短发夹RNA对人视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子表达的抑制

目的探讨针对人血管内皮生长因子（VEGF）的短发夹RNA（shRNA）在体外对视网膜色素上皮（RUE）细胞VEGF表达的影响。方法用酶辅助显微分离法分离人RPE细胞,并用细胞角蛋白和S-100进行免疫组化鉴定。设计针对人VEGF的短发夹RNA（shRNAs,P1,P2）,P3为阴性对照即不含特异性shRNA,P1、P2退火后双链DNA连接到质粒pSilencer 4．1-CMV的BamHⅠ和Hjnd Ⅲ双酶切位点。转化细菌后,提取的质粒用EcoRⅠ和SamⅠ进行酶切鉴定。实验分5组,第1组：RPE细胞中在含有100μmol／LCoCl2,10％胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中培养30h;第2组：在常规含有10％FBS的DMEM培养基中培养30h;第3、4、5组：分别P1、P2、P3转染细胞24h后在含有100μmoL／LCoCl2的10％FBS的DMEM培养基中培养30h;用免疫印迹法检测各组细胞VEGF表达水平。结果培养的细胞用细胞角蛋白和S-100免疫组化染色阳性。提取的质粒经酶切后片断相对分子质量分别为3300和1600,说明质粒成功地提取和纯化。VEGF表达水平1组明显高于2、3、4组（均P〈0．001）。乏氧（2组与1组比）可以明显增加RPE细胞中VEGF的表达。3、4组（P1和P2）对VEGF表达抑制分别为65．9％和52．4％。5组与1组比差异无统计学意义（P=0．147）。各组间β肌动蛋白表达量差异无统计学意义。结论针对人VEGF的特异性shRNA可以明显降低人RPE细胞VEGF的表达,为RNA干扰治疗新生血管性眼病,尤其是脉络膜新生血管奠定了基础。     

缺氧和高糖对视网膜色素上皮细胞增生及VEGF、TGF-β1表达的影响

目的 探究缺氧、高糖环境对体外培养的视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞生长、增生及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)表达变化的影响.方法 采用酶消化法进行C57小鼠RPE细胞的体外原代培养.通过组织形态学观察和免疫化学染色对培养的RPE细胞进行鉴定.实验缺氧组:在DMEM培养液中加入CoCl2,使其浓度分别为50μmol·L-1、100μmol·L-1、200μmol·L-1;实验高糖组:在DMEM培养液中加入D-葡萄糖,使其浓度分别为15 mmol·L-1、30 mmol·L-1、45 mmol·L-1.分别向培养的RPE细胞中加入上述培养液,共6组,每组3份;正常对照组加入含5.5 mmol·L-1葡萄糖、不含CoCl2的培养液.观察各组细胞在不同培养条件下的活力、倍增时间及增生情况.采用ELISA法检测各组细胞在培养不同时间后(24 h、48 h、72 h)上清液中VEGF及TGF-β1表达量的变化.结果原代培养及传代早期的RPE细胞生长较为旺盛;在缺氧和高糖培养条件下所培养的细胞活力和分裂次数均较正常对照组有所降低或减少,而倍增时间较正常对照组延长.在缺氧和高糖培养条件下培养24 h、48 h、72 h后,细胞上清液中VEGF和TGF-β1表达量均较正常对照组高(P<0.05);当CoCl2浓度为100 μmol·L-1和D-葡萄糖浓度为30mmol·L-1时,VEGF和TGF-β1在24 h、48 h、72 h表达均高于其他浓度,缺氧状态下48 h表达量分别为(43.28±0.88)ng·L-1和(8.90±1.38)ng·L-1,高糖状态下分别为(39.76±0.56)ng·L-1和(8.81±0.92)ng·L-1;缺氧组2种细胞因子表达量在48 h达到高峰,而高糖组在72 h达到高峰.结论 应用酶联合消化法可获得纯度较高的体外C57小鼠培养RPE细胞;缺氧和高糖状态可对RPE细胞增生起到明显抑制作用,但能够明显上调RPE细胞的VEGF、TGF-β1表达量.     

曲安奈德对缺氧条件下培养人RPE细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的 探讨曲安奈德(TA)对体外缺氧培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)合成的影响.方法 研究人RPE细胞分别在150 μmol/L CoCl2 0 μh/mL TA(0μg/mL TA组)、150μmol/L CoCl2 50 μg/mL TA(50μg/mL TA组)和150 μmol/L CoCl2 200斗g/mL TA(200μg/mL TA组)的培养条件下,通过RT-PCR检测HIF-1α及VEGF mRNA的表达,使用Western blot检测其蛋白水平.结果 与0μg/mL TA组相比,50μg/mL TA组及200μg/mL TA组中VEGF mRNA及蛋白的表达明显下降,差异均具有统计学意义(P＜005),但HIF-1α mRNA及蛋白的表达无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 TA对缺氧条件下人RPE细胞HIF-1α表达无影响,但能有效地抑制VEGF的表达,对缺血性视网膜病变新生血管形成具有防治作用.     

磷脂酰肌醇-3激酶信号通路在缺氧诱导的人视网膜色素上皮细胞VEGF表达中的作用

目的:探讨磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol3-ki-nase,PI3K)信号转导通路对缺氧诱导的视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelium,RPE)细胞表达VEGF的影响。方法:利用CoCl2建立培养的人RPE细胞缺氧模型,分为单纯缺氧组和30μmol/LPI3K特异性阻断剂LY294002阻断处理组,在缺氧条件下分别培养0,1,4,8,12和24h。细胞免疫荧光法检测磷酸化PI3K表达水平;酶联免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)检测RPE细胞上清中VEGF的含量。结果:缺氧刺激1,4,8,12和24h,RPE细胞膜上PI3K磷酸化表达水平逐渐增高(P<0.05);随缺氧时间延长,RPE细胞上清液中VEGF含量逐渐增加(P<0.05);LY294002处理组VEGF含量显著低于对照组(P<0.05)。结论:PI3K信号转导通路参与了缺氧引起的人RPE细胞VEGF表达的调控。     

三氧化二砷对兔视网膜色素上皮细胞DNA损伤的研究

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对视网膜色素上皮（RPE）细胞的损伤作用。方法按照Singh的方法从色素兔眼分离RPE细胞并进行体外培养,培养的细胞用细胞角蛋白进行免疫组织化学鉴定。按照对培养细胞的干预方式不同分为阴性对照组（培养基中加入PBS）、阳性对照组（254nm紫外线照射10min）及实验组。实验组分别在培养基中加入终浓度为50．00、5．00、2．00、1．00、0．50、0．25μmol／L的As2O3作用1h。采用锥虫蓝染色法检测各组细胞的活性。采用彗星实验的方法测定细胞的损伤程度。结果90％以上的培养细胞对细胞角蛋白产生阳性的免疫反应。锥虫蓝染色表明各组细胞的形态和细胞活力均无明显差别。不同组中RPE细胞的尾部DNA含量和尾距的差异均有统计学意义（F=88．548,P=0．000;F=129．704,P=0．000）。与对照组比较,不同浓度的As2O3实验组RPE细胞的尾部DNA含量和尾距明显增加,差异均有统计学意义（P〈0．05）,其中50μmol／L组最明显,而0．5μmol／L、0．25μmol／L组与对照组间差异则无统计学意义（P〈0．05）。结论As2O3能够诱导RPE细胞的DNA损伤,损伤程度与As2O3的浓度有关。     

CoCl2诱导大鼠视网膜前体细胞表达VEGF的研究

目的：探讨氯化钴（CoCl2）模拟缺氧环境下对大鼠视网膜前体细胞（RPCs）中血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）基因表达及蛋白分泌的影响。方法：全神经球贴壁法分离、培养、鉴定RPCs。应用RT-PCR及ELISA,检测不同浓度CoCl2（0,50,100,150,200μmol/L）干预24h后RPCs中VEGF表达的变化,检测150μmol/LCoCl2作用不同时间（0,12,24,36,48,72h）RPCs中VEGF表达的变化。结果：全神经球贴壁法培养的RPCs高表达神经干细胞特异性标记（Nestin）,自然分化后表达视网膜细胞标志性抗原Rhodopsine,MAP-2和GFAP,在缺氧培养时间相同的情况下,VEGF基因的表达随着CoCl2浓度的增加而逐渐增加而后降低,CoCl2为150μmol/L时达到峰值（P≤0.05）。当CoCl2浓度为150μmol/L培养不同时间时,随着缺氧干预时间的延长,VEGF基因的表达亦是逐渐增加而后降低,于36h时达到峰值（P≤0.05）,蛋白与基因表达的变化基本一致。结论：全神经球贴壁法培养RPCs能较好地表达其干细胞特性。CoCl2模拟缺氧环境下,缺氧使RPCs中VEGF的分泌增强并具有时间和剂量依赖性。     

CoCl2诱导大鼠视网膜前体细胞表达VEGF的研究

目的:探讨氯化钴(CoCl2)模拟缺氧环境下对大鼠视网膜前体细胞(RPCs)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因表达及蛋白分泌的影响。方法:全神经球贴壁法分离、培养、鉴定RPCs。应用RT-PCR及ELISA,检测不同浓度CoCl2(0,50,100,150,200μmol/L)干预24h后RPCs中VEGF表达的变化,检测150μmol/LCoCl2作用不同时间(0,12,24,36,48,72h)RPCs中VEGF表达的变化。结果:全神经球贴壁法培养的RPCs高表达神经干细胞特异性标记(Nestin),自然分化后表达视网膜细胞标志性抗原Rhodopsine,MAP-2和GFAP,在缺氧培养时间相同的情况下,VEGF基因的表达随着CoCl2浓度的增加而逐渐增加而后降低,CoCl2为150μmol/L时达到峰值(P≤0.05)。当CoCl2浓度为150μmol/L培养不同时间时,随着缺氧干预时间的延长,VEGF基因的表达亦是逐渐增加而后降低,于36h时达到峰值(P≤0.05),蛋白与基因表达的变化基本一致。结论:全神经球贴壁法培养RPCs能较好地表达其干细胞特性。CoCl2模拟缺氧环境下,缺氧使RPCs中VEGF的分泌增强并具有时间和剂量依赖性。     

过氧化氢诱导人视网膜色素上皮细胞转录和表达促红细胞生成素的研究

目的研究不同浓度的过氧化氢诱导人视网膜色素上皮（RPE）细胞转录和表达促红细胞生成素（EPO）的现象并探讨其发生机制。方法原代培养人胚胎RPE细胞,经鉴定后,分别应用0、200、400、600、800μmol／L浓度的过氧化氢作用6h,造成RPE细胞不同程度的氧化应激,测定细胞内超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量;采用半定量RT-PCR法检测RPE细胞氧化应激中EPO在转录水平的表达变化;免疫组织化学法检测EPO在RPE细胞中的表达部位和表达变化。结果过氧化氢导致RPE细胞内SOD含量下降,MDA含量升高。半定量RT-PCR法检测结果显示过氧化氢诱导EPOmRNA表达量增加,并在一定范围内随着过氧化氢浓度的增高而增加,在600μmol／L过氧化氢组EPOmRNA表达量达最高值,之后随着浓度的上升而下降。免疫组织化学染色法检测结果显示过氧化氢可以诱导人RPE细胞EPO表达增强,并在一定范围内随着过氧化氢浓度的增高而增强,在600μmol／L过氧化氢组EPO表达量达到高峰。结论过氧化氢导致的氧化应激可以诱导人RPE细胞转录和表达EPO,EPO的表达量与RPE存活和耐受程度有关。     

葛根素抑制缺氧状态下人视网膜色素上皮细胞低氧诱导因子-1α表达

目的研究葛根素缺氧状态下对人视网膜色素上皮(retinalpigmentepithelial,RPE)细胞分泌低氧诱导因子1α(hypoxiainduciblefactor1α,HIF1α)的抑制作用。方法用100μmol·L-1CoCl2模拟缺氧环境,不同浓度(0g·L-1、0.01g·L-1、0.1g·L-1、1g·L-1)葛根素作用于RPE细胞24h。用免疫组织化学法和Westernblot分析法检测RPE细胞中HIF1α的表达,并以计算机图像分析仪进行分析。结果不同浓度葛根素作用于100μmol·L-1CoCl2刺激的RPE细胞24h。免疫组织化学法检测显示,与对照组比较,0.01g·L-1以上浓度葛根素均能显著抑制CoCl2诱导的RPE细胞HIF1α的表达,其中0.01g·L-1葛根素使HIF1α的表达降低了12.67%,0.1g·L-1葛根素则降低了39.83%,1g·L-1葛根素则达到53.93%.Westernblot分析显示,与CoCl2组比较,3种不同浓度的葛根素不同程度地抑制HIF1α的表达,随着葛根素浓度的增加,HIF1α免疫印迹带逐渐减弱,0.01g·L-1葛根素使HIF1α的表达降低了12.45%,0.1g·L-1葛根素则降低了39.21%,1g·L-1葛根素则达到53.61%.结论葛根素可显著抑制缺氧状态下RPE细胞HIF1α的表达,提示抑制HIF1α的表达可能是抑制缺血性视网膜病变新生血管形成的新策略,葛根素有望用于缺血性视网膜病变药物治疗的研究。     

虹膜周边切除手术标本的色素上皮细胞体外培养与超微结构研究

目的：体外培养虹膜周边切除标本中的色素上皮细胞(iris pigment epithelium，IPE)，并进行生物学检测。方法：用酶-显微解剖-酶分离法培养IPE细胞并传代，免疫组化方法鉴定，透射电镜观察超微结构。结果：酶-显微解剖-酶分离法在小标本可成功获得较高纯度和密度的IPE细胞。其形态与免疫标志物表达与视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)细胞相似。结论：培养的IPE细胞为自体移植提供了较可靠的细胞来源。     

低温冷冻对角膜缘干细胞生物学特性的影响

目的 评价低温冷冻保存对体外培养兔角膜缘干细胞生物学特性的影响.设计实验研究.研究对象新西兰白兔.方法 新西兰白兔20只（40眼）,制备2 mm周边角膜和2 mm球结膜的环形浅层角膜缘植片,待形成细胞单层后,将培养的细胞低温冻存1个月,然后复苏培养.将未冻存的细胞和冻存复苏后的细胞采用免疫细胞荧光染色、流式细胞仪检测,鉴定培养细胞的生物学特性,通过倒置显微镜、MTT比色法比较传代培养的角膜缘干细胞低温保存前后的形态结构和特性.主要指标角膜缘干细胞活性及生物学特性.结果 显微镜下观察冻存复苏后的细胞,与未冻存细胞相比,细胞状态差,贴壁时间晚,核浆比变小,形态不规则;免疫荧光细胞染色检测ABCG2单克隆抗体阳性率未冻存细胞为81.7%,低温冻存细胞降至46.9%,差异有统计学意义（P〈0.05）;流式细胞仪检测低温冻存细胞与未冻存细胞角膜缘干细胞占总细胞的比例分别为0.90%和2.43%,差异有统计学意义（P〈0.05）;MTT法检测低温冻存的细胞比未冻存细胞增殖活性降低,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 低温冻存后角膜缘干细胞的活性和生物学特性均受到严重影响,其冻存方法和复苏技术有待进一步改进.     

体外培养的晶状体上皮细胞株的确定及生长、分化规律

目的建立牛、兔、人晶状体上皮细胞的体外培养，进一步认识晶状体上皮细胞生长、分化规律。方法应用组织块培养方法进行３种晶状体上皮细胞的体外培养，经Ｇｉｍｓａ染色，在倒置显微镜下对培养的晶状体上皮细胞的生长、分化规律进行观察。结果培养至６ｗｋ的人胎儿晶状体上皮细胞中有特征性的“晶状体小体”形成；牛、兔晶状体上皮细胞去分化是发生在第３代，而人晶状体上皮细胞在第４代开始出现去分化；它们传代至第８代时生长都趋于停止，出现老化表现；来自人的晶状体上皮细胞生长增殖率与年龄呈负相关关系（ｒ＝－０．９９６）。结论“晶状体小体”的形成可作为确定晶状体上皮细胞株的一项特征性依据，而体外培养的人、牛、兔晶状体上皮细胞具有相同的有限生长潜能，在相同的条件下，牛、兔晶状体上皮细胞的生长增殖速度比人晶状体上皮细胞快，但易于发生去分化；此外，人晶状体上皮细胞的生长增殖率与年龄密切相关，年龄越小，晶状体上皮细胞的生长增殖速度越快。     

Magnetic attraction of iron-endocytosed corneal endothelial cells to Descemet's membrane

PURPOSE: To evaluate the feasibility of a novel method of magnetic attraction of iron-endocytosed corneal endothelial cells to Descemet's membrane. METHODS: Cultured rabbit corneal endothelial cells (RCEC) were exposed to spherical iron powder at various concentration ranging 0-100 micro moll(-1). After 24hr, the cell density and morphology were evaluated. RCEC that had been exposed to spherical iron powder (RCEC-iron), were trypsinized and poured onto a culture dish where a neodium magnet was fixated paracentrally. After 24hr, the cell density was measured at the areas with and without a magnet. Rabbits' corneas were cryo-injuried to detach corneal endothelial cells and 1x10(5)/200 micro l RCEC-iron were injected into the anterior chamber. Neogium magnet was fixed on the lid for 24hr to attract RCEC to Descemet's membrane. Each operated eye was observed up to 2 months after the injury. RCEC group (rabbits with cryo-injury and injection of normal cultured RCEC) and cryo group (rabbits with cryo-injury but without injection of RCEC) served as controls. RESULTS: The RCEC-iron density on the dish decreased in the medium containing iron powder of 10 micro moll(-1) or more. When RCEC had been exposed to iron powder of between 5 and 10 micro moll(-1), the ratio of RCEC in the field with a magnet to RCEC in the field without a magnet increased. In the RCEC-iron group, the mean corneal thickness gradually decreased and was significantly less than in the other two groups at 2, 4, and 8 weeks after the cell injection. Fluorescein microscopic examination showed a monolayer of DiI-labelled cells on the Descemet's membrane. CONCLUSION: Magnetic attachment of iron-endocytosed corneal endothelial cells to Descemet's nembrane can be a method of choice for corneal endothelial decompensation.     

Cytotoxic effects of antiproliferative agents on human retinal glial cells in vitro

Purpose: Proliferative vitreoretinopathy (PVR) is characterizedby the formation of cellular membranes on the detached retina and also in the vitreous. Glial cellscan be found in epiretinal and subretinal membranes from eyes with PVR, proliferative diabeticretinopathy (PDR), idiopathic macular pucker, uveitis and other diseases affecting theretina. Proliferation and contraction of glial cells appears to play a role in the pathogenesisof PVR. This study is designed to inspect the effectiveness of harringtonine, as well as colchicine,daunomycin and fluorouracil, against cellular proliferation of cultured human retinal glial cellsthat might be involved in the retinal and/or vitreous proliferation. Methods: Cultures of human retinal glial cells were preparedusing the enzyme digesting method. Cells that had been in culture for 2–5 passages were usedin this study. Harringtonine (0.063 g/ml 2.0 g/ml), colchicines(0.5 g/ml 16.0 g/ml), daunomycin (0.1 g/ml 3.2 g/ml) and 5-fluorouracil(0.5 g/ml 16.0 g/ml) were added to cultures of human retinal glial cellsand the proliferation rates of the cells were measured by the MTT method. Results: Harringtonine at the dosage of 0.063 g/mlinduced suppression of cellular growth, but the changes were not statistically significant (p > 0.05).At a dosage ranging from 0.125 g/ml to 2.0 g/ml, harringtonine significantly suppressedcellular growth according to the test (p < 0.01). Likewise, other antiproliferativeagents inhibited cellular growth significantly at a dosage from 1.0 g/ml to 16.0 g/ml(colchicine), 0.2 g/ml to 3.2 g/ml (daunomycin) and 1.0 g/ml to 16.0 g/ml(5-fluorouracil), but not at 0.5 g/ml (colchicine), 0.1 g/ml (daunomycin) and0.5 g/ml (5-fluorouracil). The ID₅₀ were 0.33 g/ml (harringtonine), 3.11 g/ml (colchicine), 0.79 g/ml (daunomycin) and 5.23 g/ml (5-fluorouracil), respectively.Conclusions: Harringtonine was extremely effective ininhibiting human retinal glial cell proliferation, like other antiproliferative drugs such as colchicine,daunomycin and 5-fluorouracil. Harringtonine, therefore, may be a candidate for further studies regardingthe treatment of experimental PVR.     

曲尼司特对培养兔晶状体上皮细胞的作用

目的 观察曲尼司特(Tranilast)对培养兔晶状体上皮细胞增殖的作用及其对细胞周期的影响。方法 将传代的兔晶状体上皮细胞用含不同曲尼司特浓度的培养液培养，每天计数，绘制细胞生长曲线，收集细胞做流式细胞仪检查。空白培养液培养的细胞做阴性对照，含0．004％丝裂霉素C(MMC)培养液培养的细胞为阳性对照。结果 用180μmol／L的培养液培养细胞时细胞增殖明显受到抑制，随药物浓度增加，细胞增殖受抑制越明显，细胞生长曲线越低平，细胞形态变化不大。经流式细胞术进行细胞周期分析，随药物浓度增加G0／G1期细胞数增多(67．47％～79％)，而S期细胞数减少(21．19％～4．32％)。阳性对照组细胞于48h全部死亡。结论 曲尼司特具有抑制晶状体上皮细胞增殖的效果，且呈浓度依赖性。曲尼司特将细胞抑制在G1期的限制点内。     

尾静脉注射碘酸钠对小鼠视网膜形态结构变化的影响

目的　探讨尾静脉注射碘酸钠（NaIO₃）对小鼠视网膜形态结构的影响。方法　36只昆明小鼠分为4组:对照组、损伤3 d组、损伤7 d组、损伤14 d组。对照组不作任何处理，各损伤组小鼠经尾静脉单剂量注射NaIO₃（35 mg?kg^-1）。在NaIO₃损伤3 d、7 d、14 d后取材，进行视网膜组织铺片和组织切片。利用HE染色、NeuN免疫组织化学染色及 Opn1mw、GFAP、Iba1免疫荧光染色，检测NaIO₃注射后不同时间小鼠视网膜形态结构的改变。结果　HE染色结果显示，损伤3 d后外核层每10 μm长度细胞数由正常水平（31.97±2.27）个下降至（26.21±0.83）个，差异有统计学意义（P<0.05）；损伤7 d后内核层每10 μm长度细胞数由正常水平（12.33±0.16）个下降至（11.39±0.43）个，差异有统计学意义（P<0.05）。NeuN染色结果显示，损伤14 d后视网膜神经节细胞层每100 μm长度视网膜神经节细胞数由正常水平（14.92±1.74）个下降至（11.25±0.09）个，差异有统计学意义（P<0.05）。GFAP染色结果显示，损伤3 d组每200 μm × 200 μm 范围内活化的Müller细胞数由对照组的（16.96±0.85）个增加至（20.42±1.64）个，差异也有统计学意义（P<0.05）。Opn1mw、Iba1染色结果显示，损伤后视网膜视锥细胞外节段变薄、小胶质细胞数增加。结论　尾静脉注射NaIO₃会引起小鼠视网膜形态结构不可逆的损伤，且该损伤具有时间依赖性。     

兔角膜内皮、上皮及基质细胞体外培养扩增的研究

目的 建立角膜上皮、基质及内皮细胞体外培养扩增的简单稳定的方法，为组织工程化角膜的构建提供种子细胞。方法 内皮细胞与后弹力层在培养基中孵育后消化法获原代细胞，胰酶消化去除表层上皮后取角膜缘，组织块法培养角膜缘上皮细胞，基质细胞应用胶原酶消化法获原代培养，各细胞融合后胰酶消化依次传代培养。结果 原代内皮细胞4—5d融合成单层细胞，可连续传6—7代。上皮细胞1周左右生长融合，连续传3—4代后细胞形态改变。基质细胞接种6—7d后近融合，传代后增殖明显，可连续传10代。结论依据角膜组织特征选择合适的方法体外分离、培养角膜3种细胞成分，可获连续传代扩增的角膜细胞。     

Amacrine and horizontal cell dysfunction in adult ceroid-lipofuscinosis (Kufs disease) and anatomical correlates in the ovine model

Psychophysical examination of the visual performance of a patient with Kufs disease suggests abnormal functioning of the amacrine and horizontal cell systems of lateral inhibition. The sheep model offers insight into early patho-physiology of these cell types.     

Socioeconomic and Ethnic Disparities in Periocular Cutaneous Malignancies

ABSTRACT

Cutaneous malignancies make up the majority of periocular tumors diagnosed and treated by ophthalmologists. In this review, we examine literature regarding ethnic and socioeconomic disparities in incidence and clinical outcomes of the three most common cutaneous periocular tumors: basal cell carcinoma, squamous cell carcinoma, and melanoma. In all three tumor types, the literature shows an increased incidence among two groups: those with lightly pigmented skin and those of higher socioeconomic status. While incidence is high in these groups, clinical outcomes for these patients tend to be good. Those with lower socioeconomic status and ethnic minorities, on the other hand, have a low incidence but are more likely to have poor clinical outcomes. These disparities are likely the result of both biologic and behavioral differences between patients and could provide opportunities for intervention to change risk perception and improve outcomes.     

正常人结膜杯状细胞的体外培养

目的体外建立人结膜杯状细胞系,观察其形态结构等生物学特征,并观察杯状细胞超微结构。设计实验性研究。研究对象体外培养的人结膜杯状细胞。方法外眼手术中取正常球结膜组织,放入含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中,以组织块培养法进行培养。通过倒置相差显微镜下细胞形态、特殊组化染色和免疫组化方法鉴定杯状细胞。利用透射电镜观察其超微结构。主要指标细胞形态、结构。结果培养24小时后细胞从组织块向外长出,6￣10天后可形成细胞单层,并可传3￣5代。倒置相差显微镜下可见杯状细胞呈长椭圆形,胞浆中含有黏蛋白颗粒。对阿利新蓝/过碘酸-希夫试剂染色(AB-PAS染色)呈阳性;对杯状细胞特异性中间丝角蛋白-7(CK-7)和黏蛋白MUC5AC单克隆抗体均呈阳性反应,而对复层非角化上皮细胞特异性中间丝角蛋白-13(CK-13)呈阴性反应。透射电镜下可见离体杯状细胞体积较大,呈长椭圆形,核位于细胞一端,胞浆中充满圆形黏蛋白颗粒,大小不一。传三代后杯状细胞纯度可达80%左右。结论人结膜杯状细胞可在体外培养并传代,并保持在体细胞特性,为进一步研究杯状细胞相关的眼表疾病提供实验室基础。(眼科,2006,15:172-176)