贮脂细胞反义TIMP1基因转移及对细胞外基质降解的促进作用

目的：探讨反义TIMP1基因对贮脂细胞及细胞外基质降解的作用及其意义。方法：将大鼠全长TIMP1 cDNA反向插入哺乳表达载体pCI-neo中，构建反义TIMP1基因真核表达载体，用脂质体介导的方法，将反义TIMP1基因导入贮脂细胞株CFSC－2G中，选择稳定转染的贮脂细胞培养，采用RT－PCR、原位杂交、免疫组化及RIA等方法，观察TIMP1 mRNA和蛋白、α1（Ⅲ）mRNA、FN蛋白表达及细胞培养上清中PCI、PCⅢ、HA、LN水平的变化。结果：反义TIMP1基因能明显地抑制贮脂细胞中TIMP1 mRNA和蛋白的高表达（P＜0．01）。转基因细胞中α1（Ⅲ）mRNA、FN蛋白的表达与未转基因细胞比较无明显变化（P＞0．05）。转基因后贮脂细胞培养上清中PCI、PCⅢ、HA、LN水平明显低于未转基因细胞（P＜0．01）。结论：反义TIMP1基因可抑制贮脂细胞内源性TIMP1产生，促进细胞外基质的降解，为肝纤维化的逆转治疗提供了理论基础。     

反义TIMP1基因对纤维化肝脏间质胶原合成的影响

目的探讨反义TIMP1基因对大鼠纤维化肝脏间质胶原合成的影响及其意义.方法用60%CCl4+5%乙醇建立大鼠肝纤维化模型;构建反义TIMP1基因真核表达载体后转入大鼠肝脏;采用RT-PCR、原位杂交、免疫组化及RIA等方法,观察了肝脏中TIMP1 mRNA、α1(Ⅲ)mRNA和蛋白表达及大鼠外周血PCⅠ、PCⅢ水平的变化.结果反义TIMP1基因能明显地抑制大鼠纤维化肝脏中 TIMP1的高表达(P<0.01).转基因肝脏中α1(Ⅲ)mRNA和蛋白的表达明显低于未转基因的纤维化肝脏(P<0.01).转基因后大鼠外周血PCⅠ、PCⅢ的浓度明显低于未转基因大鼠(P<0.01).结论反义TIMP1基因能下调纤维化肝脏中间质胶原的合成,这对寻找新的肝纤维化防治对策提供了可供探索的途径.     

肝细胞生长因子对ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成细胞外基质、基质金属蛋白酶及其抑制剂的作用

目的；观察重组人肝细胞生长因子（rhHGF)对常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD)囊肿衬里上皮细胞合成细胞外项质（ECM），基质金属蛋白酶及其抑制剂的作用。方法：采用放免法测定细胞合成层粘连蛋白（LN）和Ⅲ型前胶原氨基末端肽（PⅢNP），采用ELISA法检测细胞合成Ⅳ型胶原(ColⅣ），采用RT－PCR方法测定细胞表达转化生长因子β1（TGFβ1），基质金属蛋白酶2（MMP－2），金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP－1），金属蛋白酶组织抑制剂2（TIMP－2）mRNA的情况，用蛋白质印迹方法检测细胞上清液中MMP－2蛋白表达，明胶酶谱法检测MMP－2活性。结果：rhHGF及rhHGF 抗TGFβ1抗体组ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成LN，ColⅣ显著增多，但两组比较无显著差异。对照组，rhHGF组，rhHGF 抗HGF抗体组及rhHGF 抗TGFβ1抗体组各间合成PⅢNP值均无显著差异。对照组，rhHGF组，rhHGF＋抗HGF抗体组各组比较TGFβ1mRNA表达无显著差异。与对照比较，rhHGF显著上调细胞MMP－2 mRNA和细胞上清液中MMP－2蛋白表达及MMP－2活性，显著下调细胞TIMP－1，TIMP－2 mRNA表达。结论：HGF促进了ADPKD囊肿衬里上皮细胞合成LN和ColⅣ，增加MMP－2表达，抑制TIMP－1，TIMP－2的表达。这些改变可能参与了ADPKD囊肿的发生及发展。     

缺氧对细胞滋养细胞MMP9/TIMP1基因表达及细胞侵袭力的影响

目的 探讨缺氧对细胞滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)及其抑制物1(TIMP1)mRNA和蛋白的表达及细胞侵袭能力的影响.方法 将永生化的早孕细胞滋养细胞进行化学缺氧(150 μmol/L CoCl2),用免疫组化、荧光定量PCR、Western blot等方法检测正常和缺氧细胞滋养细胞系MMP9/TIMP1基因的表达,应用Transwell侵袭模型检测缺氧对细胞滋养细胞侵袭能力的影响.结果 缺氧组的细胞滋养细胞MMP9、TIMP1 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05),MMP9/TIMP1比值升高,且呈时间依赖性.缺氧组细胞滋养细胞的侵袭力较对照组增强(P<0.05).结论 在生理性缺氧条件下,早孕细胞滋养细胞的侵袭力是增加的,并与MMP9/TIMP1比值的升高有关;同时TIMP1除了调节MMP9外,还可能促进细胞滋养细胞的增殖与分化.     

喉鳞状细胞癌中MMP1和TIMP3表达的相关性分析

目的 探讨喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)中基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1,MMP1)和基质金属蛋白酶抑制因子 3(tissue inhibitor of metalloproteinase 3,TIMP3)mRNA和蛋白的表达,探讨MMP1和TIMP3在LSCC发展和监测中的意义.方法 分别应用逆转录-聚合酶链反应及免疫组织化学SP法,检测LSCC组织中MMP1和TIMP3 mRNA及蛋白表达情况.结果 MMP1 mRNA在LSCC组织中的表达0.66±0.26高于癌旁组织0.49±0.23(P﹤0.05),TIMP3 mRNA在LSCC组织中的表达0.34±0.21低于癌旁组织0.49±0.24(P﹤0.05);MMP1在LSCC组织和癌旁组织中的蛋白表达阳性率分别为82.4%和18.2%,两者比较差异有统计学意义(P﹤0.05);TIMP3在LSCC组织和癌旁组织中的蛋白表达阳性率分别为80.4%和100%,两者比较差异有统计学意义(P﹤0.05);MMP1和 TIMP3 mRNA及蛋白表达与组织病理学分级﹑淋巴结转移相关(P﹤0.05),而与年龄无关(P﹥0.05);LSCC组织中MMP1和TIMP3 mRNA及蛋白表达未检测到相关性(P﹥0.05).结论 MMP1和TIMP3表达与LSCC的发生发展﹑浸润及转移有关,检测LSCC组织中的MMP1和TIMP3的基因及蛋白表达情况,有助于判断LSCC的转移、TNM分期及预后情况.     

ET-1、MMP-3、TIMP-1在人肾小球中的表达及意义

目的　研究内皮素 1(Endothelin 1,ET 1)、基质金属蛋白酶 3 (Matrixmetalloprotevnase 3 ,MMP 3 )、金属蛋白酶组织抑制剂 1(Tissueinhibitorofmelalloproteinase ,TIMP 1)在人肾小球中的表达变化及意义。方法　应用免疫组化技术检测3 2例原发性系膜增生性肾炎患者及 5例对照组肾小球中ET 1、MMP 3、TIMP 1、LN蛋白的表达。结果　在中、重度系膜增生性肾炎患者的肾小球中 ,ET 1、MMP 3、TIMP 1、LN蛋白表达增强 ,MMP 3 /TIMP 1比值下降 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;ET 1的表达与MMP 3 /TIMP 1比值负相关 (r =-0 70 3 ,P <0 0 1) ,与LN表达正相关 (r =0 880 ,P <0 0 1) ;MMP 3 /TIMP 1比值与LN表达负相关 (r=-0 62 3 ,P <0 0 1)。结论　ET 1可能是肾小球MMP 3 /TIMP 1下降的原因之一 ,这与肾小球细胞外基质 (Exlracellularmatrix ,ECM)降解受抑密切相关。     

低氧微环境对MDA-435细胞株MMP2、9及其抑制剂TIMP21表达的影响

目的：探讨低氧微环境对人乳腺癌细胞株MDA 435中基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)及其抑制剂(tissue inhibitors of matrix metalloproteinases，TIMPs)表达的影响。方法：分别置人乳腺癌细胞株MDA 435于常氧（21% O2、5% CO2）和低氧（1% O2、5% CO2和94% N2）环境中培养6?h，RT PCR技术mRNA水平检测MMP2、9及TIMP2、1的表达。结果：MDA 435细胞株表达MMP9和TIMP1 mRNA，未检测到MMP2和TIMP2 mRNA；低氧环境下MDA 435细胞株中MMP9 mRNA 水平显著上升(P＜0.05)，TIMP1基因的表达在低氧环境与常氧环境下差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：与常氧环境相比，低氧环境下乳腺癌细胞株MDA 435中MMP9及其抑制剂TIMP1的表达平衡发生了改变，提示，进行肿瘤转移分子机制的体外研究应充分考虑氧环境的影响。     

MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2在肝癌中原位表达

目的 :探讨肝癌中基质金属蛋白酶MMP 2 ,MMP 9和组织金属蛋白酶抑制剂TIMP 1 ,TIMP 2的mRNA和蛋白质表达与临床病理特征和预后的关系。方法 :在 5 6例有完整随访资料的原发性肝癌标本中原位杂交检测MMP 2mRNA ,TIMP 2mRNA ;免疫组化检测MMP 2 ,MMP 9,TIMP 1 ,TIMP 2蛋白质的表达。结果 :MMP 2mRNA ,TIMP 2mRNA ,MMP 2 ,MMP 9,TIMP 1和TIMP 2蛋白质在肝癌中的阳性表达分别为 4 8(85 .7% )例 ,35 (6 2 .5 % )例 ,4 4 (78.6 % )例 ,4 1 (73.2 % )例 ,30 (5 3.6 % )例 ,38(6 8% )例。MMP 2mRNA ,MMP 2 ,MMP 9在肝癌中呈高表达 ,而TIMP 1蛋白呈低表达 (P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 )。TIMP 2mRNA与TIMP 2蛋白 ;MMP 2mRNA与MMP 2蛋白在肝癌中的表达呈正相关 (分别为r=0 .31 6 ,P <0 .0 5 ;r=0 .35 6 ,P <0 .0 5 )。MMP 2mRNA的表达与肝癌肿瘤大小和临床分期呈正相关 (分别为r =0 .4 4 1 ,P <0 .0 1 ;r=0 .340 ,P <0 .0 5 ) ;MMP 9蛋白表达阳性的肝癌患者术后生存时间缩短 (P <0 .0 5 )。Kaplan Meier单因素分析发现MMP 2 ,MMP 9表达阳性患者的预后差 (P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 )。多因素Cox回归分析显示MMP 2 ,MMP 9的蛋白表达可作为肝癌估测预后的指标。结论 :基质金属蛋白酶MMP 2 ,MMP 9的过表达以及其与TIMP 2 ,MMP     

TGFβ1反义RNA对腹膜间皮细胞分泌细胞外基质的影响

目的 :研究转化生长因子 β1(TGFβ1)反义RNA对体外培养的人腹膜间皮细胞 (HPMC)细胞外基质合成与分泌的影响。方法 :将反义TGFβ1基因真核表达载体转染HPMC ,用ELISA法检测转染细胞上清液中纤维连接蛋白 (FN)和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂 (PAI 1)的蛋白质水平 ;用半定量逆转录多聚酶链反应 (RT PCR)法检测转染细胞内FN ,PAI 1和胶原Ⅰ (ColⅠ )的mRNA表达 ,并与未转染HPMC对照组和转染空载体组比较其变化。结果 :TGFβ1反义RNA转染HPMC后 ,与对照组相比 ,转染 2 4h后 ,FN ,ColⅠ ,PAI 1mRNA分别下调 17% ,2 6 % ,9.6 % ;转染 4 8h后FN ,PAI 1蛋白含量亦明显下降 (P <0 .0 5 )。结论 :人反义TGFβ1基因真核表达载体可抑制HPMC合成细胞外基质 ,在腹膜纤维化的研究及防治中有潜在的应用价值     

氯沙坦对动脉粥样硬化兔金属蛋白酶基因表达的影响

目的研究氯沙坦对动脉粥样硬化 (AS)兔基质金属蛋白酶 (MMP )基因表达的影响。方法通过高脂饮食和内皮损伤术建立兔AS模型 ,16只新西兰大白兔随机分单纯高脂饮食组和高脂饮食加氯沙坦 (2 5mg·kg -1·d-1)组 ,喂养 4个月。应用免疫组化法测定MMP 9和MMP抑制剂 - 1(TIMP 1)蛋白表达 ,RT PCR测定MMP 9和TIMP 1的mRNA表达。结果单纯AS组MMP 9蛋白和mRNA表达水平明显高于氯沙坦治疗组 (P <0 .0 1) ;两组TIMP 1蛋白和mRNA水平比较无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论大量MMP 9基因的表达可能与AS斑块不稳定性有关 ;氯沙坦可能通过抑制MMP 9蛋白和mRNA的表达而稳定斑块。     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

大鼠脑出血灶周围星形胶质细胞内糖原含量的变化

目的：研究脑出血后局部超微结构的变化，探讨脑出血的病理生理过程，为临床治疗提供理论依据．方法：健康雄性SD大鼠4只，随机等分为实验组和对照组．实验组采用细菌胶原酶注射制作纹状体脑出血模型，对照组采用相同方法在相应部位注入等体积生理盐水，采用透射电镜观察脑出血后24h病变局部及其周围和对照组超微结构的变化和糖原的水平变化．结果：电镜观察到在脑出血动物出血灶周围区，不同类型的细胞内均可见到各种各样的超微结构改变．最为醒目的是在脑内血肿周围星形胶质细胞胞质和突起内有大量的糖原颗粒聚集，尤其在毛细血管周围的胶质细胞突起内非常明显；小胶质细胞和少突胶质细胞内均未发现明显糖原颗粒存在．在生理盐水对照组动物，相应部位的各种细胞的超微结构正常；而且神经元、各种胶质细胞和毛细血管内皮细胞内均无明显糖原颗粒聚集．结论：脑出血周围糖原含量增高，局部存在明显的糖代谢障碍．     

云南省2006年登革热监测分析

目的了解云南省登革热的疫情动态、人群抗体水平、媒介伊蚊种群（包括成幼虫孳生和密度变化）的动态变化、为登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法各级医疗、卫生、检疫机构的医务人员对疑似、临床病例进行及时发现和诊断;在流行季节前随机抽取正常人群血清,-20℃保存,用ELISA方法进行血清学检测;在6～10月采用定时、定点调查法,对登革热的主要传播媒介白纹伊蚊、埃及伊蚊的种群、孳生环境、伊蚊幼虫指数和成蚊密度进行监测,每月1次。结果2006年云南省发生输入性登革热病例18例;健康人群登革热IgG抗体阳性率8．09％。伊蚊幼虫密度布雷图指数（BI）、容器指数（Cl）分别在14～98、4．7～73．68之间,白纹伊蚊成蚊密度在3．5～34只,人工小时之间。结论云南省输入性登革热疫情有不断上升的趋势;人群抗体水平登革热IgG抗体阳性率较高,提示当地人群中可能存在该病毒的既往感染或隐性感染;媒介伊蚊幼虫布雷图指数、容器指数和白纹伊蚊成蚊密度均较高。对登革热传播具有极高的危险性,应引起高度注意。     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

黄芪在体内抗氧化作用的实验研究

目的:探讨黄芪水提物抗氧化、清除体内自由基的生物活性。方法:将昆明种小鼠随机分为对照组和黄芪低、中、高剂量组,每组10只。连续灌胃给药7天,采血后,迅速取出肝组织,制成匀浆。测定超氧化物歧化酶(SOD)的活力及丙二醛(MDA)含量。结果:黄芪可减少MDA含量,增强SOD活力。结论:黄芪可有效清除体内的氧自由基,具有减少氧化应激引起的器官损伤和延缓机体衰老的作用。     

Cohort Mortality Study in Three Ceramic Factories in Jingdezhen in China

To investigate the health impacts of crystalline silica mixed dust and other potential occupational hazards on workers in ceramic factories, a cohort study of 4851 workers registered in the employment records in 3 ceramic factories in Jingdezhen city of China between 1972 and 1974 was identified. The cohort mortality was traced throughout 2003 with an accumulation of 128970.2 person-years, revealed 1542 deaths. Standardized mortality ratios （SMRs） were calculated for the main causes of death by using Chinese national mortality rates as reference. The mortality from all causes in three ceramic factories was 12.0‰ and the cumulative mortality was 31.8%. Malignant neoplasm, cardiovascular diseases, respiratory diseases, infectious diseases were the first four illnesses that threaten workers’ life, and they accounted for 73.2% of all deaths. The results of this study showed that the standardized mortality ratio for all subjects was 1.02, which is very close to that expected on the basis of the China national mortality rates. Statistically significant mortality excesses for respiratory disease （SMR=1.36）, pneumoconiosis （SMR=37.34）, infectious disease （SMR=5.70） and pul- monary tuberculosis （SMR=3.88） were observed. The mortality of 2938 dust-exposed workers was higher than that of 1913 non dust-exposed workers. Except for pneumoconiosis, the mortality from lung cancer, non-malignant respiratory diseases and pulmonary tuberculosis in dust-exposed workers were significantly increased as compared with that in non-exposed workers, and the relative risks （RRs） were 1.86 （1.16–2.99）, 2.50 （1.84–3.40）, 1.81 （1.34–2.45）. The exposure-response relationships between cumulative dust exposure level and mortality from all causes, colorectal cancer, lung cancer, respiratory diseases, and pulmonary tuberculosis were also identified. The findings indicated that silica mixed dust in ceramic factories has harmful impact on the workers’ health and life span in ceramic factory.     

2005年汕头市登革热定点监测结果分析

目的 通过定点监测为汕头市登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法收集监测点的登革热疫情、人群抗体水平和媒介伊蚊等监测资料，用EPI2002软件统计分析。结果2005年汕头市无登革热疫情，抗登革热病毒IgG、IgM阳性率低，伊蚊幼虫孳生密度高峰在6、8、9、10月份，低谷在4、7、11月份，孳生情况随着月平均降水量、平均气温变化而变化；孳生场所以农村、暂时性容器为主。结论汕头市有登革热流行的自然、社会环境条件，人群普遍对登革热易感，8～10月是发动爱国卫生运动，清除伊蚊孳生地，预防、控制登革热流行的适当时机。     

2009年泉州市流感监测结果分析

目的了解泉州市2009年流感活动情况及其型别特征。结论通过流行病学和病原学监测,对泉州市流感流行情况进行分析。结果 2009年全市流感样病例占就诊人数的0.26%～2.34%;全年采集监测标本1392份,经RT-PCR法检测样本阳性率为22.34%;经MDCK细胞分离流感毒株134株,其中季节性H3N2和HINl型各占60.45%和11.19%,甲型H1N1流感占21.64%,B型占6.70%。结论 2009年泉州市流感春夏季以季节性H3N2亚型流感为优势毒株,秋冬季以甲型H1N1流感为流行株,需加强泉州市流感监测和流感病毒抗原变异研究。