内毒素诱导血小板20kD蛋白磷酸化、钙转运及纤维蛋白原受体显露

本文观察了E.Coli大肠杆菌内毒素对人血小板蛋白磷酸化,钙转运及纤维蛋白原受体的影响,实验采用SDS-凝胶电泳及放射自显影技术分离血小板蛋白并测定其磷酸化程度,结果发现内毒素刺激血小板后,内源性20kD蛋白迅速磷酸化,这一作用在细胞外Ca~(2 )存在时明显加强。同时还观察到血小板对~(45)Ca~(2 )摄取加强,胞浆游离Ca~(2 )升高,血小板结合荧光标记纤维蛋白原的阳性细胞百分率明显提高。提示:内毒素可能通过诱导Ca~(2 )动员,蛋白磷酸化,使血小板纤维蛋白原受体显露,导致血小板聚集。     

内毒素对内皮细胞的损伤及黄芩甙的保护作用

本实验利用4～9代和15～20代、纯化牛肺动脉内皮细胞(BPEC),观察了内毒素(ET)对BPEC的直接毒性作用和黄芩甙的保护作用。实验分为:对照组(M-199液含D-Hank's液25μl/ml);ET组(M-199液含ET0.1μg/ml;ET加黄芩甙组(M-199液含ET 0.1μg/ml,黄芩甙0.5μg/ml)。每组再分为0.5h,1h,2h,4h,8h,     

Pam3CSK4对血小板活化及其TLR2表达的影响

目的 探讨Toll样受体2(TLR2)在血小板激活及免疫方面的作用.方法 取健康人(n=5)全血6 ml,以密度梯度离心法制备洗涤血小板.用1、5、10μg/ml的TLR2激动剂Pam3CSK4(一种合成的细菌脂蛋白)刺激人洗涤血小板,然后测定血小板聚集率,血小板表面蛋白CD62p和TLR2表达的变化.结果 Pam3CSK4以浓度0、1、5和10μg/ml激活血小板:聚集率增加分别为(12.83±2.43)%、(28.32±5.67)%、(52.56±8.54)%、(76.24±11.23)%,P<0.01;血小板表面CD62p表达量增加分别为(11.20±1.67)%、(18.45±2.66)%、(22.45±2.04)%、(29.53±4.08)%,P<0.01.Pam3CSK4在1μg/ml时TLR2表达为(16.85±6.10)%,与对照组(10.81±3.99)%相比差异无统计学意义(P>0.05),在5 μg/ml、10μg/ml时TLR2表达量分别为(21.15±9.90)%和(22.52±9.26)%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 细菌脂蛋白Pam3CSK4通过激活TLR2引起血小板聚集、活化,是血小板参与抑制革兰阳性细菌感染的免疫应答机制之一.     

藏红花素对人脐静脉内皮细胞增殖及细胞外调节蛋白激酶信号通路的影响

目的观察藏红花素(crocin)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外增殖、细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2表达及活性的影响。方法用藏红花素及MAPK/ERK激酶(MEK)抑制剂PD98059分别处理HUVECs,Ed U细胞增殖法检测细胞体外增殖活力,Western blotting法检测crocin对磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)和总ERK1/2表达的影响,激光扫描共焦显微镜检测细胞内Ca~(2+)浓度。结果在1μmol/L和10μmol/L浓度水平,藏红花素可明显促进细胞的增殖能力,提高磷酸化ERK1/2和总ERK1/2蛋白的表达水平,并增加细胞内Ca~(2+)浓度;给予MEK抑制剂PD98059后,细胞的增殖能力下降,磷酸化ERK1/2和总ERK1/2的表达减弱,细胞内Ca~(2+)浓度降低。结论藏红花素通过活化ERK1/2信号途径,提高细胞内Ca~(2+)浓度,促进人脐静脉内皮细胞的体外增殖能力。     

NF-κB在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达组织因子中的作用探讨

目的:探讨核因子κB(NF-κB)在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:使用一定剂量的抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物处理THP-1细胞一定时间,收集细胞总RNA和总蛋白,实时定量PCR(RT-qPCR)检测细胞TF mRNA水平,TF活性试剂盒检测TF活性;Western blot检测细胞NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65及NF-κB抑制蛋白IκB-α的表达情况;进一步采用NF-κB抑制剂(PDTC)观察是否能干预抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的刺激效应,并利用上游信号分子MAPKs的抑制剂观察抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对NF-κB p65磷酸化的影响。结果:抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)能够诱导THP-1细胞表达TF mRNA及活性,与对照相比差异显著(P<0.05);能够增强细胞内NF-κB p65磷酸化(P<0.05 vs media),降低IκB-α水平(P<0.05 vs media);NF-κB抑制剂PDTC(20μmol/L)能够抑制抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞表达TF及NF-κB磷酸化的效应;MAPKs抑制剂均能影响抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞NF-κB p65磷酸化。结论:在抗β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,NF-κB被激活并发挥重要作用,MAPKs为NF-κB的关键上游分子。     

SU11248对骨髓瘤细胞U266作用机制的研究

目的:探讨SU11248抑制骨髓瘤细胞U266增殖及促凋亡作用的机制。方法:MTT法检测以IC50为3.0μg/ml的SU11248作用不同时间后U266细胞的增殖情况;免疫蛋白印迹技术(Western blot)检测3.0μg/ml SU11248处理U266细胞不同时间后人Akt、p-Akt、p73、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达变化。结果:SU11248可明显抑制U266细胞增殖,且呈现时间依赖性;免疫印迹技术检测显示,3.0μg/ml SU11248处理U266细胞不同时间后Akt无明显变化,p-Akt、Bcl-2、Caspase-3前体蛋白表达呈时间依赖性降低,而p73蛋白、Caspase-3剪接体蛋白表达呈时间依赖性增强。结论:SU11248抑制U266细胞增殖及诱导其凋亡作用与抑制Akt蛋白磷酸化、下调Bcl-2蛋白的表达、上调p73蛋白及Caspase-3蛋白的活化有关。     

Klotho蛋白减轻低氧/复氧诱导的心肌细胞系H9C2损伤

目的研究Klotho蛋白对低氧-复氧诱导的心肌H9C2细胞系损伤的保护作用及其机制。方法将H9C2心肌细胞分为对照组、低氧/复氧组(1%O_2低氧6 h, 5%CO_2以及95%空气培养箱中复氧2 h)和Klotho蛋白(10μg/mL)干预组。通过酶标仪间接测定细胞内钙离子([Ca~(2+)]_i)水平;CCK8法和TUNEL法分别检测细胞活性及细胞凋亡;分光光度法检测细胞中钠ATP酶(Na~+/K~+-ATPase,NKA)和反向模式钠/钙交换体(Na~+/Ca~(2+)-exchange,NCX)的活性。结果体外培养的H9C2细胞低氧/复氧(6 h/2 h)处理后可明显降低H9C2细胞活性(P0.05);增加细胞内Ca~(2+)水平和凋亡率(P0.05);降低细胞中Na~+/K~+-ATPase的活性(P0.05);增加反向模式Na~+/Ca~(2+)交换体的活性(P0.05);10μg/mL Klotho蛋白处理可明显减轻上述损伤。结论 Klotho蛋白可减轻低氧/复氧诱导下的H9C2细胞内钙超载,最终减少该细胞系细胞的凋亡。     

二脱氧肌苷引发培养的背根神经节神经元的形态学改变(英文)

为探讨二脱氧肌苷(ddI)对培养的背根神经节(DRG)神经元的影响,我们对分散培养的胎鼠DRG神经元培养3d后,再分别以不同浓度的ddI(1μg/ml,5μg/ml,10μg/mll和20μg/ml)孵育3d。终止培养后,行微管相关蛋白2(MAP2)标记,用共聚焦激光扫描显微镜观察神经元胞体和突起的改变。结果表明,DRG神经元用ddI孵育3d,神经元突起的数目减少和长度变短,呈剂量依赖性,而神经元的直径则没有变化。本研究的结果表明,ddI可影响培养的DRG神经元突起的再生和生长。     

信号分子IRAK1/4在antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF中的作用探讨

目的:探讨IRAK1和IRAK4在antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒分别检测THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性;Western blot检测anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达IRAK1、磷酸化-IRAK1(p-IRAK1)、IRAK4情况;观察IRAK1/4抑制物是否干预anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1表达TF。结果:Antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞表达TF显著增加(P<0.05 vs control);Antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)刺激THP-1细胞表达IRAK1、p-IRAK1、IRAK4(蛋白)显著升高(P<0.05 vscontrol);IRAK1/4抑制物(50μmol/L)能够阻断antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)诱导THP-1表达TF及IRAK1磷酸化的效应。结论:antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,信号分子IRAK1/4被激活进而发挥重要作用。     

人嗜碱细胞可摄取~3H-组氨酸并转化成H~3-组胺重新释放

<正> 我们用H~3-组氨酸掺入健康人全血嗜碱细胞,并观察其转化为~2H-组胺重新释放能力。 4名输血员,每份抗凝全血分成0.25ml一管,共4管,2管测掺入,2管测释放。分别加入0.1mlH~3-组氨酸(含5μCi)及50μl载体,37℃旋转温育20分钟,以冷Tyrode's液洗涤3次,上清放射性本底可降至400opm以下。掺入管即可加0.1ml12.5％TAC,离心后吸上清待测(混合闪烁液,允许含水50μl/1ml)。释放管则加0.1mlConA(最终5μg/ml)及Ca~(++)、Mg~(++)继续温育50分钟,离心后吸上清测定。所有管均吸5μl在DEAE纤     

青蒿素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及细胞骨架蛋白F-actin的影响

<正>目的:青蒿素是从中药青篙中提取的有过氧基团的倍半萜内酯药物,是一种高效、速效的抗疟中草药物,并在肿瘤辅助治疗中具有免疫调节功能。本实验着重观察青蒿素对乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖及对细胞骨架蛋白F-actin的影响,并探讨其机制。方法:用RPMI-1640培养基在体外培养乳腺癌MDA-MB-231细胞:(1)按照约每孔1×104个细胞接种于96孔板,培养基中加入不同浓度的青蒿素(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、100μg/ml、1000μg/ml)和0.1%的二甲基亚砜(DMSO)作为对照,     

大白鼠内毒素休克肝线粒体Ca~(2+)、Mg~(2+)含量变化与线粒体损伤

本工作在大鼠内毒素休克的模型上,观察了肝线粒体结构和离子(Ca~(2+)、Mg~(2+))的变化。实验分为两组:(1)生理盐水对照组(n=14);(2)内毒素休克组(n=16),静脉注射大肠杆菌内毒素16mg/kg。结果发现,1小时内毒素休克组动物肝组织和线粒体的Ca~(2+)浓度分别为33.61μg/g湿重和5.09nmol/mg蛋白,较对照     

钙和TXA2在猫局部脑缺血重灌流损伤中的作用

用夹闭猫一侧大脑中动脉和开夹重灌流的方法,复制局部脑缺血和重灌流动物模型。发现血管闭塞5小时后,缺血区γCBF由106±12ml/100g/min降至17±4ml/100g/min(P<0.01),SEP幅度下降和出现脑水肿,形态学检查亦见缺血损伤,皮层组织TXB_2含量由19.31±7.61pg/mg增至33.77±6.38pg/mg(P<0.05),Ca~(2 )含量由10.4±1.2umol/g增至16.5±0.9umol/g(P<0.01)。重灌2小时后,γCBF仅恢复至63±7ml/100g/min(P<0.01),提示出现缺血后延迟型低灌综合征;SEP幅度初期有轻微恢复,后又呈严重抑制状态,脑水肿进一步加重,TXB_2含量继续增至37,01±8.37pg/mg(P<0.05),Ca~(2 )含量增至20.1±3.0μmol/g(P<0.01),电镜可见线粒体肿胀,基质出现絮状物,表明有磷酸钙盐沉积。这些结果说明TXA_2、Ca~(2 )内流增加在脑缺血,特别是缺血重灌流损伤发病中有一定作用。     

牛内皮细胞生长因子提取物对培养细胞的作用

从牛脑组织中制备了内皮细胞生长因子粗品(ECGS)和纯品(β-ECGF)。实验结果表明,β-ECGF具有显著的促进内皮细胞生长的作用,它的分子量约为70kd,等电点为4～6,ECGS按100μg/ml加入培养基中,可使人的脐静脉内皮细胞传20代以上,血清用量可节省50％,细胞能够克隆、冷冻和复苏。     

心肌细胞缺钙复钙现象的观察

本文在细胞水平观察了成年大鼠心肌细胞的缺钙复钙现象。在分离心肌细胞后,按3mg细胞蛋白/ml分管,每管2ml细胞悬液。实验分对照组(1mM Ca~(2 ) 37℃孵育60分钟)无钙组(0mM Ca~(2 )30分钟,复Ca~(2 )(1 mM)     

茯苓酸通过上调miR-133a 影响子宫肌瘤细胞增殖凋亡及表皮生长因子 的水平

目的:探讨茯苓酸(PA)对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡及表皮生长因子(EGF)水平的影响。方法:选取58例子宫肌瘤患者的子宫肌瘤组织进行细胞原代培养。将子宫肌瘤细胞分为NC组、PA 10μg/ml组、PA 20μg/ml组、PA 40μg/ml组、PA 80μg/ml组。采用甲基噻唑基四唑(MTT)检测各组细胞存活率,筛选PA适宜浓度进行后续实验。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测PA对EGF水平的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PA对表皮生长因子受体(EGFR)蛋白表达的影响;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测PA对细胞中微小RNA-133a(miR-133a)表达水平的影响。miR-133a mimics及阴性对照miR-NC转染至子宫肌瘤细胞,观察miR-133a过表达对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡及EGF、EGFR表达水平的影响。Western blot检测细胞周期蛋白1(CyclinD1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(C-caspase-3)蛋白表达。结果:与NC组比较,PA 10μg/ml组、PA 20μg/ml组、PA 40μg/ml组、PA 80μg/ml组细胞存活率均显著降低(P0.05),选用PA 40μg/ml作为后续研究。与NC组比较,PA组细胞凋亡率显著升高(P0.05),C-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.05),EGFR蛋白表达水平显著降低(P0.05),而EGF水平显著降低(P0.05);与NC组比较,PA组细胞中miR-133a的表达水平显著升高(P0.05);与miR-NC组比较,miR-133a组细胞存活率显著降低(P0.05),CyclinD1、EGFR蛋白表达水平显著降低(P0.05),EGF水平显著降低(P0.05),而细胞凋亡率显著升高(P0.05),C-caspase-3蛋白表达水平显著升高(P0.05)。抑制miR-133a的表达可逆转PA对子宫肌瘤细胞增殖、凋亡及EGF的影响。结论:PA可通过上调miR-133a的表达抑制子宫肌瘤细胞增殖并促进细胞凋亡,同时降低EGF、EGFR表达水平。     

虫草素对胶质瘤细胞的增殖及侵袭作用的影响及机制研究

目的:探讨虫草素对胶质瘤细胞增殖及侵袭作用的影响,并初步探讨其机制。方法:将虫草素配置成不同浓度(100、200和400μg/ml)作用于胶质瘤细胞,对照组不加入药物。使用CCK8法检测细胞不同时间点和不同药物浓度增殖情况,采用Transwell实验检测不同药物浓度作用下细胞侵袭情况,通过Western blot和q-PCR法检测Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白和mRNA的表达水平。结果:100μg/ml虫草素对U87细胞增殖和侵袭无明显影响(P 0. 05)。200和400μg/ml虫草素可明显抑制U87细胞增殖,呈剂量和时间依赖性(P0. 05)。200和400μg/ml虫草素可明显抑制U87细胞侵袭,呈剂量依赖性(P0. 05)。U87细胞经不同浓度虫草素(100、200、400μg/ml)处理24 h后,发现200和400μg/ml虫草素处理后Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白和mRNA水平明显降低(P0. 05),100μg/ml虫草素处理后对Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin蛋白和mRNA水平的抑制作用不明显(P 0. 05)。结论:虫草素能抑制U87细胞的增殖和侵袭,其机制可能与下调Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、Ezrin的表达有关。     

雌二醇在体外对脾细胞和胸腺细胞增殖反应的影响

本文研究在体外细胞培养系统中直接加入雌二醇(E_2)对脾细胞和胸腺细胞的作用,发现高剂量(≥5μg/ml)的E_2可直接抑制脾细胞对ConA诱导的增殖反应;但在胸腺细胞的实验中,无论低或高剂量(10~(-2)ng/ml～20μg/ml)的E_2均未发现它对ConA诱导的增殖反应产生明显影响。表明E_2在体外对脾细胞和胸腺细胞的作用存在差异。     

葡萄糖、胰岛素和氧化低密度脂蛋白对内皮细胞内皮素-1生成及其mRNA水平的影响

目的 研究葡萄糖(GLU)、胰岛素(INS)和氧化低密度脂蛋白(ox—LDL)对内皮细胞(ECs)内皮素—1(ET—1)分泌及其mRNA水平的影响，探讨ET—1分泌异常与DM血管并发症的关系。方法 培养胎牛动脉内皮细胞，用放免法测定内皮细胞ET—1水平；半定量RT—PCR检测ET—1 mRNA水平。结果 (1)高浓度GLU、INS和ox-LDL促进ECs合成ET—1，并且这种作用有浓度和时间依赖性；高浓度GLU(20mmol/L-40mmol/L)并不增加ECs ET—1 mRNA的表达，但高浓度INS(1．8nmol/L—6．0nmol/L)和ox-LDL(25μg/ml-50μg/ml)能上调ET—1 mRNA水平；(2)生理性低浓度INS 0．18nmol/L下，ECs合成的ET—1及其mRNA水平均无明显增加；(3)高浓度GLU、INS、ox-LDL两两及三者间具有正性协同作用，促进ET—1的分泌；对ET—1的促分泌作用高浓度INS和ox-LDL可能要强于高血糖。结论 高浓度GLU、INS和ox-LDL可直接导致血管ECs功能的异常，引起ET—1产生增多，促进DM血管并发症的发生、发展。     

人参皂苷Rg1通过调节GSK-3β/PP2A活性减轻皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化

目的 探讨人参皂苷Rg1是否通过调节GSK-3β/PP2A活性而减轻凝聚态Aβ25～35诱导的胎鼠皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化.方法 选用孕期(18±2)d的SD大鼠,分离纯化胎鼠皮层神经元.实验分为阴性对照组、模型组、LiCl处理组、Rg1预处理组.阴性对照组不加任何处理因素;模型组用20μmol/L Aβ25～35作用于皮层神经元12h;LiCl处理组用10mmol/L LiCl和20μmol/L Aβ25～35共同作用于皮层神经元12h;Rg1预处理组分别用5、10、20、40、80μmol/L Rg1预处理皮层神经元24h,再加入20μmol/L Aβ25～35作用12h.通过免疫印迹法和免疫细胞化学染色法检测皮层神经元Tau蛋白磷酸化水平、总Tau蛋白水平和糖原合成酶3β(GSK-3β)表达水平,通过非放射性免疫法检测皮层神经元蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)活性.结果 模型组Tau蛋白在Ser396、Ser199/202和Thr231位点的磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的蛋白表达水平均增加,但PP2A的活性不受影响;LiCl处理组和Rg1预处理组,Tau蛋白在Ser396、Ser199/202和Thr231位点的磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的蛋白表达水平均降低(P＜0.05).在Rg1预处理组中,以20μmol/L Rg1预处理后Tau蛋白磷酸化水平、总Tau蛋白水平和GSK-3β的表达水平下降最为明显,而且PP2A的活性明显增强(P＜0.01).结论 人参皂苷Rg1可通过上调PP2A活性和下调GSK-3β活性从而减轻凝聚态Aβ25～35所诱导的皮层神经元Tau蛋白过度磷酸化.