THE STUDY OF INTERRELATION BETWEEN HUMAN PAPILLOMAVIRUS INFECTION AND LANGERHANS CELL IN THE CARCINOGENESIS OF ESOPHAGEAL CARCINOMA

为了解人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）对免疫Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）的影响及ＨＰＶ的致癌机理，采用地高辛配基标记的ＨＰＶ１６／１８ＤＮＡ探针和抗Ｓ１００蛋白抗体，分别用原位分子杂交和免疫组化ＬＳＡＢ法，检测了４０例食管鳞状细胞癌中ＨＰＶＤＮＡ序列及分布，重点观察了ＨＰＶ感染时局部癌旁上皮内Ｓ１００蛋白阳性Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞的分布、数量及形态改变。结果显示：在有ＨＰＶ感染时，上皮内ＬＣ数量明显少于无感染者。上皮内残留的少数ＬＣ的分布及形态也有改变。结果提示：ＨＰＶ可能通过减少局部的ＬＣ，破坏机体局部的免疫监视系统，并与其他致癌因素协同作用，进而导致食管癌的发生。     

朗格罕细胞和 p53 蛋白与喉癌中人乳头瘤病毒感染的关系

目的：研究喉癌的发生机理。方法：应用免疫组化ＬＳＡＢ法对３０例喉鳞状细胞癌中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）、ｐ５３蛋白、朗格罕细胞（Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓｃｅｌ，ＬＣ）进行了染色。结果：ＨＰＶ感染的癌旁粘膜内ＬＣ的数量明显少于无感染者，ｐ５３蛋白表达率（３７３％）也明显低于无感染组（８３３３％）。结论：ＨＰＶ、ＬＣ、ｐ５３是与喉癌发生有关的三个重要因素，且三者相互影响。喉癌的发生机理可能是由于ＨＰＶ感染引起ＬＣ减少，局部免疫功能降低和其它改变；ＨＰＶ感染还可能通过表达的某种肿瘤蛋白使ｐ５３失活而致癌。     

食管癌发生中不同标志Langerhans细胞的比较

分别采用组织化学和免疫组织化学方法，观察５７例人食管癌切除标本中ＡＴＰ酶阳性和ｓ－１００蛋白阳性Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）的形态和分布。结果２种方法均可地显示食管正常粘膜上皮、不典型增生上皮、原位癌及鳞状细胞癌组织中的ＬＣ。ＬＣ的形态随所处组织的病变不同而有所改变。部分与ＬＣ密切接触的癌细胞呈现变性的形态改变。除形态变化外，在不同的病变组织中，ＬＣ的数量均不相同。但２种标志的ＬＣ分布趋势基本     

宫颈癌及癌旁组织中人乳头瘤病毒DNA检测

目的：探讨人乳头瘤病毒（ｈｕｍａｎ ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓ,ＨＰＶ） 与宫颈癌及癌旁组织的关系。方法：应用原位ＰＣＲ技术（ＩＳＰＣＲ）对４４ 例宫颈癌、１８ 例癌旁组织及３０ 例慢性宫颈炎和１５ 例正常宫颈组织中的ＨＰＶ１６ＤＮＡ和ＨＰＶ１８ＤＮＡ进行检测。结果：４４ 例宫颈癌组织中ＨＰＶ１６ＤＮＡ 阳性３５ 例（７９－５％ ）,ＨＰＶ１８ＤＮＡ 阳性５ 例（１１－３ ％） 。其中ＨＰＶ１６ＤＮＡ和ＨＰＶ１８ＤＮＡ均阳性４ 例;ＨＰＶ１８ＤＮＡ 阳性而ＨＰＶ１６ＤＮＡ阴性１ 例;ＨＰＶ１６ＤＮＡ 阳性而ＨＰＶ１８ＤＮＡ 阴性３１ 例。１５ 例癌旁组织伴宫颈上皮内新生物（ｃｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｎｅｏｐｌａｓｍ , ＣＩＮ） Ⅱ～Ⅲ级,ＨＰＶ１６ＤＮＡ 阳性１２ 例（８０％ ）,其他３ 例癌旁组织中１ 例ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性;３０ 例慢性宫颈炎有４ 例ＨＰＶ１６ＤＮＡ 阳性（１３－３％ ） ;１５ 例正常宫颈组织ＨＰＶＤＮＡ均阴性。结论：宫颈癌及癌旁伴ＣＩＮⅡⅢ与ＨＰＶ１６、１８ 感染有密切关系,以ＨＰＶ１６ 感染为主     

食管癌发生中不同标志Langerhans细胞的比较

分别采用组织化学和免疫组织化学方法，观察５７例人食管癌切除标本中ＡＴＰ酶阳性和ｓ１００蛋白阳性Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）的形态和分布。结果２种方法均可清晰地显示食管正常粘膜上皮、不典型增生上皮、原位癌及鳞状细胞癌组织中的ＬＣ。ＬＣ的形态随所处组织的病变不同而有所改变。部分与ＬＣ密切接触的癌细胞呈现变性的形态改变。除形态变化外，在不同的病变组织中，ＬＣ的数量均不相同，但２种标志的ＬＣ分布趋势基本吻合，唯ＡＴＰ酶阳性ＬＣ数量更多（Ｐ＜０．０５）。提示ＡＴＰ酶、ｓ１００蛋白２种标志均可较好地显示食管癌发生过程中的ＬＣ，ＬＣ在抗肿瘤免疫过程中起一定的作用。     

人乳头瘤病毒与呼吸道肿瘤关系的研究：Ⅰ.HPV与喉癌的关系

应用α－３２Ｐ－ｄＣＴＰ标记ＨＰＶ－１１及ＨＰＶ－１６ＤＮＡ为探针，以Ｓｌｏｔｂｌｏｔ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ两种核酸杂交技术，检测了取自青岛及北京两个地区的３７例喉鳞癌组织ＤＮＡ中ＨＰＶ－１１及ＨＰＶ－１６ＤＮＡ相关序列。结果表明，Ｓｌｏｔｂｌｏｔ杂交中，与ＨＰＶ－１１探针杂交阳性者占８６％（３２／３７），与ＨＰＶ－１６探针杂交阳性者占８１％（３０／３７）。在同一癌组织中，与两型探针同时呈现阳性者占８１％（３０／３７）。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交中，与所用探针ＤＮＡ的内切酶ＰｓｔⅠ酶切图谱比较，有４６％（１３／２８）与ＨＰＶ－１６ＤＮＡ的酶切图谱相同，可定为ＨＰＶ－１６型。当用ＨＰＶ－１１探针时无一例出现与ＨＰＶ－１１相同的图谱。提示喉癌的发生与ＨＰＶ－１６有关。     

郎罕细胞和淋巴细胞在贲门癌间质中的分布及其免疫学意义

目的探讨郎罕细胞（ＬＣ）和淋巴细胞在贲门癌组织中的分布及其免疫学意义，为判断病人预后提供理论根据。方法以ＬＳＡＢ免疫组化法，用Ｓ－１００蛋白抗体对正常贲门粘膜、单纯增生、不典型增生及癌组织进行染色，油镜下观察ＬＣ及淋巴细胞的分布及数量变化，将所得结果用秩和检验法进行统计分析。结果贲门粘膜单纯增生、不典型增生组织中ＬＣ的数量较癌组织中的少，正常粘膜组织内更少见。癌组织中ＬＣ的数量与其分化程度关系密切，同时在密集的区域常有淋巴细胞伴随。结论牌号癌组织内Ｓ－１００蛋白阳性ＬＣ及淋巴细胞的多少，可作为宿主抗肿瘤免疫反应的一个标志。     

咽喉上皮增生性病变和HPV感染相关性的研究

对５１例咽喉上皮增生性病变进行病理组织学观察，并应用免疫组化及ＰＣＲ方法检测人类乳头瘤病毒。其中３７例咽喉部乳头状瘤样病变分为尖锐湿疣样病变、不典型尖锐湿疣样病变、鳞状上皮乳头状瘤３组。免疫组化检测ＨＰＶ－Ａｇ：第１组阳性率３３％，后２组全部阴性。ＰＣＲ检测ＨＰＶ－ＤＮＡ：前２组全部阳性，后１组阳性率１０％。１４例喉鳞状细胞癌分为鳞状细胞疣状癌（４例）、高分化鳞状细胞癌（１０例）２组。免疫组化检测ＨＰＶ－Ａｇ：前组阴性，后组阳性率１０％；ＰＣＲ检测ＨＰＶ－ＤＮＡ：前组阳性率５０％，后组阳性率３０％。结果表明：部分咽喉上皮增生性病变的发生与ＨＰＶ感染有关。     

用聚合酶链反应检测喉鳞癌细胞内人乳头状瘤病毒DNA

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测喉鳞状细胞癌患者的经福尔马林固定、石蜡包埋的组织标本２８例。从石蜡包埋的癌组织提取的人乳头状瘤病毒ＤＮＡ（ＨＰＶＤＮＡｓ）用ＨＰＶ－１６，１８试剂盒进行ＰＣＲ扩增。其中５例（１８％）扩增阳性。声带癌ＨＰＶ－１６，１８的阳性率较其它部位的高（占阳性８０％）。结果提示：ＨＰＶ－１６，１８的感染在喉癌的发生中起到一定的作用。声门区的喉鳞癌与宫颈癌的发生类似，与ＨＰＶ－１６，１８的感染有密切的联系。     

HPV16L1重组蛋白在甲醇营养型酵母菌中的诱导表达及鉴定

目的 ＨＰＶ１６Ｌ１重组蛋白的表达为研制ＨＰＶ１６Ｌ１预防性蛋白疫苗及诊断试剂盒打下基础。方法 ｐＰＬＣ３．５－ＨＰＶ;１６Ｌ１／ＧＳ１１５阳笥菌株,经０．５％甲醇诱导,运用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测Ｌ１蛋白;用鼠抗ＨＰＶ１６Ｌ１单克隆抗体,经Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ检测蛋白的特异笥;在透射电下观察类病毒颗粒（ＶＬＰｓ）结果 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测结果表明,在５５ＫＤ处有诱导蛋白带的出现;经Ｗ     

子宫颈鳞癌 Rb 基因与 HPV16 E7 基因的相关性研究

用多聚酶链反应—单链构象多态性分析（Ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）以及地高辛标记探针斑点杂交技术对３０例子宫颈鳞癌组织中Ｒｂ抑癌基因及ＨＰＶ１６Ｅ７癌基因进行分析。结果３０例子宫颈鳞癌组织中未检出Ｒｂ基因突变或缺失；２０例癌组织中检出ＨＰＶ１６Ｅ７ＤＮＡ，阳性率为６７％。提示ＨＰＶ１６Ｅ７癌基因与子宫颈鳞癌密切相关。子宫颈鳞癌中Ｒｂ基因结构异常并不常见，而且与ＨＰＶ１６Ｅ７基因的存在状况无明显相关性。     

移植静脉平滑肌细胞凋亡及相关基因表达与增殖关系的动态研究

目的 探讨移植静脉狭窄发生机制。方法 建立１００只Ｗｉｓｔａｒ大鼠自体颈静脉移植与肾下腹主动脉模型。采用透射电镜、原位ＤＮＡ片断末端标记（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学法、检测移植静脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）凋亡及相关基因ｂａｌ－２、ｂａｘ蛋白和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果 术后１￣８周,移植静脉ＴＵＮＥＬ及ＰＣＮＡ阳性ＶＳＭＣｓ多于对照静脉（Ｐ〈０．０１）;术后１￣２周为ＴＵＮＥＬ及Ｐ     

非小细胞肺癌ras—p21蛋白表达与细胞DNA倍体的关系

目的：分析非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）中ｒａｓ－ｐ２１蛋白表达与细胞ＤＮＡ含量和增殖活性的关系。方法：用ＡＢＣ免疫组织化学方法研究ｒａｓ－ｐ２１蛋白在３０例ＮＳＣＬＣ中的表达，以超过２０％的癌细胞着色为阳性。用流式细胞术检测细胞ＤＮＡ含量并计算增殖指数。结果：２３例异倍体和７例二倍体ＮＳＣＬＣｒａｓ－ｐ２１蛋白表达的阳性率无明显差别（６５．２％对８５．７％，Ｐ＝０．３０）。２１例ｒａｓ－ｐ２１蛋白表达阳性和９例阴性的ＮＳＣＬＣ，其增殖指数无明显差别，［（２４．５５±５．８７）％对（２３．３２±４．６８）％，Ｐ＝０．５９］。结论：ｒａｓ－ｐ２１蛋白表达与ＮＳＣＬＣ细胞ＤＮＡ含量和增殖活性无关，而与细胞的终末分化有关。     

人白细胞介素2基因转移表达及抗乙型肝炎病毒和诱导LAK细胞活性的研究

为了探讨白细胞介素（ＩＬ）－２转基因表达抗乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的作用，应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＳｖ（Ｘ）－包装细胞系ＰＡ３１７基因转移系统，研究了人ＩＬ－２ｃＤＮＡ转移和表达，以及抗ＨＢＶ和诱导淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ细胞）的作用。所构建的人ＩＬ－２重组表达载体ｐＺＩＰｈｕＩＬ－２，以ＤＮＡ－磷酸钙共沉淀技术转染ＰＡ３１７细胞，筛选到Ｇ４１８抗性克隆，分泌假病毒颗粒达１０６ＣＦＵ／ｍｌ。以假病毒颗粒感染２．２．１５细胞系及正常人外周血单个核细胞，分泌ＩＬ－２水平可达６ＩＵ／ｍｌ，明显抑制２．２．１５细胞ＨＢｓＡｇ的分泌表达，与１００ＩＵ／ｍｌ重组的ＩＬ－２一样可诱导出相似的ＬＡＫ细胞活性。而不含ＩＬ－２ｃＤＮＡ的ｐＺＩＰＳＶ（Ｘ）的假病毒颗粒则无此作用。提示逆转录病毒载体。包装细胞系可以成功地实现人ＩＬ－２ｃＤＮＡ的转移和低水平的分泌和表达，并可明显抑制２．２．１５细胞分泌ＨＢｓＡｇ及诱导ＬＡＫ细胞活性。     

人子宫颈癌中的HPV16E6mRNA,p^53 P^21ras和c—myc蛋白表达

为进一步探讨了子宫颈癌的分子发病机制采用ＰＣＲ，ＩＳＨ和ＩＨＣ方法对５１例子宫颈癌组织的ＨＰＶ１６感染，ＨＰＶ１６Ｅ６ｍＲＮＡ，ｐ＾５３，Ｐ＾２１ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ蛋白表达分布进行了研究。结果表明５１例中有ＨＰＶ１６感染者３８例，ＨＰＶ１６Ｅ６ｍＲＮＡ表达者３５例，其阳性细胞主要分布在高分化癌巢之周边部或中，低分化癌之整个癌巢；     

中国妇女宫颈癌组织中HPV_(16)L_1晚期基因克隆及重组质粒的构建

本实验采用ＰＣＲ方法，以中国妇女宫颈癌组织ＤＮＡ为模板扩增出了３株ＨＰＶ１６Ｌ１晚期基因ＤＮＡ片段，扩增参数为９４℃１ｍｉｎ，５５℃３０ｓ，７２℃２ｍｉｎ，共３５个循环。将扩增产物ＨＰＶ１６Ｌ１ＤＮＡ片段与克隆载体ｐＣＲ２．１连接构建了ＨＰＶ１６Ｌ１－ｐＣＲ２．１重组质粒。经酶切ＨＰＶ１６Ｌ１－ｐＣＲ２．１重组质粒回收ＨＰＶ１６Ｌ１基因片段，将其与表达载体ｐＰＩＣ３．５连接，构建了ＨＰＶ１６Ｌ１－ｐＰＩＣ３．５重组体，并经酶切鉴定得到确认。为进一步对感染型ＨＰＶ１６Ｌ１晚期基因的测序及表达打下了基础。     

腮腺淋巴上皮瘤样癌中EB病毒基因的表达

采用原位杂交和免疫组化技术，检测２０例腮腺淋巴上皮瘤样癌（ＬＥＬＣ）组织中ＥＢ病毒编码的小ＲＮＡ（ＥＢＥＲｓ）、潜伏感染膜蛋白（ＬＭＰｌ）、溶解感染期立即早期基因编码蛋白ＺＥＢＲＡ、早期基因编码蛋白ＥＡ－Ｄ、晚期基因编码蛋白ＶＣＡ和ＭＡ。结果ＥＢＥＲｓ阳性率为１００％（２０／２０），ＬＭＰｌ阳性率为８５％（１７／２０），ＺＥ－ＢＲＡ均为阴性，ＥＡ－Ｄ阳性率８５％（１７／２０），ＶＣＡ阳性率６０％（１２／２０），ＭＡ阳性率为０．５％（１／２０）。阳性信号限于癌细胞。癌周正常组织和间质细胞均阴性。说明在我国南方鼻咽癌高发区，腮腺ＬＥＬＣ的发生发展与ＥＢ病毒感染密切相关，本文还对ＥＢ病毒基因的腮腺ＬＥＬＣ中表达的生物学意义作了初步探讨。     

用PCR技术检测皮肤表皮肿瘤组织HPV DNA

应用多对引物ＰＣＲ方法检测５８例皮肤人表皮肿瘤（Ｂｏｗｅｎ‘ｓ病１７例，Ｑｕｅｙｒａｔ增殖性红斑５例，鲍温样丘疹病１６例，皮肤鳞状细胞癌２０例）石蜡包埋组织中ＨＰＶ６，１１，１６及１８ＤＮＡ。Ｂｏｗｎｅ’ｓ病ＨＰＶ１ＤＮＡ２例（２／１７）阳性Ｑｕｅｙｒａｔ增殖性红斑ＨＰＶ１６ＤＮＡ１例（１／５）阳性，鲍温样丘疹病ＨＰＶ１６ＤＮＡ９例（９／１６）阳性，皮阳鳞状细胞癌ＨＰＶＤＮＡ２０例均阴性，提示鲍温     

多重多聚酶链反应和原位杂交检测成人咽喉病变中人乳头瘤病毒感染

用多重我聚酶链反应（ＰＣＲ）和生物素标记探针的原位杂交方法对３６例石蜡包埋的成人咽、喉部乳头状瘤、上皮不典型增生和鳞状细胞癌的组织标本进行了检测。结果共检出６例ＨＰＶＤＮＡ阳性病例，全部为ＨＰＶ６／１１，其中仅１例伴ＨＰＶ１６型感染。６例阳性病例包括喉乳头状瘤３例，咽乳头状瘤、喉粘膜上皮高度不典型增生及喉鳞癌各１例。原位杂交显了ＨＰＶＤＮＡ在肿瘤组织、组织中的分布。     

咽喉鳞状细胞癌组织中HPV的检测

用免疫组化及ＤＮＡ斑点杂交技术检测人咽喉部鳞状细胞癌组织中ＨＰＶ壳蛋白抗原及ＨＰＶ６、１１、１６、１８型ＤＮＡ序列。４５例鳞状细胞癌组织ＨＰＶ抗原阳性率为２２．２％，ＨＰＶＤＮＡ阳性率为３１．１％，５例正常粘膜ＨＰＶ抗原及ＨＰＶＤＮＡ均阳性。结果提示咽喉部鳞状细胞癌的发生和发展与ＨＰＶ感染有关系。