人参皂苷及其三醇对白血病细胞增殖抑制、凋亡和药敏的研究

目的:观察人参总皂苷(GS)及其三醇(GPT)对白血病祖细胞增殖抑制、诱导凋亡及化疗药物的协同作用，寻找GS中抗白血病的有效成分。方法:从人参提取GS，再分离出有效成分GPT；用白血病原代细胞与细胞株进行半固体祖细胞集落培养和液体培养，经GS或GPT处理后，采用MTT试验、流式细胞术、Annexin V试验和DNA片段电泳分析及药敏试验等方法检测。结果:(1)GS对白血病祖细胞的促进和抑制增殖的作用呈剂量依赖性，即小剂量刺激正常和白血病祖细胞增殖，中等剂量仍促进正常集落增加，但抑制白血病集落生长。(2)GS与化疗药高三尖杉酯碱、阿糖胞苷、阿霉素和足叶乙苷具有协同增敏作用，小剂量就能增强化疗药物的杀伤作用1．84—2．23倍，并使部分药敏试验由原先的不敏感转为敏感。(3)50mg/L的GS使化疗药物对K562／VCR、K562/／Adr两耐药细胞株的抑制作用明显，且随着GS浓度的升高而逐渐增强。(4)50mg/L的GS作用于HL-60细胞3d能够诱导其凋亡，Annexin V阳性细胞率明显增高，并出现典型的DNA梯形条带。(5)GPT 20mg/L低浓度能够显著地刺激K562细胞增殖，中浓度50mg／L时则抑制细胞增殖。GPT分别与化疗药物高三尖杉酯碱、阿糖胞苷联合应用时，对K562细胞的抑制作用明显增强。结论：不同剂量的GS及GPT对白血病祖细胞具有刺激增殖与抑制生长的双向效应，即小剂量时通过刺激增殖而增强化疗药物的杀伤作用，中等剂量则诱导白血病细胞凋亡。提示GPT是人参皂苷内抗白血病的有效成分，可为临床用作白血病的辅助治疗提供依据。     

三氧化二砷增强ST1571对K562细胞的细胞毒作用

目的 探讨ST1571联合三氧化二砷(arsenie trioxide，ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞增殖和活力检测、形态学观察、细胞凋亡率和细胞周期检测等方法观察ST1571和ATO对CMI，细胞系K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡效应。结果 ST1571和ATO均可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡，并使细胞阻滞于G2／M期；当两药物联合运用时，明显增强对K562细胞增殖的抑制作用，细胞凋亡率也较两药单用组明显增高。结论 ATO能增强ST1571对K562细胞的细胞毒效应和诱导凋亡作用。     

三氧化二砷增强STI571对K562细胞的细胞毒作用

目的 探讨STI571联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞增殖和活力检测、形态学观察、细胞凋亡率和细胞周期检测等方法观察STI571和ATO对CML细胞系K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡效应。结果 STI571和ATO均可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,并使细胞阻滞于G2／M期;当两药物联合运用时,明显增强对K562细胞增殖的抑制作用,细胞凋亡也较两药单用组明显增高。结论 ATO能增强STI571对K562细胞的细胞毒效应和诱导凋亡作用。     

小剂量阿糖胞苷与重组人白血病抑制因子联合诱导HL-60细胞凋亡的作用

白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)是一类具有广泛生物学活性的细胞因子,对胚胎发育、神经细胞再生、关节软骨代谢、肿瘤细胞增殖等方面均有影响[1-3].阿糖胞苷(Cytosinearabinoside,Ara-c)是治疗白血病的重要药物.有研究认为,化疗药物是否能够有效地诱导白血病细胞凋亡是判断急性髓系白血病(AML)患者化疗敏感性的重要指标[4].资料显示,小剂量Ara-c及rh-LIF单用均可诱导细胞凋亡[5,6].最近,小剂量Ara-c与其它药物联合治疗白血病获得较好疗效[7,8].本文报道rh-LIF和Ara-c联合诱导HL-60凋亡的作用.     

IL-15联合GM-CSF对外周血中NK细胞活性的影响

目的选择细胞因子IL-2、IL-15和GM CSF作为刺激物,观察其对NK细胞的激活作用。方法健康成人及化疗缓解后的白血病患者外周血细胞单个核细胞,经过IL-2、IL-15、GM CSF培养,MTT法检测其增殖程度的变化,及活化后的单个核细胞对白血病K562的细胞毒作用。结果正常人外周血单个核细胞及化疗后缓解组外周血单个核细胞,经过IL-2、IL-15、IL-15 GM CSF分别作用后,细胞均呈现不同程度的增殖。但化疗后缓解组与各组的细胞因子联合孵育后,其增殖程度均小于正常人。其杀伤活性IL-15活化组优于IL-2组,而IL-15联合应用GM CSF后对K562杀伤活性优于单用IL-15。缓解组与正常对照组相比对K562的杀伤活性均明显降低,当与细胞因子IL-15、GM CSF联合孵育后,杀伤活性均显著提高(P<0.01),并且缓解组接近正常人水平。结论正常人及白血病患者的外周血单个核细胞与IL-15和GM CSF联合孵育,有效刺激外周血单个核细胞增殖。明显提高了正常人及白血病患者的外周血单个核细胞对K562的杀伤能力。     

SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

目的：研究SeO2对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响。方法:采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达。结果:10和30mmol／L SeO2能抑制3种细胞增生。30mmol／L SeO2作用48h能使54．0％的NB4细胞、46．5％的K562细胞和49．6％的HL-60细胞发生凋亡；能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达。结论:SeO2对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用，在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控。     

rhGM—CSF联合rhIL—4对髓性白血病细胞B7分子表达的上调作用

目的 探讨GM－CSF联合IL－4对髓性白血病细胞表面B7分子表达的上调作用。方法 从初诊急性或慢性髓性白血病患者的外周血中分离出单个核细胞（PBMNC）,用rhGM-CSF联合rhIL-4共同孵育7－10d;通过流式细胞仪检测细胞因子诱导前后细胞表面B7分子的表达。结果 未经细胞因子诱导的白血病细胞表面B7分子低表达或缺如,经过GM－CSF联合IL－4 7－10d的诱导,可显著上调B7分子的表达。结论 髓性白血病细胞表面存在B7分子表达缺陷;用GM－CSF联合IL－4进行诱导是纠正这种缺陷的一条途径。     

人硫氧还蛋白及其变异体对TF-1和NFS60细胞的凋亡抑制和促增殖效应

目的:比较rhTRX与rhTRXδ3对细胞因子依赖株TF-1细胞、NFS60细胞撤除细胞因子所诱导凋亡的抑制及促细胞增殖作用.方法:在大肠杆菌中克隆并表达重组hTRX和hTRXδ3,纯化rhTRX与rhTRXδ3蛋白,FACS检测凋亡细胞,MTT法检测细胞增殖.结果:在依赖IL-3、GM-CSF生长的TF-1细胞(人红白血病细胞)和依赖G-CSF生长的NFS60细胞(小鼠白血病细胞)撤除细胞因子后,加入rhTRXδ3比加入rhTRX能更有效地抑制这两种细胞的凋亡并有促增殖的作用.结论:重组hTRX和hTRXδ3有着不同的生物活性,rhTRXδ3有着更强的抑制这两种细胞的凋亡和促增殖的作用.     

二氧化硒诱导肺癌细胞株A549和GLC-82细胞凋亡及对bcl-2、p53基因表达的影响

目的探讨二氧化硒（SeO2）对肺癌细胞株A549、GLC-82的增生、凋亡以及bcl-2和p53基因表达的影响。方法用MTT比色法检测二氧化硒（SeO2）对细胞增殖和存活的影响；用光学显微镜和荧光显微观察了细胞经过SeO2处理后的形态学改变；利用流式细胞术测定细胞的凋亡率及bcl-2和p53的表达。结果SeO2可明显抑制肿瘤细胞的增殖，促进细胞的凋亡。10μmol／L的SeO2作用48h后，A549细胞、GLC-82细胞的凋亡率分别为钾。8％、40．8％。用不同浓度（从3-30μmol／L）的SeO2处理肿瘤细胞48h，在A549细胞中，bcl-2的表达从65．8％下降至9．6％。结论SeO2对2种肺癌细胞株均有诱导凋亡的作用，在凋亡过程中涉及到bcl-2下调和p53上调。     

广西眼镜蛇毒对人类小涎腺腺样囊性癌细胞株的抑制作用

目的研究广西眼镜蛇毒（guangxi cobravenom）对人类小涎腺腺样囊性癌（NACC）细胞在体外生长的抑制作用。方法以不同浓度的眼镜蛇毒作用于NACC细胞，应用三磷酸腺苷一生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法（ATP—TCA法）测定细胞的增殖状态；应用细胞形态学和流式细胞仪观察细胞凋亡。结果实验显示眼镜蛇毒对体外培养的NACC有明显的抑制作用，与浓度和作用时间呈正比。用浓度2．0μg／mL的眼镜蛇毒处理癌细胞48h后，试验组细胞凋亡率显著高于对照组。HE染色观察到眼镜蛇毒作用NACC细胞后其形态发生改变。结论眼镜蛇毒能抑制NACC细胞增殖并诱导其凋亡。     

紫杉醇和姜黄素联用对人卵巢癌细胞系OC3的抑制作用

目的：观察姜黄素和紫杉醇联用对卵巢癌细胞系OC3生长的影响。方法：采用MTT法计算细胞抑制率；Giemsa染色观察细胞形态学变化；TUNEL染色计算细胞凋亡指数。结果：姜黄素可明显抑制OC3细胞的生长，其半数生长抑制率(ID50)约为11．2μmol／L；Giemsa染色显示紫杉醇、姜黄素或二者联合用药均可诱导细胞凋亡，联合用药后诱导细胞凋亡的作用增强；姜黄素能增加紫杉醇的细胞凋亡指数，并呈剂量依赖性。结论：姜黄素与紫杉醇协同可抑制人卵巢癌细胞系OC3的增殖；二者联合化疗有增效减毒作用。     

联用重组的IL-3、GM-CSF对阿糖胞苷诱导的HL-60细胞凋亡的影响

为研究在阿糖胞苷（Ara－C）的作用下，基因重组的人白细胞介素3（rh－IL－3）、粒单祖细胞集落刺激因子（rh－GM－CSF）对白血病细胞凋亡的影响，选用了HL－60白血病细胞系，采用DNA电泳、流式细胞仪检测、单克隆抗体C－myc、bcl－2抗原表达的分析以及白血病细胞集落的培养观察方法，观察了0～36h8个不同时相凋亡率与其他指标的变化，表明Ara－C凋亡的作用随药物孵育时间的延长而逐渐增强，凋亡率从0h的1．5％升至36h后的36．4％，而IL－3和GM－CSF能使这种作用明显提高，使凋亡率从7．6％升至19．6％，并能增强Ara－C对白血病细胞的杀灭，引起HL－60细胞C－myc抗原表达下降，而bcl－2抗原表达变化不大，同时发现这两种细胞因子对正常造血细胞影响较小，这为临床上白血病诱导缓解期联用rh－IL－3、rh－GM－CSF和细胞毒药物，提高缓解率，提供了理论依据。     

三丁酸甘油酯对K562 白血病细胞的体外作用

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂三丁酸甘油酯(tributyrin，TB)对K562白血病细胞增殖、凋亡的影响，并进一步探讨其作用机制。方法用细胞计数及台盼兰拒染法观察TB对K562细胞增殖及活力的影响，通过细胞形态观察、流式细胞术分析观察TB对K562细胞体外诱导凋亡的情况，RT—PCR技术分析p2l^WAFl表达的改变。结果(1)TB抑制：K562细胞的增殖。(2)TB诱导K562白血病细胞的凋亡，影响细胞周期的进程，使细胞周期阻滞于G2／M期。(3)在TB引起的K562细胞增殖抑制及凋亡过程中，p2l^WAFl表达增加。结论TB抑制K562白血病细胞的增殖并诱导凋亡，阻滞细胞周期进程于G2／M期，p2l^WAFl在此过程中发挥作用。     

EVn-50抑制人宫颈癌Hela细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的探讨EVn-50对体外培养的人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞，台盼蓝拒染法检测EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响；平皿克隆形成法、软琼脂克隆形成法测定EV-n50对人宫颈癌Hela细胞锚定依赖性生长和锚定非依赖性生长作用的影响；AO／EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导Hela细胞凋亡的形态学改变；DNA凝胶电泳确证EVn-50诱导Hela细胞凋亡作用。结果EVn-50对体外培养人宫颈癌Hela细胞的增殖具有显著抑制作用，呈浓度依赖性。EVn-50可诱导Hela细胞凋亡，AO／EB染色可见典型凋亡小体；DNA凝胶电泳在EVn-50浓度100μg／mL作用48h出现典型“梯形”DNA条带。结论EVn-50具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡作用。     

吲哚美辛诱导的HL-60白血病细胞凋亡与JNK信号转导途径活化

目的：观察吲哚美辛对HL-60白血病细胞增殖的抑制作用及细胞凋亡的诱导作用，了解c-Jun N-末端激酶(JNK)信号转导途径在介导吲哚美辛诱导的HL-60细胞凋亡中的活化状态，揭示吲哚美辛诱导HL-60细胞凋亡的分子机制。方法：以台盼蓝染色检测药物干预后的HL-60细胞活力；分析HL-60细胞的增殖能力；DNA梯状胶电泳及吖啶橙／溴化乙锭染色形态学分析鉴定细胞凋亡；Western印迹检测凋亡信号蛋白caspase-9，-3和PARP的裂解激活以及JNK信号途径蛋白质MEK4，JNK，P-JNK，P-C-Jun的表达及活化状态。结果：200～400txmol的吲哚美辛能够显著抑制HL-60细胞增殖和诱导HL-60白血病细胞凋亡，并呈浓度和时间依赖性；HL-60细胞凋亡伴有easpase-9，3和PARP的表达上调及裂解激活；MEK4蛋白表达呈浓度依赖性上调；磷酸化JNK和磷酸化C-Jun呈浓度依赖性上调。结论：吲哚美辛可抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡；JNK信号途径活化介导了吲哚美辛诱导的凋亡。JNK途径的活化导致了下游caspase途径的活化。     

地塞米松抑制核因子-κB活化增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡

目的 研究化疗药物诱导HL60—n白血病细胞核因子—κB（NF—κB)活化与凋亡的关系，并探讨地塞米松(DXM)对其的影响。方法 采用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测细胞NF—κB活化水平；采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(Tunel)检测细胞凋亡。结果 化疗药物诱导HL60—n白血病细胞NF—κB活化与化疗药物诱导细胞凋亡明显相关，1μmol/L DXM能显著抑制高三尖杉酯碱(HHT)0．5μmol/L或足叶乙甙(VP—16)1μmol/L诱导的HL60—n细胞NF—κB活化，抑制率分别为49．69％和44．35％，并增强它们诱导HL60—n细胞凋亡的作用，凋亡增加率分别为57．5％和37．2％。HL60—n细胞在接触化疗药物前，NF-κB亦有一定程度的活化。结论 化疗药物在诱导HL60—n白血病细胞凋亡的同时活化NF—κB，DXM可通过抑制NF—κB活化以增强化疗药物诱导白血病细胞凋亡的作用。     

重组人干细胞因子与重组人粒细胞集落刺激因子联合用药的猴毒性研究

重组人干细胞因子(rhSCF)和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG—CSD是临床常用的造血生长因子(HGF)，实验提示rhSCF和rhG—CSF与IL3、IL-6、粒-巨噬细胞刺激因子、Epo等造血生长因子的各种联合应用有增效作用。rhSCF和重组人粒／单集落刺激因子(rhGM—CSF)均能刺激CFU-GM生成，     

姜黄素联合吉西他滨对肝癌细胞HepG2增殖、凋亡的影响

目的:观察姜黄素、吉西他滨单药及联合用药对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法:使用不同浓度的姜黄素、吉西他滨以及两药联合分别作用肝癌细胞HepG2 24h、48h、72h。MTT法检测上述药物单用或联用对HepG2细胞的生长抑制作用;采用流式细胞仪检测其对HepG2细胞凋亡率的影响。结果:姜黄素、吉西他滨单药及联合用药对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,存在时间剂量依赖关系,均可诱导HepG2细胞凋亡,联合用药有协同作用。结论:姜黄素、吉西他滨能够抑制HepG2细胞增殖,诱导细胞凋亡,两药联用有协同作用。     

小檗胺诱导白血病细胞株NB4细胞凋亡及其机制的研究

目的：探讨小檗胺对白血病细胞系NB4生长的影响及其机制。方法：体外培养人白血病细胞株NB4细胞，经不同浓度小檗胺处理不同时间后，MTT法检测药物对NB4细胞的抑制作用；细胞形态学观察和DNA琼脂糖电泳检测细胞凋亡；流式细胞仪检测DNA含量及细胞周期；巢式PCR及RT-PCR检测PML／RARα融合基因及Survivin基因表达及流式细胞仪检测Caspase3阳性表达率。结果：经不同浓度小檗胺处理不同时间后，NB4细胞生长出现明显的抑制，并呈现明显的时间剂量依赖性，48h IC50为3．860μg／ml；细胞形态学观察可见细胞凋亡现象，DNA琼脂糖电泳显示典型的凋亡梯形图；流式细胞仪检测发现细胞凋亡率明显增加，经48h作用后，凋亡率从2．83％增至12μg／ml时的58．44％；虽未发现药物作用后PML／RARα基因表达量的改变，但检测到NB4细胞经药物作用后Survivin基因表达量的减少和Caspase3表达的增加，Caspase3阳性率从对照组的2．06％增至12μg／ml时的70．89％。经相关性分析，随着细胞Survivin表达水平的下降和Caspase3表达水平的增高，NB4细胞凋亡率相应地增高。结论：小檗胺对NB4细胞有增殖抑制作用，诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤作用的重要机制之一，但不是通过作用于NB4细胞特异性融合基因PML／RARα发挥作用的，其抗凋亡的可能分子机制之一是抑制Survivin基因的表达和增加Caspase3的表达。     

原代白血病细胞survivin基因表达与化疗药物诱导凋亡敏感性关系

目的：探讨原代白血病细胞survivin基因表达与化疗药物诱导凋亡的敏感性关系。方法：RT—PCR方法检测初发ANLL细胞suntivin mRNA的表达。DNA片段原位末端标记(TUNEL)方法检测不同化疗药物体外诱导的白血病细胞凋亡。结果：原代ANLL细胞与HHT、AcLa、Ara—C孵育15h后，survivin mRNA阳性表达的ANLL细胞凋亡率低于阴性表达者。联用HHT Ara—C或AcLa Ara—C体外处理原代ANLL细胞15h后．survivin mRNA阳性表达的ANLL细胞凋亡率亦低于阴性表达者。且survivin mRNA阴性的ANLL患者骨髓缓解(BMR)率高于survivin mRNA阳性者((2／2)对(3／11))。结论：sunrvivin基因阳性表达的ANLL细胞对化疗药物诱导凋亡不敏感。