重组梅毒螺旋体抗原的研究进展

在梅毒螺旋体人工培养尚未获得成功的情况下,基因克隆技术的出现为该病原体的研究开辟了一条新的途径。应用基因工程技术目前已制备出多种重组梅毒螺旋体抗原,这些抗原的制备对梅毒发病机理的探讨,疫苗的研制,以及血清学诊断试验的建立与应用具有重要意义,为梅毒的预防和控制提供了更加有效的手段。     

重组梅毒螺旋体抗原的研究进展

在梅毒螺旋体人工培养尚未获得成功的情况下,基因克隆(即DNA重组)技术的出现为该病原体的研究开辟了一条新的途径。应用基因工程技术目前已制备出多种重组梅毒螺旋体抗原,这些抗原的制备对梅毒发病机理的探讨、疫苗的研制、以及血清学诊断试验的建立与应用具有重要意义,为梅毒的预防和控制提供了更加有效的手段。     

梅毒螺旋体Gpd重组蛋白的表达

随着基因工程技术的迅速发展和梅毒螺旋体(Tp)全基因序列的解析^[1],通过重组技术已制备多种重组Tp抗原,并被广泛应用于梅毒血清学检测的研究和试剂盒的开发^[2-5],但对于哪一种Tp蛋白抗原在临床各期梅毒的血清学诊断中具有更高的特异性和敏感性尚无一致观点。我们应用软件筛选分析,选取抗原性较强的Tp外膜蛋白GPd进行克隆表达,并以重组蛋白为包被抗原,建立间接ELISA法,评价其在梅毒血清学诊断中的应用价值。     

4种以重组梅毒螺旋体抗原为基础的梅毒快速诊断试验的临床评价

目的：评估4种以重组梅毒螺旋体抗原为基础的梅毒快速诊断试剂盒的敏感性和特异性,及其在临床应用中的可操作性。方法：选择860例性传播疾病（STD）门诊患者,签署知情同意书并采集其静脉血。分别取全血和血清进行梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）及4种试剂盒的检测。检测方法分别按照说明书进行。结果：以TPHA为标准,结果分别为：①Abbott Determine Syphilis TP test：血清敏感性为100％,特异性为98、9％;全血敏感性为81．9％,特异性为99．4％。②SDBIOLINE Syphilis 3．0 test：血清敏感性为95．5％,特异性为97．9％;全血敏感性为87．6％,特异性为99．4％。③VISITECT-SYPHILIS test：血清敏感性为94．0％,特异性为98．1％;全血敏感性为73．5％,特异性为99．7％。④Syphicheck-WB test：血清敏感性为67．4％,特异性为98．8％：全血敏感性为64．0％,特异性为99．7％。结论：4种试剂盒均具有优良的临床操作性能,适用于STD门诊的梅毒快速检测。而且这4种快速诊断试剂盒在血清中的检测比全血具有更高的敏感性。     

一种梅毒螺旋体重组抗原胶体金的制备

目的制备一种可以特异、准确的检测血清中梅毒螺旋体抗体的胶体金免疫层析试纸。方法利用原核表达系统构建一种包含梅毒螺旋体多个免疫表位的重组抗原B1,采用ELISA的方法对重组抗原进行活性检测。胶体金标记重组抗原B1,制备胶体金免疫层析试纸。结果重组抗原B1在BL21表达载体中有较高表达,ELISA结果显示B1与梅毒患者血清能特异、敏感的结合,与乙型肝炎病毒血清及阴性血清无交叉反应。应用B1蛋白制备的胶体金诊断试纸检测100份梅毒标准血清,结果均为阳性,与乙型肝炎患者血清及健康人群血清无交叉反应。结论梅毒螺旋体胶体金快速诊断试纸具有良好特异性和敏感性,可以快速、准确的诊断梅毒螺旋体的感染。     

梅毒螺旋体IgM抗体蛋白印迹试验诊断新生儿胎传梅毒的探讨

目的探讨梅毒螺旋体IgM抗体蛋白印迹试验(Treponema pallidum IgM Western blot，TP-IgM-WB)在新生儿胎传梅毒早期诊断中的价值。方法对8例胎传梅毒新生儿(其母亲均为梅毒)进行TRUST、TPPA，FTA-ABS-19S-IgM和TP-IgM-WB 4种梅毒血清学检查，并结合临床对结果进行比较。结果8例中3例出现胎传梅毒的典型临床表现，包括典型皮肤损害，梅毒新生儿肺炎，伴发心、脑、肝、肾多脏器衰竭；另外5例无胎传梅毒的临床表现。梅毒血清学试验结果：所有8例TP-IgM-WB均为阳性；除1例外，7例FTA-ABS-19S-IgM试验为阳性；3例有症状的胎传梅毒及3例胎传潜伏梅毒中4种梅毒血清学试验均为阳性；1例TRUST和TPPA均阴性，但FTA-ABS-19S-IgM和TP-IgM-WB均阳性；1例FTA-ABS-19S-IgM阴性，但TRUST滴度是母亲的4倍，TPPA和TP-IgM-WB均阳性。结论梅毒螺旋体IgM抗体蛋白印迹试验可作为一种确诊试验应用于新生儿胎传梅毒，尤其是胎传潜伏梅毒的早期诊断。     

梅毒螺旋体特异性抗体对梅毒早期诊断和治疗的评价

目的：为评价梅毒血清特异性抗体在梅毒早期诊断及治疗后的意义。方法：采用蛋白印迹法(Western blottinG,WB)、快速血浆反应素(RPR)试验、梅毒颗粒凝集试验(TPPA)3种方法．对67例梅毒及其中经治疗后随诊18～24个月的21例患者作血清检测。对5年来诊治的临床一期、二期梅毒血清抗体的变化进行分析。结果：20例一期梅毒WB检测出现不同抗体谱条带,其中均有相对分子质量为47000的条带,RPR试验及TPPA部分为阴性。经治疗后随诊18-24个月的21例梅毒患者．18个月内检测时WB9．52％阴转,24个月时28．57％阴转;TPPA阴转的情况同WB;RPR滴度随疗后时间的增加而逐渐下降．6个月内28．57％阴转,24个月85．71％阴转：结论：相对分子质量为47000、17000的条带对早期梅毒的诊断既敏感又特异：部分一期和二期梅毒患者在经过有效治疗后2年,梅毒抗体可以完全消失;RPR试验可用于梅毒治疗期间的疗效判定。     

梅毒螺旋体Tp0453重组蛋白的表达纯化及免疫活性研究

目的表达梅毒螺旋体膜蛋白Tp0453(28-288 aa),纯化表达产物并进行免疫活性分析,为探索Tp0453重组蛋白在梅毒血清学诊断中的应用提供实验依据。方法通过生物信息学分析,挑选Tp0453抗原的优势表位,进行诱导表达;以W estern-b lot和间接ELISA法检测重组蛋白的免疫反应性;用重组蛋白免疫新西兰家兔,评价其免疫原性。结果纯化后获得了相对分子量约为32×103的融合蛋白。W estern-b lot检测其能与梅毒患者阳性血清发生特异性反应;同时以重组蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,检测梅毒诊断试剂参考血清,其阴阳性符合率均为100%。用纯化的Tp0453重组蛋白免疫新西兰家兔,能诱导其产生特异性免疫应答,ELISA法测定免疫血清中特异性抗体滴度在1∶1280以上。结论基因重组表达的Tp0453重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用和其生物学功能奠定了基础。     

梅毒螺旋体黏附素蛋白TP0136不同亚型重组蛋白在神经梅毒患者血清诊断中的应用

 目的 探讨不同亚型梅毒螺旋体（Tp）黏附素蛋白TP0136在神经梅毒（NS）患者血液中的诊断价值。方法比较60例NS患者与120例非神经梅毒的梅毒患者（NNS）一般情况。通过分子克隆技术构建表达和纯化Nichols Seattle TP0136（NST）和Nichols Houston TP0136（NHT）重组蛋白,采用ELISA方法检查NS和NNS患者血清中NST和NHT抗体水平。结果NS和NNS患者两组之间年龄、性别、来源地、职业无统计学差异（均P>0.05）,而婚姻状况、神经系统症状、血清或血浆TRUST和TPPA 滴度、血清或血浆TP-IgM阳性率、脑脊液TRUST和TPPA 滴度均有统计学差异（均P<0.05）。NST在NS组和NNS组血清或血浆中抗体水平无差异（t=0.15,P=0.920）;NHT在NNS组血清或血浆中抗体水平高于NS患者,差异有统计学意义（t=3.68,P=0.021）。结论Tp黏附素蛋白TP0136重组蛋白NHT或可作为NS诊断的潜在血液学标志物。     

基因工程技术制备梅毒螺旋体重组抗原的研究

目的 用基因工程技术制备梅毒螺旋体特异蛋白抗原,以梅毒螺旋体不能体外培养而难以获得足量的纯梅毒螺旋体特蛋白抗原的难题。方法 以PCR技术克隆出目的基因,重组后通过DNA序列测定验证重组质粒中连结有目的基因片段;以pMAL^TM-e2为质粒载体,TB1大肠杆菌为宿主菌进行目的基因的转化、诱导和表达,并对表达产物进行蛋白印迹试验检测其血清学活性。结果 PCR克隆出梅毒螺旋体15000、17000以及47000蛋白的基因克隆,其中梅毒螺旋体17000以及47000在TB1大肠杆菌中得到稳定的表达,且表达产物显示与梅毒患者血清有非常特异的血清学反应。结论 梅毒螺旋体之目的基因在大肠杆菌中得到了成功表达,并具特异的血清学活性,从而为建立为国产化梅毒血清学诊断的新方法奠定了基础。     

梅毒免疫和梅毒螺旋体的研究进展

梅毒螺旋体有着独特的基因和蛋白结构,对其基因分型有利于梅毒分子流行病学的研究.梅毒螺旋体缺乏脂多糖与外膜蛋白,但可表达多种脂蛋白,这些脂蛋白同梅毒螺旋体的组织黏附及播散有关,同时可诱导机体发生免疫应答.机体对于梅毒螺旋体的免疫应答过程十分复杂,固有免疫、体液免疫及细胞免疫均在梅毒螺旋体的感染过程中参与了应答过程.Th1型细胞免疫在梅毒的发生发展过程中起重要作用,梅毒患者在局部及系统免疫方面都存在细胞免疫的异常.     

梅毒螺旋体抗体在诊断新生儿梅毒中的应用和讨论

目的:探讨梅毒螺旋体(treponema pallidum,TP)抗体在诊断新生儿梅毒中的应用。方法:分别用甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、TP-ELISA和密螺旋体颗粒凝集实验(TPPA)法对84例确诊新生儿梅毒患者与100例健康新生儿血清进行检测。结果:三种检测梅毒螺旋体抗体方法的灵敏度分别为51.2%、98.8%和100%,相对而言,TRUST法不适合作为诊断新生儿梅毒的初筛试验。结论:TP-ELISA法灵敏度与特异性相对较高,操作简便易行,建议作为诊断新生儿梅毒的初筛试验;TPPA法由于操作繁琐复杂,可结合临床作为新生儿梅毒的确诊试验。     

血清梅毒螺旋体IgM在先天梅毒诊断中的意义

目的探讨血清梅毒螺旋体IgM(TP-IgM)检测在先天梅毒诊断中的作用。方法回顾性分析了1215例初诊儿童的梅毒血清学检查结果,并与其临床资料作比较分析。结果梅毒血清学阳性率8.81%(107/1215),其中梅毒螺旋体IgM阳性率6.42%(78/1215)。107例梅毒血清学阳性患儿最后确诊为先天梅毒92例,TP-IgM阳性与先天梅毒确诊符合率为100%。结论血清梅毒螺旋体IgM是诊断婴幼儿先天梅毒有价值的梅毒血清学指标,对鉴别先天梅毒和被动梅毒血症有重要意义。     

衡阳和江门地区梅毒螺旋体基因分型的初步研究

目的 了解湖南衡阳和广东江门地区梅毒螺旋体(TP)基因亚型的分布.方法 收集衡阳和江门地区疑似硬下疳病例的标本85份,经TP polA PCR筛选后,阳性者用PCR扩增各标本中TP的arp和tpr基因,酶切tpr基因扩增产物,分析各TP菌株arp基因长度和tpr基因的限制性片段长度多态性(RFLP),进行分型.结果 TP polA PCR阳性者69例,可用于分型者57例,分为10个亚型,其中14d亚型为26例,其他亚型包括10d(1),12a(3),12g(2),13d(6),14a(5),14b(2),14f(6),15d(5),16d(1);衡阳和江门地区TP基因亚型分布大致相同.结论 衡阳和江门地区存在TP的多亚型,都以14d亚型为主(占45.6%),无明显地区性差异.     

梅毒螺旋体Tp0319重组蛋白的表达及免疫活性研究

目的 克隆和表达梅毒螺旋体Tp0319基因,并对其表达产物进行免疫活性分析。方法 挑选并克隆出Tp0319免疫优势区基因,构建原核表达载体;诱导表达并纯化重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western印迹法鉴定;用纯化的重组蛋白免疫新西兰兔;间接ELISA法检测梅毒螺旋体参考血清及临床标本。结果 成功构建原核表达载体pQE32/Tp0319;高效表达和纯化出一相对分子质量约30 000的重组蛋白。用重组蛋白免疫新西兰兔,能刺激其产生高水平抗体滴度。Western印迹证明其能与梅毒患者血清发生特异性反应,阴性对照菌未见目的表达条带。间接ELISA法检测80份梅毒螺旋体参考血清（阴性、阳性各40份）,阳性和阴性结果的符合率均为100%。检测200份临床梅毒血清标本及200份正常人血清,结果与梅毒螺旋体明胶凝集试验相比,灵敏度和特异度分别为92.6%和100%,符合率为96%。结论 制备的Tp0319重组蛋白具有良好的免疫活性,为进一步研究其在梅毒血清学诊断中的应用奠定一定的基础。     

梅毒螺旋体分子流行病学研究进展

基于arp／tpr两个基因的梅毒螺旋体基因分型方法正被广泛应用,不同血液成分及脑脊液标本都可用于梅毒螺旋体检测及基因分型,结合tp0548基因加强分型,发现中国梅毒螺旋体菌株主要为梅毒螺旋体14d／f型,而脑脊液中常检测到梅毒螺旋体19d／e型。23SrRNA基因A2058G突变是梅毒螺旋体耐14、15元环大环内酯类抗菌素的原因,对16元环大环内酯类抗菌素同时耐药的A2059G突变菌株在国外已经出现。梅毒螺旋体分子流行病学研究有助于了解其基因型别与梅毒类型之间的相关性,通过监测梅毒螺旋体携带抗菌素耐药基因的情况,为临床选用抗菌素治疗梅毒提供依据。     

梅毒螺旋体的巢式PCR检测与基因分型

目的探讨广州地区梅毒螺旋体基因型分布,确定其分子流行病学特点。方法收集2002-2004年间连续就诊的疑似梅毒患者的生殖器溃疡标本,用暗视野显微镜和巢式PCR检测梅毒螺旋体,阳性者进行巢式PCR扩增酸性重复蛋白基因(arp)和苍白螺旋体重复基因族(tpr),凝胶电泳分析arp基因重复序列个数和tpr基因的MseⅠ酶切片段多态性。根据Pillay标准基因分型。结果共检测62例疑似硬下疳病例,33例(53．2％)暗视野镜检发现梅毒螺旋体；54例PCR检测阳性,阳性率为87.1％。47例arp基因分型以14型为主(36例占76.6％),49例tpr基因分型以d型为主(39例占79.6％),47例双重基因分型发现7个基因型,依次为14 d 31例占66.0％,13 d 5例占10.6％,14 b 4例占8.5％,12 b 3例占6.4％,12 d 2例占4.3％。15 d和14 i各1例占2.2％。结论巢式PCR法检测梅毒螺旋体具有较高的敏感性,广州地区梅毒螺旋体基因型以14 d型为优势型。梅毒的早期诊断和基因分型对于梅毒的防治有重要意义。