103 Pd放射性支架诱发犬胆管损伤后平滑肌细胞增殖抑制和凋亡的相关研究及意义

目的:探讨犬胆管损伤后增殖平滑肌细胞受辐射后细胞增殖抑制和凋亡发生的关系.方法:在犬胆管内分别植入103 Pd放射性支架和普通胆管支架,取出胆管标本采用ABC法进行增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色和平滑肌细胞凋亡染色.结果:103Pd支架组犬胆管组织平滑肌细胞PCNA蛋白阳性表达率为33.33%,而普通支架组犬胆管组织平滑肌细胞PCNA蛋白阳性表达率为83.33%,103Pd支架组PCNA蛋白阳性表达率明显低于普通支架组(P＜0.01).而103Pd放射性支架组犬胆管增殖平滑肌凋亡细胞数明显大于普通支架组犬胆管增殖平滑肌细胞数(P＜0.05),而且103Pd放射性支架组犬胆管腔无明显狭窄,而普通支架组犬胆管腔有明显狭窄.结论:辐射可以抑制平滑肌细胞增殖,同时可诱导犬胆管平滑肌细胞凋亡,抑制犬胆管再狭窄.     

103Pd放射性支架对bcl-2表达影响的研究

目的:探讨γ射线对bcl-2基因的影响及意义.方法:将103钯(103Pd)放射性支架和普通支架分别植入犬的肝外胆管,免疫组化方法检测γ射线诱导犬胆管壁凋亡增殖平滑肌细胞中的bcl-2表达,计数凋亡细胞,计算机图像分析系统检测两组胆管管腔面积.结果:bcl-2表达103Pd支架组较普通支架组为弱,胆管出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,肝外胆管无明显狭窄;普通支架组未出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,肝外胆管有明显狭窄.结论:bcl-2表达与细胞凋亡发生和细胞对辐射敏感性有关;103附放射性支架通过降低bcl-2表达,促进胆管壁增殖平滑肌细胞凋亡,从而抑制肝外胆管狭窄.     

P53和PCNA在辐射诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡中的表达及意义

目的探讨在辐射诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡中,P53和PCNA的表达及意义。方法12只犬随机分两组,每组6只犬,在犬胆管内分别植入103pd(103钯)放射性支架和普通胆管支架,术后30d取出胆管标本采用ABC法进行PCNA免疫组化染色,核出现棕色反应为阳性细胞;原位杂交进行P53细胞染色,细胞浆出现棕褐色反应为阳性细胞;又行平滑肌细胞凋亡染色,阳性细胞为细胞核有棕黄色颗粒即为凋亡细胞。结果103Pd支架组PCNA蛋白阳性表达率明显低于普通支架组,两组之间比较差异有非常显著性(P<0.01),103Pd支架组P53蛋白阳性表达率明显高于普通支架组,两组之间比较差异有非常显著性(P<0.01)。103Pd支架组平滑肌细胞凋亡数较普通支架组明显增多,两者有显著差异(P<0.05),103pd放射性支架组犬胆管腔无明显狭窄,而普通支架组犬胆管腔有明显狭窄。结论以上结果证实103Pd支架组犬胆管平滑肌组织PCNA表达较弱,而普通支架组犬胆管平滑肌组织PCNA表达却增高,说明辐射可以抑制平滑肌细胞增殖,辐射可激活P53基因而诱导犬胆管平滑肌细胞凋亡,同时抑制犬胆管损伤后胆管狭窄。     

103Pd放射性支架植入犬胆管的可行性及安全性实验研究

目的观察动物胆管植入103Pd放射性支架后胆管腔内照射的放射性损伤。方法实验动物为雄性健康Beagle犬,体重9￣11kg。麻醉下经手术植入103Pd放射性金属支架于犬的胆管腔内,支架放射性活度分别为0、3.5、5.5、7.5、10mCi,植入30d后取出金属支架和胆管,胆管经组织切片HE染色,光镜下评价胆管放射性损伤,同时监测肝肾功能、血淀粉酶。结果放射性活度为3.5mCi时光镜下可观察到胆管黏膜损伤;放射性活度为7.5mCi时胆管放射性损伤达肌层;放射性活度为10mCi时未出现胆管穿孔。放射性支架对于周围脏器无损伤,安全性高。结论103Pd放射性支架胆管腔内近距离照射有明显的量效关系,为应用于临床治疗胆管恶性肿瘤提供了实验依据。     

103pd放射性支架诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡及对抑癌基因影响和意义

目的探讨辐射对抑癌基因(p53基因)在辐射诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡中的影响和意义.方法12只犬随机分两组,每组6只,在犬胆管内分别植入103pd(103钯)放射性支架和普通胆管支架,术后30d取出胆管标本进行HE染色和p53基因原位杂交,DAB染色,p53基因表达阳性者为细胞浆呈棕黄色,和平滑肌细胞凋亡染色,阳性凋亡细胞为细胞核有棕黄色颗粒.结果103pd放射性支架组犬胆管平滑肌细胞p53基因阳性表达率为83.33%,而普通支架为16.66%,两组之间比较差异有非常显著性(P＜0.01);同时,103pd放射性支架组犬胆管增殖平滑肌凋亡细胞数明显大于普通支架组犬凋亡细胞数,两组之间比较差异有显著性(P＜0.05),而且103pd放射性支架组犬胆管腔无明显狭窄,普通支架组犬胆管腔有明显狭窄.结论以上结果证实辐射可以激活p53基因,使其功能提高,诱导犬胆管平滑肌细胞凋亡,抑制犬胆管再狭窄.     

尿道内放射与Bax/Bcl-2基因表达及细胞凋亡关系的实验研究

目的探讨^103Pd支架对雄性新西兰白兔尿道组织Bax/Bcl-2基因表达的影响及与细胞凋亡的关系。方法分别将普通支架和^103Pd同位素支架置入兔的尿道内,术后30d取尿道标本,采用免疫组化、Tunel方法检测尿道组织Bax/Bcl-2基因表达及细胞凋亡情况。结果放射性支架组尿道组织Bax蛋白表达明显上调,其阳性率为83.3%,明显高于普通支架组的16.7%（P﹤0.05）;Bcl-2蛋白表达降低,其阳性率为33.3%,明显低于普通支架组的83.3%（P﹤0.05）。放射性支架组成纤维细胞、平滑肌细胞等凋亡明显,细胞凋亡数为161.93±26.21,尿道无明显狭窄;普通支架组细胞凋亡不明显,细胞凋亡数为65.27±13.39,尿道出现不同程度的狭窄。结论103Pd放射性支架通过增强Bax基因表达、降低Bcl-2基因表达,可促进兔尿道组织细胞凋亡,抑制尿道损伤愈合过程中管腔的再狭窄。     

103pd放射性支架持续照射犬胆管放射性损伤的动物实验研究

目的 寻找动物胆管金属内支架植入方法，观察动物胆管植入^103pd(^103钯)放射性支架，胆管腔内照射的放射性损伤。方法 实验动物为雄性健康杂种犬，体重15-20kg。照射方法及条件：麻醉下经手术植入^103pd放射性金属支架于犬的胆管腔内，^103pd的方向性活度分别为3．4，4．5，6，7，8和10mCi，不同的放射性活度照射，30天后取出^103pd放射性金属支架和胆管标本进行放射性损伤的评价。结果 ^103pd的不同放射性活度照射犬的胆管后，在胆管HE染色片上，光镜下可见的胆管放射性损伤：放射性活度为3．4mCi时，粘膜损伤；放射性活度为6mCi时，损伤达肌层，放射性活度为10mCi时，损伤达外膜层，并出现胆管穿孔。根据不同放射性活度，胆管放射性损伤的效应曲线，得到ED50为7．64mCi。结论 ^103pd金属支架胆管腔内近距离照射有明显的剂量效应关系。此动物实验方法接近于临床，实验方法是可行和实用的。     

125I支架抑制犬胆管损伤后胆管平滑肌细胞增殖的作用

目的 探讨125I支架抑制犬胆管损伤后胆管平滑肌细胞增殖,预防胆管再狭窄的可行性.方法 实验犬12 只(体质量15～18 kg),随机分为普通支架组和125I支架组各6 只.用切断吻合法,造成胆总管损伤.术后30 d胆道狭窄形成后,分组将普通支架及125I支架从胆总管末端开口处释放到胆总管内.置入支架后60 d 分别行病理形态学检测,用免疫组织化学方法测定P53蛋白、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen) 及平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin),并测定外周血和支架周围放射性.结果 支架置入后60 d,与普通支架组比较, 125I 支架组胆管最大内膜厚度显著减少(P<0.05),两组胆管狭窄面积百分比分别为(53.72±13.89) %和(17.34±9.28) %,差异有显著性(P<0.05), 125I 支架组胆管腔周长及胆管腔面积均较普通支架组明显增加(P< 0.05) ,125I支架组胆管平滑肌增殖细胞核抗原(PCNA) 及平滑肌肌动蛋白(SMA) 表达较弱,而P53蛋白表达增高,后者平滑肌PCNA 及SMA表达增高,而P53蛋白表达较弱.结论 125I 支架照射可抑制平滑肌细胞增殖,预防胆管再狭窄.     

胆管损伤愈合过程中显微结构和超微结构的变化

目的 探讨良性胆管狭窄形成机制。方法 建立犬胆总管损伤修复动物模型后，于术后3d,1,3wk,3,6mo取材分别行光镜、电镜观察及免疫组化观察巨噬细胞、转化生长因子（TGF－β1）、平滑肌肌动蛋白（α－SMA）在胆管愈合过程不同时期组织中的表达强度、阳性细胞数和组织分布。结果 光、电镜显示：炎性渗出期较长，胆道粘膜上皮愈合较慢，瘢痕组织细胞持续增生活跃，细胞外基质过度沉积，胶原纤维排列致密杂乱。肌成纤维细胞（MFB）功能活跃，持续存在于整个愈合过程中。免疫组化：巨噬细胞、转化生长因子（TGF－β1）、平滑肌肌动蛋白（α－SMA）在胆管愈合过程中表达较强，且持续较长时间。MΦ阳性主要表达于胆道粘膜下固有层；TGF－β1主要表达于肉芽组织、成纤维细胞、MΦ及血管内皮细胞胞质和细胞膜；α－SMA表达于MFB质、平滑肌组织。结论 胆管愈合方式属于过度愈合；MFB功能活跃，持续存在，是导致胆管瘢痕性挛缩的重要原因；MΦ、TGF－β1及α－SMA高表达是造成胆管愈合过程中成纤维细胞增殖旺盛、细胞外基质过度沉积、胆管瘢痕性挛缩的重要因素。     

103钯放射性支架诱导胆管癌细胞凋亡及对抑癌基因的影响和意义

目的探讨103钯(103pd)放射性支架对p53抑癌基因在辐射诱导胆管癌细胞凋亡中的影响和意义。方法 12只裸鼠随机分2组,每组6只,在裸鼠胆管癌内分别植入103pd放射性支架和普通胆管支架,术后30 d取出胆管癌标本进行HE染色和p53基因原位杂交,DAB染色p53基因表达阳性者细胞质呈棕黄色,胆管癌细胞凋亡染色细胞核中有棕黄色浓染的为阳性细胞。结果103pd放射性支架组胆管癌细胞p53基因阳性表达率为89.63%,而普通支架组为21.76%,2组比较差异有统计学意义(P<0.01);103pd放射性支架组胆管癌凋亡细胞数明显大于普通支架组,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论103pd放射性支架可以激活p53基因,使其功能提高,诱导胆管癌细胞凋亡。     

Intrabiliary radiation inhibits smooth muscle formation and biliary duct remodelling after balloon overstretching injury in dogs

Background Internal metallic stents have been widely used in clinical practice, but a high postoperative restenosis rate limits its application. The purpose of this study was to determine the effect of intrabiliary radiation on muscle formation and biliary duct remodeling after biliary duct balloon injury in dogs. Methods Twenty male dogs (15-20 kg) were randomly divided into treatment group (n=10) and control group (n=10). Balloon overstretching injury was induced using a balloon catheter placed across the biliary duct. Subsequently, a 103Pd radioactive stent was positioned at the target site in each animal in the treatment group, providing the injured biliary duct with a radiation dose of 12.58×10(7) Bq. Dogs in the control group received Ni-Ti stents. All the dogs were killed one month after initial injury. The injured sections were dissected free from the dogs, and were processed for histological and morphological study. Cross-sections were stained with hematoxylin-eosin, Masson’s trichrome, and Verhoef-van Giesen. Muscle formation area and lumen area were determined using a computer-assisted image analysis system. Results Compared with the control group, 103Pd radioactive stents significantly reduced muscle formation area (78.3%, P＜0.01), and percentage area of stenosis ［control stents: (60.0±21.6)%, 103Pd radioactive stents: (31.6±9.5)%］. In addition, in the treatment group, the biliary duct lumen area was significantly larger than that in the control group (P＜0.01). Conclusions 103Pd radioactive stents providing a radioactive dose of 12.58×10(7) Bq are effective in reducing muscle formation and biliary duct remodeling after balloon overstretching injury.     

经内镜逆行胆管支架置入在恶性胆管狭窄姑息性减黄 治疗中的有效性和安全性分析

目的探讨经内镜逆行胰胆管造影术（endoscopic retrograde cholangiopancreatography,ERCP）置入胆管支架治疗恶性胆管狭窄所致梗阻性黄疸的有效性及安全性,筛选胆管支架引流效果预测指标。方法采用ERCP技术对106例不能手术切除的恶性胆管狭窄病人行胆管支架置入治疗。根据分析目的不同分为:恶性胆管狭窄肝门部与远端组;恶性肝门部胆管狭窄BismuthⅠ型与Ⅱ~Ⅳ型组;恶性肝门部胆管狭窄BismuthⅡ~Ⅳ型中单侧支架与双侧支架组;恶性远端胆管狭窄中塑料支架与金属支架组;支架引流有效与无效组。记录术前、术中及术后相关指标,比较术前术后及各组引流效果、术后并发症发生情况,分析筛选可能影响支架引流效果的相关指标。结果106例病人术后1周内血清总胆红素水平较术前明显下降（P < 0.05）,引流有效率70.8%。Bismuth Ⅰ型组、金属支架组引流有效率分别明显高于BismuthⅡ~Ⅳ型组、塑料支架组（P < 0.05）。恶性肝门部胆管狭窄较远端胆管狭窄的术后急性胰腺炎及急性胆管炎的发生率明显升高（P < 0.05）。术前血清白蛋白水平及术中回抽淤积胆汁量与引流效果呈明显正相关（P < 0.05）。结论经ERCP置入胆管支架的姑息性减黄治疗安全有效,但对于引流效果及术后并发症相对风险较高之BismuthⅡ~Ⅳ型组应谨慎对待。术前血清白蛋白水平及术中回抽胆汁量可预测支架引流效果。     

二烯丙基三硫化物涂层支架对冠状动脉损伤后内皮结构和功能的影响

目的观察二烯丙基三硫化物涂层支架置入犬冠状动脉后内皮修复、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白质表达和一氧化氮水平的变化,探讨该药物支架对血管内皮结构和功能的影响。方法将8只犬进行冠状动脉左回旋支支架置入术,将二烯丙基三硫化物涂层支架(药物组)和对照支架(对照组)分别置入左回旋支的远端和近端。术后28d处死动物,采用光镜观察内膜增生情况,扫描电镜观察内皮修复情况,用免疫组织化学和Western印迹法测定eNOS蛋白质表达,硝酸还原酶法检测一氧化氮水平。结果术后28d,药物组血管内膜增生(内膜厚度0·12mm±0·05mm,内膜面积1·17mm2±0·25mm2)明显轻于对照组(内膜厚度0·35mm±0·11mm,内膜面积1·81mm2±0·36mm2,P<0·01,P<0·05);血管内膜表面的内皮细胞较对照组分布更紧密,排列更整齐,覆盖更完整;药物组eNOS蛋白质表达量(免疫组化法11·1±1·9,Western印迹法37·5±6·2)明显高于对照组(5·6±0·6,10·4±2·7,均P<0·01);药物组一氧化氮水平(279μmol/L±72μmol/L)明显高于对照组(160μmol/L±57μmol/L,P=0·01)。结论二烯丙基三硫化物涂层支架可加速内皮化、促进eNOS表达和提高一氧化氮水平,表明该药物支架在促进内皮结构修复的同时,实现了内皮功能的恢复和完善。     

Induction of biliary cholangiocarcinoma cell apoptosis by 103Pd cholangial radioactive stent γ-rays

Background In recent years, interventional tumor therapy, involving implantation of intra-cholangial metal stents through percutaneous trans-hepatic punctures, has provided a new method for treating cholangiocarcinoma, ^103Pd cholangial radioactive stents can concentrate high radioactive dosages into the malignant tumors and kill tumor cells effectively, in order to prevent re-stenosis of the lumen caused by a relapsed tumor. The aim of the present study was to investigate the efficacy of y-rays released by the ^103pd biliary duct radioactive stent in treating cholangiocarcinoma via induction of biliary cholangiocarcinoma cell apoptosis.
Methods A group of biliary duct cancer cells was collectively treated with a dose of y-rays. Cells were then examined by the 3-（4,5-dimethyl thiazol-2-yl）-2,5-diphenyl terazolium-bromide （MTF） technique for determining the inhibition rate of the biliary duct cancer cells, as well as with other methods including electron microscopy, DNA agarose gel electrophoresis, and flow cytometry were applied for the evaluation of their morphological and biochemical characteristics. The growth curve and the growth inhibition rate of the cells were determined, and the changes in the ultrastructure of the cholangiocarcinoma cells and the DNA electrophoresis bands were examined under a UV-lamp.
Results The y-ray released by ^103Pd inhibited cholangiocarcinoma cell growth, as demonstrated when the growth rate of the cells was stunned by a y-ray with a dosage larger than 197.321 MBq. Typical features of cholangiocarcinoma cell apoptosis were observed in the 197.321 MBq dosage group, while cell necrosis was observed when irradiated by a dosage above 245.865 MBq. DNA agarose gel electrophoresis results were different between the 197.321 MBq irradiation dosage group, the 245.865 MBq irradiation dosage group, and the control group.
Conclusions ^103pd radioactive stents which provide a radioactive dosage of 197.321 MBq are effective in the treatment of cholangiocaminoma; ^103pd radioactive     

肝静脉闭塞型Budd-Chiari氏综合征患者病灶组织细胞凋亡及相关基因表达的观察

目的从肝静脉内膜增生、细胞凋亡及其相关基因角度,探讨肝静脉阻塞型布-加氏综合征的发病机理。方法选择32例肝静脉阻塞型Budd-Chiari氏综合征患者手术中切下的标本,即闭塞肝静脉以及增生狭窄的病灶组织,利用光镜、电镜进行病理学检查,同时进行免疫组织化学检查,观察病变组织的组织学变化、凋亡细胞及其相关基因表达情况;并与正常肝静脉和下腔静脉对照。结果内膜组织不规则增生,弹力纤维不完整,内见散在平滑肌细胞及大量纤维结缔组织增生,部分透明样变性或玻璃样变性,伴有大量炎性细胞浸润。病灶组织异常增生和凋亡并存,凋亡细胞数和PCNA、bcl-2阳性表达明显高于对照组。结论肝静脉病变组织不规则异常增生、细胞凋亡异常可能是肝静脉阻塞型布-加氏综合征的发病机理之一或疾病过程中的基本病理表现之一。     

腹腔镜规则性肝叶切除术治疗肝胆管结石

目的 探讨腹腔镜规则性肝叶切除术治疗肝胆管结石的可行性及安全性.方法 对14例肝内胆管结石集中于半肝的肝胆管结石患者采用完全腹腔镜下规则性肝叶切除术,与同期完成的20例开腹规则性肝叶切除术患者进行比较,了解术中出血、手术历时、术后恢复等情况.结果 腹腔镜组14例完全腹腔镜下规则性肝叶切除术均获成功.手术时间为190～420 min,平均(259±134)min;术中出血量220～1 000 ml,平均(454.5±314.2)ml;仅1例应用镇痛剂,术后无严重并发症,术后7-14 d带T管出院,术后平均住院时间(9.2±3.4)d.开腹组20例手术时间为125～257 min,平均(178±58)min;术中出血量210～1 200 ml,平均(550.9±348.1)ml;术后切1:2感染2例、胃瘫1例、肺部感染1例,术后9～25 d带T管出院,术后平均住院时间(13.4±4.7)d.腹腔镜组手术时间较开腹组显著延长(P＜0.05),腹腔镜组术后并发症发生率及住院天数较开腹组显著减少(P＜0.05,P＜0.01),腹腔镜组术中出血量与开腹组比较差异无显著性(P＞0.05).结论 完全腹腔镜规则性肝叶切除术治疗肝胆管结石是安全可行的,可有效降低术后并发症,痛苦少,是一种良好的微创肝切除方式.