肾上腺素对体外培养心肌细胞心钠素分泌的影响

以培养的新生大鼠心房肌细胞和心室肌细胞为模型,采用放射免疫测定和免疫组织化学法,分别观察了肾上腺素对体外培养的心房和心室肌细胞分泌心钠素的影响。结果表明:肾上腺素(10~(-6)mol/L)不仅促使体外培养新生大鼠心房肌细胞心钠素的分泌,而且刺激心室肌细胞心钠素的分泌。     

能谱-X线微束分析检测α-actinin在额叶皮质神经干细胞定向分化神经元的表达

目的用能谱-X线微束分析检测新生大鼠额叶皮质神经干细胞分化的神经元各时段α辅肌动蛋白(α-actinin)原位超微分布及量的表达变化。方法采用神经干细胞培养、Aclar膜电镜免疫细胞化学方法、能谱-X线微束分析术对各时段分化的神经元中α-actinin的表达进行定位、定量检测。结果电镜免疫细胞化学显示α-actinin阳性表达呈电子密度高的球形颗粒,神经干细胞向神经元分化过程中,其表达分布逐渐密集由核周至充满胞质并伸至突起中,随着突起伸展而延伸分布,在原位超微结构表达基础上,能谱-X线微束分析检测结果表明了随着神经元的分化成熟,α-actinin的表达量逐渐增加。结论大鼠额叶皮质神经干细胞向神经元分化各时段α-actinin表达的分布变化及量的增加均与分化的神经元的生长发育成正相关。     

PGP9.5、SYn和α-actin在先天性肛门直肠畸形动物模型盆底肌的表达及意义

目的检测PGP9.5、SYn和α-actin在胎鼠正常盆底肌和肛门直肠畸形(ARMs)中的蛋白表达,探讨其表达意义。方法通过全反式维甲酸(ATRA)诱导大鼠胚胎产生ARMs动物模型,应用免疫组化方法检测正常与ARMs胎鼠直肠末端组织PGP9.5、SYn、α-actin在E16、18、20胎鼠盆底肌发育过程中的表达。结果正常组共产胎鼠91只,未见畸形、死胎、吸收胎;ATRA诱导大鼠共产胎鼠126只,除无肛畸形外,短尾、无尾畸形58例,存在显性脊柱裂、脑膜膨出等神经发育缺陷有29例,ARMs发生率为74.60%。E16、18、20胎鼠盆底肌:正常组PGP9.5、SYn和α-actin呈阳性表达;ARMs组PGP9.5、SYn和α-actin呈弱阳性表达,分布稀疏。PGP9.5、SYn强阳性表达率除E16 2组间差异无统计学意义外(P﹥0.05),E18、20差异有统计学意义(P<0.05)。α-actin在E16、18、20两种组织间强阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PGP9.5、SYn和α-actin分布异常是ARMs动物模型直肠末端壁的重要病理改变之一。     

CHOP在妊娠期肝内胆汁淤积症新生鼠心肌细胞表达水平变化

目的 探讨CHOP在孕鼠妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)胎鼠心肌细胞表达水平变化及意义。方法 健康清洁级孕龄14 d的SD大鼠随机分成ICP组和对照组，ICP组利用17α-乙炔基雌二醇诱导建立ICP大鼠模型，光镜观察妊娠第21天新生鼠心脏的病理改变，TUNEL检测心肌细胞凋亡、免疫荧光染色及Western Blot技术检测心肌细胞CHOP水平。结果 ICP组新生鼠心肌细胞萎缩，体积缩小，空泡样变性，核固缩；ICP组心肌细胞凋亡指数[(20.8±6.1)%]较对照组[(5.0±1.8)%]明显增高，差异有统计学意义(P<0.01)。ICP组新生鼠心肌细胞CHOP表达免疫荧光染色(IOD值108.96±21.82)较对照组(62.12±11.09)明显增加，Western Blot(IOD值1.17±0.04)较对照组(0.81±0.00)明显增加，差异均有统计学意义(P<0.01)。相关性分析结果显示，新生鼠心肌细胞凋亡率与心肌细胞CHOP表达量呈正相关(r=0.780,P<0.01),新生鼠心肌细胞凋亡率(r=0.835,P<0.01)和CHOP表达量(r=0.650,P<0.05)与孕鼠死胎率均呈正相关，且新生鼠心肌细胞凋亡率(r=0.740,P<0.01)和CHOP表达量(r=0.801,P<0.01)、孕鼠死胎率(r=0.736,P<0.01)与孕鼠总胆汁酸呈正相关。结论 CHOP在孕鼠ICP新生鼠心肌细胞中表达明显增加，孕鼠ICP时胎鼠心肌细胞凋亡可能由CHOP介导。     

乌司他丁对脓毒症膈肌p38MAPK信号通路的影响

目的观察乌司他丁对脓毒症膈肌p38MAPK信号通路的影响,以探讨其对脓毒症膈肌损伤的保护作用。方法 SPF级成年雄性SD大鼠30只,随机分为A组(假手术组,n=10)、B组(脓毒症组,n=10)及C组(乌司他丁治疗组,n=10)。其中,A组在给予水合氯醛麻醉成功后,从正中线剪开大鼠腹部,然后缝合伤口。B组和C组在麻醉成功后,使用盲肠结扎穿刺(CLP)模型将大鼠制成脓毒症动物模型,并且C组在术后立即给予乌司他丁治疗。所有大鼠在术后16h处死,取左侧膈肌检测肌条收缩力,右侧膈肌检测膈肌肌细胞凋亡率及p38MAPK蛋白表达水平。结果脓毒症组与假手术组比较,膈肌肌细胞凋亡率及p38MAPK蛋白表达明显上升,肌条收缩力明显下降,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。给予乌司他丁治疗后,膈肌细胞凋亡率、p38MAPK蛋白表达及肌条收缩力较脓毒症组明显恢复,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论乌司他丁能够有效抑制脓毒症时p38MAPK蛋白的表达,减少膈肌肌细胞凋亡率,从而减轻脓毒症膈肌损伤。     

生长抑素在老年鼠胃窦黏膜和血浆中的表达

目的研究老年鼠胃窦黏膜生长抑素含量和分布状况,探讨老化过程中生长抑素作为一种胃酸抑制因子存在的实际意义。方法选择不同年龄Wistar大鼠,雌雄不拘。青年鼠(3月龄)20只,体质量200～250 g;老年鼠(24～30月龄)15只,体质量400～450 g。动物按规定月龄取血,提取血浆样本,留取胃黏膜组织,采用放射免疫分析法,进行生长抑素测定。取胃窦新鲜组织,经冰冻切片进行生长抑素免疫组织化学染色。结果不同年龄组Wistar大鼠胃黏膜组织生长抑素具有不同的生理浓度,在老年鼠生长抑素含量呈高浓度分布,与青年鼠比较差异有统计学意义(P<0.01)。生长抑素免疫组织化学染色显示,胃窦D细胞形状不规则,胞质内布满生长抑素免疫复合物颗粒,老年鼠D细胞显色较深,其D细胞数量和免疫复合物颗粒多于青年鼠组,2者比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年大鼠D细胞数量增加,生长抑素分泌量增多,与其老年抑酸调节作用增强存在重要关系。     

肌肉特化锚定蛋白β在小鼠心室肌组织中的增龄性变化及其与肥大心室肌细胞的相关性

目的 研究肌肉特化锚定蛋白β(mAKAPβ)在小鼠心室肌组织中的增龄性变化及其与肥大心室肌细胞的相关性.方法 分别提取不同出生时间(1、7、40、90 d)的昆明小鼠的心室肌组织,常规提取RNA后,应用实时聚合酶链反应检测不同年龄阶段小鼠心肌组织mAKAPβ基因表达水平.使用白细胞干扰因子(LIF)处理新生小鼠心肌细胞(实验组),了解LIF对新生小鼠心肌细胞中mAKAPβ基因表达水平的影响.结果 随着小鼠年龄的增长,心室肌组织mAKAPβ的mRNA表达水平逐渐升高,出生1、7、40、90 d的小鼠心室肌组织的mAKAPβ mRNA相对表达量分别为1.00±0.00、1.52±0.06、1.81±0.14和2.20±0.18,各组间差异均有统计学意义(P值分别＜0.01、0.05).在LIF干预48 h后,实验组的心肌细胞面积明显增大,达(3 107.84±731.98)mm2,显著大于对照组的(2 348.19±533.00)mm2(P＜0.05).同时,实验组的mAKAPβmRNA相对表达量为1.62±0.02,显著高于对照组的1.00±0.00(P＜0.01).结论 mAKAPβ基因表达水平在小鼠心室肌组织中呈增龄性变化,随着小鼠年龄的增长,心肌组织mAKAPβmRNA相对表达量明显升高.在肥大的心室肌细胞中,mAKAPβ基因表达水平较正常心肌细胞明显升高.     

慢性间歇性低压低氧对大鼠心肌细胞内向整流钾通道的影响

目的 探讨慢性间歇性低压低氧(chronic intermittent hypobaric hypoxia,CIHH)对大鼠心室肌细胞内向整流钾通道电流(Ik1)的影响.方法 通过低压氧舱制备CIHH大鼠模型;全细胞膜片钳方法记录大鼠心室肌细胞Ik1.结果 基础条件下,CIHH与对照大鼠心肌细胞Ik1差异无统计学意义(P>0.05);模拟缺血导致大鼠心肌细胞Ik1明显降低(P＜0.05),CIHH处理28d大鼠心室肌细胞Ik1降低达(20±25)%(n=10),CIHH处理42d大鼠心室肌细胞Ik1降低达(17±22)%(n=10),明显小于control大鼠心室肌细胞Ik1降低的(46±11)%(n=10,P＜0.05).结论 CIHH可有效对抗模拟缺血对大鼠心肌细胞Ik1的抑制,可能是CIHH抗心律失常作用的离子机制之一.     

乳鼠窦房结细胞、心房肌细胞及心室肌细胞动作电位比较

目的研究乳鼠窦房结细胞、心房肌细胞及心室肌细胞的动作电位。方法选12只新生24 h内的Wistar大鼠乳鼠,分离培养窦房结细胞、心房肌细胞和心室肌细胞,运用全细胞膜片钳技术记录动作电位。结果窦房结细胞体积小,细而长,呈长梭形,搏动频率为（152.1±10.9）min-1;心房肌细胞体积亦较小,梭形或三角形,搏动频率为（116.3±8.6）min-1;心室肌细胞体积较大,可伸出伪足并交织成网,呈短梭形、多角形或不规则形,搏动频率为（92.4±9.3）min-1,3种细胞的搏动频率差别均有统计学意义（P＜0.01）。3种细胞的静息电位分别为（-41.3±4.0）,（-50.7±2.9）及（-59.8±2.1）mV,差别无统计学意义（P＞0.05）。心室肌细胞的APD20,APD50和APD90均较心房肌细胞延长,差别具有统计学意义（P＜0.05）。结论3种细胞形态各异,窦房结细胞具有自发性搏动,心室肌细胞动作电位时程较心房肌细胞长。     

缬沙坦对尿酸性肾病大鼠肾间质纤维化的干预机制研究

目的观察尿酸性肾病大鼠肾脏血小板反应蛋白-1(TSP-1)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及缬沙坦对其影响,探讨缬沙坦对尿酸性肾病大鼠肾间质纤维化的干预机制。方法选取雄性健康Wistar大鼠36只为研究对象,适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为正常组、模型组和缬沙坦组,每组12只。采用酵母和腺嘌呤建立尿酸性肾病模型,造模同时给予缬沙坦干预。于入组3周和5周时观察3组大鼠血尿酸(UA)、血肌酐(Scr)及肾脏病理变化,采用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾脏TSP-1和HIF-1α的表达。结果 3组大鼠3周和5周时测得的体质量、UA、Scr水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和缬沙坦组大鼠3周、5周时的体质量低于正常组大鼠,UA、Scr水平高于正常组大鼠,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠3周和5周时的体质量低于缬沙坦组,Scr水平高于缬沙坦组,差异均有统计学意义(P<0.01)。3组大鼠3周和5周时RT-PCR测得的TSP-1 mRNA、HIF-1αmRNA表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和缬沙坦组3周和5周时TSP-1 mRNA、HIF-1αmRNA的表达量均高于正常组(P<0.01),模型组3周和5周时TSP-1 mRNA、HIF-1αmRNA的表达量亦均高于缬沙坦组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠3周和5周时肾组织TSP-1 mRNA与HIF-1αmRNA的表达分别呈正相关(r值分别为0.821和0.736,P<0.05)。结论尿酸性肾病的发展存在缺氧状态;缬沙坦可能通过下调TSP-1及HIF-1α的表达改善肾脏纤维化程度。     

急性心肌缺血大鼠心肌α辅肌动蛋白含量变化及其与心功能的关系

目的观察大鼠心肌缺血及再灌注过程中心肌细胞骨架蛋白α辅肌动蛋白(α-actinin)含量的变化及其与心功能的关系。方法 Wistar大鼠随机分为假手术组(sham),缺血30min组(I30min),缺血1h组(I1h),缺血1h再灌注2h组(IR),每组各8只。通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌缺血及再灌注模型,记录左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左室内压上升最大速度(+dp/dtmax)、左室内压下降最大速度(-dp/dtmax)。采用免疫组化方法检测各组心肌中α-actinin含量和分布。ELISA法定量检测各组心肌组织磷酸肌醇3激酶(PI3K)和磷脂酶C(PLC)含量。急性分离大鼠心肌细胞,并用PI3K抑制剂(LY-29400)和PLC抑制剂(U-73122)处理细胞,观察其对心肌细胞收缩舒张能力及对α-actinin含量的影响。结果 (1)随缺血时间延长,大鼠LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax下降,LVEDP升高;再灌注后LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax回升,LVEDP回落,但不能恢复到缺血前水平。(2)免疫组化染色观察到随缺血时间延长,α-actinin出现点状、片状缺失,含量下降。(3)急性缺血过程中PI3K和PLC含量逐渐增加(P<0.05)。(4)应用LY-294002及U-73122后单个心肌细胞收缩幅度较缺血组明显增加(P<0.05)。(5)应用LY-294002及U-73122后心肌细胞α-actinin免疫荧光强度较缺血组增加(P<0.001)。结论心肌缺血时心肌细胞骨架蛋白α-actinin的含量减少可能与缺血后PI3K和PLC含量增加有关,并且α-actinin结构与含量变化可能是导致心肌功能障碍的原因之一。     

低氧诱导因子-1α在缺血和缺血/再灌注后大鼠心肌中的免疫组化表达型式

目的观察在心肌缺血和缺血/再灌注时大鼠心肌有无低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达及其表达的时-空间型式。方法选取220～280 g健康Wistar大鼠48只,随机分为3组:①正常对照组;②单纯缺血组;③缺血/再灌注组。利用免疫组织化学技术检测各组心肌HIF-1α的表达。结果正常对照组大鼠心肌组织未见HIF-1α表达。单纯缺血组大鼠心肌组织在缺血2 h即有HIF-1α的阳性表达,缺血12 h表达面积及强度达到最高,缺血24 h又有所下降。大鼠心肌组织中HIF-1α在细胞核及细胞浆中均有表达。在心肌缺血组大鼠心肌中的HIF-1α表达常呈区域性分布,与阴性表达区常有较明显的界限。缺血/再灌注组大鼠心肌组织在缺血45 min/再灌注1 h后即有HIF-1α表达,再灌注3 h后表达面积达到高峰,再灌注5 h又略有下降。单纯缺血组和缺血/再灌注组大鼠心肌组织的HIF-1α最高表达量差异无统计学意义。缺血/再灌注组大鼠心肌中的HIF-1α表达部位也呈区域性分布。结论心肌缺血或缺血/再灌注后大鼠心肌均有HIF-1α的表达,二者表达的时间过程相似,均在数小时内即达到高峰,且表达量差异无统计学意义;HIF-1α在细胞核及细胞浆中均有表达,在心肌组织中的表达常呈区域性分布,与阴性表达区常有较明显的界限,提示只在缺血部位有表达。     

微电极阵列芯片技术研究不同发育阶段C57小鼠心肌细胞的电生理特性

目的:微电极阵列芯片技术研究不同发育阶段C57小鼠心肌细胞的电生理特性。方法:分离13.5~19.5 d胎鼠和2 d乳鼠的心室肌细胞并培养于微电极阵列(Microelectrode arrays,MEA)电极盘中48 h,通过倒置相差显微镜,透射电镜、扫描电镜观察其形态,免疫组化鉴定并用MEA技术研究其电生理特性。并对生后1、7、14、21、28、35、>60 d的意识清醒未麻醉的小鼠行心电图(Electrocardiogram,ECG)和心率变异性(Heart rate variability,HRV)记录。结果:胎鼠心室肌细胞场电位时程(Field poten-tial duration,FPd)随发育而增加(P<0.01),乳鼠的突然明显缩短(P<0.01)。胎鼠心室肌细胞的搏动频率随发育而减慢。出生后小鼠的心律是窦性心律,平均PR、RR、QRS、QT、JT间期随发育逐渐缩短,7 d组比1 d组减少的差异有统计学意义(P<0.01),而14、21、28、35和>60 d之间差异无统计学意义。J-S-T段在1 d小鼠明显抬高,7 d组和14 d组逐渐降低,到35 d则基本回到基线。HRV随发育逐渐增加。结...     

EP对HIBD新生大鼠脑组织BCL-2及BAX表达的影响

目的:观察丙酮酸乙酯(EP)对缺血缺氧性脑损伤新生大鼠脑组织Bcl-2及Bax蛋白表达的影响,探讨EP在新生大鼠缺血缺氧性脑损伤脑组织中保护作用的可能机制。方法:90只Wistar新生大鼠,随机分为3组:A组为对照组,B组为模型组,C组为干预组。给动物吸入含有92%氮气和8%氧气混合气体建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)动物模型,免疫组化法观察大鼠海马区Bax、Bcl-2表达变化。结果:A组Bax、Bcl-2表达变化不明显;B组Bcl-2表达明显减少,与A组、C组比较差异有统计学意义(P<0.05);C组Bcl-2表达较B组明显增多(P<0.05)。B组Bax表达明显增多,与A组、C组比较差异有统计学意义(P<0.05),C组Bax表达较B组明显减少(P<0.05)。结论:丙酮酸乙酯对新生大鼠缺血缺氧性脑损伤脑组织有保护性作用,此作用可能与其调节Bcl-2和Bax表达水平有关。     

Hemin对缺氧缺血性脑损伤新生鼠脑保护作用的研究

目的观察氯化高铁血红素(Hemin)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织中脑红蛋白(Ngb)表达的影响,探讨Hemin的脑保护作用及机制。方法将7 d龄新生SD大鼠90只随机分为假手术组、HIBD组、HIBD+Hemin组共3组。采用结扎左颈总动脉、低氧诱导(8%氧气,32℃)2 h方法建立HIBD模型。HIBD建模后2 h,HIBD+Hemin组腹腔注射Hemin(50 mg/kg),假手术组与HIBD组腹腔注射生理盐水。24 h后处死取脑,分别行脑梗死体积百分比测定、荧光定量(RT-PCR)检测Ngb mRNA表达、免疫组化分析Ngb表达。结果 HIBD组和HIBD+Hemin组脑梗死体积百分比、Ngb mRNA和Ngb表达均较假手术组显著上升(P<0.01);与HIBD组比较,HIBD+Hemin组Ngb mRNA和Ngb表达均增加,而脑梗死体积百分比明显减少,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 Hemin可减轻新生鼠的缺氧缺血性脑损伤,其机制可能是通过上调Ngb的表达发挥作用。     

转化生长因子BⅡ受体在大鼠胰腺发育后期的表达

目的:探讨转化生长因子(TGF)-βⅡ受体在SD大鼠胰腺发育后期的表达及意义。方法:使用RT-PCR方法分别检测交配后18.5天、新生及成年SD大鼠胰腺TGF-βⅡ受体mRNA表达;使用Western blot方法分别对上述不同时期SD大鼠胰腺TGF-βⅡ受体表达进行蛋白质水平的检测。结果:新生鼠胰腺TGF-βⅡ受体表达在核酸与蛋白质水平上均明显高于18.5天胎鼠与成年鼠胰腺,差异有显著性(P<0.05)。结论:TGF-βⅡ受体表达在新生鼠阶段有明显上调。     

脂氧素受体激动剂BML-111对左向右分流型肺动脉高压大鼠作用的影响

目的观察脂氧素受体激动剂BML-111对肺动脉高压大鼠肺动脉压力和肺组织炎症的影响。方法选择SD大鼠30只,随机分为三组:C组、PH组、B组,PH组和B组大鼠行建立左颈总动脉-颈外静脉吻合加左侧股动脉-股静脉吻合,吻合饲养六周后,PH组每天腹腔注射生理盐水,B组每天腹腔注射1mg·kg-1·d-1BML-111连续四周,C组每天腹腔注射等量生理盐水。实验测量指标:平均肺动脉压力、右心室收缩压、RV/(LV+S)、肺小动脉中膜厚度百分比、小动脉肌化程度、新生内膜厚度百分比、肺组织匀浆炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1的水平。结果 PH组和B组平均肺动脉压力、右心室收缩压、RV/(LV+S)、肺小动脉中膜厚度百分比、小动脉肌化程度、新生内膜厚度百分比高于C组(P<0.05),PH组和B组大鼠肺组织匀浆IL-6、TNF-α、MCP-1的含量高于C组(P<0.05);B组平均肺动脉压力、右心室收缩压、肺小动脉中膜厚度百分比、新生内膜厚度百分比低于PH组(P<0.05),B组大鼠肺组织匀浆IL-6、TNF-α、MCP-1均低于PH组(P<0.05)。结论脂氧素受体激动剂BML-111可减轻左向右分流型肺动脉高压大鼠肺动脉压力,其机制可能与减轻肺周围组织炎症反应有关。     

宫内感染中TNF-α的作用及对新生鼠脑髓鞘碱性蛋白表达变化的影响

目的:研究妊娠18 d孕鼠腹腔注射脂多糖(LPS)致胎鼠损伤中肿瘤坏死因子α(TNF-α)作用及新生鼠脑髓鞘碱性蛋白(MBP)表达的变化.方法:孕18 d大鼠随机分为盐水对照组、LPS组,观察孕鼠腹腔注射LPS(0.1,0.2,0.3,0.4 mg/kg)后胎盘病理变化,免疫组化技术检测胎盘TNF-α表达并统计胎鼠死亡率;免疫组化技术检测孕鼠注射LPS0.2 mg/kg后两组新生鼠生后1,3,7,14 d脑组织MBP表达的变化.结果:LPS组胎盘组织炎性病理改变及TNF-α表达明显增强.LPS组药物剂量越大,胎鼠死亡率越高.新生鼠生后7 d有MBP表达,14 dMBP表达增多.LPS组脑组织内MBP表达与同日龄对照组比较减弱,灰度值明显高于对照组(P＜0.01).结论:TNF-α可能是致胎鼠损伤的关键细胞因子;母体注射LPS可对新生鼠髓鞘发育产生重要影晌,导致新生鼠脑损伤.     

PEA3基因在大鼠肾脏组织不同发育时期的表达

目的:探讨PEA3基因在大鼠肾脏组织发育后期不同阶段的表达变化,分析PEA3基因与肾脏发育的关系。方法:获取出生后第1、7、21天和成年大鼠肾脏组织,采用RT-PCR技术检测肾脏组织中PEA3基因mRNA的表达水平。结果:PEA3基因在新生鼠肾脏表达丰富(64.09±10.12)%,出生后7天表达明显减少(22.43±7.97)%,出生后21天(12.79±2.90)%和成年鼠肾(11.17±3.08)%表达微弱,除出生后21天和成年大鼠两组间表达没有统计学差异外,其他各组表达差异均有统计学意义。结论:PEA3基因的表达水平随肾脏发育的成熟而下降,可能与肾脏发生发育有关。     

新生大鼠原代心房肌细胞钙超载模型的建立

目的 探讨建立新生大鼠原代心房肌细胞钙超载模型的方法 .方法 用消化法分离新生大鼠心房肌细胞并进行原代培养.纯化后随机分为对照组(C组)、实验组(E1、E2、E3组),依次加入不同浓度(0.5、1.0、2.0 μmol/L)伊屋诺霉素(ionomycin),以钙离子指示剂Fluo-3/AM负载心房肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜检测心房肌细胞游离钙离子浓度([Ca2+]i),建立新生大鼠心房肌细胞不同程度钙超载模型.结果 (1)培养至第4天,细胞生长密度可以达到瓶底70%左右;免疫组织化学染色鉴定:90%以上培养细胞α-肌动蛋白抗体染色呈阳性;(2)对照组心房肌细胞活性率为(73.00±2.37)%,与各实验组心房肌细胞活性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);(3)经不同浓度ionomycin处理l h后,各实验组心房肌细胞[Ca2+]i明显增高,与对照组比较,差异有统计学意义(431.54±20.97、705.87±28.34、1 305.05±53.69 vs 257.08±18.63,P<0.05),且各实验组间心房肌细胞[Ca2+]i水平随ionomycin浓度的增加而上升,实验组间比较,差异有统计学意义(P<0.05).光镜下形态学观察表明,随ionomycin浓度的增加,荧光强度逐渐加强,呈浓度依赖性.结论 应用钙离子载体ionomycin能够建立可靠的心房肌细胞钙超载模型.