红景天化学成分的研究及其对低氧诱导因子-1α表达的影响

目的 研究红景天的化学成分及其对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响.方法 采用硅胶柱色谱法对红景天 中的化学成分进行分离纯化,运用现代波谱方法进行结构鉴定;采用RT-PCR法,检测化合物对缺氧状态下乳鼠心肌细胞HIF-1α mRNA表达的影响.结果 从红景天中分得到5个化合物,经鉴定为Rhodiolin(Ⅰ)、德钦红景天苷(Ⅱ)、没食子酸(Ⅲ)、酪醇(Ⅳ)、红景天苷(Ⅴ),化合物Ⅳ,Ⅴ 111.11 μg·ml-1与缺氧对照组相比,可促进HIF-1αt的表达(P<0.01).结论 采用二维核磁共振和质谱的方法确认了化合物Ⅰ的结构.化合物Ⅳ,Ⅴ能够增强心肌细胞HIF-1α mRNA的表达.     

声门上型喉癌颈淋巴结隐匿性转移的临床研究

目的探讨声门上型喉癌患者颈淋巴结隐匿性转移的特点和颈部淋巴清扫区域及范围。方法 89例声门上型喉癌颈淋巴结临床诊断阴性患者行喉切除术同时行选择性颈清扫术。对清扫的淋巴结分区域进行病理连续切片观察,明确转移及复发区域。结果 89例患者32例有转移,转移率36％。发现61 枚有转移的淋巴结分布在：Ⅰ区1枚,Ⅱ区42枚,Ⅲ区13枚,Ⅳ区4枚,Ⅴ区1枚,Ⅵ区未见转移。其中Ⅱ、Ⅲ区共55枚,占转移数90.2％。颈部复发6例分别于Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ区,复发率6.7％。结论声门上型喉癌患者颈淋巴结隐匿性转移率较高,而早期临来诊断较难,故临床处理应积极行选择性区域性颈清扫术,而重点行Ⅱ、Ⅲ区颈淋巴结清扫术。     

低氧诱导因子-1α在压力过负荷大鼠心肌组织的表达

目的 探讨压力过负荷造成的大鼠心肌肥厚组织HIF-1α表达.方法 30只雄性Wistar大鼠随机分为3组,假手术组(A组)10只,模型组(B组)13只,正常组(C组)7只.采用腹主动脉缩窄法制作心肌肥厚模型.6周后检测大鼠心肌肥厚程度,血流动力学指标以及心肌组织中HIF-1α的表达.结果 与A,C组相比,B组大鼠心肌组织明显肥厚(P＜0.01);心肌组织HIF-1α表达明显增加(P＜0.01).结论 压力过负荷造成的大鼠心肌肥厚组织,HIF-1α表达明显增加.     

低氧诱导因子-1α对脓毒症肠黏膜屏障的保护作用

目的:探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对脓毒症肠黏膜屏障的影响及机制。方法:SD大鼠随机分4组:假手术组、脓毒症组、脓毒症+HIF-1α刺激剂组(脓毒症+DMOG组)、脓毒症+HIF-1α抑制剂组(脓毒症+Bay87-2243组),每组6只。采用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and perforation,CLP)建立脓毒症模型。ELISA检测大鼠血浆炎性标记物IL-1β、IL-6、TNF-α,氧化应激标记物丙二醛(MDA)以及抗氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的水平。Western blot检测大鼠肠黏膜HIF-1α表达。HE染色检测肠黏膜病理学损伤。结果:与假手术组相比,脓毒症大鼠炎症因子、氧化应激因子以及HIF-1α显著上调(P<0.05);给予腹腔注射DMOG明显降低脓毒症大鼠血浆IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA水平(P<0.05);增加血浆SOD、CAT水平(P<0.05);HIF-1α表达上调(P<0.05),肠黏膜病理损伤减轻,Chiu's评分显著降低(P<0.05)。口服灌胃Bay87-2243则得到相反的结果。结论:HIF-1α对脓毒症肠黏膜损伤具有保护作用,其机制可能与缓解脓毒症炎性反应和抑制氧化应激水平有关。     

低氧诱导因子-1α对细胞信号、细胞凋亡的影响及研究进展

低氧诱导因子-1（hypoxia—induciblefactor-1，HIF-1）是普遍存在于人和哺乳动物细胞内的缺氧应答调控因子，通过调控一系列与缺氧适应有关基因的表达以保持机体的氧稳态。HIF-1（尤其是HIF-1α）的表达水平与糖酵解、细胞周期阻滞、细胞生存与增殖、血管新生、血管舒缩、红细胞生成、肿瘤生长和转移以及肿瘤多药耐药等许多生命活动密切相关。多数肿瘤具有缺氧的微环境。HIF-1α对于肿瘤的效应是多方面的：HIF-1α在上游调控诸多与肿瘤发生密切相关的基因；肿瘤在低氧条件下选择更恶性的表型；增加细胞突变率；增加与血管新生和肿瘤侵袭有关的基因表达；低氧条件下细胞更具有耐药倾向。因此HIF-1α已经成为一个治疗肿瘤的新的关键性靶点。细胞信号、细胞凋亡在多细胞生物的个体发育、自稳平衡等生理以及肿瘤、炎症等病理过程中具有重要意义，理解HIF-1α对于细胞信号、细胞凋亡的调节，对于开发特异性的肿瘤治疗有着现实意义。现就HIF-1α对细胞信号、细胞凋亡的影响及研究进展作一综述。     

大鼠肺动脉平滑肌细胞原代培养及低氧对缺氧诱导因子- 1α的影响

目的获得活力稳定、高度纯化的体外培养大鼠血管平滑肌细胞,为肿瘤研究提供实验材料;并探讨低氧对抗肿瘤药物研究新靶点：缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的影响。方法无菌下取SD大鼠心肺组织,然后分离出肺动脉段,分离肺动脉中膜层,用组织块贴壁法培养,倒置相差显微镜观察细胞形态、普通免疫组织化学法（SP法）进行细胞鉴定。随后,将体外培养的大鼠PASMCs,设计常氧组、低氧组H2,H6,H12,H24,用Western blotting法检测HIF-1α的蛋白表达。结果用组织贴块法成功培养大鼠PASMCs,得到生长稳定、纯度高的PASMCs,且培养与纯化可以同时进行,可获得稳定传代的细胞;HIF-1α蛋白在常氧组有少量表达,在低氧条件下,其表达明显增加。结论成功建立体外大鼠肺动脉平滑肌细胞原代培养模型;低氧条件下促进其中HIF-1α的表达;这提示HIF-1α蛋白的表达可能是肿瘤细胞适应缺氧环境的重要原因。     

缺氧诱导因子-1α在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF1α)在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法,检测74例经手术切除的人体胃癌组织(术前均未行放疗及化疗)中HIF1α的表达。结果HIF1α主要表达于胃癌细胞浆及胞核,肿瘤间质细胞也可见少量表达,肿瘤坏死区周围及肿瘤浸润边缘部的癌细胞HIF1α表达明显增多。HIF1α的表达强度与细胞分化程度(P<0.05)、胃癌淋巴结转移(P<0.05)及预后(P<0.01)有关,而与病人年龄、性别及原发肿瘤大小均无关。其阳性强度随癌细胞分化程度的降低、淋巴结转移、术后生存期短而增高。结论HIF1α可作为评估胃癌淋巴结转移和预后的重要指标。     

结肠癌患者低氧诱导因子1α和微血管密度的表达

目的 探讨结肠癌患者低氧诱导因子1a(HIF-1α)的表达及其与结肠癌新生血管生成、结肠癌进展转移的关系.方法 采用免疫组化方法 ,检测46例结肠癌患者组织标本和相应的癌旁正常黏膜组织中HIF-1α与CD34的表达,并与结肠癌的临床病理特征结合分析.结果 微血管密度(MVD)染色密度在结肠癌组织中明显高于结肠癌癌旁组织;有淋巴结转移、Dukes分期为C、D期者,CD34与HIF-1α阳性表达明显高于无淋巴结转移、Dukes分期为A、B期患者(P<0.05);CD34与HIF-1a的阳性表达存在一致性.结论 HIF-1α的过表达在结肠癌的发生发展及浸润转移过程中起着重要作用;HIF-1a参与结肠癌患者的肿瘤新生血管生成过程.     

免疫型肠内营养对于慢性阻塞性肺疾病合并呼吸衰竭患者血浆低氧诱导因子-1α的影响

目的观察免疫型肠内营养支持对慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并Ⅱ型呼吸衰竭患者低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的影响,并探讨其机制。方法将68例COPD并Ⅱ型呼吸衰竭患者随机分为2组,标准饮食组(对照组)和免疫型肠内营养组(治疗组),每组各观察34例,均于治疗前及治疗后14d分别测HIF-1α水平、营养指标、外周血T细胞亚群及血气指标。结果对照组及治疗组治疗14d后,对照组患者的血浆HIF-1α水平较治疗前没有明显变化(P>0.05),治疗组血浆HIF-1α水平较治疗前有显著下降,较标准饮食对照组相比有明显下降(P<0.05);治疗组和对照组患者14d的营养指标比较治疗前均有显著增高(P<0.05),治疗组较对照组有明显提高(P<0.05);治疗组和对照组患者14d的CD4+、CD8+数目及CD4+/CD8+较治疗前有显著增高(P<0.05),治疗组CD4+、CD4+/CD8+较对照组有明显提高(P<0.05);治疗组和对照组患者14d的PaO2比治疗前有显著增高(P<0.05),PaCO2有显著下降(P<0.05),治疗组上述指标较对照组相比有明显改善(P<0.05)。结论给予免疫型肠内营养制剂可以降低患者HIF-1α的水平,其机制与营养的改善、感染的控制、缺氧的纠正有关。     

低氧诱导因子 1-α 的表达及 DNA 结合活性在非小细胞肺癌中的临床意义

目的探讨非小细胞肺癌患者肺组织中HIF-α的表达及DNA结合活性的动态变化与肿瘤病理学特性的关系。方法收集89例非小细胞肺癌患者肿瘤及癌旁正常肺组织标本,RT—PCR检测HIF-α的mRNA表达水平,Westernblot检测HIF-α的蛋白质表达水平,EMSA法检测HIF—αDNA结合活性的表达变化,并结合临床及病理特征进行分析。结果HIF-αmRNA及蛋白的表达水平在肿瘤组织中均明显高于癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0．05）。HIF-α的表达与非小细胞肺癌病理分期及有无淋巴结转移有关。肿瘤组HIF-α的DNA结合活性较癌旁正常组织增高,2组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论HIF-α的高表达及转录活性的增强与非小细胞肺癌发病密切相关,可将此作为抑制肿瘤发病的靶点。     

低氧诱导因子1α调控的血管活性因子在实验性脊髓损伤中的表达及意义

目的 探讨实验性脊髓损伤中低氧诱导因子1α（HIF-1α）调控的两种血管活性因子诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管内皮生长因子（VEGF）在损伤脊髓中的表达趋势及其意义。方法 将SD大鼠随机分为7组，分别为损伤后12h、1d、2d、3d、1周、2周以及正常对照组，各损伤组以脊髓压迫模型致伤。采用免疫组化方法，观察伤后各损伤脊髓中iNOS和VEGF的表达情况。结果 损伤脊髓中iNOS和VEGF的表达都显著增加，它们的表达都在伤后2～3d达到高峰．以后逐渐下降。结论 HIF-1α调控的iNOS和VEGF在损伤脊髓中的表达明显增高，这应是HIF-1α激活下游基因转录的结果，从而使血管扩张，微循环重建，这是损伤脊髓组织对缺血缺氧的一种适应。     

低氧诱导因子-1基因在宫颈癌组织中的表达及意义

目的研究HIF-1在宫颈癌组织、正常宫颈组织及宫颈良性病变组织中的表达,并与宫颈癌患者年龄、淋巴结转移与否、临床分期进行比较,探讨其与宫颈癌侵袭/转移的关系。方法应用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）的方法检测56例宫颈癌组织、正常宫颈组织及20例宫颈良性病变组织中HIF-1mRNA的表达情况,并应用相关统计学方法进行分析。结果 HIF-1mRNA在宫颈癌组织、正常宫颈组织及宫颈良性病变组织中的表达率分别为62.50%、41.07%、35.00%,宫颈癌与正常宫颈组织（P=0.023）、宫颈癌与宫颈良性病变组织（P=0.001）间的HIF-1αmRNA表达率差异有统计学意义,而正常宫颈组织与宫颈良性病变组织之间的HIF-1αmRNA表达率差异无统计学意义（P=0.091）。HIF-1mRNA在不同临床分期（P=0.001）及淋巴结转移（P=0.002）中的表达率存在显著差异,但在不同年龄患者的癌组织中HIF-1mRNA的表达率无差异（P〉0.05）。结论 HIF-1mRNA在宫颈癌中的表达率明显高于正常宫颈组织及宫颈良性病变组织。HIF-1与宫颈癌临床分期密切相关,临床分期越晚,其肿瘤组织中HIF-1mRNA的表达率越高。伴淋巴结转移宫颈癌HIF-1mRNA表达率高于无淋巴结转移者。HIF-1mRNA表达率与患者年龄无关。     

缺氧诱导因子-1α在中耳胆脂瘤中的表达

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在中耳胆脂瘤发病机制中的作用,检测其在中耳胆脂瘤和外耳道正常上皮中的表达情况.方法:取32例中耳胆脂瘤和15例外耳道正常上皮标本用免疫组织化学技术检测HIF-1α蛋白的表达.结果:在中耳胆脂瘤中HIF-1α的表达较外耳道正常上皮明显增多(P＜0.05).结论:中耳胆脂瘤中HIF-1α的表迭显著升高,推测HIF-1α在中耳胆脂瘤的发生、发展过程中具有极其重要的作用,并且缺氧有可能是中耳胆脂瘤发病机制中的一个诱因.     

低氧对大鼠骨髓间充质干细胞HIF-1α表达影响的研究

目的通过体外不同氧浓度下培养大鼠骨髓间充质干细胞,RT-PCR方法检测,观察正常氧浓度和低氧浓度对HIF-1α(缺氧诱导因子-1α)表达的影响。方法分离雄性Wistar大鼠骨髓间充质干细胞体外培养,鉴定其CD34、CD44的表达,分为正常氧浓度组和低氧浓度组培养24h,RT-PCR方法检测,不同氧浓度对细胞HIF-1α表达的影响。结果贴壁法培养的细胞表达CD44,不表达CD34;正常氧浓度培养的细胞较少有HIF-1α的表达,低氧浓度培养的细胞HIF-1α的表达明显增加。结论细胞低氧可激活HIF-1α的表达,低氧浓度培养的细胞的HIF-1α表达较正常氧浓度培养的细胞的表达明显增加。     

缺氧诱导因子-1α与妇科肿瘤

缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）是一类重要的缺氧应答调控因子,与肿瘤的发生、发展密切相关。其在维持氧稳定、细胞的能量代谢和肿瘤血管生成以及转移、细胞增殖、凋亡等方面有重要的作用。HIF-1α已成为近年来在肿瘤学术研究方面的一个热点,现就HIF-1α与妇科肿瘤的关系作以概述。     

缺氧诱导因子-1α在宫颈癌中的表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）在宫颈癌发生发展过程中蛋白表达情况。方法应用免疫组织化学S-P方法检测HIF-1α在正常宫颈组织（NCE）20例、宫颈上皮内瘤变组织（CIN）28例、宫颈癌（ICC）组织70例中的表达情况。结果在正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变组织、宫颈癌（I—IIA期）组织中，HIF-1α蛋白的阳性表达率分别是0、32．14％、72．86％（P〈0．01）。结论HIF-1α的表达与宫颈癌的发生发展密切相关，促进宫颈癌的发生发展。     

缺氧诱导因子-1α和血管内皮因子在卵巢癌中的表达及其临床意义

探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)在卵巢癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学S-P法检测HIF-1α和VEGF在10例良性卵巢肿瘤、20例交界性上皮性卵巢肿瘤和64例上皮性卵巢癌组织中的表达。结果HIF-1α在良性卵巢肿瘤、交界性上皮性卵巢肿瘤和上皮性卵巢癌中阳性表达率分别为40%、60%、92.2%,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-1α在卵巢癌组织中表达和临床分期、淋巴结转移成正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。VEGF在卵巢癌组织中表达和临床分期、淋巴结转移、病理分型成正相关,差异有统计学意义(P<0.05)。卵巢癌组织中HIF-1α表达和VEGF表达之间成正相关(P<0.05)。结论HIF-1α和VEGF在卵巢癌的发生发展和淋巴转移中起重要作用,可能成为卵巢癌治疗和判断预后的可靠指标之一。HIF-1α通过上调VEGF的表达,刺激微血管形成,促进卵巢癌的浸润和转移。     

低氧诱导因子-1α和角质细胞生长因子双基因重组减毒沙门菌菌株的构建及其在肠上皮细胞中的表达

目的构建同时携带低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和角质细胞生长因子（KGF）真核表达载体的减毒沙门菌菌株（Ty21a-pIRES-HIF,IRES-KGF,TPHK）,观察其在防治肠黏膜损伤方面潜在的应用前景。方法采用RT-PCR法从低氧处理A549细胞扩增HIF-1αcDNA后连接到载体pIRES-SEQ的NheI和MluI酶切位点,构建单基因重组质粒pIRES-HIF。然后以质粒pIRES2-EGFP-KGF为模板扩增KGF基因并克隆到重组质粒pIRES-HIF的XbaI和NotI酶切位点上,获得双基因重组质粒plRES-HIF-IRES-KGF。采用电穿孔法将pIRES-HIF-IRES-KGF质粒转人减毒沙门菌Ty21a中,通过筛选获得TPHK。该菌株转染肠上皮细胞IEC-6后48h,用ELISA法检测上清中HIFId和KGF的表达水平。并采用MTT方法分析不同剂量表达产物对IEC-6细胞的作用。结果通过对构建质粒克隆进行测序及酶切,证实TPHK构建成功。TPHK转染正常肠上皮细胞IEC-6后,48h取上清用ELISA法检测HIF和KGF的表达,结果表明6×10^5个细胞可表达（16．03±1．47）ng的HIF蛋白和（17．77±1．83）ng的KGF蛋白。MTT结果表明表达上清有明显刺激正常肠上皮细胞IEC-6增殖的活性（P〈0．05）,加入20％表达上清时刺激活性达高峰。结论成功构建了TPHK,其可有效转染肠上皮细胞IEC-6,表达上清可显著促进IEC-6细胞增殖。提示TPHK具有潜在的在肠黏膜损伤局部应用的前景。     

复方景川片调控低氧诱导因子-1α表达对大鼠缺血性脑损伤的保护作用

目的探究复方景川片对大鼠缺血性脑损伤的保护作用并探讨其对低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响。方法 60只大鼠按体质量随机分为假手术组、模型组、尼莫地平(0.012g/kg)组和复方景川片(0.780、1.560、3.120g/kg)组,除假手术组外,其余各组均采用线栓法构建大鼠大脑中动脉闭塞模型,连续给药10 d。采用评分法测定复方景川片对大鼠神经行为学的影响,采用TTC染色法测定脑梗死比例,采用TUNEL染色法检测大鼠缺血区脑组织神经细胞凋亡比率,并通过Real-Time PCR法和Western blotting法检测复方景川片对HIF-1αmRNA和蛋白表达水平的影响。结果与模型组比较,复方景川片各剂量组均能降低大鼠神经功能评分和横木行走实验评分,能显著性减少神经细胞凋亡、减小梗死体积,其中0.78、1.56、3.12 g/kg组脑梗死面积分别为44.53%、33.71%、29.93%。HIF-1α在复方景川片各剂量组中呈高表达状态,其升高水平与模型组相比具有统计学意义(P0.05、0.01)。结论复方景川片在一定剂量范围内能够有效改善大鼠脑缺血损伤程度并减少神经细胞凋亡,其对脑缺血损伤中的神经保护作用可能与其对HIF-1α表达的调控有关。