乳腺癌99mTc-MIBI显像与MRP、TOPO—Ⅱ表达的关系

目的探讨乳腺癌对99m锝-甲氧基异丁基异腈（99mTc-MIBI）的摄取、滞留与多药耐药相关蛋白（MRP）、拓扑异构酶-Ⅱ（TOPO—Ⅱ）表达的关系。方法对60例乳腺癌患者进行99-Tc-MIBI乳腺显像：静脉注射显像剂99mTc-MIBI740MBq后20、120min分别行99mTc-MIBI乳腺显像,采用感性趣区（ROI）技术计算早期摄取比值（T/Ne）和延迟摄取比值（T/Nd）并根据公式RI%=（T/Nd—T/Ne）/T/Ne×100计算滞留率（RI%）。采用免疫组化法检测乳腺癌组织MRP、TOPO—Ⅱ表达水平,并与T/N比值和RI%进行相关性分析。结果在60例乳腺癌患者中99mTc-MIBI乳腺显像阳性者56例,阳性率为93.33%;对56例99mTc-MIBI乳腺显像阳性患者进行免疫组化检测MRP、TOPO—Ⅱ,表达阳性率分别为58.93%、67.86%。MRP、TOPO—Ⅱ表达阳性组和阴性组间T/Ne、T/Nd、RI%间比较均无统计学意义。结论 99mTc-MIBI乳腺显像的摄取、滞留均与乳腺癌组织MRP、TOPO—Ⅱ的表达无关。     

肺腺癌A549细胞中Nestin的表达

目的探讨nestin在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及nestin表达.结果四个肺癌标记物中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性,nestin在肺腺癌A549细胞中部分细胞表达.结论肺癌细胞中存在部分神经干细胞的标记物nestin.     

肺腺癌A549细胞株细胞活力变化及GDNF表达

目的探讨GDNF在肺腺癌A549细胞株的表达及细胞活力变化.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取第1代培养后1 d,5 d两个时间点分别计数细胞;MTT检测两时间点细胞活力变化;用免疫组化检测两时间点GDNF免疫阳性细胞数量变化.并进行统计学分析.结果培养5 d组肺腺癌A549细胞株的细胞数量与1 d组相比,明显增加（P〈0.05）;5 d组的细胞活力较1d组明显下降（P〈0.05）;GDNF的表达百分数比较显示;5 d组亦较1 d组明显下降（P〈0.05）.结论体外培养肺腺癌A549细胞株随细胞增殖过程,活力逐渐下降,同时GDNF表达明显下调,提示细胞增殖和细胞活力不一定完全一致,GDNF减少可能与活力减少有关.     

99mTc-MIBI肺显像与肺癌P糖蛋白、多药耐药相关蛋白、肺耐药蛋白表达的关系

目的 探讨99m锝甲氧异丁基异氰(99mTc-MIBI)肺显像与肺癌组织中P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白表达的关系.方法 对47例原发性肺癌患者术前行早期与延迟99mTC-MIBI显像,应用免疫组化化学方法检测术后标本中多药耐药蛋白P-gp、MRP、肺耐药蛋白的表达水平.比较各多药耐药蛋白阳性组和阴性组间早期摄取比值、晚期摄取比值及放射性清除指数的差异.结果 P-gp阳性组晚期摄取比值、清除指数分别为1.27±0.61、O.22±O.19,阴性组晚期摄取比值、清除指数分别为1.95±o.87、-O.17±0.18;两组晚期摄取比值、清除指数差异有显著性(t=2.36、P=0.04)及(t=4.51、P<0.01);而P-gp阳性组与阴性组早期摄取比值差异无显著性(P>0.05).MRP阳性组与阴性晚期摄取比值分别为1.07±0.32、1.65±O.86,两组晚期摄取比值差异有显著性(t=2.19、P=0.03),而MRP阳性组与阴性组早期摄取比值、清除指数差异无显著性(p>0.05).肺耐药蛋白阳性组与阴性组早期摄取比值、晚期摄取比值及清除指数差异均无显著性(P>0.05).结论 99mTc-MIBI显像晚期摄取比值与P-gp和MRP表达呈负相关,清除指数与P-gp表达呈正相关,99mTc-MIBI显像具有检测肺癌患者肿瘤组织内P-gp和MRP表达的价值.     

肺腺癌细胞MRP基因甲基化与多药耐药的相关性

目的探讨肺腺癌SPCA-1细胞中多药耐药相关蛋白(MRP)基因甲基化状态与MRPmRNA、MRP表达的关系.方法应用限制性内切酶Ec047Ⅲ和PCR法检测人胚肺WI-38细胞、肺腺癌SPCA-1细胞及经阿霉素诱导的耐药细胞MRP基因甲基化状态;原位杂交法检测MRPmRNA表达;免疫组化法测定MRP表达.结果 WI-38细胞MRP基因启动子区处于高甲基化状态,SPCA-1肺腺癌细胞和经阿霉素诱导的耐药细胞MRP基因启动子区处于低甲基化状态.WI-38细胞、SPCA-1肺腺癌细胞、不同浓度阿霉素诱导的耐药SPCA-1细胞MRPmRNA和MRP表达的阳性率和强阳性率,经组间多重比较均有显著性差异. 结论 SPCA-1肺腺癌细胞MRP基因启动子区处于低甲基化状态,尤其5'端调控区低甲基化是导致转录活性增加的重要结构基础,参与肺癌耐药的发生.     

肺腺癌细胞MRP基因甲基化与多药耐药的相关性

目的探讨肺腺癌SPCA-1细胞中多药耐药相关蛋白(MRP)基因甲基化状态与MRPmRNA、MRP表达的关系.方法应用限制性内切酶Ec047Ⅲ和PCR法检测人胚肺WI-38细胞、肺腺癌SPCA-1细胞及经阿霉素诱导的耐药细胞MRP基因甲基化状态;原位杂交法检测MRPmRNA表达;免疫组化法测定MRP表达.结果 WI-38细胞MRP基因启动子区处于高甲基化状态,SPCA-1肺腺癌细胞和经阿霉素诱导的耐药细胞MRP基因启动子区处于低甲基化状态.WI-38细胞、SPCA-1肺腺癌细胞、不同浓度阿霉素诱导的耐药SPCA-1细胞MRPmRNA和MRP表达的阳性率和强阳性率,经组间多重比较均有显著性差异. 结论 SPCA-1肺腺癌细胞MRP基因启动子区处于低甲基化状态,尤其5'端调控区低甲基化是导致转录活性增加的重要结构基础,参与肺癌耐药的发生.     

原发性周围型肺癌对99mTc-甲氧基异丁基异腈摄取与多药耐药蛋白表达的相关性研究

多药耐药（multidrug resistance，MDR）是导致恶性肿瘤化疗失败的重要原因之一，准确而无创地检测和监测肿瘤组织多药耐药基因的表达，实现肿瘤的个体化治疗一直是学者们研究的热点问题。一些研究者发现，肿瘤组织对^99mTc-甲氧基异丁基异腈（sestamibi，MIBI）的摄取与某些多药耐药蛋白的表达有一定关系，可作为预测恶性肿瘤化疗敏感性的一种无创性手段；     

制滴菌素A治疗人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤的实验研究

目的　探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂制滴菌素A (trichostatinA ,TSA)对人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠移植瘤的治疗作用。方法　建立人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠模型 ,瘤内注射TSA和 0 9%生理盐水 (NS) ,对治疗前后的裸鼠进行瘤重量、瘤体积、细胞形态和凋亡的观察。结果　在实验组和对照组之间 ,瘤重量差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;TSA治疗 1周和 2周后瘤体积与治疗前瘤体积相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。NS治疗 1周后瘤体积与治疗前相比差异无显著性 ,而治疗 2周后瘤体积与治疗前相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。电镜下可见肿瘤细胞的凋亡现象经TSA干预后明显增多。结论　TSA治疗人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠模型有效。     

乳癌患者99m Tc-MIBI显像及癌组织中P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白测定

目的:评价乳癌患者99mTc-甲氧基异丁基异腈(MIBI)显像结果,并检测癌组织中P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)的表达.方法:42例乳腺癌患者静脉注射99mTc-MIBI 555～740 MBq(15～20 mCi),10 min及3 h后显像.计算早、晚期肿瘤部位平均放射性计数与对侧相应部位平均放射性计数比值(T/N)、清除率.术后标本采用免疫组织化学法检测P-gp、MRP的表达.结果:根据P-gp、MRP免疫组织化学结果将42例患者分为4组:A组P-gp阳性、MRP阳性,7例;B组P-gp阳性、MRP阴性,15例;C组P-gp阴性、MRP阳性,9例;D组P-gp阴性、MRP阴性,11例.早期T/N值,A组、B组与D组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05),其余各组间差异无统计学意义(P均＞0.05).晚期T/N值,各组间差异无统计学意义(F=0.460,P=0.650).清除率,A组与B组、C组、D组之间,B组、C组与D组之间,差异均有统计学意义(P均＜0.05),而B组与C组之间,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:乳癌99mTc-MIBI显像计算清除率可用于评估癌组织中P-gp、MRP的表达.     

宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力的比较研究

目的比较宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株体外培养细胞活力.方法体外培养宣威肺腺癌xwlc-05和肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取传代培养后1 d、3 d、5 d 3个时间点分别计数细胞,MTT检测3时间点细胞活力变化,并进行统计学分析比较.结果宣威肺腺癌xwlc-05细胞株和肺腺癌A549细胞株各时间点比较,培养1 d、3 d、5 d组的细胞数量逐渐增加,差异有统计学意义（P〈0.05）;同时,宣威肺腺癌xwlc-05细胞株和肺腺癌A549细胞株3 d组细胞活力较1 d组增加,而5 d组的细胞活力较3 d组下降,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论不同肺腺癌细胞株体外增殖和细胞活力不完全一致.     

人肺腺癌细胞A549放射治疗前后Dystrobrevin蛋白表达的变化

目的射线诱导肺腺癌A549细胞凋亡,于凋亡高峰时检测放疗前后dystrobrevin的表达,探讨其与放射剂量及凋亡的关系。方法人肺腺癌A549细胞株培养24 h后用10 Gy X线照射,分别培养6 h、14 h、23 h、40 h,应用Hoechest33258荧光染色在荧光显微镜下观察细胞形态变化——细胞的凋亡,并计算凋亡率。采用Western blot检测0 Gy、6 Gy、10Gy照射A549细胞14 h后dystrobrevin蛋白表达水平的变化。结果 10 Gy X射线照射A549细胞株后14 h凋亡率达到高峰。Western blot检测显示,随着放射剂量的增加,α-dystrobrevin有下降的趋势,而ε-dystrobrevin有升高的趋势。结论人肺腺癌A549细胞株在能量为6-MV,剂量率为300 cGy/分,接受10 Gy X线照射后14 h出现明显的凋亡;并且在此时间点上随着放射剂量的增加α-dystrobrevin和ε-dystrobrevin变化趋势不同。     

奥美拉唑增强多柔比星对肺腺癌A549细胞毒性作用的实验研究

目的 探讨囊泡型质子泵(V- ATPase)非特异性抑制剂奥美拉唑(OME)增强多柔比星(ADM)对人肺腺癌细胞株A549的毒性作用及其可能机制.方法 OME(终浓度为0、2.0、4.0、8.0、16.0μg/mL)处理A549细胞48 h后,锥虫蓝法测定OME对A549的细胞毒性.OME预处理0、24 h后,MTT法测定ADM对A549细胞的半数抑制浓度(IC50).以非细胞毒性的OME 4 μg/mL预处理,流式细胞术测定不同时间A549细胞内ADM的浓度.RT-PCR法测()ME预处理后A549细胞内多药耐药基因(MDR1)转录量.结果 不同浓度OME预处理的A549细胞锥虫蓝染色均未见蓝染细胞.与对照组比较,OME预处理后,ADM对A549细胞的IC50值明显下降(P＜0.05);A549细胞摄入ADM量增加,排出量下降;A549细胞内MDR1基因转录明显下降.结论 OME对A549细胞无毒性作用,但能增强ADM对A549细胞的毒性,其可能机制为OME抑制MDR1基因的转录.     

99Tcm-MIBI乳腺癌显像与P-gp、GST-π及Bcl-2表达的关系

目的 探讨乳腺癌99Tcm-甲氧基异丁基异腈(MIBI)显像与乳腺癌组织中P-gp、GST-π、及Bcl-2等蛋白表达的关系.方法 对105例未经治疗的乳腺肿瘤患者术前一周内进行99Tcm-MIBI早期相(30 min)与晚期相(180 min)平面显像,对其中59例乳腺癌患者用免疫组织化学的方法检测手术后标本中P-gp、GST-π及Bcl-2的表达水平.结果 P-gp阴性表达患者的晚期T/N明显高于P-gp阳性表达患者(t=-2.49,P=0.002,双侧).两者间RI差异也有统计学意义(t=-2.90,P=0.01),而GST-π、Bcl-2阴性与阳性表达者间早晚期T/N比值及RI的差异均无统计学意义.结论 (1)99Tcm-MIBI转运分析可以作为体外检测P-gp表达的敏感指标,P-gp高水平表达的乳腺肿瘤组织其晚期相摄取比值及滞留指数明显低于无P-gp表达的肿瘤.(2)乳腺99Tcm-MIBI显像可以在活体上动态观察多药耐药蛋白P-gp的表达水平,用于多药耐药的预测.     

肺腺癌A549细胞株GDNF、BDNF、NT3和NT4的表达

目的探讨神经营养因子在肺腺癌细胞株A549中的表达及临床意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取代培养后3 d的A549细胞,用免疫组化检测神经营养因子GDNF、BD-NF、NT3和NT4在肺腺癌细胞株A549的表达.结果神经营养因子GDNF、BDNF、NT3和NT4在部分肺腺癌细胞株A549中表达.结论神经营养因子GDNF、BDNF、NT3和NT4可能在肺癌的增殖中发挥作用.     

去甲斑蝥酸钠对耐顺铂肺腺癌A549／DDP细胞逆转的分子机制

目的探讨去甲斑蝥酸钠（SNCTD）对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549／DDP的逆转作用及可能分子机制。方法（1）采用CCK法筛选出SNCTD对A549／DDP的无毒浓度（即对细胞抑制率〈10％的药物浓度）,并检测出顺铂及与无毒浓度SNCTD联合对耐药细胞株的半数抑制浓度（IC50）;（2）采用流式细胞仪分别检测1、2倍无毒浓度SNCTD对细胞内罗丹明123的蓄积情况;（3）采用逆转录-多聚酶链反应（RT—PCR）检测1、2倍无毒浓度SNCTD处理细胞48h后耐药相关基因mdr1mRNA、MRP1mRNA、GST—PimRNA表达,并检测药物处理72h后GST—PimRNA的表达。结果（1）SNCTD对A549／DDP的无毒浓度为5μg／ml,无毒浓度SNCTD与顺铂联合应用可使A549／DDP细胞对顺铂的IC50值下降为4．32μg／ml,逆转倍数为1．97倍;（2）无毒浓度SNCTD处理耐药细胞48h后细胞内罗丹明123荧光强度明显增强（P〈0．05）;（3）5、10μg／ml SNCTD处理耐药细胞株48h后mdr1 mRNA、MRP1 mRNA表达均明显减弱（P〈0．05）,而且10μg／ml SNCTD处理组减弱强度亦明显大干5μg／mlSNCTD处理组（P〈0.05）,呈现浓度依赖性;而GST—PimRNA表达并无明显变化（P〉0．05）,72h后GST—PimRNA表达也未出现下降（P〉0．05）。结论SNCTD可以逆转A549／DDP细胞的耐药作用。其作用机制可能与下调耐药相关基因mdr1、MRP1的表达,影响膜蛋白外排泵功能有关。     

乳腺癌^99m锝-甲氧基异丁基异腈显像与三种多药耐药蛋白表达的关系

目的探讨乳腺癌对^99mTc-甲氧基异丁基异腈（^9mTc—MIBI）摄取、滞留与三种多药耐药蛋白表达的关系及临床意义。方法对60例未经治疗的乳腺癌患者静脉注射^99mTc—MIBI740MBq进行早期（20rain）和延迟（120min）平面显像,采用感性趣区（ROI）技术计算早期摄取比值（T／Ne）、延迟摄取比值（T／Nd）以及滞留率（RI％）。采用免疫组化方法检测空心针穿刺或手术乳腺癌组织多药耐药蛋白P—gP、MRP和GST-π表达水平,并与T／Ne、T／Nd和RI％进行相关性分析。结果^99mTc—MIBI显像阳性率为93．33％;P—gP、MRP、GST-π表达的阳性率分别为73．21％、58．93％、51．79％,X^2=6．552,P〉0．05三者无统计学意义。P—gP表达阳性组和阴性组RI％间有统计学意义（Z=-2．120,P〈0．05）。P—gP表达与RI％呈负相关。结论^99mTc—MIBI显像能预测乳腺癌组织P-gp的表达水平．为临床个体化治疗提供参考。     

胰岛素对肺腺癌A549细胞放疗增敏作用的研究

目的探讨胰岛素能否提高体外肺腺癌A549细胞的放疗敏感性。方法将胰岛素直接作用于体外培养的A549细胞，再将此细胞放于直线加速器下行X线照射，采用甲基噻唑基四唑（MTT）、流式细胞仪等检测肺腺癌A549细胞的凋亡情况。结果仅给予胰岛素作用该细胞时，MTT检测结果表明，给予胰岛素的细胞光密度（OD）值与未给予胰岛素的细胞OD值之间无明显差异（P〉0．05）。同时给予胰岛素及X线照射后，给予不同浓度胰岛素的细胞与未给予胰岛素的细胞相比凋亡率有差异（P〈0．05），其中4、8、16mU／mL浓度组有明显差异（P〈0．01）。结论不同浓度的胰岛素液并不会长时间地促进A549细胞的增殖，胰岛素可提高该肿瘤细胞的放疗敏感性，促进肿瘤细胞的凋亡，为胰岛素充当放疗增敏剂运用于临床治疗提供一定的理论依据。     

奥沙利铂对A549肺腺癌细胞系生长抑制作用和细胞凋亡的实验研究

目的　观察奥沙利铂对肺腺癌细胞系A5 4 9的药物敏感性和诱导细胞凋亡作用。方法　将不同浓度的奥沙利铂与A5 4 9作用 2 4、36、4 8h ,用MTT法计算细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果　奥沙利铂对A5 4 9的细胞生长抑制率随作用浓度和作用时间的增加而增大。 12 .5、2 5、5 0、10 0 μg/ml奥沙利铂对A5 4 9作用 2 4h ,细胞凋亡率分别为 35 %、13.6 %、2 .6 %、1.4 %。结论　奥沙利铂对A5 4 9细胞有生长抑制作用 ,呈剂量依赖性和时间依赖性 ;能引起细胞凋亡 ,细胞凋亡率呈剂量依赖性 ,与细胞生长抑制率呈正相关关系 (P <0 .0 1)。     

经阿霉素诱导的人肺腺癌A549细胞中侧群细胞比例变化及意义

目的 探讨多药耐药性与肿瘤侧群细胞之间的关系.方法 以小剂量阿霉素(ADM)浓度梯度递增的方法诱导人肺腺癌A549细胞系,12周后观察细胞形态变化,用MTT法进行细胞药物敏感性检测,Hoechst33342/PI染色测定侧群细胞(SP细胞)比例.结果 A549/ADM细胞以长梭形为主,胞体增大,伪足增多,对阿霉素、顺铂、长春新碱、足叶乙甙、紫杉醇5种药物的耐药指数分别为9.588、6.348、1.736、11.213、4.333,SP细胞比例增加10倍.结论 肺腺癌A549细胞多药耐药性与侧群细胞比例增加有关.     

重铬酸钾对人肺腺癌A549细胞hMGMT蛋白表达的影响

目的:研究不同浓度重铬酸钾(K2Cr2O7)对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制效应以及对O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(hMGMT)蛋白表达的影响.方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定9种不同浓度K2Cr2O7,(0.000、0.010、0.040、0.160、0.312、0.625、1.250、2.500、5.000.μmol/L)对A549细胞的增殖抑制率;用损伤修复试验观察在不同浓度K2Cr2O7,作用下人肺腺癌A549细胞的划痕修复情况;以β-actin为参照,应用Western blotting技术检测不同浓度K2Cr2O7,对人肺腺癌A549细胞hMGMT表达的影响.结果:MTT比色法检测显示,大于0.625μmol/L浓度组K2Cr2O7,可抑制细胞活性,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).损伤修复试验显示,与空白对照组比较,0.625、1.250.2.500和5.000 μmoL/L的K2Cr2O7,抑制细胞损伤修复,而0.312、0.160、0.040μzmoL/L的K2Cr2O7促进细胞损伤修复.Western blotting显示,0.312、0.160、0.040 μmoL/L的K2Cr2O7对hMGMT蛋白的表达具有促进作用,0.625、1.250、2.500和5.000 μmoL/L的K2Cr2O7,对hMGMT蛋白的表达具有抑制作用.结论:低浓度的K2Cr2O7,对人肺腺癌A549细胞的增殖、损伤修复和hMGMT蛋白的表达呈现低剂量兴奋效应;高浓度K2Cr2O7,对hMGMT蛋白的表达则呈现抑制作用.