肝纤维化大鼠肝组织Raf/ERK信号通路的变化及肝复康的干预作用

目的探讨中药肝复康通过Raf/ERK介导的信号转导通路治疗肝纤维化大鼠的作用机制。方法制备四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠,应用肝复康干预;采用RT-PCR法测定肝组织及HSC-T6细胞Raf、ERK和Ⅲ型胶原mRNA水平的变化;采用免疫组织化学法检测肝组织ERK的表达。结果模型组肝组织Raf、ERK和Ⅲ型胶原mRNA水平较正常对照组明显上调(P<0.01),而肝复康治疗组则明显下调(P<0.01);模型组肝组织ERK蛋白的表达上调,而肝复康治疗组表达则下调。结论肝复康对肝纤维化有明确的治疗作用,其抗肝纤维化的作用机制可能与ERK介导的信号转导通路有关。     

肝复康对肝纤维化大鼠肝组织NF-κB、MMP-2和TIMP-2表达的影响

目的研究中药肝复康对肝纤维化大鼠肝脏NF-κB、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制因子2（TIMP-2）基因表达的影响。方法随机将SD大鼠分为正常对照组、模型组、小剂量、中剂量和大剂量治疗组,制备CCl4肝纤维化模型,自第9周起,给予中药肝复康治疗至第20周。采用Western-Blot法检测NF-κB表达;采用RT-PCR法观察NF-κB、MMP-2和TIMP-2 mRNA水平。结果模型组大鼠肝组织NF-κB、MMP-2和TIMP-2表达增加,肝复康可明显抑制上述因子的表达（P〈0.01）,且三者mRNA水平在各组间呈显著正相关。结论肝复康治疗肝纤维化可能与其抑制NF-κB、MMP-2和TIMP-2的表达有关。     

中药肝复康对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝组织PI3K/PKB信号通路和PDGFR-β表达的影响

目的探讨中药肝复康对大鼠肝纤维化组织PI3K/PKB信号通路和血小板衍生生长因子受体-β(PDGFR-β)表达的影响。方法制备大鼠四氯化碳诱导的肝纤维化模型,给予肝复康干预。采用免疫组织化学法检测肝组织PDGFR-β蛋白的表达,采用半定量RT-PCR法测定肝组织PI3K和PKB1mRNA水平的变化。结果与对照组比,模型组肝组织PDGFR-β蛋白的表达上调,而肝复康治疗组其表达被显著抑制;模型组肝组织PI3K和PKB1 mRNA水平的相对光密度值分别为2.08±0.09和2.54±0.10,较对照组均显著上升(0.86±0.04和0.36±0.03,P<0.01),但肝复康治疗组其水平均被显著抑制(分别为0.88±0.05和0.41±0.03,与模型组比,P<0.01)。结论肝复康对肝纤维化的治疗作用可能与其作用于PI3K/PKB信号转导途径和抑制PDGFR-β表达有关。     

中药肝复康对肝星状细胞mTOR/P70S6K信号通路的干预作用

目的观察中药肝复康含药血清对乙醛刺激的肝星状细胞mTOR/P70S6K信号通路的影响,以探讨肝复康抗纤维化的分子生物学机制。方法体外培养大鼠HSC-T6细胞,用肝复康对乙醛刺激的HSCs进行干预,采用RT-PCR法测定HSCs中Ⅰ、Ⅲ型胶原、mTOR、P70S6K的表达。结果空白对照组肝星状细胞各指标表达量呈相对较低水平,乙醛刺激组细胞Ⅰ型胶原、mTOR、P70S6K和Ⅲ型胶原表达量明显升高(P<0.05),而肝复康干预对于细胞Ⅰ型胶原、mTOR和P70S6K的升高有明显的抑制作用(P<0.01)。结论 mTOR/P70S6K信号通路在HSCs活化过程中起到重要作用,肝复康发挥抗纤维化的作用机制与阻断mTOR/P70S6K信号通路有关。     

肝复康对实验性肝纤维化转化生长因子β及层粘连蛋白表达的影响

研究复方中药肝复康对实验性肝纤维化大鼠肝组织的转化生长因子 β(TGF—β1)及层粘连蛋白 (LN)表达的影响 ,探讨其治疗机制。采用 10 %的四氯化碳皮下注射制备肝纤维化模型 ,于造模 6 0天后给予肝复康治疗 6 0天 ,以秋水仙碱及肝脾康为对照药。通过光镜及电镜观察肝组织病理变化 ,检测肝组织羟脯氨酸含量 ,免疫组化法检测肝组织TGF - β1及LN表达。经肝复康治疗后 ,组织学显示肝纤维化程度明显改善 ,肝组织羟脯氨酸明显降低 ,肝组织TGF - β1阳性染色细胞数及LN阳性染色面积明显减少 (P <0 0 1)。肝复康对肝纤维化有明确的治疗作用。其部分机制为减少细胞因子TGF - β1的表达 ,减少LN的表达 ,减轻肝窦毛细血管化     

肝复康对肝纤维化大鼠肝组织整合素α5β1/FAK信号通路的调节作用

目的研究整合素α5β1/FAK信号通路在肝纤维化中的作用以及中药肝复康对此通路的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、肝复康大剂量、中剂量和小剂量治疗组,皮下注射10%CCl4制备肝纤维化模型,自第9周起,给予肝复康灌胃治疗至第20周。采用免疫组化法检测大鼠肝组织整合素α5和整合素β1的表达情况;采用RT-PCR法检测FAK mRNA水平。结果模型组大鼠肝组织整合素α5表达水平(0.50±0.01)比正常对照组(0.23±0.13)明显增高(P<0.01),而肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.35±0.03、0.33±0.01、0.38±0.02)比模型组明显降低(P<0.01);模型组大鼠肝组织整合素β1表达水平(0.44±0.02)比正常对照组(0.27±0.01)明显增高(P<0.01),肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.37±0.01、0.34±0.01、0.39±0.01)表达水平较模型组明显降低(P<0.01);模型组动物FAK mRNA水平(0.73±0.01)比正常对照组(0.11±0.02)明显增高(P<0.01),而肝复康治疗后(大、中、小剂量治疗组分别为0.33±0.03、0.28±0.01、0.18±0.01)比模型组明显降低(P<0.01)。结论整合素α5β1/FAK信号通路的激活在肝纤维化中发挥重要作用,肝复康治疗肝纤维化作用的机制可能与抑制整合素α5β1/FAK通路的信号转导有关。     

肝复康对HSC-T6细胞Wnt信号转导通路调节作用的观察

目的观察中药肝复康含药血清对肝星状细胞T6（HSC-T6）细胞株经典Wnt信号转导通路中的关键调节因子Wnt1、糖原合成激酶3β（GSK-3β）、β-链蛋白（β-catenin）、细胞周期蛋白D1（cyclinD1）以及α-平滑肌动蛋白（α-SMA）基因表达的影响,探讨其抗纤维化的作用及分子机制。方法制备肝复康含药血清,用乙醛及肝复康含药血清干预HSC-T6细胞株,采用RT-PCR和Western-Blot法分析Wnt1、Gsk-3β、β-catenin、cyclinD1和α-SMA表达的变化。结果肝复康含药血清处理可上调HSC-T6细胞株Gsk-3βmRNA的表达,下调Wnt1、β-cateninc、yclinD1和α-SMA的表达。结论肝复康对肝纤维化具有明显的抑制作用,其作用机制可能是通过调节经典的Wnt信号通路中的关键因子的表达,从而抑制α-SMA mRNA的转录,以减少细胞外基质的形成。     

JAK/STAT信号转导通路在肝纤维化形成中的作用

JAK/STAT信号转导通路是一条由多种细胞因子和生长因子介导的信号转导通路,能参与细胞的增殖、分化、凋亡及炎症等病理生理过程。研究表明,JAK/STAT通路在肝纤维化的形成进程中具有重要的调控作用。本文就近年JAK/STAT信号转导通路在肝纤维化形成过程中的作用作一综述。     

抑制JAK／STAT信号通路对实验性急性胰腺炎大鼠肝损伤的保护作用

背景：JAK／STAT细胞内信号通路广泛参与细胞的增殖、分化、凋亡以及炎症、肿瘤的发生等多种生理、病理生理过程，然而关于其在重症急性胰腺炎（SAP）急性肝损伤中作用的研究尚少。目的：观察抑制JAK〈STAT通路对实验性急性胰腺炎（AP）大鼠肝损伤的保护作用。方法：56只Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、3组AP模型组和3组JAK特异性抑制剂AG490干预组。以4％牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射诱导AP模型。分批处死各组大鼠，动态测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平，观察肝脏大体和组织学表现，以免疫组化染色和蛋白质印迹法检测肝组织中JAK2的定位和表达。结果：与正常对照组相比，AP模型组各时间点血清ALT、AST水平均显著升高；肝组织大体和组织学损伤随病情进展而逐渐加重；肝组织JAK2表达逐渐增强，于18h时达高峰。经AG490预处理的大鼠，上述各项指标均较同时间点AP模型组显著改善。结论：JAK2参与了大鼠实验性AP肝损伤的病理过程，抑制肝组织JAK／STAT通路活化有助于SAP急性肝损伤的防治。     

JAK2/STAT3信号通路在肝内胆管细胞癌中的表达及预后

目的 探讨Janus激酶2/信号转导子与转录激活子(JAK2/STAT)3信号通路在人胆管细胞癌(ICC)组织中的表达和临床特征意义。方法 采用免疫组织化学技术检测80例ICC组织及其相应的癌旁组织中JAK2和STAT3中的表达情况，并分析两者表达与ICC患者临床病理参数之间的关系。结果 ICC组织中JAK2与STAT3蛋白的阳性表达率均高于相应癌旁组织，两者表达呈明显正相关。JAK2与STAT3与肝硬化、胆管癌栓、血管侵犯、肿瘤分化、临床分期密切相关(均P<0.05);Kaplan-Meier分析表明高表达JAK2与STAT3的患者生存率及生存期更短，预后更差；Cox模型分析表明，JAK2与STAT3是影响ICC患者生存期的独立预后因素(均P<0.05)。结论 JAK2/STAT3信号通路在ICC组织中高表达，是反映ICC发生发展的重要生物学指标。     

香附多糖对牛血清白蛋白诱导的肝纤维化大鼠血清MMP-2、TIMP-2和TGF-β1水平的影响

目的 研究香附多糖对牛血清白蛋白诱导的肝纤维化大鼠血清基质金属蛋白酶2（MMP-2）、组织金属蛋白酶抑制剂-2（TIMP-2）和转化生长因子-β1的影响。方法 将60只SD大鼠随机平均分为正常对照组、模型组、秋水仙碱（0.1 mg·kg^-1）、大剂量香附多糖组（200 mg·kg^-1）、中等剂量香附多糖组（100 mg·kg^-1）和小剂量香附多糖组（50 mg·kg^-1）,每组10只。在造模成功后,分别给予生理盐水、秋水仙碱和香附多糖灌胃处理,连续60 d。在末次给药后,采用腹主动脉取血,分离血清,并取肝组织行病理学检查。检测各组大鼠血清肝功能指标和肝纤维化指标,采用酶联免疫分析法检测血清MMP-2、TIMP-2和TGF-β1水平,并观察各组大鼠肝组织病理学变化情况。结果 与模型组比较,大剂量、中剂量和小剂量香附多糖组大鼠血清ALT、AST、TP、ALB水平得到显著改善（P<0.05）,血清LN、HA、PC-Ⅲ和Ⅳ-C水平均明显降低（P<0.05）;大、中、小剂量组大鼠血清MMP-2水平分别为（221.58±23.76）ng/mL、（291.12±29.35） ng/mL、（375.14±38.21） ng/mL,TIMP-2水平分别为（161.89±16.12） μg/mL、（180.34± 17.12） μg/mL和（196.56±19.34）μg/mL,TGF-β1水平分别为（206.23±21.45）ng/mL、（251.53±26.10） ng/mL、（302.09±31.21） ng/mL,均显著低于模型组（P<0.05）;肝组织病理学检查结果显示,与模型组比较,大、中、小剂量药物处理组大鼠肝纤维化程度均有明显减轻。结论 香附多糖具有较好的保肝及抑制肝纤维化的活性,可能是有效改善了大鼠MMP-2/TIMP-2失衡和降低TGF-β1水平有关。     

Janus激酶/信号转导子与转录激活子通路对类风湿关节炎大鼠滑膜细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 探讨Janus激酶/信号转导子与转录激活子(JAK/STAT)信号通路对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜细胞凋亡相关基因表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠50只,除对照组6只外,其余均建立胶原诱导的关节炎(CIA)模型,关节炎指数＞2分的大鼠再随机分为CIA模型组,JAK/STAT阻断剂低、中、高剂量组,每组6只.在关节炎开始后,阻断剂组分别予以AG490 1、5、10 mg·kg-1·d-1腹腔注射,对照组及模型组于以生理盐水1 ml/腹腔注射.应用单因素方差分析观察应用JAK/STAT阻断剂前后滑膜细胞Bcl-2、Bcl-xl、Bax mRNA及蛋白表达情况.结果 CIA模型组Bcl-2、Bcl-xl mRNA及蛋白表达水平较对照组明显增高(0.931±0.035与0.351±0.024,0.920±0.037与0.271±0.029,0.322±0.047与0.230±0.031),Bax表达轻微上调;应用JAK/STAT阻断剂后Bcl-2、Bcl-xl基因及蛋白质表达水平明显下降,而 Bax的基因及蛋白质水平明显升高.结论 在RA发病过程抗凋亡因子呈明显高表达状态,而JAK/STAT通路对凋亡调控基因具有直接的调节作用.

Abstract：

Objective To explore the effect of the JAK/STAT signal pathway on the apoptosis-related gene in the synovial tissue of rat rheumatoid arthritis (RA).Methods Fifty rat models of collagen-induced arthritis,whose arthritis index was more than 2,were divided into the model group,the low dose of AG490 group,the medium dose of AG490 group and the high dose of AG490 group.In addition,6 rats were treated intraperitoneal injection.Then,the arthritis index and the change of apoptosis-related genes were compared.Multiple-sample average was analyzed by single-factor x2 test and LSD-t or Tamhane's T 2 test were used for two-two comparison.Results The arthritis index of the model group increased evidently,and the apoptosis inhibitor Bcl-2,Bcl-xl gene and protein expression was up-regulated,which was significantly different when compared with that of the control group(0.931±0.035 vs 0.351±0.024,0.920±0.037 vs 0.271±0.029,0.322±0.047 vs 0.230±0.031 ).The expression of apoptosis promoting factor Bax wasslightly up-regulated.The blockage of JAK/STAT pathway cotld down-regulate the expression levels of the gene and protein of survivins Bcl-2 and Bcl-xl,and up-regulate the gene and protein expressions of Bax.Conclusion In the process of RA development,apoptosis inhibitor Bcl-2,Bcl-xl gene and protein expression is up-regulated.JAK/STAT signal transduction pathway regulates the apoptosis process.     

鳖甲煎丸对肝纤维化大鼠作用机制研究

[目的]探讨鳖甲煎丸抗肝纤维化的作用机制.[方法]采用复合因素建立肝纤维化大鼠模型.将大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组、鳖甲煎丸高剂量组、鳖甲煎丸等剂量组.秋水仙碱组[0.11mg/（kg·d）]、鳖甲煎丸高剂量组[2.2 g/（kg·d]及鳖甲煎丸等剂量组[1.1 g/（kg·d]分别予以相应药物灌胃,模型组及正常组给予等剂量的0.9％氯化钠灌胃,共6周.采用比色法检测血清丙氨酸氨基转移酶,天冬氨酸转氨酶（ALT、AST）水平,苏木精-伊红染色观察肝组织病理学变化及肝纤维化程度,免疫组化方法检测肝组织瘦素、瘦素受体表达水平.[结果]鳖甲煎丸能降低大鼠血清ALT、AST水平,减轻肝脏炎症及纤维化程度（均P＜0.01）;抑制模型大鼠肝组织瘦素及瘦素受体的表达（P＜0.01）.[结论]鳖甲煎丸能有效减轻模型大鼠肝纤维化的病理程度.其作用机制可能与降低大鼠血清ALT、AST水平,抑制大鼠肝组织瘦素及瘦素受体的表达密切相关.     

硫化氢对大鼠肝纤维化的抑制作用及机制探讨

目的观察外源性硫化氢（H2S）对四氯化碳（CCl4）诱导大鼠肝纤维化的抑制作用,并探讨其机制。方法将50只雄性SD大鼠随机分为5组,空白对照组皮下注射花生油2．0mL／kg体质量,肝纤维化组注射同剂量40％CCL4花生油,NailS低剂量组注射同剂量40％CCL4花生油＋NailS7μmol／kg,NailS高剂量组注射同剂量40％CCL4花生油＋NariS14μmol／kg,秋水仙碱组注射相同剂量40％CCL4花生油＋秋水仙碱0．25mg／kg灌胃,每周2次,共8周。采用全自动生化检测仪检测各组大鼠血清ALT、AST,放射免疫法检测肝脏组织透明质酸（HA）、层黏连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）及Ⅳ型胶原（CⅣ）,羟胺法检测肝组织超氧化物歧化酶（SOD）,比色法检测肝组织丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化酶（GSH—Px）,HE染色观察肝组织学改变,网状纤维和masson染色观察肝纤维组织增生状况,免疫组化法检测肝组织I型、Ⅲ型胶原。结果与空白对照组比较,肝纤维化组ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CIV、MDA升高,SOD、GSH—Px降低（P均〈0．05）;与肝纤维化组比较,NariS低剂量组、NaHS高剂量组、秋水仙碱组ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CIV、MDA降低,SOD、GSH—Px升高（P均〈0．05）。与肝纤维化组比较,NaHS低剂量组、NaHS高剂量组、秋水仙碱组肝纤维化程度减轻,肝组织胶原纤维异常分布明显减少,I型、Ⅲ型胶原明显减少。结论外源性H,S能有效抑制大鼠肝纤维化的发生、发展,其机制可能与其清除自由基、提高抗氧化物酶的活性、抑制HSC的胶原合成、减少细胞外基质在肝脏中的沉积有关。     

蓝莓对大鼠肝纤维化TGF-β1/Smads信号通路的影响

目的观察蓝莓对大鼠肝纤维化的预防作用及对肝纤维化大鼠肝组织转化生长因子（transforminggrowthfactor,TGF）-β1／Smads信号通路的影响。方法45只健康sD大鼠被随机分为正常对照组、模型组、蓝莓预防组、丹芍化纤胶囊预防组、蓝莓＋丹芍化纤胶囊预防组。每组9只。用四氯化碳（cch）制作大鼠肝纤维化模型,共8周。测定肝脏指数及血清ALT、AST并进行肝组织病理学检查,采用实时荧光定量RT—PCR检测TGF-β1、Smad4mRNA的表达,免疫组织化学法检测肝脏组织TGF-β1、Smad4及Smad7蛋白的表达。结果与正常对照组比较,模型组TGF-β1及Smad4的表达增高（P〈0．05）,而Smad7的表达降低（P〈0．05）。与模型组比较,各预防组血清ALT及AST均明显降低（P〈0．05）,TGF-β1及Smad4的表达均降低（P〈0．05）,而Smad7的表达均增高（P〈0．05）。结论蓝莓对GEL所致大鼠肝纤维化有一定的预防保护作用,其机制可能与蓝莓影响TGF-β1／Smads信号转导通路,从而下调TGF-β1及smad4的表达,同时上调Smad7的表达有关。     

瑞舒伐他汀激活JAK—STAT信号传导通路抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的：探讨瑞舒伐他汀（RSV）预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及相关信号传导通路机制。方法：采用结扎冠状动脉法制备大鼠心肌缺血再灌注模型。80只雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别为假手术组（Sham）、缺血再灌注组（I／R）、RSV组、RSV＋JAK激酶抑制剂（AG490）组。尾静脉内注射RSV和AG490。TuNEL检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学观察凋亡相关因子Bax及Bcl-2表达,westernblot检测JAK2、磷酸化JAK2（P—JAK2）及STAT3蛋白表达。结果：在缺血再灌注前给予外周血管内RSV治疗后,心肌组织凋亡水平（AI）及Bax表达水平显著低于I／R组,Bcl-2、P-JAK2及STAT3水平显著高于I／R组;而同时给予RSV及AG490预处理后,心肌AI及Bax表达水平较RSV组回升,Bcl-2、P—JAK2及STAT3水平较RSV组降低。结论：在缺血再灌注前,从外周血管给予RSV,可显著降低缺血再灌注所诱导的心肌细胞凋亡,其保护机制可能与JAK—STAT信号传导通路有关。