生孢梭菌孢子作为生物指示剂用于残存概率灭菌工艺验证的可行性

测定并分析生孢梭菌孢子在不同介质及不同温度下的耐热参数，评价生孢梭菌孢子的耐热特性及其作为生物指示剂在残存概率湿热灭菌工艺验证中的应用。     

全脂奶粉可改变生孢梭菌孢子的耐热性

生孢梭菌孢子液可作为灭菌效力相对较低(较低的灭菌温度或较短的灭菌时间;F0值一般控制在8～12 min)的生物指示剂.商购的普通生物指示剂耐热性较高,最常见的是嗜热脂肪芽孢杆菌孢子液,一般用于验证F0值大于等于15 min的灭菌工艺.     

2%戊二醛溶液对无菌检查中阳性对照菌的灭菌处理

目的验证 2 %戊二醛溶液对无菌检查中阳性对照菌的灭菌处理效果 ,建立简单快速的阳性对照菌灭菌方法。方法采用 2 %戊二醛溶液对药典规定的无菌检查用金黄色葡萄球菌、生孢梭菌和白色念珠菌 3种阳性对照菌灭菌处理后 ,先进行增菌培养再进行平皿培养实验 ,以检测 2 %戊二醛溶液对阳性对照菌杀灭程度。结果 2 %戊二醛溶液对 3种阳性菌的灭菌最低用量分别为 :金黄色葡萄球菌和白色念珠菌的阳性管为 1.5ml;生孢梭菌的阳性管为 2ml。结论将 2 %戊二醛溶液直接加入到阳性对照管中进行灭菌处理方法可行 ,灭菌效果可靠     

厌氧罐法检查硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度

目的 建立厌氧罐法检查硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度的方法。方法 用氧化还原指示剂检查厌氧罐的密封性能,确保厌氧罐内能达到厌氧状态;测定达到厌氧状态的时间以及能够保持的时间;将生孢梭菌接种至不同的固体培养基上,根据菌落生长情况选择适宜生孢梭菌生长的培养基;同时用厌氧罐法和试管法对同一批号的生孢梭菌菌悬液培养计数,并对计数结果进行比对。结果 硫乙醇酸盐流体培养基能够作为厌氧罐内厌氧状态的指示剂,罐盖密封后30min可达厌氧状态,至少可以保持7天;中国药典规定的营养琼脂培养基适宜生孢梭菌的生长;厌氧罐法比试管法更适合对生孢梭菌菌悬液的培养计数。结论 用厌氧罐法检查硫乙醇酸盐流体培养基的灵敏度能更真实地反映培养基的质量,符合中国药典要求,方法切实可行。     

生孢梭菌生长所需最低水分活度研究

目的探讨用不同介质调节培养基的水活度,严格厌氧微生物生孢梭菌生长所需的最低水分活度。方法用氯化钠、蔗糖及甘油调节梭菌增菌培养基的水分活度,取制备好的新鲜菌悬液,用无菌生理盐水稀释成每1 mL含104 cfu的菌悬液。将上述菌液分别加入3种调节好的梭菌增菌培养基水分活度中,取1 mL稀释至适宜的稀释级注平皿倾注哥伦比亚琼脂培养基,待培养基凝固后装入厌氧培养袋,在35℃培养72 h,计数。结果以氯化钠、蔗糖及甘油调节梭菌增菌液的水分活度,生孢梭菌生长所需最低水分活度分别为0.95~0.96,0.95~0.96,0.92,其中甘油的试验结果相对稳定,生孢梭菌生长所需最低水分活度最低。结论该方法可为水分活度测定在我国非无菌制剂微生物控制中的应用和2020年版《中国药典》相关内容的修订提供参考。     

羧氨基葡聚多糖钠生物胶体液无菌检查法的建立

目的:建立羧氨基葡聚多糖钠生物胶体液的无菌检查方法。方法:采用薄膜过滤法,对样品中金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉生长情况进行考察;对受抑制的试验菌(生孢梭菌、白色念珠菌)采用加热冲洗液的方法消除样品对其的抑制作用并进行验证。结果:羧氨基葡聚多糖钠生物胶体液对生孢梭菌的抑菌作用最强;采用加热至45℃的0.1%无菌蛋白胨水溶液500mL(每膜)冲洗可消除其抑菌作用,验证试验中试验菌生长良好。结论:所建立的方法可用于羧氨基葡聚多糖钠生物胶体液的无菌检查,且结果准确、可靠。     

MTF0型智能温度—F0值监测仪在热压灭菌中的应用

温度－Ｆ０值监测仪是依对数残留定律理论，采用最新专利技术，为热压灭菌装置配套而设计的一种懒汉型仪表，它填补了我国直接用Ｆ０值灭菌参数进行灭菌过程可靠性在线监控的空白，为医药工业推行“实施指南”提供新型的工艺验证硬件，在有助于提高灭菌产品的内在质量同时，可取得强化工艺科学管理与节能降耗等综合效果。     

覆盆子生药粉湿热灭菌工艺优化及不同灭菌方式对质量影响研究

目的 通过多指标正交试验优选覆盆子生药粉最佳湿热灭菌工艺，对比不同灭菌方式对覆盆子生药粉的灭菌效果及质量的影响。方法 以山柰酚3-O-芸香糖苷、鞣花酸的含量和灭菌率的综合评分为指标，采用层次分析（AHP）法、指标重复性相关（CRITIC）法和AHP-CRITIC混合加权法确定各指标权重系数，结合正交试验筛选覆盆子湿热灭菌工艺中灭菌时间、灭菌温度和物料厚度，优化覆盆子灭菌工艺参数；通过微生物限度检测，生药粉椴树苷鉴别，水分、总灰分、酸不溶灰分、浸出物、山柰酚3-O-芸香糖苷和糅花酸含量检测，指纹图谱检测，对比采用湿热灭菌、辐照灭菌、干热灭菌和乙醇灭菌法对覆盆子生药灭菌效果和质量的影响。结果 AHP-CRITIC混合加权法较AHP法和CRITIC法更为科学、合理，按照其确定的权重系数进行综合评价确定的覆盆子最佳湿热灭菌工艺条件为灭菌时间15 min、灭菌温度115℃、物料厚度5 mm；各灭菌样品的微生物限度检查等均符合药典规定，与未灭菌生药粉相比，山柰酚3-O-芸香糖苷经乙醇灭菌与干热灭菌后含量降低，糅花酸经干热灭菌后含量增加；指纹图谱结果显示，干热灭菌与未灭菌相比相似度较低，辐照灭菌、湿热灭菌与未灭菌相比相似度较高。结论 湿热灭菌法与其他灭菌方法相比，可在较低温度、更短时间得到符合规定的覆盆子生药粉，且优选得到的灭菌工艺稳定可行、重复性好。     

关于施行《抗菌药物临床应用指导原则》的通知(续五)

1．两性霉素B适用于下列真菌所致侵袭性真菌感染的治疗：隐球菌病、北美芽生菌病、播散性念珠菌病、球孢子菌病、组织胞浆菌病，由毛霉属、根霉属、犁头霉属、内孢霉属和蛙粪霉属等所致的毛霉病，由申克孢子丝菌引起的孢子丝菌病，曲霉所致的曲霉病、暗色真菌病等。本药尚可作为美洲利什曼原虫病的替代治疗药物。     

MTF_0型智能温度－F_0值监测仪在热压灭菌中的应用

温度－Ｆ０值监测仪是依对数残留定律理论，采用最新专利技术，为热压灭菌装置配套而设计的一种懒汉型仪表。它填补了我国直接用Ｆ０值灭菌参数进行灭菌过程可靠性在线监控的空白，为医药工业推行“（ＧＭＰ）实施指南”提供新型的工艺验证硬件，在有助于提高灭菌产品的内在质量同时，可取得强化工艺科学管理与节能降耗等综合效果。     

不锈钢载体型过氧化氢蒸汽灭菌生物指示剂芽孢计数方法的建立

目的  建立不锈钢载体型过氧化氢蒸汽灭菌生物指示剂总芽孢计数的方法。方法  采用不同洗脱液及不同超声参数组合充分洗脱不锈钢载体上的芽孢,并对其进行激活、培养和计数,以考察生物指示剂的芽孢回收率;通过重复性实验确定其最优试验参数,建立总芽孢计数检测方法,并对该方法进行精密度和重现性验证。结果  以含0.1%吐温80的灭菌纯化水作为洗脱液,超声频率40 kHz、功率500 W为超声条件作用50 min,芽胞回收率最高可达135.6%,确定该实验参数组合为样品最佳处理条件;3名实验人员分别对3批生物指示剂开展重复性实验,其精密度相对标准偏差在4.0%〜14.8%范围内,重现性相对标准偏差分别为8.4%、11.6%和13.8%,该方法的精密度和重现性达到中国药典2020年版的要求。结论  研究建立的检测方法可用于不锈钢载体型过氧化氢蒸汽灭菌生物指示剂芽孢载量计数。     

环氧乙烷灭菌生物指示剂D值测定方法研究

目的 研究环氧乙烷灭菌指示剂D值测定方法。方法 采用部分阴性法测定不同厂家产品的D值,用存活灭杀时间进行验证,两者一致说明部分阴性法测定D值结果有效。若无法验证,则采用残存曲线法重新测定D值,再进行验证。结果 5个样本中,3个用部分阴性法测定的D值可以被存活灭杀时间验证。另2个样本用残存曲线法测定的D值与验证结果一致。结论 D值是评价环氧乙烷灭菌生物指示剂产品质量的关键性技术参数,部分阴性法和残存曲线法的D值测定结果存在差异,为确证D值测定结果的准确性,应采用存活灭杀时间对测定结果进行验证。     

自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂孢子计数方法的考察

摘 要 目的： 研究自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂孢子计数方法。方法: 采用活菌计数法,将不同厂家产品在不同洗脱液、不同平皿计数方式下的回收菌数进行计数,并利用单因素方差分析方法(ANOVA)对不同处理组回收菌数的几何均数进行统计学检验。结果: 洗脱液为灭菌纯化水,培养基为胰酪胨大豆琼脂培养基,纸片破碎形式为涡旋振荡法（加入玻璃珠）,平皿计数形式采用浇碟法的操作方法能获得较好的实验结果。结论: 在保证自含式压力蒸汽灭菌生物指示剂的孢子计数菌数回收率的情况下采用上述操作能降低实验成本且易于操作。     

嗜热脂肪芽孢杆菌孢子在四种介质中的耐热性

用残存曲线法测定了生物指示剂嗜热脂肪芽孢杆菌孢子在大豆胰蛋白胨液体培养基、7．0％复方氨基酸溶液、10％脂肪乳剂和0．9％氯化钠水溶液中的耐热性。结果表明生物指示剂接科0．9％氯化钠水溶液用于研究湿热灭菌程序较合适。     

非聚氯乙烯软包装输液残存概率法灭菌工艺研究

目的:对我院生产非聚氯乙烯软包装输液时采用的残存概率法灭菌工艺进行验证。方法:主要通过对不同产品进行热穿透试验,以确定在设计的灭菌参数下,装载室中的"最冷点"产品内部标准灭菌时间(F0)值>9min;通过生物指示剂试验,确定产品中固定数量嗜热脂肪芽孢杆菌孢子完全杀灭(生物指示剂为阴性);考察输液袋灭菌适应性及灭菌前、后产品pH,主成分含量和5-羟甲基糠醛量的变化等。结果:采用115℃、30min,8min≤F0<12min的湿热灭菌工艺,热穿透试验中灭菌结束时F0值平均为11.3min;生物指示剂试验中生物指示剂均为阴性;输液袋灭菌适应性良好,产品灭菌后质量符合相关要求。结论:该灭菌工艺可靠。     

《中国药典》2020年版中生物指示剂相关指导原则的标准建立与研究

生物指示剂是药品灭菌工艺监控、确认和验证的关键物质.《中国药典》2020年版增订了通则9207灭菌用生物指示剂指导原则和通则9208生物指示剂耐受性检查法指导原则,进一步规范了生物指示剂的定义、特点、质量和应用等,并且增加了总芽孢计数、D值测定、存活时间和杀灭时间的确认等质量控制方法.新增订的指导原则弥补了《中国药典》...     

Thermal sterilization of heat-sensitive products using high-temperature short-time sterilization

High-temperature short-time (HTST) sterilization with a continuous-flow sterilizer, developed for this study, was evaluated. The evaluation was performed with respect to (a) the chemical degradation of two heat-sensitive drugs in HTST range (140-160 degrees C) and (b) the microbiological effect of HTST sterilization. Degradation kinetics of two heat-sensitive drugs showed that a high peak temperature sterilization process resulted in less chemical degradation for the same microbiological effect than a low peak temperature process. Both drugs investigated could be sterilized with acceptable degradation at HTST conditions. For the evaluation of the microbiological effect, Bacillus stearothermophilus ATCC 7953 spores were used as indicator bacteria. Indicator spore kinetics (D(T), z value, k, and E(a)), were determined in the HTST range. A comparison between the Bigelow model (z value concept) and the Arrhenius model, used to describe the temperature coefficient of the microbial inactivation, demonstrated that the Bigelow model is more accurate in prediction of D(T) values in the HTST range. The temperature coefficient decreased with increasing temperature. The influence of Ca(2+) ions and pH value on the heat resistance of the indicator spores, which is known under typical sterilization conditions, did not change under HTST conditions.     

纸塑消毒袋在牙科手机消毒灭菌中临床使用效果评价

目的 牙科手机的结构复杂,存在着难以探入的管腔。在治疗过程中,手机密切接触患者的唾液、血液和致病微生物。在手机停转时容易产生回吸,当再次使用时,回吸的污染物就会随着喷出的水雾进入患者口中,造成交叉感染的危险。本文拟在对袋装化手机消毒效果进行检测,寻找一条使病人安全放心的手机灭菌方法。方法 通过化学指示卡与包装袋指示条、HBsAg破坏试验的对比。结果 袋装化手机经134℃/4min灭茵后的化学指示卡颜色变黑,HBsAg培养阴性。结论 袋装化手机高压灭菌效果安全可靠。     

4A分子筛干燥剂连续使用有效次数试验

 目的  确定同一批次4A分子筛干燥剂连续使用后，能达到预期灭菌除湿效果的有效次数。 方法  分别对无菌隔离器的手套系统（包括手套、封圈、套袖）以及实验舱和传递舱进行完整性测试。采用同一批次4A分子筛干燥剂连续灭菌除湿3次，通过对过氧化氢气体浓度、分布状态和灭菌效果，以及隔离器内部环境微生物（沉降菌、浮游菌、表面微生物）检测，验证过氧化氢对隔离器的灭菌效果；通过对4A分子筛干燥剂使用前后称重和观察舱内起雾现象，确定4A分子筛达到灭菌除湿效果的有效次数。结果  共对8个手套系统进行完整性测试，手套在60 s内的压降差值均<60 Pa；实验舱和传递舱的完整性测试结果表明，小时体积泄露率为0.04%，每次测量环境温度波动均<0.5 ℃。过氧化氢指示卡显示，舱内过氧化氢达到灭菌浓度且分布均匀。经生物指示剂检测，过氧化氢能杀灭106以上嗜热脂肪芽孢杆菌。隔离器内部环境微生物检测结果如下，沉降菌为每4小时 0 菌落形成单位（colony forming unit，CFU）、浮游菌为0 CFU/m3、表面微生物为0 CFU/碟。同一批次4A分子筛干燥剂使用前的重量为3.000 5 kg，第1、第2和第3次使用后的重量分别为3.185 0、3.340 5和3.451 5 kg。当同一批次干燥剂可连续使用至第3次时，隔离器舱内出现起雾现象。结论  同一批次4A分子筛干燥剂可连续使用3次能并到预期的灭菌除湿效果。