模型组（P〈0．05，P〈O．01）。结论 川芎嗪能提高缺氧损伤造成的内皮细胞一氧化氮合酶的活性，增加分泌一氧化氮分泌。     

川芎嗪对缺氧损伤的人脐静脉内皮细胞分泌一氧化氮的影响

目的观察川芎嗪对缺氧损伤的人脐静脉上皮细胞分泌一氧化氮功能的影响。方法以连二亚硫酸钠作为耗氧剂,建立体外人脐静脉上皮细胞缺氧损伤模型,与不同浓度的川芎嗪共同孵育后测定细胞培养液中的一氧化氮和一氧化氮合酶的含量。结果在以终浓度为1μmol/L的川芎嗪的条件下,细胞培养液中的一氧化氮和一氧化氮合酶的含量显著高于模型组(P<0.05,P<0.01)。结论川芎嗪能提高缺氧损伤造成的内皮细胞一氧化氮合酶的活性,增加分泌一氧化氮分泌。     

尾加压素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的诱导凋亡作用,以及这种诱导作用与细胞内游离Ca2+的关系。方法:(1)光镜观察培养的静脉内皮细胞形态。(2)分成浓度组和时间组:浓度组加入不同浓度的UⅡ(10-9～10-6mol/L),并将硫氮唑酮加入对照组及10-7mol/L组;时间组则观察10-7mol/LUⅡ作用后不同时间段HUVEC的凋亡率。(3)流式细胞仪分析细胞周期,计算凋亡率。(4)电镜检测细胞凋亡。结果:(1)UⅡ促进HUVEC凋亡,二者呈时间依赖性(P<0.05);二者呈明显量效关系(P<0.05)。(2)硫氮唑酮可抑制UⅡ的诱导作用。结论:UⅡ可诱导HUVEC凋亡,其机制可能与[Ca2+]i升高有关。     

低频电磁场对培养的人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶的影响

目的：观察不同磁场强度,不同作用时间的低频电磁场（LFEMF）对培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）一氧化氮合酶（NOS）活性表达的影响,以探讨LFEMF用于经皮冠脉腔内成形术（PTCA）及支架植入（IVS）术后冠脉再狭窄（RS）防治的意义。方法：分别用不同磁场强度,不同作用时间的LFEMF作用于体外培养人脐静脉内皮细胞系ECV304,行ABC免疫酶染色法,图像分析法分析LFEMF对HUVEC的NOS表达的影响。结果：除60mT20min组,60mT30min组外,其余各实验组内皮细胞结构型NOS（ecNOS)表达均较对照组增强,差异显著（P＜0．05）。所有实验组与对照组诱生型NOS（iNOS)均无表达。结论：LFEMF增强了培养的HUVEC的ecNOS的表达,可能适用于RS的防治。     

低频电磁场对培养的人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶的影响

背景目前认为经磁场作用的酶,大多有增强活性的倾向,而关于低频电磁场(1owfrequency electromagneticfield,LFEMF)对培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性表达的影响研究不多见.目的探讨不同磁场强度,不同作用时间的LFEMF对HUVEC的NOS活性表达的影响,以探讨LFEMF用于经皮冠脉腔内成形术(percutanuoustransluminal coronary angioplasty,PTCA)及支架植入术后冠脉再狭窄防治的意义.设计随机对照的实验研究.地点、材料和干预本研究在解放军第四军医大学西京医院心内科实验室完成.体外培养的人脐静脉内皮细胞系ECV304按LFEMF的不同磁场强度,不同作用时间分为9个实验组和1个对照组进行干预.进行ABC免疫酶染色后图像分析法观察HUVEC的NOS表达.主要观察指标非磁场干预与不同强度磁场干预的体外培养的人脐静脉内皮细胞NOS结果.结果除60mT 20min组,60mT 30min组外,其余各实验组内皮细胞结构型NOS(Endothelium Constructive nitric oxide synthase,ecNOS)表达均较对照组增强,差异有显著性意义(P＜0.05).所有实验组与对照组诱生型NOS(Induced nitric oxide synthase,iNOS)均无表达.结论LFEMF增强了培养的HUVEC的ecNOS的表达,可能适用于再狭窄的防治.     

艾塞那肽对人脐静脉内皮细胞内皮型一氧化氮合酶的影响

目的:观察艾塞那肽对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的影响。方法:在正常葡萄糖(5.5mmol/L)或高糖(16.8mmol/L)条件下以50～5000pmol/L艾塞那肽孵育HUVECs,硝酸还原酶法检测HUVECs的一氧化氮(NO)释放量,荧光法检测细胞内eNOS活性,Westernblot法检测HUVECs内eNOS1177位丝氨酸磷酸化水平和总蛋白水平,realtimeRT-PCR检测eNOSmRNA水平。结果:正常葡萄糖条件下,艾塞那肽使HUVECs释放NO增加,提高细胞内eNOS活性及1177位丝氨酸磷酸化水平,提高eNOS总蛋白水平。高糖条件下,艾塞那肽仍具有上述作用,且可提高eNOSmRNA水平。结论:艾塞那肽可上调HUVECs中eNOS的活性和表达,使NO释放增加,可能是其发挥降压及血管内皮保护作用的机制之一。     

人脐静脉内皮细胞体外分离培养的改进及其鉴定

[目的]优化建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)体外原代及传代培养的方法,并对培养的细胞进行鉴定,为组织工程血管提供种子细胞。[方法]改进的胶原酶Ⅰ型灌注法分离HUVEC,用含胎牛血清及内皮细胞生长因子的RPMI—1640培养基培养,光镜、免疫组化法进行生物学鉴定。[结果]分离的HUVEC体外培养7～10d左右可长成单层,光镜下为多角形,呈铺路石状排列,人第Ⅷ因子相关抗原免疫组化检测阳性。[结论]改进的胶原酶Ⅰ型灌注法所分离细胞数量多,易成活,且为具有细胞生物学功能的HUVEC。     

久强脑立清对人脐静脉内皮细胞一氧化氮和内皮素分泌的影响

目的观察久强脑力清 (JNQ)含药血清对人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)分泌一氧化氮 (NO)和内皮素 (ET 1)的影响 ,探讨其对HUVECs血管活性分子分泌的调节作用。方法取原始JNQ含药血清体积分数的 80 %、40 %、2 0 %、10 %和 5 %作用于原代培养的HUVECs 2 4h后 ,分别检测上清中的NO和EI 1的含量。结果不同浓度的JNQ含药血清作用组的NO、ET 1含量与正常血清对照组比较增加 (P <0 0 5 ) ;NO/ET 1比值随着含药血清浓度的增加 ,比正常血清组增高 (P <0 0 5 )。结论JNQ含药血清通过提高HUVECs分泌NO和ET 1,具有保护内皮细胞功能和维持NO/ET 1平衡的作用     

恒磁场对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶活性的影响

目的：观察恒磁场（static magnetic field,SMF)对培养的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelium cell,HUVEC)一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS)活性表达的影响。以探讨SMF能否用于经皮腔内冠状动脉成形术（percutaneous transluminal coronary angioplasty,PTCA）及冠脉内支架植入术后冠脉再狭窄（restenosis,RS)的防治，方法：用含100g/L小牛血清的DMEM培养液体外培养人脐静脉内皮细胞（ECV304），分别在给予SMF和无SMF条件下培养，行ABC免疫酶染色法，采用图像分析法分析SMF对HUVEC的NOS活性的影响。结果：实验组内皮细胞结构型NOS（endothelium constructive NOS,ecNOS)的表达较对照组增强，差异显著（P＜0．01），实验组与对照组诱生型NOS（induced NOS,iNOS）均无表达。结论：恒磁场增强了培养的HUVEC的ecNOS的表达；恒磁场对PTCA支架植入术后的冠脉再狭窄可能具有防治作用。     

低频电磁场对培养的人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶的影响

背景：目前认为经磁场作用的酶，大多有增强活性的倾向，而关于低频电磁场(low frequency electromagnetic field，LFEMF)对培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVEC)一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)活性表达的影响研究不多见。目的：探讨不同磁场强度，不同作用时间的LFEMF对HUVEC的NOS活性表达的影响，以探讨LFEMF用于经皮冠脉腔内成形术(percutanuous transluminal coronary angioplasty，FFCA)及支架植入术后冠脉再狭窄防治的意义。设计：随机对照的实验研究。地点、材料和干预：本研究在解放军第四军医大学西京医院心内科实验室完成。体外培养的人脐静脉内皮细胞系ECV304按LFEMF的不同磁场强度，不同作用时间分为9个实验组和1个对照组进行干预：进行ABC免疫酶染色后图像分析法观察HUVEC的NOS表达。主要观察指标：非磁场干预与不同强度磁场干预的体外培养的人脐静脉内皮细胞NOS结果。结果：除60mT20min组，60mT30min组外，其余各实验组内皮细胞结构型NOS(Endothelium Constnmtive nitric oxide synthase，ecNOS)表达均较对照组增强，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。所有实验组与对照组诱生型NOS(Induced nitric oxide synthase，iNOS)均无表达。结论：LFEMF增强了培养的HUVEC的ecNOS的表达，可能适用于再狭窄的防治。     

人巨细胞病毒感染对人脐静脉内皮细胞周期和凋亡的影响——动脉粥样硬化发生的可能病因

目的：探讨人巨细胞病毒感染对人脐静脉内皮细胞细胞周期和细胞凋亡的影响。方法：实验于2003—06／2004／06在解放军第四军医大学老年病二科和解放军第四军医大学基础部生理学教研室完成。①细胞来源及分组：将液氮中冻存的人巨细胞病毒AD169株，用人胚肺成纤维细胞进行增殖培养6-8代；将人脐静脉内皮细胞消化成单细胞悬液，用DMEM培养基重新悬浮，细胞以一传三种于培养瓶继续培养至细胞贴壁并已伸展但未汇合，用台盼蓝拒染法检查活细胞数大于95％，对照组为空白对照，实验组接种人巨细胞病毒169病毒株。②组织学及实验室检查：凋亡的人脐静脉内皮细胞形态学特点在倒置相差显微镜下观察。两组人脐静脉内皮细胞增殖情况采用四甲基偶氮唑蓝比色法，以酶联免疫检测仪测得的A490值表示。两组人脐静脉内皮细胞的细胞周期变化采用流式细胞技术（在荧光激活细胞分选仪上进行细胞周期分析）；检测两组人脐静脉内皮细胞的细胞凋亡情况以Annex—in V染色法的以荧光强度判定。结果：①凋亡的人脐静脉内皮细胞形态学特点：正常的生长融合的人脐静脉内皮细胞呈铺路石状镶嵌排列，细胞边界清楚，胞浆丰富，胞核椭圆居中，核仁明显；凋亡的细胞有的变成大细胞。②人巨细胞病毒对人脐静脉内皮细胞增殖的影响：人巨细胞病毒感染人脐静脉内皮细胞后24h，对照组与人巨细胞病毒组A490值分别为1．09&;#177;0．08与2．08&;#177;0．09（t=7．96，P〈0．05）。③人巨细胞病毒对人脐静脉内皮细胞细胞周期的影响：正常对照组G0／G1期的细胞为74．4％，加入人巨细胞病毒后为59．3％，较正常对照组降低20．3％（P〈0．05）。④人巨细胞病毒对人脐静脉内皮凋亡的影响：正常对照组凋亡细胞为8.3％，当加人人巨细胞病毒后为5.8％，较对照组降低30．1％（P〈0．01）。结论：人巨细胞病毒感染人脐静脉内皮细胞后，引起细胞生长周期和凋亡水平的改变增加G0／G1期细胞进入S和G2／M期，降低细胞凋亡，导致细胞最终表现为增殖。     

明胶对人脐静脉内皮细胞株细胞相容性影响的研究

目的探讨明胶对人脐静脉内皮细胞株(HUVECs)细胞生长的影响。方法建立后干扰(模型1)及预干扰(模型2)的细胞模型,采用MTT法和倒置光镜动态观察细胞生长状态及观察不同分子量明胶(40000道尔顿、60000道尔顿、70000道尔顿)、不同质量分数(5%、10%、15%)对HUVECs细胞相容性的影响。实验分为10组:对照组,明胶Aa、Ab、Ac组(明胶分子量为40000道尔顿,明胶溶液浓度分别为5%、10%、15%),明胶Ba、Bb、Bc组(明胶分子量为60000道尔顿,明胶溶液浓度分别为5%、10%、15%),明胶Ca、Cb、Cc组(明胶分子量为70000道尔顿,明胶溶液浓度分别为5%、10%、15%)。结果 (1)倒置光镜动态观察显示:模型1:对照组HUVECs呈正常生长状态,3个时间段(24、48、72h)细胞形态及密度无明显变化,而与对照组比较,明胶各实验组细胞大量死亡,仅少数细胞贴壁存活;模型2:对照组HUVECs呈正常生长状态,与对照组比较,3个时间段(24、48、72h)内明胶各实验组细胞生长状态好,无明显差异,并于72h时出现细胞密度明显增加的现象。(2)MTT检测:模型1:与对照组比较,明胶各实验组3个时间段(24、48、72h)细胞增殖有明显降低,至72h,HUVECs增殖无明显增加;模型2:与对照组比较,随着观察时间增加,3个时间段(24、48、72h)明胶各实验组细胞增殖逐渐增加,其中48h明胶Aa组、72h明胶Cc组两组与对照组HUVECs细胞增殖比较差异有统计学意义(P0.05)。结论在本研究范围内,采用预干扰模型(模型2)对较高分子量明胶进行细胞实验较适合;较高分子量明胶可能对微血管在一定时间内的修复与重建有促进作用。     

人巨细胞病毒感染对人脐静脉内皮细胞周期和凋亡的影响动脉粥样硬化发生的可能病因

目的探讨人巨细胞病毒感染对人脐静脉内皮细胞细胞周期和细胞凋亡的影响. 方法实验于2003-06/2004/06在解放军第四军医大学老年病二科和解放军第四军医大学基础部生理学教研室完成.①细胞来源及分组将液氮中冻存的人巨细胞病毒AD169株,用人胚肺成纤维细胞进行增殖培养6～8代;将人脐静脉内皮细胞消化成单细胞悬液,用DMEM培养基重新悬浮,细胞以一传三种于培养瓶继续培养至细胞贴壁并已伸展但未汇合,用台盼蓝拒染法检查活细胞数大于95%,对照组为空白对照,实验组接种人巨细胞病毒169病毒株.②组织学及实验室检查凋亡的人脐静脉内皮细胞形态学特点在倒置相差显微镜下观察.两组人脐静脉内皮细胞增殖情况采用四甲基偶氮唑蓝比色法,以酶联免疫检测仪测得的A490值表示.两组人脐静脉内皮细胞的细胞周期变化采用流式细胞技术(在荧光激活细胞分选仪上进行细胞周期分析);检测两组人脐静脉内皮细胞的细胞凋亡情况以AnnexinV染色法的以荧光强度判定. 结果①凋亡的人脐静脉内皮细胞形态学特点正常的生长融合的人脐静脉内皮细胞呈铺路石状镶嵌排列,细胞边界清楚,胞浆丰富,胞核椭圆居中,核仁明显;凋亡的细胞有的变成大细胞.②人巨细胞病毒对人脐静脉内皮细胞增殖的影响人巨细胞病毒感染人脐静脉内皮细胞后24 h,对照组与人巨细胞病毒组A490值分别为1.09±0.08与2.08±0.09(t=7.96,P＜0.05).③人巨细胞病毒对人脐静脉内皮细胞细胞周期的影响正常对照组G0/G1期的细胞为74.4%,加入人巨细胞病毒后为59.3%,较正常对照组降低20.3%(P＜0.05).④人巨细胞病毒对人脐静脉内皮凋亡的影响正常对照组凋亡细胞为8.3%,当加入人巨细胞病毒后为5.8%,较对照组降低30.1%(P＜0.01). 结论人巨细胞病毒感染人脐静脉内皮细胞后,引起细胞生长周期和凋亡水平的改变增加G0/G1期细胞进入S和G2/M期,降低细胞凋亡,导致细胞最终表现为增殖.     

氧自由基对培养人脐静脉内皮细胞代谢产物的影响

目的：观察氧自由基对培养的人脐静脉内皮细胞产生的裂解不对称二甲精氨酸的酶--二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶活性及表达的影响，以探讨不对称二甲精氨酸代谢机斜及卡托普利的作用。方法：实验于2003—05／2004—06在南昌大学医学分子中心进行。采用改良的Jaffe法培养人脐静脉内皮细胞，取生长良好的3～6代人脐静脉内皮细胞分为4组：①空白对照组：加DMEM培养液。②氧自由基0．01，0.1mmol／L组：分别加入氧自由基0.01，0.1mmol／L。③卡托普利组：同时加入氧自由基0.1mmol／L及卡托普利（100mg／L）共孵。孵育24h后，检测上清液中一氧化氮、一氧化氮合酶活性、内皮细胞的代谢产物不对称二甲精氨酸浓度以及反应二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶酶活性的L-瓜氨酸浓度，采用Western blotting测定细胞裂解液中二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的蛋白表达。结果：①二甲精氨酸浓度：氧自由基0，01，0.1mmol／L组均高于空白对照组[（2．71&;#177;0．35），（4．78&;#177;0．67），（0．81&;#177;0．12）μmol／L，P〈0．05，0．01]，卡托普利组低于氧自由基0．1mmol／L组[（2．03&;#177;0．35）μmol／L．P〈0．01]。②L-瓜氨酸浓度：氧自由基0．01，0．1mmol／L组均低于空白对照组（P〈0．05，0．01）．卡托普利组高于氧自由基0．1mmol／L组（P〈0．01）。③一氧化氮浓度及一氧化氮合酶活性：氧自由基0．01，0．1mmol／L组均低于空白对照组（P〈0．05，0．01），卡托普利组高于氧自由基0．1mmol／L组（P〈0．01）。④二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的蛋白表达：各组间无差异（P〉0．05）。结论：氧自由基培养下，内皮损伤，不对称二甲精氨酸的增加与二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶的活性减弱有关，与其蛋白的表达无关。而卡托普利则通过增加二甲精氨酸-二甲赖氨酸水解酶活性促进不对称二甲精氨酸代谢，使一氧化氮合酶活性增加，抑制氧自由基对内皮功能的损伤。     

人脐静脉内皮细胞体外培养、鉴定与形态学特征观察

目的：建立人血管内皮细胞的培养模型，为体外研究动脉硬化发病机制提供重要的实验手段。方法：采用1．25g／L胰蛋白酶(2．5g／L胰蛋白酶：0．2g／LEDTA：1：1V／V)消化、分离和传代人脐静脉内皮细胞，并用光镜、电镜和免疫组化等方法进行内皮细胞的形态观察和鉴定。结果：原代培养的内皮细胞在接种后约2h开始贴壁生长，光镜下内皮细胞呈铺路石状镶嵌排列；免疫组化可见内皮细胞胞浆中人第Ⅷ因子相关抗原呈阳性反应；电镜下可见胞浆中有W-P小体，证实培养的细胞为内皮细胞。结论：用胰酶灌注消化脐静脉可获得高纯度的内皮细胞，细胞存活率高。本方法为血管内皮细胞的研究提供了实验模型。     

与人脐动脉平滑肌细胞共培养的人脐静脉内皮细胞的生物学特性

目的：通过共培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical Venous endothelial tells，HUVEC)与人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical arterial smooth musele cells，HUASMC)，初步探讨观察共培养的HUVEC的形态和增殖特性及经皮冠状动脉成形术(percutaneous transluminal coronary angioplasty,PTCA)后再狭窄的机制。方法：用共培养装置将体外同时培养在一个培养孔中的HUVEC和HLASMC分离。在倒置显微镜下观察单独培养和共培养HUVEC的生长状态和形态；采用免疫荧光法标记细胞，流式细胞仪测定荧光强度和细咆周期结果：共培养的HUVEC逐渐转变为长梭形；单独培养的HUVEC仍保持鹅卵石样。单独培养的和共培养的HUVEC处于细胞周期G0／G1期和G2+S期的百分率为：(70&;#177;3)％和(81&;#177;5)％；(22&;#177;4)％和(14&;#177;4)％。二者均有Cyclin D的表达，但后者的表达显著低于前者。结论：共培养的HUVEC低血清干预48h形态逐渐变为长梭形，更接近于在体形状；而单独培养的HUVEC仍保持原鹅卵石状。此外，前者的增殖活性也显著低于后者。